高考生物二轮复习专题二十三微生物的利用与酶的应用试题809.pdf

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1、第 1 页 专题二十三 微生物利用与酶应用 考纲要求 1.大肠杆菌培养与别离(加试)。2.别离以尿素为氮源微生物(加试)。3.果汁中果胶与果胶酶(加试)。4.淀粉酶固定化及淀粉水解作用检测(加试)。考点一 微生物利用 一、大肠杆菌培养与别离 1大肠杆菌(1)特性：大肠杆菌是革兰氏阴性、兼性厌氧(代谢类型)肠道杆菌，在肠道中一般对人无害，但假设进入人泌尿系统，就会对人体产生危害。(2)用途：是基因工程技术中被广泛采用工具。2细菌培养与别离(1)细菌繁殖：以分裂方式繁殖，分裂速度很快，约 20 min 分裂一次。(2)培养方法：需要将已有细菌培养物转移到新培养基中，一般用接种环(工具)转移带菌培养

2、物。(3)细菌别离方法与特点 别离方法 特点 划线别离法 操作简单 涂布别离法 操作复杂，单菌落更易分开 工程 条件 结果 常用方法 消毒 较为温与物理或仅杀死物体外表或内煮沸消毒法、巴氏消第 2 页 化学方法 部一局部对人体有害微生物(不包括芽孢与孢子)毒法、紫外线或化学药物消毒法 灭菌 强烈理化因素 杀死物体内外所有微生物，包括芽孢与孢子 灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌(1)实验内容：将大肠杆菌扩大培养与划线别离，即用 LB 液体培养基扩大培养大肠杆菌，培养后再在 LB 固体平面培养基上划线进展别离，随后培养基上就会形成一个个单独菌落。(2)实验步骤 培养基灭菌 倒平板 接种 划线别离

3、培养观察 50 mL LB 液体培养基与 50 mL LB 固体培养基及培养皿高压蒸汽灭菌 将培养基分别倒入 4 个灭菌后培养皿中，水平放置，使之形成平面 在装有液体培养基三角瓶中接种大肠杆菌，培养 12 h 用接种环在接种有大肠杆菌三角瓶中蘸菌液一次，在固体培养基平板上连续划线，盖好培养皿 培养皿倒置(盖在下面)，放在 37 恒温培养箱中培养1224 h 后，可看到划线末端出现不连续单个菌落(3)大肠杆菌别离用途：单菌落别离是消除污染杂菌通用方法，也是用于筛选高表达量菌株最简便方法之一。二、别离以尿素为氮源微生物 第 3 页 1菌种特点 含有脲酶，可以通过降解尿素作为其生长氮源。2培养基 用

4、以尿素为唯一氮源培养基培养，以 LB 全营养培养基为对照。3实验原理(1)筛选以尿素为氮源微生物，可使用以尿素为唯一氮源选择培养基进展培养选择。(2)细菌合成脲酶能将尿素分解成 NH3，致使 pH 升高，使酚红指示剂变红。4实验步骤 制备培养基：将已灭菌 LB 固体培养基与尿素固体培养基分别倒入两个培养皿中，摇匀，平放至凝固 制备细菌悬液：用 1 g 土样配制不同浓度细菌悬液 用涂布别离法别离细菌：将不同浓度土壤稀释液分别参加到有 LB 培养基与尿素培养基培养皿中，并用玻璃刮刀涂布到整个平面上 培养：将培养皿倒置，在 37 恒温箱中培养 2448 h 观察：培养基中菌落数量 5反响鉴定 在配制

5、培养基时，参加指示剂酚红，培养时细菌将尿素分解产生碱性氨，使培养基上菌落周围出现红色环带。思考诊断 1从有机废水中别离分解有机物微生物时，接种后培养皿须放在光第 4 页 照培养箱中培养()提示 异养微生物不需要光照。2消毒原那么是既杀死材料外表微生物，又减少消毒剂对细胞伤害()3以下图中甲为划线别离法中最重要环节，乙为操作结果：(1)每一次划线后都要将接种环灼烧()(2)除第一次划线外，每一次划线起点都是第一次划线末端()提示 平板划线时除第一次划线外，每一次划线起点都是上一次划线末端，而不是第一次。4筛选能分解尿素细菌所利用培养基中，尿素是唯一氮源()5分解尿素细菌在分解尿素时，可以将尿素转

6、化为氨，使得培养基酸碱度降低()提示 应为升高。1培养基配制及划线别离操作考前须知(1)配制牛肉膏蛋白胨固体培养基考前须知 倒平板适宜温度是 60 左右，温度过高会烫手，过低培养基又会凝固。平板需倒置，这样既可使培养基外表水分更好地挥发，又可防止皿盖上水珠落入培养基，造成污染。(2)划线别离操作考前须知 第一次划线及每次划线之前都需要灼烧接种环。灼烧接种环，待其冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。第 5 页 划线时最后一区域不要与第一区域相连。划线用力大小要适当，防止用力过大将培养基划破。2几种消毒与灭菌方法及其适用范围 类型 适用范围 操作方法 消毒方法 煮沸消毒法 日常生活 100

7、煮沸 56 min 巴氏消毒法 不耐高温液体 7075煮 30 min或 80 煮 15 min 化学药剂 生活活体、水源等 擦拭如用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源等 紫外线 房间、仪器设备 紫外线照射 30 min 灭菌方法 灼烧 接种工具、接种时用试管口或瓶口等 直接在酒精灯火焰充分燃烧层灼烧 干热灭菌 耐高温、需要保持枯燥物品，如玻璃器皿与金属用具等 物品放入干热灭菌箱，160170 加热 12 h 高压蒸汽灭菌 培养基、培养皿等，生产与实验室常用 高压蒸汽灭菌锅内，100 kPa，温度121，1530 min 比拟 划线别离法 涂布别离法 工具 接种环 玻璃刮刀 原理 通过接种环在琼脂固

8、体培养基将菌液进展一系列梯度稀释，第 6 页 外表连续划线操作，将聚集菌种逐步稀释分散到培养基外表。在数次划线后培养，可以别离到由一个细胞繁殖而来肉眼可见细胞群体，即菌落 然后将不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基外表，进展培养。在稀释度足够高菌液里，聚集在一起微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基外表形成单个菌落(1)培养基中酸碱指示剂产生颜色变化(变红)，标志着存在脲酶分解尿素作用，从而证明这一菌株能以尿素为氮源。红色环状区域大小代表脲酶活性强弱与含量多少。红色区域越大，说明菌株利用尿素能力越强。(2)本实验中配制固体培养基时应选用琼脂糖而不能选用琼脂作凝固剂。这是由于琼脂是未被纯化混

9、合物，内含一定量含氮化合物。如果用琼脂固化培养基，会为细菌提供一定量非尿素类氮源，这样会在尿素固体培养基上产生大量以非尿素为氮源细菌，不利于以尿素为氮源细菌筛选。(3)由于尿素在高温下会分解，所以对尿素溶液灭菌要采用 G6 玻璃漏斗过滤方法。并且应在根本培养基经高压蒸汽灭菌后，冷却至 60 时再参加。(4)土样应从有哺乳动物排泄物地方取得，这是由于动物排泄物中有一定量尿素，在这些土壤中一般含有较多分解尿素细菌。题型一 大肠杆菌培养与别离 1以下图为“大肠杆菌培养与别离实验根本流程，请答复以下问第 7 页 题 A.配制培养基 B.灭菌 C.扩大培养液体培养基 D.划线别离和培养和培养固体培养基

10、E.菌种保存(1)A 过程配制是通用细菌培养基，称为_培养基。配制时除了参 加 特 定 营 养 物 质 以 外，还 要 参 加 一 定 量 氯 化 钠，以 维 持_。对培养基酸碱度调节，应该在 B 过程_(填“前面或“后面)。(2)D 过程与 C 过程相比，培养基中增加物质是_，E过程所需温度是_。(3)D 过程后，一个菌体便会形成一个_，这种别离方法是_通用方法，也是筛选特定菌株最简便方法之一。(4)植物组织培养时，先配制 MS 培养基，再参加一定比例植物激素，当生长素相对较多时，可促进_。(5)植物组织培养与微生物培养都需要无菌操作，以下不适宜用高压蒸汽灭菌是()A接种环与镊子 B三角瓶与

11、广口瓶 C发芽培养基与生根培养基 D用于培养幼茎与幼芽 答案(1)LB 液体 渗透压 前面(2)琼脂 4 (3)(单)菌落 消第 8 页 除污染杂菌(或纯化菌种)(4)生根(5)D 解析(1)LB 液体培养基是通用细菌培养基，LB 固体平面培养基那么用于划线别离形成单菌落。氯化钠作用是维持培养基渗透压。调节好酸碱度后才能进展灭菌，假设灭菌后再进展酸碱度调节，又会产生新污染。(2)在液体培养基根底上参加一定量琼脂可形成固体培养基。菌种应置于 4 C 冰箱中保存。(3)通过划线别离后，一个菌体就会繁殖出一个菌落。(4)植物组织培养中生长素相对较多时，有利于生根，而细胞分裂素相对较多时，那么有利于生

12、芽。(5)高压蒸汽灭菌常用于培养基、培养器材等灭菌，而用于培养幼茎与幼芽那么不能进展任何灭菌操作，否那么会导致细胞死亡。2检验饮用水细菌含量是有效监控疾病发生必要措施。请答复以下与检验饮用水有关问题：(1)要测定饮用水中大肠杆菌数量，常采用_法，通常将水样进展一系列梯度_，然后将上述水样用玻璃刮刀分别涂布到_外表进展培养，记录菌落数量。用该方法统计样本菌落数时_(填“是或“否)需要对照组。原因是：_。(2)下面所示四种菌落分布图中，不可能由上述方法得到是_。(3)大肠杆菌培养条件是无菌，培养基配制时需参加氯化钠，以维持_。配制培养基时先_后_。A调节 pH B.灭菌 C消毒 D调节温度 第 9

13、 页 答案(1)涂布别离 稀释 LB 固体培养基 是 需要判断培养基使用之前是否被杂菌污染(培养基灭菌是否合格)(2)D(3)渗透压 A B 题型二 别离以尿素为氮源微生物 3请答复微生物培养与别离有关问题：(1)欲从土壤中别离出能利用尿素细菌：以_为唯一氮源且参加了_指示剂培养基，用_法别离细菌。假设培养基平板上有菌落存活且颜色变_，那么说明别离成功。(2)别离以尿素为氮源细菌与别离大肠杆菌都使用了 LB 培养基，其成分_。A前者含琼脂，后者不含琼脂与琼脂糖 B两者都含有琼脂 C前者含有琼脂糖，后者不含琼脂糖但含琼脂 D两者都不含琼脂与琼脂糖 答案(1)尿素 酚红 涂布别离(或涂布)红(2)

14、C 解析(1)别离能利用尿素细菌，只需以尿素为唯一氮源，加酚红作指示剂，采用涂布别离法别离细菌，只要培养基中指示剂变红，标志着存在脲酶水解尿素反响，证明菌株可以以尿素为氮源。(2)别离以尿素为氮源细菌所用培养基应含有琼脂糖，而别离大肠杆菌所用培养基那么不含琼脂糖而含琼脂。4要获得能够分泌脲酶细菌菌种，某生物兴趣小组同学设计了以下培养与筛选途径：第 10 页(1)获得菌种：要获得较多能够分泌脲酶细菌，最好取 525 cm 处浅层土样，说明这类细菌细胞呼吸方式为_，在生态系统中属于_(成分)。(2)将土样参加无菌水中配制成悬液，并配制如下图培养基，其中尿素在培养基中必须是作为保证微生物生长唯一_。

15、向培养基中添加尿素方法是待其他成分灭菌冷却后，参加尿素溶液，而该尿素溶液要事先用_过滤，使之无菌。从物理性质看，该培养基属于_。葡萄糖：0.05 g NaCl：0.24 g K2HPO4：0.24 g 琼脂糖：1.0 g 酚红：0.5 g 水：30 mL 尿素：20 mL含2 g 脲(3)利用酚酞指示剂可检测出细菌是否能分泌脲酶，原理是脲酶能使_，结果菌落周围培养基呈红色。(4)为获取能分泌脲酶单菌落，必须将土壤样液进展稀释，并取少量稀释土壤液用_接种于培养基上，培养皿在培养箱第 11 页 中培养时必须倒置，原因是 _。(5)假设要别离土壤中尿素分解菌，对于采集与处理土壤样品，以下表达错误是(

16、)A最好选择在肥沃湿润、动物排泄物多土壤中取样 B采集土样需经高温灭菌后，才可以用于制取土壤稀释液 C制备土壤稀释液时，要用无菌水 D用于制备土壤稀释液各种器具要经过灭菌 答案(1)需氧呼吸 分解者(2)氮源 G6 玻璃漏斗 固体培养基(3)培养基中尿素分解为 NH3，使周围 pH 升高(4)涂布别离法 防止冷凝后水珠从皿盖上落入培养基，造成污染(5)B 考点二 酶应用 一、果汁中果胶与果胶酶 1果胶(1)果胶是植物细胞壁主要成分，它由半乳糖醛酸与半乳糖醛酸甲酯组成。(2)果胶与果汁加工：果胶不仅影响出汁率，还会使果汁浑浊。2果胶酶(1)来源：黑曲霉、苹果青霉等。(2)组成：果胶酶并不是特指某

17、一种酶，而是分解果胶一类酶总称，主第 12 页 要包括果胶酶与果胶甲酯酶。(3)作用：将果胶分解成可溶性分子，使出汁率提高，也使浑浊果汁变得澄清。3探究利用苹果或山楂匀浆制作果汁最正确条件实验(1)实验原理 果胶果胶酶、果胶甲酯酶半乳糖醛酸半乳糖醛酸甲酯。果胶酶活性受温度(或 pH)影响，处于最适温度(或 pH)时活性最高。果肉出汁率、果汁澄清度与果胶酶活性大小成正比。果胶不溶于乙醇。(2)实验流程设计 二、淀粉酶固定化及淀粉水解作用检测 1淀粉酶固定化(1)固定化酶 概念：将水溶性酶用物理或化学方法固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性制剂。方法：吸附法、共价偶联法、交联法与包埋法等

18、。(2)淀粉酶固定化 淀粉酶作用最适条件：最适 pH 为；最适温度为 5075_。方法：吸附法。淀粉水解作用 淀粉 淀粉酶糊精 淀粉酶麦芽糖糖化淀粉酶葡萄糖 遇碘显蓝色 遇碘显红色 遇碘不显色 第 13 页 2淀粉水解测定实验 固定 淀粉酶滴管滴加淀粉溶液加 KII2溶液观察洗涤几天后重复实验。3淀粉酶固定化实验过程 固定化 淀粉酶，装入注射器中 以 0.3 mL/min 流速滴加淀粉溶液过柱 流出 5 mL 淀粉溶液后接收 0.5 mL 流出液 滴加 KII2溶液，观察颜色，用水稀释 1 倍后再观察颜色 以 10 倍柱体积蒸馏水洗涤固定化柱，放置在 4 冰箱中，几天后重复实验 思考诊断 1将

19、果胶酶用于果胶生产，既能提高果肉出汁率又能提高果汁澄清度()2酶活性受温度、pH 与酶用量等因素影响()提示 酶用量不影响酶活性。3果胶起着将植物细胞粘合在一起作用，它溶于乙醇()提示 果胶不溶于乙醇。4用固定化 淀粉酶进展淀粉水解实验时不需考虑温度()提示 温度影响酶活性。5固定化 淀粉酶可永久使用()提示 固定化酶能够连续使用，但不是永久使用。6淀粉酶固定化实验完毕后，将固定化柱放在常温下即可()第 14 页 提示 固定化柱低温保存。1探究影响果胶酶活性因素实验相关分析(1)实验原那么：遵循单一变量原那么、对照原那么，严格控制变量，尽量减少无关变量影响。(2)实验原理：果胶酶活性受温度、p

20、H 或酶抑制剂影响，在最适温度或 pH 时，其活性最高，果肉出汁率、果汁澄清度都与果胶酶活性大小呈正相关。(3)三个实验变量分析 实验名称(目)自变量 因变量 考前须知 探究温度对果胶酶活性影响 温度 果汁量(澄清度)底物与酶在混合时温度是一样；温度梯度越小，实验构造越准确；苹果泥与果胶酶用量在各个试管中应一样 pH 应为最适 pH 探究 pH对果胶酶活性影响 pH 果汁量(澄清度)温度应为最适温度；pH梯度可用NaOH与盐酸调节；用玻璃棒搅拌使反响充分进展 第 15 页 探究果胶酶用量 果胶酶用量 果汁量(澄清度)制备苹果匀浆后迅速加热，使苹果浆中果胶酶变性；温度、pH 应为最适温度与最适

21、pH 且保持不变 名称 原理 图示 包埋法 将微生物细胞均匀地包埋在不溶于水多孔性载体中 共价偶联法 利用共价键、离子键将酶分子或细胞相互结合，或将其结合到载体上 吸附法 通过物理吸附作用，把酶固定在纤维素、琼脂糖、多孔玻璃或离子交换树脂等载体上 题型一 果汁中果胶与果胶酶 1以下有关果胶酶及果胶酶实验探究表达，正确是()A探究果胶酶用量时，pH、温度不影响实验结果 B果胶酶包括多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶与葡萄糖异构酶等 C探究温度对果胶酶活性影响时，温度、苹果泥、果胶酶用量及反响时间等都是自变量 D可以用一样时间内过滤得到果汁体积来确定果胶酶用量 答案 D 第 16 页 解析 探究果胶酶用

22、量时，pH、温度会影响实验结果；葡萄糖异构酶不属于果胶酶成分；探究温度对果胶酶活性影响实验中，温度为单一变量，其他因素保持不变。2某同学为探究温度对果胶酶活性影响，在不同温度条件下，将等量果胶酶参加到等量苹果泥中，在反响同样时间后，再将反响液过滤同样时间，用量筒测定滤出苹果汁体积。以下曲线图能正确反映实验结果是()答案 B 解析 果胶酶在 0 时活性较低，但也能催化苹果泥形成果汁，果汁量不为 0；随着温度升高，果胶酶活性先升高后下降，果汁量也是先升高后降低。正确应是 B 曲线。题型二 淀粉酶固定化及淀粉水解作用检测 直接使用酶与固定化酶比拟 比拟工程 直接使用酶 固定化酶 制作方法 吸附法、共

23、价偶联法、交联法、包埋法等 是否需要营养物质 否 否 酶种类 一种或多种 一种 催化反响 单一或多种 单一 反响底物 各种物质(大分子、小分子)各种物质(大分子、小分子)第 17 页 缺点 对环境条件非常敏感，易失活；难回收，本钱高，影响产品质量 不利于催化一系列反响 优点 催化效率高、耗能低、低污染 既能与反响底物接触，又能与产物别离；可以重复使用 3.以下关于固定化酶说法，错误是()A固定化酶缺乏之处是不能催化一系列反响 B固定化酶可再次利用，降低了生产本钱 C固定后酶既能与反响物接触，又能与反响物别离 D固定化酶易溶于水 答案 D 解析 由于酶具有专一性，因此固定化酶不能催化一系列反响，

24、A 项正确；固定化酶可反复利用，降低了生产本钱，B 项正确；固定后酶既能与反响物接触，又能与反响物别离，C 项正确；固定化酶不易溶于水，易与反响物别离，D 项错误。4(2021 舟山中学测试)某校学生尝试用琼脂作载体，用包埋法固定 淀粉酶来探究固定化酶催化效果。实验结果见下表(假设参加试管中固定化淀粉酶量与普通 淀粉酶量一样)。实验说明 1 号试管中淀粉未被水解，最可能原因是()1 号试管 2 号试管 第 18 页 固定化淀粉酶 普通 淀粉酶 淀粉溶液 60 保温 5 min，取出冷却至室温，滴加碘碘化钾溶液 现象 变蓝 不变蓝 A.实验中温度过高，导致固定化淀粉酶失去活性 B淀粉是大分子物质

25、，难以通过琼脂与淀粉酶接触 C水浴保温时间过短，固定化淀粉酶未将淀粉水解 D实验程序出现错误，试管中应先参加碘碘化钾溶液后保温 答案 B 解析 由于固定化酶是用包埋法固定，而淀粉是大分子物质，它不能通过琼脂与酶充分接触，导致淀粉不能被水解而遇碘碘化钾溶液呈现蓝色。探高考 练模拟 1(2021温州中学期末测试)以下图是微生物平板划线示意图。划线顺序为 1、2、3、4、5。以下操作方法正确是()A操作前要将接种环放在火焰旁灭菌 B划线操作须在火焰上进展 C在 5 区域中才有可能得到所需菌落 D在 1、2、3、4、5 区域中划线前后都要对接种环进展灭菌 第 19 页 答案 D 解析 操作前要将接种环

26、放在火焰上灼烧灭菌，A 项错误；划线操作须在火焰旁进展，B 项错误；在 5 区域中最有可能得到所需菌落，C项错误；在 1、2、3、4、5 区域中划线前后都要对接种环进展灭菌，D 项正确。2(2021鲁迅中学期末测试)以下关于“探究果胶酶最适用量实验表达，错误是()A配制不同浓度果胶酶溶液，并在各组中参加等量该溶液 B实验温度为无关变量，要在一样适宜温度条件下进展实验 C用玻璃棒搅拌加酶果泥，搅拌时间可以不一样 D调节 pH，使各组中 pH 一样而且处于适宜状态 答案 C 解析 在探究果胶酶最适用量实验中，果胶酶量为自变量，通过配制不同浓度果胶酶溶液来控制；实验温度、搅拌时间、pH 为无关变量，

27、需要控制等量、适宜，A、B、D 项正确，C 项错误。3(2021温州中学测试)探究温度对果胶酶活性影响实验中，得到如下实验结果。据此分析其中不正确是()温度()30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 80 果汁量(mL)第 20 页 B为了实验结果科学性，各组混合处理时间与过滤果汁时间均应一样 C应在 5055 设置更细温度梯度进展实验，探究果胶酶最适温度 D该实验结果说明高温能使果胶酶失活，但高温也可能促进果胶分解 答案 C 解析 实验过程中应先将苹果泥与果胶酶分别调节到对应温度后再混合，A 项正确；为了实验结果科学性与控制单一变量，各组混合处理时间与过滤果汁时间均应一样

28、，B 项正确；实验中温度梯度跨度较大，要想确定最适温度，需要设置更细温度梯度进展实验，分析数据可知，应该在 4555 设置更细温度梯度进展实验，探究果胶酶最适温度，C 项错误；高温可以使酶失活，由表格数据可以看出，高温也可能促进果胶分解，D 项正确。4在细菌培养过程中，以下有关操作正确是()A涂布器用火焰灼烧进展灭菌 B培养基分别装到培养皿后进展灭菌 C倒平板与取菌液都必须要在酒精灯火焰旁进展 D别离得到菌落应先接种在平板上，培养 24 h 后，置于 4 冰箱保存 答案 C 解析 涂布器应该用高压蒸汽灭菌，A 项错误；培养基应该先灭菌后第 21 页 分装，B 项错误；倒平板与取菌液都必须要在酒

29、精灯火焰旁进展，以防止杂菌污染，C项正确；别离得到菌落应先接种于斜面上，置于37 恒温箱培养 24 h 后，再置于 4 冰箱保存，D 项错误。5(2021浙江自选，17 节选)(1)现有一份污水样品，某兴趣小组欲检测其中细菌数，进展以下实验。将一定量污水样品进展浓度梯度稀释。取适量不同稀释度稀释液，用_法分别接种于固体平面培养基上，经培养后进展计数。该实验应注意，接种前，从盛有_容器中将玻璃刮刀取出，放在酒精灯火焰上灼烧，冷却后待用；分组时，需用_作为对照。(2)在上述细菌培养实验中进展计数时，应计数是接种了()A各个稀释度样品培养基上细菌数 B合理稀释度样品培养基上细菌数 C各个稀释度样品培

30、养基上菌落数 D合理稀释度样品培养基上菌落数 答案(1)涂布别离 70%酒精 未接种培养基(2)D 解析(1)细菌别离与计数常用涂布别离法，即用玻璃刮刀将一定体积稀释液涂布到固体平面培养基上。玻璃刮刀在使用前需进展灭菌处理，即将其浸入体积分数为 70%酒精中，随后取出放在酒精灯火焰上灼烧，冷却后待用。为排除其他因素影响，提高实验可信度，实验中要设置空白对照。(2)将菌液涂布到固体平面培养基上后，倒置放在恒温箱中培养，培养一段时间后，统计菌落数。当样品稀释度足够高时，培养基外表生长一个菌落，来源于样品稀释液中一个活菌，这样通过第 22 页 统计菌落数就可估算出待测样品细菌数目，所以要选择合理稀释

31、度样品培养基上菌落数。专题强化练 一、选择题 1以下图为实验室培养与纯化大肠杆菌过程中局部操作步骤，以下说法错误是()A步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进展 B步骤中，待倒入培养基冷却后盖上培养皿皿盖 C步骤中，每次划线前后都需对接种环进展灼烧处理 D划线接种完毕后，将图平板倒置后放入培养箱中培养 答案 B 解析 由图可知，步骤是倒平板，步骤是用接种环蘸取菌液，步骤是进展平板划线，步骤是培养。步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进展，防止被杂菌污染，A 项正确；倒完平板后应立即盖上培养皿盖，冷却后将平板倒过来放置，B 项错误；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线完毕后接种环上残留菌种，使下一次划线时，接

32、种环上菌种直接来源于上次划线末端，从而通过划线次数增加，使每次划线时菌种数目逐渐减少，以便得到单菌落，C 项正确；划线接种完毕后，将平板倒置放入培养箱中培养，有利于培养基外表水分更好地挥发与防止皿盖上水珠落入培养基造成污染，D 项正确。2(2021舟山中学期末测试)以下有关微生物培养表达中，不正确第 23 页 是()A获得纯洁培养物关键是防止杂菌污染 B单菌落别离是消除污染杂菌通用方法 C培养基都必须使用高压蒸汽灭菌法灭菌 D倒置平板防止培养皿盖上冷凝水滴落 答案 C 解析 微生物培养中获得纯洁培养物关键是防止杂菌污染，A 项正确；通常可以采用涂布别离法或划线别离法进展单菌落别离，以消除污染杂

33、菌，B 项正确；培养基通常可以进展高压蒸汽灭菌，但对于培养基中有高温易分解成分，就不能用此方法，如培养基中尿素等物质，C项错误；倒平板后需要将培养皿倒置，以防止培养基蒸发冷凝成水滴入培养基而造成污染，D 项正确。3(2021 普陀中学期末测试)在分解尿素细菌别离与鉴定中，对先后用到两种培养基表达正确是()A参加酚红指示剂作为选择培养基，再参加唯一碳源作为鉴别培养基 B参加唯一氮源作为鉴别培养基，再参加酚红指示剂作为选择培养基 C参加唯一氮源作为选择培养基，再参加酚红指示剂作为鉴别培养基 D参加酚红指示剂作为选择培养基，再参加唯一碳源作为鉴别培养基 第 24 页 答案 C 解析 能合成脲酶细菌才

34、能分解尿素。配制以尿素为唯一氮源培养基，能够生长细菌就是能分解尿素细菌；细菌合成脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基碱性增强，在以尿素为唯一氮源培养基中参加酚红指示剂培养细菌，假设指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。4(2021 绍兴中学期末测试)以下关于果胶酶作用表达，错误是()A分解水果细胞壁中果胶，从而瓦解细胞壁 B可将果胶分解成半乳糖醛酸，使果汁变清 C分解水果细胞壁中纤维素与果胶 D可使果汁榨取变得容易，提高出汁率 答案 C 解析 果胶酶可将果胶分解为半乳糖醛酸，从而使果汁榨取时候比拟容易，并使果汁变清。要分解纤维素，需要纤维素酶。5在用果胶酶处理苹果泥时，为了使果胶酶能够充分地催化

35、反响，应采取措施是()A加大苹果泥用量 B加大果胶酶用量 C进一步提高温度 D用玻璃棒不时地搅拌反响混合物 答案 D 解析 在用果胶酶处理苹果泥时，假设让果胶酶充分发生反响，那么第 25 页 需扩大果胶酶与苹果泥接触面积，尽量使果胶酶与苹果泥充分接触，因此可用玻璃棒不时地搅拌反响混合物。对苹果泥用量、酶量及反响所需温度与 pH 调整，在一定范围内只能增大反响速度，而不能使果胶酶充分地催化反响。6(2021 宁波鄞州中学期末测试)以下图为某同学探究温度对果胶酶活性影响实验操作流程图，以下表达错误是()底物 酶液 在所控制温度下处理一段时间 底物与酶混合 在所需温度下保温一段时间 检测 A底物为苹

36、果泥，酶液为果胶酶溶液 B底物与酶混合前同温处理可以取消 C实验自变量为底物与酶混合后温度 D检测是果汁体积或果汁澄清度 答案 B 第 26 页 解析 探究温度对酶活性影响实验步骤：取 10 支试管，5 支放入等量苹果泥，另 5 支中放入等量果胶酶；将盛苹果泥与果胶酶试管分别放在 5 个温度梯度下进展保温；一段时间后，再将酶参加对应温度下苹果泥中；观察试管中浑浊程度变化情况或果汁澄清度。二、非选择题 7现从土壤中别离以尿素为氮源细菌，实验过程如以下图所示：土样 土壤浸出液 稀释 接种 培养、观察 请答复：(1)欲从土壤中别离出能分解尿素细菌，将土壤用_进展一系列梯度稀释，同一浓度土壤稀释液应至

37、少涂布_个平板，通常以每个培养皿中有_个以内单菌落那一组稀释倍数为最适宜。(2)接种后培养皿_于 37 恒温箱中培养。假设培养基中存在含脲酶细菌，其菌落周围会出现_，这是由于尿素被分解产生氨气，遇培养基中_产生颜色变化，从而证明这一菌株能以尿素为氮源。(3)别离能利用尿素细菌时所用培养基成分上最主要特点是_ _。(4)以 下 操 作 需 要 在 酒 精 灯 火 焰 旁 进 展 是_ 第 27 页(多项选择)。A称取葡萄糖、琼脂糖等培养基成分 B倒平板 C涂布平板 D微生物培养(5)与 LB 全营养培养基上菌落数相比，尿素培养基上只有少数菌落原因是_ _。答案(1)无菌水 3 20(2)倒置 红

38、色环带 酚红指示剂(3)以尿素作为唯一氮源(固体)培养基(4)BC(5)土壤中能利用尿素细菌在土壤菌群中只占极少数 8有机农药苯磺隆是一种除草剂，长期使用会污染环境，研究发现，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。别离能降解苯磺隆菌株实验过程如以下图所示。请答复以下问题：(1)微生物生长繁殖所需主要营养物质有碳源、水、_、_四类，该实验所用选择培养基只能以苯磺隆作为唯一碳源，其原因是_ _。第 28 页(2)纯化菌株时，通常使用划线工具是_。在第二次及以后划线时，总 是 从 上 一 次 末 端 开 场 划 线。这 样 做 目 是_。(3)假设要检测土样中细菌含量，应采用_法。在接种前，随机取假设干灭

39、菌后空白平板培养基先行培养了一段时间，这样做目是_。答案(1)氮源 无机盐 只有能利用苯磺隆微生物能正常生长与繁殖(2)接种环 将聚集菌体逐步减少以便获得单个菌落(3)涂布别离 检测培养基平板灭菌是否合格 解析(1)微生物生长所需要主要营养物质包括：碳源、氮源、水与无机盐。使用选择培养基是因为选择培养基上只有能利用苯磺隆微生物能正常生长与繁殖，同时又能抑制或阻止其他微生物生长。(2)划线别离法接种时常使用接种环划线。在第二次及以后划线时，总是从上一次末端开场划线。这样做目是将聚集菌体逐步减少以便获得单个菌落。(3)涂布别离法常常用来进展微生物别离与计数。为检验培养基平板灭菌是否合格，常常需要在

40、接种前，随机取假设干灭菌后空白平板培养基先行培养一段时间，观察有无菌落形成，假设没有菌落形成那么说明培养基灭菌合格，否那么不合格。9(2021金丽衢十校联考)下表是 3 组生物实验培养基。请答复以下问题：组别 培养基 第 29 页 a 无机盐、蔗糖、维生素与甘氨酸等有机物、水、琼脂 b 葡萄糖、NaCl、K2HPO4、尿素、酚红、水、琼脂糖 c 蛋白胨、酵母提取物、NaCl、水、琼脂(1)别离以尿素为氮源细菌应选用培养基_。在含有脲酶细菌菌落周围会出现_，这是由于尿素被分解产生_使 pH 升高，酚红指示剂产生颜色变化，从而证明这一菌株可以尿素为氮源。变色区域越大，说明该菌株利用尿素能力_。(2

41、)用培养基 a 进展植物组织培养，那么培养基中还需参加_。一般先用_(填“发芽或“生根)培养基进展培养，使之长出较多丛状苗，然后将丛状苗分株培养。(3)生产上利用黑曲霉或苹果青霉来提取果胶酶，在用果胶酶水解果胶实验中，以下说法正确是_。A实验后滴加酒精目是增加果胶酶活性 B沸水浴加热后果胶酶活性随着温度下降逐渐恢复 C间歇搅拌 2030 min 目是让果胶酶与果胶充分接触 D选用黑曲霉提取液是因为果胶酶只能在生物细胞内起催化作用 答案(1)b 红色环带 氨 越强(2)植物激素(植物生长调节剂)发芽(3)C 解析(1)别离以尿素为氮源细菌应选用以尿素为唯一氮源并添加酚红指示剂培养基。分解尿素微生

42、物可产生脲酶，脲酶可催化尿素分解第 30 页 产生氨，使酚红指示剂变红，从而在菌落周围形成红色环带，形成红色环带越大，说明该菌株利用尿素能力越强。(2)植物组织培养所需 MS 培养基需参加植物激素。培养过程中一般先用发芽培养基进展培养，使之长出较多丛状苗，然后将丛状苗分株培养，诱导生根。(3)在用果胶酶水解果胶实验中，实验操作后滴加酒精目是检验实验过程中果胶是否被水解；沸水浴加热后果胶酶会失去活性；只要条件适宜，果胶酶在细胞内外均可发挥催化作用。10(2021温州中学检测)在果汁生产中需用到果胶酶，某课题研究小组为了探究果胶酶某些特性，进展了如下实验：(1)实验方法：请将图 1 中所示操作进展

43、排序：_。(2)实验结果：对照组与实验组进展了一样时间实验，结果如图 2 中曲线甲所示：图 2 中自变量是温度，除此之外还可用 _表示。A酶浓度 B苹果泥量 C水参加量 DpH 图 2 中纵坐标还可用_来表示。实验步骤中，在果胶酶与苹果泥混合前，将二者分装在不同试管中并进展恒温目是_ _第 31 页 _。实验小组改变了实验条件后重复做实验，得到曲线乙，苹果汁澄清度最高点对应横坐标是同一位置原因是_。引起曲线乙下移原因是_ _(至少答出两条)。答案(1)a、c、d、b(2)D 苹果汁体积 保证底物与酶在混合时温度是一样 同一种酶最适温度是一定，不会因酶浓度、底物量不同而改变 pH、酶浓度与苹果泥

44、量等因素不同 解析(1)实验顺序：准备水果泥与配制果胶酶水果泥与果胶酶分别水浴保温水果泥与果胶酶混合保温过滤果汁后用量筒计量。(2)果胶酶活性受温度、pH 等条件影响，而与底物量、酶浓度与水参加量没有关系；每一种酶都有一个最适温度与最适 pH，且该值恒定。衡量实验结果指标有两个：一个是苹果汁体积，另一个是苹果汁澄清度。为了保证实验在相应温度下进展，必须使酶与底物分别保温到达要求后再混合。在一样温度条件下，pH、酶浓度与底物浓度也会改变反响速率。11请答复以下问题：第 32 页(1)在工业生产中，为提高酶使用率与产品纯度，一般需要将酶进展固定化处理。利用石英砂固定 淀粉酶方法属于_。A吸附法 B

45、偶联法 C交联法 D包埋法(2)一定浓度淀粉溶液流过 淀粉酶固定化柱后，被水解成_，遇碘显_色。(3)淀粉酶可以通过枯草杆菌发酵生产，以下是利用诱变育种方法培育获得产生较多淀粉酶菌株主要实验步骤。(原理：菌株生长过程中可释放淀粉酶分解培养基中淀粉，在菌落周围形成透明圈。)第一步：将枯草杆菌接种到_培养基上进展扩大培养。第二步：将枯草杆菌分成两组，A 组用_处理，B 组不处理(作对照)。第三步：制备多个含淀粉固体培养基。第四步：将 A、B 组分别稀释后，分别在含淀粉固体培养基上利用_法别离，适宜条件下培养得到单菌落。第五步：观察 A、B 组各菌落周围_。实验结果预期：根据诱发突变率低特点，预期_

46、 _。第 33 页 根据诱发突变不定向性特点，预期_ _。答案(1)A(2)糊精 红(3)液体 诱变剂 涂布 透明圈大小 A 组中多数菌落周围透明圈与 B 组差异不显著 A 组有少数菌落周围透明圈比 B 组明显小，有少数比 B 组明显大(或 A 组透明圈大小不一，B 组较一致)解析 石英砂固定 淀粉酶方法为吸附法；淀粉流经 淀粉酶固定化柱后，被水解为糊精，遇碘呈红色；获得诱变菌株需进展诱变剂处理，通过实验组与对照组培养基中菌落周围透明圈大小可确认淀粉分解程度。12(2021宁波 1 月期末测试)石油烃是环境重要污染源。为了筛选出具有强分解石油烃能力微生物，进展了一系列操作，请答复以下问题：(1

47、)分解石油烃微生物一般要从土壤中别离，获取土壤样品取样地点最好选在_。(2)微生物实验室采用_法对培养基进展灭菌处理。A干热灭菌 B过滤灭菌 C灼烧灭菌 D高压蒸汽灭菌(3)以下图为获取土壤样品后培养研究过程：为了能有效地别离出分解石油烃微生物，过程所用培养基成分第 34 页 特点是_，从而有利于分解石油烃微生物生长。(4)对 进 展 接 种 常 采 用 两 种 方 法 分 别 是 _ 与_。(5)假设发现在中无法区分菌落，可以将图中 取出菌液_。(6)假设实验室为别离纯化优良菌种进展了如下操作，排序最合理是_。A B C D(7)整个微生物别离与培养操作，一定要注意在_条件下进展。答案(1)

48、石油污染明显处(2)D(3)以石油烃为唯一碳源(4)划线别离法 涂布别离法(5)进展(梯度)稀释(6)B(7)无菌 解析(1)分解石油烃微生物在石油污染明显处分布较多。(2)微生物实验室常用高压蒸汽灭菌法对培养基灭菌。(3)实验过程中，过程所用培养基应用石油烃作为唯一碳源，以抑制其他种类微生物生长，从而别离出以石油烃为碳源微生物。(4)对微生物别离实验中，常用划线别离法或涂布别离法进展接种。第 35 页(5)假设发现在中无法区分菌落，可能是菌液中细菌浓度太高，可进展梯度稀释处理后再进展接种。(6)图示为用划线别离法进展接种别离。接种过程中应先在酒精灯火焰上灼烧接种环后，蘸取菌液进展接种，整个操作在酒精灯火焰旁进展，接种完毕后还须在酒精灯上灼烧接种环。(7)为防止污染，整个微生物别离与培养操作，一定要注意在无菌条件下进展。