SDS尿蛋白及本周氏电泳的意义.pptx

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1、SDSSDS尿蛋白电泳尿蛋白电泳王连升王连升法国法国SebiaSebia公司上海代表处公司上海代表处 肾病的现状肾脏疾病：疾病：慢性隐匿，发病率急剧上升，早期就诊率20-30%，部分患者首诊即终末期肾功能衰竭慢性肾功能衰竭（CRF）是各种慢性肾脏病（CKD）的最终结果CRF并发症严重,死亡率高严重危害人重危害人类健康的全球性的公共健康的全球性的公共卫生生问题肾单位的生理结构和各类生理蛋白2百万个肾单位每天过滤180升的血浆同时产生大约1.5升的尿液。肾小管的废弃物排放 最后形成的尿液含有 1/3的白蛋白 和 2/3 球蛋白肾小管重新吸收白蛋白转铁蛋白免疫球蛋白小分子蛋白肾小球过滤白蛋白转铁蛋白

2、免疫球蛋白小分子蛋白小分子蛋白尿里的蛋白在生理学角度讲，正常的人的尿蛋白量小于150mg/24h(大约在 100mg/L)主要的蛋白是白蛋白(少于 30mg/L)病理上的肾功能疾病：当尿蛋白量大于150mg/24h而此时，尿蛋白的成分也是不定的。尿蛋白含量增加的原因p间歇性的 生理因素：食高蛋白饮食后，精神激动、剧烈运动、长时间受 寒，站立过久,p病理性的：肾前性（溢出性）肾性 肾后性 肾小球损伤 肾小管损伤 混合性 选择性 非选择性 67kDa 67 kDa溢出性蛋白尿血浆中相对分子质量较小或阳性电荷蛋白异常增多经肾小球滤过，超过肾小管重吸收能力形成蛋白尿。肾小球滤过、肾小管重吸收均正常。7

3、常见蛋白种类及疾病常见蛋白种类及疾病 游离轻链 见于多发性骨髓瘤 2微球蛋白 见于淋巴组织增生综合征 溶菌酶 见于部分急性粒细胞白血病 血红蛋白 溶血性疾病,血型不合输血 1酸性糖蛋白 见于支气管肺癌 肌红蛋白 挤压伤,心肌梗死肾前性(溢出)蛋白尿肾后性蛋白尿 来源于肾小管代谢产生的、组织破坏分解的、炎症或药物刺激泌尿系统分泌的蛋白质，进入尿液而形成的蛋白尿。肾性蛋白尿肾小球性蛋白尿 肾小球滤过膜因炎症、免疫、代谢等因素损伤后滤过膜孔径增大、断裂和（或）静电屏障作用减弱。根据滤过膜损伤程度及尿蛋白的组分，尿蛋白分为2类：（1）选择性蛋白尿（selectiveproteinuria）：相对分子质

4、量中等的清蛋白为主（2）非选择性蛋白尿（non-selectiveproteinuria）：以相对分子质量较大和中等的蛋白质同时存在为主。反映肾小球毛细管壁有严重断裂和损伤。肾小管性蛋白尿 肾小管在受到感染、中毒损伤或继发于肾小球疾病时，因重吸收能力降低或抑制，而出现的以相对分子质量较小的蛋白为主的蛋白尿。肾小球过滤大分子量蛋白（主要为67kDa）无法透过肾小球进入肾小管其他决定各种蛋白被过滤的因素:分析形状,带电量,血浆浓度.还有一些血液动力学因素可影响蛋白的过滤.肾小球损伤原因糖尿病感染性损伤(细菌感染,乙肝患者,水痘,梅毒,单核白血球增多症,)其他系统性疾病(自动免疫系统,癌症,)中毒现

5、象(重金属,药物中毒,)此时,我们可以在尿蛋白中发现白蛋白和其他大分子量蛋白白蛋白和其他大分子量蛋白 (大于大于 67kDa)。肾小管的再次吸收功能在肾小球中被过滤掉的小分子蛋白，分子量小于67kDa,将会在肾小管内被重新吸收(内吞作用).99%的在肾小球内被过滤的蛋白,都将会被重新吸收利用.例如,18g/24-h白蛋白将会被过滤掉;30mg/24-h白蛋白在人的尿液中被发现.肾小管损伤肾小管损伤将会改变其对小蛋白分子的重新吸收能力(小于67kDa的蛋白)产生原因遗传原因(Fanconisyndrome)代谢性疾病(糖尿病,草酸中毒)免疫球蛋白单克隆扩增(myeloma,Waldenstrm)

6、药物作用(氨基甙类抗生素)中毒(金属中毒,氨基甙类)白蛋白白蛋白 (67 kDa 67 kDa 67 kDa混合性损伤混合性蛋白尿 肾脏病变同时或相继累及肾小球和肾小管时而产生的蛋白尿。各组分所占比例因病变损害部位不同而不一致。67kDa150-200mg/L):蛋白尿阳性变蓝，本周氏蛋白时会产生假阴性定量检测方法-比浊法（不建议使用）-建议采用比色法（焦性没食子酚红，考马斯蓝）尿中总蛋白的定量分析无法检测到低浓度的本周氏蛋白特异蛋白测定免疫法定量测定肾小球性标志蛋白:Albumin,IgG,Transferrin肾小管性标志蛋白:b 2 microglobulin,RBP,a1 microg

7、lobulin 如果需要更多的特异蛋白信息，需要更多的测试尿蛋白电泳提供更全面的蛋白信息在 HYDRAGEL 5 PROTEINURIE 凝胶上 主要的尿蛋白 电泳条带区域分析起源于肾小管的各类蛋白(分子量 67 kDa)白蛋白白蛋白(分子量分子量:67 kDa)a1-微球蛋白(MW:33kDa)游离轻链(MW 25 kDa)转铁蛋白(MW:80kDa)Cystatin(MW:11kDda)b2-微球蛋白(MW:12kDa)溶菌酶(MW:15kDa)视黄醇结合蛋白(MW:21kDa)游离轻链的二聚体(MW 50 kDa)IgG(MW:160kDa)IgA(MW:165kDa)结合珠蛋白加样位置

8、a2-巨球蛋白(MW:900kDa)注:(Cystatin C),血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C5 PROTEINURIE14.3 KDa26.6 KDa150 KDa67 KDa肾小球性蛋白尿血清血清Glomerular proteins(67kDa)肾小球性蛋白肾小管性蛋白尿SerSerTubular proteins肾小管性蛋白(67kDa)临床病例2:Light chain myeloma轻链性骨髓瘤4:Macroscopic Hematuria肉眼血尿MW5:Overload Proteinuriawith polymerised BJ 本周氏蛋白多聚体 非浓缩尿蛋白电泳的优点1.可以直

9、观地反映出病人是肾小球受损还是肾小管受损，或者是小球小管均受损伤的混合型尿蛋白。2.操作简便、尿液无须浓缩，只需2个半小时即可出报告。3.对不愿意进行肾穿检查的病人,可作为替代实验。4.方法敏感，最小检出限度为15mg/L。5.能得到尿蛋白剖像的电泳谱，便于比较和保存。6.儿童尤以肾小球病变为主,直接检测24h尿蛋白。7.对临床不典型的患者及微量尿蛋白的患者的诊断及各种肾病在治疗过程中的动态分析具有很高的临床价值。本周氏Bence-Jones蛋白检测本周氏蛋白（Bence-Jones Proteins,BJP)HenryBenceJones于1844年在一个骨髓瘤患者尿中发现的一种具有特殊凝溶

10、性质的蛋白该种蛋白4060发生沉淀，加热煮沸时溶解，冷却后又沉淀。后被证明是单克隆的免疫球蛋白轻链二聚体。大多数骨髓瘤患者尿中有本周氏蛋白5060室温室温90100本周氏蛋白浆细胞增生症浆细胞增生症影响影响血液中出现游离轻链血液中出现游离轻链尿液中出现起因起因结果结果骨髓瘤巨球蛋白血症CLL慢性白血病MGUS.肾小管损伤淀粉样病变轻链沉淀病本周氏蛋白阳性患者多表现为肾脏损害极易误诊极易误诊为慢性肾炎轻链有3种形式出现在血清或尿中正常的轻链过剩 慢性肝病、红斑狼疮等多克隆增殖性疾病伴随轻链单一轻链 本周氏蛋白免疫固定电泳方法 仪器仪器：Sebia Sebia 琼脂糖凝胶电泳仪琼脂糖凝胶电泳仪试剂

11、：本周氏试剂：本周氏蛋白电泳蛋白电泳试剂试剂 方法：方法：点样，电泳，加抗体反应点样，电泳，加抗体反应，条条带检测带检测ELP ELP 泳道泳道:固定液固定液GAM GAM 泳道：泳道：抗抗IgG.A.MIgG.A.M重链抗血清重链抗血清K K 泳道：泳道：抗抗 轻链抗血清轻链抗血清L L 泳道：泳道：抗抗 轻链抗血清轻链抗血清K Kfreefree 泳道：泳道：抗游离抗游离 轻链抗血清轻链抗血清L L free free 泳道：泳道：抗抗 游离游离 轻链抗血清轻链抗血清重链重链参考泳道参考泳道复合轻链复合轻链游离轻链游离轻链免疫球蛋白免疫球蛋白免疫球蛋白是机体的正常生理成分多克隆分类重链：I

12、gG、IgA、IgM、IgD、IgE轻链：、10种类型抗抗复合复合轻链抗血清结合位置轻链抗血清结合位置抗游离轻链抗血清结合位置，抗游离轻链抗血清结合位置，不能与完整抗体的轻链结合不能与完整抗体的轻链结合本周氏蛋白检测结果解析游离游离kappakappa复合复合kappakappa游离游离lambdalambdaLambda Bence Jones protein(G,A or M)kappa kappa Bence Jones2 different levels of polymerization1.Bence Jones suspected2.No Bence Jones suspected3.Bence Jones suspected4.Bences Jones suspectedBenceJones?1.Bence Jones lambda(polymerized)2.No Bence Jones 3.Bence Jones lambda4.Bences Jones kappa(polymerized)本周氏蛋白电泳检测对象肾病不明原因水肿尿蛋白阳阳性血清蛋白电泳提示“M蛋白”尿SDS蛋白电泳提示“轻链轻链”存在骨髓瘤患者其他淋巴系统恶性增殖性疾病淋巴细胞白血病浆细胞型白血病谢 谢