大学基础化学——食品中防腐剂的测定.ppt

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1、 防腐剂的测定防腐剂的测定v 概论薄层层析法苯甲酸、山梨酸测定v防腐剂防腐剂是指能防止食品腐败、变质，是指能防止食品腐败、变质，抑制食品中微生物繁殖，延长食品抑制食品中微生物繁殖，延长食品保存期的物质，它是人类使用最悠保存期的物质，它是人类使用最悠久、最广泛的食品添加剂久、最广泛的食品添加剂。防腐剂的种类防腐剂的种类 我国允许使用的品种主要有：我国允许使用的品种主要有：苯苯甲甲酸酸及及其其钠钠盐盐、山山梨梨酸酸及及其其钾钾盐盐、对对羟羟基基苯苯甲甲酸酸乙乙酯酯和和丙丙酯酯、丙丙酸酸钠钠、丙丙酸酸钙钙、脱脱氢氢乙乙酸等。酸等。非允许的防腐剂：非允许的防腐剂：硼砂、水杨酸、氯霉素、青霉素硼砂、水杨

2、酸、氯霉素、青霉素 防腐剂的测定方法防腐剂的测定方法vGB/T5009292003v第一法第一法气相色谱法气相色谱法v第二法第二法高效液相色谱法高效液相色谱法v第三法第三法薄层色谱法薄层色谱法v本本标标准准规规定定了了酱酱油油、水水果果汁汁、果果酱酱等等食食品品中中苯苯甲甲酸酸、山山梨梨酸酸含量的测定方法。含量的测定方法。v本本标标准准适适用用于于酱酱油油、水水果果汁汁、果果酱酱等等食食品品中中苯苯甲甲酸酸、山山梨梨酸酸含量的测定。含量的测定。教学重点、难点教学重点、难点v薄层层析法薄层层析法v薄层色谱法测定薄层色谱法测定苯甲酸和山梨酸苯甲酸和山梨酸原理原理利用样品中各组分对吸附剂吸附能力的利

3、用样品中各组分对吸附剂吸附能力的不同，发生了无数次吸附和解吸过程。不同，发生了无数次吸附和解吸过程。对吸附剂吸附能力弱、对展开剂溶解度对吸附剂吸附能力弱、对展开剂溶解度大的组分随流动相迅速向前移动，可较快地大的组分随流动相迅速向前移动，可较快地随着展开剂迁移到层析板的上端；对吸附剂随着展开剂迁移到层析板的上端；对吸附剂吸附能力强的组分移动慢，则留在层析板的吸附能力强的组分移动慢，则留在层析板的下端。下端。利用各组分在展开剂中溶解能力和被解利用各组分在展开剂中溶解能力和被解吸能力的不同，最终将各组分彼此分开。吸能力的不同，最终将各组分彼此分开。实验流程实验流程v制板制板活化活化点样点样展开展开定

4、性或定量定性或定量 1、制制板板吸吸附附剂剂均均匀匀地地涂涂在在玻玻璃璃板板上上作作为为固固定定相相，经经干干燥燥、活活化化后后，称称薄薄层层板板。将将吸吸附附剂剂均均匀匀地涂在玻璃板上这个过程称地涂在玻璃板上这个过程称制板制板。2、点点样样把把含含有有不不同同组组成成的的被被测测样样品品，点点在在涂涂有吸附剂的薄层板上，称有吸附剂的薄层板上，称点样点样。3 3、展开展开由于物质中各组分受到吸附剂的吸附由于物质中各组分受到吸附剂的吸附力和溶剂的解吸附力的反复作用，各组分在层析力和溶剂的解吸附力的反复作用，各组分在层析板上向前迁移过程称为板上向前迁移过程称为展开展开，选用适当的有机溶剂，通过毛细

5、管作用，逐选用适当的有机溶剂，通过毛细管作用，逐步浸润层析板，有机溶剂称为步浸润层析板，有机溶剂称为展开剂展开剂（流动相）。（流动相）。定性或定量定性或定量v展开后使各组分分离，再根据比移值和斑点展开后使各组分分离，再根据比移值和斑点的大小进行定性或定量。的大小进行定性或定量。吸附剂吸附剂v分离效果及层析速度主要取决一吸附剂的粒度分离效果及层析速度主要取决一吸附剂的粒度的大小。而吸附作用则与颗粒本身的微孔大小有关。的大小。而吸附作用则与颗粒本身的微孔大小有关。v吸附剂的活性：对于同一吸附剂，若以不同的方法吸附剂的活性：对于同一吸附剂，若以不同的方法制备处理，其吸附能力也有强弱的变化，一般常以制

6、备处理，其吸附能力也有强弱的变化，一般常以“活性活性”表示吸附力的强弱。分为五级：一级活性表示吸附力的强弱。分为五级：一级活性最强，五级活性最弱。一般用二三级。最强，五级活性最弱。一般用二三级。v吸附剂的常用种类有：硅胶、吸附剂的常用种类有：硅胶、聚酰胺聚酰胺薄层板制备薄层板制备v1、平平铺铺法法：用用购购置置或或自自制制的的薄薄层层涂涂布布器器，进进行行制制板板，涂涂层层既既方方便便又又均均匀匀，是是科科研研中中常常用用的方法。的方法。v2、倾倾注注法法：将将调调好好的的浆浆料料倒倒在在玻玻璃璃板板上上，用用手手摇摇晃晃，使使其其表表面面均均匀匀平平整整，然然后后放放在在水水平平的平板上晾干

7、。这种制板方法厚度不易控制。的平板上晾干。这种制板方法厚度不易控制。注意事项注意事项v用用湿湿法法制制薄薄层层，应应入入在在水水平平的的台台面面上上，否否则则由由于于台台面面不不平平而而使使吸吸附附剂剂糊糊状状体体向向低低处处流流动，造成薄层厚度不一致。动，造成薄层厚度不一致。v晾晾干干时时应应放放在在通通风风良良好好的的地地方方，无无灰灰尘尘，以防薄层被污染。以防薄层被污染。v烘干后应放在干燥器中冷却、贮存。烘干后应放在干燥器中冷却、贮存。活化活化v活化的目的：活化的目的：是为了增加吸食剂的吸附能力，即增加活性。v操作：操作：湿法制板都应进行晾干、烘干干燥。薄层板经过自然干燥后，失去了大部分

8、水分才能进行活化处理。活化的温度为105-110。v观察与思考：观察与思考：将含水分过多的薄层板立即放入烘箱（105-110）中活化，会出现什么现象？由于水分突然大量蒸发则造成板面断裂或龟裂，而使薄层板不能使用。点样点样v点样技术直接影响到分离效果和要检出灵敏度。点样技术直接影响到分离效果和要检出灵敏度。v点点样样仪仪器器：玻玻璃璃毛毛细细管管（一一般般用用于于定定性性）、生生化化用用血血色色素素管管（一一般般用用于于定定性性），微微量量注注射射器器（一一般般用用于定量），于定量），v规格：规格：202020cm20cmv在在薄薄板板一一端端1.5厘厘米米处处开开始始每每隔隔厘厘米米作作一一记

9、记号号（铅铅笔笔轻轻轻轻点点一一下下，切切勿勿刺刺破破薄薄层层）共共六六点点，用用0.5毫毫米米直直径径的的毛毛细细管管吸吸取取样样品品，各各样样品品按按右右图图点点样样二二次次（样品量微克，点子直径不超过毫米）。（样品量微克，点子直径不超过毫米）。薄层色谱薄层色谱法法v原理原理 样品酸化后，用乙醚提取苯甲酸、样品酸化后，用乙醚提取苯甲酸、山梨酸。将样品提取液浓缩，点于聚酰胺薄山梨酸。将样品提取液浓缩，点于聚酰胺薄层板上，展开。显色后，根据薄层板上苯甲层板上，展开。显色后，根据薄层板上苯甲酸、山梨酸的比移值，与标准比较定性，并酸、山梨酸的比移值，与标准比较定性，并可进行概略定量。可进行概略定量

10、。展开展开v展展层层至至溶溶剂剂前前沿沿顶顶端端0.5厘厘米米处处时时取取出出薄薄板板（展展开开时时间间约约小小时时），在在溶溶剂剂前前沿沿处处作作记记号号并并放放在在空空气中晾干，以除去溶剂。气中晾干，以除去溶剂。v将选择的展开剂倒入层析槽或层析缸中（液层高度将选择的展开剂倒入层析槽或层析缸中（液层高度约为约为0.5cm）,待容器内溶剂蒸气达到饱和后，将点待容器内溶剂蒸气达到饱和后，将点好样的薄层析放入槽或缸中进行展开。好样的薄层析放入槽或缸中进行展开。v（注意：点样的位置必须要在展开剂液面之上。）（注意：点样的位置必须要在展开剂液面之上。）v当展开剂展开，其前沿上升到板顶端当展开剂展开，其

11、前沿上升到板顶端5-10mm处时，处时，取出薄层板，用铅笔划出前沿的位置、晾干。取出薄层板，用铅笔划出前沿的位置、晾干。显色显色v 用喷雾器显色均匀喷雾在薄层上，放烘箱用喷雾器显色均匀喷雾在薄层上，放烘箱中保持中保持加温至层析斑点显现。此显色加温至层析斑点显现。此显色剂可使各种剂可使各种糖呈现糖呈现出不同颜色。出不同颜色。定性定性v根据各标准糖液层析后所得班点的根据各标准糖液层析后所得班点的位置确定混合样品中所分离出的各位置确定混合样品中所分离出的各个斑点分别为何种糖。个斑点分别为何种糖。定量定量v用各种显色方法使斑点出现后，应立即用铅用各种显色方法使斑点出现后，应立即用铅笔或小针划出斑点的位

12、置，并计算笔或小针划出斑点的位置，并计算R值。值。v 化合物移动的距离（斑点中心到原点的距离）化合物移动的距离（斑点中心到原点的距离）v R R值值 v 溶剂的移动的距离（溶剂前沿到原点距离）溶剂的移动的距离（溶剂前沿到原点距离）苯甲酸和山梨酸测定苯甲酸和山梨酸测定（薄层层析法）（薄层层析法）v步骤步骤v样样品品处处理理点点样样展展开开显显色色定定性性或或半半定量定量聚酰胺板的制备聚酰胺板的制备称称取取1.6g聚聚酰酰胺胺粉粉，加加0.4g可可溶溶性性淀淀粉粉，加加约约7ml水水，研研磨磨35min，立立即即倒倒入入涂涂布布器器内内制制成成、0.3mm的的薄薄层层板板两两块块，室室温温干干燥燥

13、后后，于于80干燥干燥1h,取出置于干燥器中保存。取出置于干燥器中保存。注意事项注意事项：聚酰胺薄层板，烘干温度不能高：聚酰胺薄层板，烘干温度不能高于于8080，否则聚酰胺变色。，否则聚酰胺变色。注意！注意！样品提取样品提取v操作流程图：操作流程图：v2.5g样品样品于于25ml具塞量筒具塞量筒加加0.5ml盐酸盐酸用用15ml乙醚萃取，振摇乙醚萃取，振摇1min用用10ml乙醚萃乙醚萃取取合并两次萃取液合并两次萃取液于另一于另一25ml具塞量筒。具塞量筒。思考题：思考题：酸化的目的是什么？酸化的目的是什么？使苯甲酸钠、山梨酸钾转变为苯甲酸或山使苯甲酸钠、山梨酸钾转变为苯甲酸或山梨酸，用乙醚提

14、取。梨酸，用乙醚提取。?v另一另一25ml具塞量筒具塞量筒NaCl洗涤两次洗涤两次静静止止10min通过无水通过无水NaSO4层过滤层过滤于于25ml容量瓶容量瓶加乙醚定容至加乙醚定容至25ml。v吸吸取取10.0ml乙乙醚醚提提取取液液分分现现将将置置于于10ml具具塞塞离离心心管管中中40水水浴浴上上挥挥干干加加0.1ml乙醇溶解残渣乙醇溶解残渣备用。备用。思考题思考题v1 1、样品中如含有二氧化碳、酒精时应如何处、样品中如含有二氧化碳、酒精时应如何处理？理？v2 2、富含脂肪和蛋白质的样品应如何处理？、富含脂肪和蛋白质的样品应如何处理？v答：如含有二氧化碳、酒精时应先加热除去答：如含有二

15、氧化碳、酒精时应先加热除去 ；富含脂肪和蛋白质的样品应除去脂肪和蛋；富含脂肪和蛋白质的样品应除去脂肪和蛋白质，以防用乙醚萃取时发生乳化。除去的白质，以防用乙醚萃取时发生乳化。除去的方法同糖精的测定。方法同糖精的测定。?测定测定v点点样样：在在薄薄层层下下端端2cm的的基基线线上上，用用微微量量注注射射器器点点样品液，同时各点样品液，同时各点苯甲酸、山梨酸标准溶液。苯甲酸、山梨酸标准溶液。v展开与显色：展开与显色：将点样后的薄层板放入预先盛有展开将点样后的薄层板放入预先盛有展开剂的展开剂的展开内，展开内，展开槽周围贴有滤纸，待溶剂前沿槽周围贴有滤纸，待溶剂前沿上展至上展至10cm，取出挥干，喷显色剂，斑点成黄色，取出挥干，喷显色剂，斑点成黄色，背景为蓝色。样品中所含苯甲酸、山梨酸的量与标背景为蓝色。样品中所含苯甲酸、山梨酸的量与标准斑点比较定量（苯甲酸、山梨酸的比移值依次为）准斑点比较定量（苯甲酸、山梨酸的比移值依次为）。操作技术要点操作技术要点v点样：少量多次，大小要均匀。v展开：展开剂倒入展开槽中，展开剂液层约为.0.5cm,并盖盖一段时间，使之预告达到饱和状态，再放入薄层板。v显色：均匀喷洒显色剂。v计算vX=m51000 v M610/25V6/V51000