大肠菌群检验重点1320.pptx

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1、大肠菌群检测第一页，共二十四页。检检验验程程序序检检 样样25g(mL)样品样品+225mL稀释液，均质稀释液，均质10倍系列稀释倍系列稀释选择适宜选择适宜3个连续稀释度的样品匀液，接种至个连续稀释度的样品匀液，接种至月桂基硫酸盐胰蛋白胨月桂基硫酸盐胰蛋白胨LST肉汤管肉汤管不产气不产气产气产气煌绿乳糖胆盐煌绿乳糖胆盐BGLB)肉汤肉汤不产气不产气产气产气大肠菌群阴性大肠菌群阴性大肠菌群阳性大肠菌群阳性查查MPN表表报告结果报告结果36148h2h36148h2h检检样样初初发发酵酵复复发发酵酵报报告告第二页，共二十四页。检检 样样固体样品：在电子天平上称取固体样品：在电子天平上称取25g +

2、225mL0.85%灭菌生理灭菌生理 盐水盐水液体样品：直接取用液体样品：直接取用固体样品存放罐固体样品存放罐第三页，共二十四页。固体样品称量l l用镊子取酒精棉擦手，点燃酒精灯；用镊子取酒精棉擦手，点燃酒精灯；用镊子取酒精棉擦手，点燃酒精灯；用镊子取酒精棉擦手，点燃酒精灯；l l翻开稀释瓶盖，放在天平上，等显示屏上的数字稳定后，按翻开稀释瓶盖，放在天平上，等显示屏上的数字稳定后，按翻开稀释瓶盖，放在天平上，等显示屏上的数字稳定后，按翻开稀释瓶盖，放在天平上，等显示屏上的数字稳定后，按“去皮去皮去皮去皮键，当显示屏上的数字显示为键，当显示屏上的数字显示为键，当显示屏上的数字显示为键，当显示屏上

3、的数字显示为“0“0时，可开始称量。时，可开始称量。时，可开始称量。时，可开始称量。去去皮皮键键第四页，共二十四页。初初 发发 酵酵取带上试管架：取带上试管架：单料管单料管9支支装有装有0.85%灭菌生理盐水的生理盐水灌灭菌生理盐水的生理盐水灌1个个装有装有9mL 0.85%灭菌生理盐水的试管灭菌生理盐水的试管3支支第五页，共二十四页。操操 作作 步步 骤骤1.1.用酒精棉消毒操作台用酒精棉消毒操作台用酒精棉消毒操作台用酒精棉消毒操作台第六页，共二十四页。操操 作作 步步 骤骤2.2.用酒精棉消毒双手用酒精棉消毒双手用酒精棉消毒双手用酒精棉消毒双手第七页，共二十四页。操操 作作 步步 骤骤3.

4、3.点燃酒精灯点燃酒精灯点燃酒精灯点燃酒精灯第八页，共二十四页。操操 作作 步步 骤骤4.4.为装有培养基的试管编号为装有培养基的试管编号为装有培养基的试管编号为装有培养基的试管编号第九页，共二十四页。为试管编号为试管编号编号原那么：编号原那么：编号原那么：编号原那么：固体样品：固体样品：固体样品：固体样品：1 1、0.10.1、0.010.01表示参加的固体样品为表示参加的固体样品为表示参加的固体样品为表示参加的固体样品为1g1g、0.1g0.1g、0.01g0.01g液体样品：液体样品：液体样品：液体样品：1010、1 1、0.10.1表示参加的液体样品为表示参加的液体样品为表示参加的液体

5、样品为表示参加的液体样品为10mL10mL、1mL1mL、0.1mL0.1mL双双 料料单单 料料1110.10.10.10.010.010.011010101110.10.1 0.1第十页，共二十四页。l l用量筒量取用量筒量取用量筒量取用量筒量取225mL0.85%225mL0.85%灭菌生灭菌生灭菌生灭菌生理盐水至稀释瓶中。注意：稀理盐水至稀释瓶中。注意：稀理盐水至稀释瓶中。注意：稀理盐水至稀释瓶中。注意：稀释瓶、带塞锥形瓶开盖前要过火，释瓶、带塞锥形瓶开盖前要过火，释瓶、带塞锥形瓶开盖前要过火，释瓶、带塞锥形瓶开盖前要过火，量筒、装有量筒、装有量筒、装有量筒、装有0.85%0.85%灭

6、菌生理盐水灭菌生理盐水灭菌生理盐水灭菌生理盐水的锥形瓶及其塞子应放在酒精灯的锥形瓶及其塞子应放在酒精灯的锥形瓶及其塞子应放在酒精灯的锥形瓶及其塞子应放在酒精灯周围周围周围周围15cm15cm的范围内的范围内的范围内的范围内固体样品称量后处理固体样品称量后处理第十一页，共二十四页。液液 体体样样 品品液体样品：直接吸取液体样品：直接吸取1mL样液至单料管中样液至单料管中1110.10.10.11mL1mL1mL注意：注意：加样加样液后不能液后不能振摇试管。振摇试管。第十二页，共二十四页。液体样品：液体样品：液体样品：液体样品：吸取吸取吸取吸取25mL25mL液体样品至稀释瓶中，参加液体样品至稀释

7、瓶中，参加液体样品至稀释瓶中，参加液体样品至稀释瓶中，参加225mL0.85%225mL0.85%灭菌生理灭菌生理灭菌生理灭菌生理盐水，盖上盖子，混匀；盐水，盖上盖子，混匀；盐水，盖上盖子，混匀；盐水，盖上盖子，混匀；从稀释瓶中分别吸取从稀释瓶中分别吸取从稀释瓶中分别吸取从稀释瓶中分别吸取1mL1mL被稀释被稀释被稀释被稀释1010倍的饮用水至最后三支单倍的饮用水至最后三支单倍的饮用水至最后三支单倍的饮用水至最后三支单料管中。料管中。料管中。料管中。液液 体体样样 品品0.10.10.125mL1mL1mL1mL注意：注意：加样液后不能振摇试管。加样液后不能振摇试管。第十三页，共二十四页。固体

8、样品：固体样品：固体样品：固体样品：l l从稀释瓶中吸取从稀释瓶中吸取从稀释瓶中吸取从稀释瓶中吸取1mL1mL样液至装有样液至装有样液至装有样液至装有9mL0.85%9mL0.85%灭菌生理盐水的试管灭菌生理盐水的试管灭菌生理盐水的试管灭菌生理盐水的试管中，盖上盖子，混匀；中，盖上盖子，混匀；中，盖上盖子，混匀；中，盖上盖子，混匀；l l从该试管中分别吸取从该试管中分别吸取从该试管中分别吸取从该试管中分别吸取1mL1mL样液至最后三支单料管中。样液至最后三支单料管中。样液至最后三支单料管中。样液至最后三支单料管中。0.010.010.011mL1mL1mL1mL注意：注意：将样液参加装有稀释液

9、的试管后，振摇试管，混匀。将样液参加装有稀释液的试管后，振摇试管，混匀。样液参加培养基后不能振摇试管。样液参加培养基后不能振摇试管。第十四页，共二十四页。观察初发酵结果l l取回初发酵结果，观察。确定有几支初发酵取回初发酵结果，观察。确定有几支初发酵管内的小倒管中有气泡产生。管内的小倒管中有气泡产生。第十五页，共二十四页。l l根据对初发酵结果的观察，有几支小倒管中根据对初发酵结果的观察，有几支小倒管中有气泡，那么取几支煌绿乳糖胆盐复发酵有气泡，那么取几支煌绿乳糖胆盐复发酵管。管。内有小倒管内有小倒管复复 发发 酵酵第十六页，共二十四页。在有气泡的初发酵管后的在有气泡的初发酵管后的相应位置相应

10、位置放上复发酵管放上复发酵管 用接种环移取有气泡初发酵管中液体一环至相对应的用接种环移取有气泡初发酵管中液体一环至相对应的复发酵管中。注意接种环的灼烧、冷却复发酵管中。注意接种环的灼烧、冷却第十七页，共二十四页。l l将接种好的初发酵管和复发酵管放入恒温培将接种好的初发酵管和复发酵管放入恒温培养箱。养箱。l l注意选择设置为注意选择设置为361的培养箱。的培养箱。361 48h 2h 第十八页，共二十四页。l l观察复发酵结果，小倒管内有气泡为阳性观察复发酵结果，小倒管内有气泡为阳性+，无气泡为阴性，无气泡为阴性-。+-+-+-注：初发酵管产气，复发酵结果可能产气，也可能不产注：初发酵管产气，

11、复发酵结果可能产气，也可能不产气。气。第十九页，共二十四页。查查MPN表表 1 1 1 11第二十页，共二十四页。检验结果记录检验结果记录检样量检样量检样量检样量初发酵结果（管）初发酵结果（管）初发酵结果（管）初发酵结果（管）复发酵结果（管）复发酵结果（管）复发酵结果（管）复发酵结果（管）阳性管数阳性管数阳性管数阳性管数10mL10mL1g1g（或（或（或（或mLmL）+-+-1 10.1g0.1g（或（或（或（或mLmL）+-+-1 10.01g 0.01g（或（或（或（或mLmL）-+-+-1 10.001g 0.001g（或（或（或（或mLmL）培养条件培养条件培养条件培养条件温度：温度

12、：温度：温度：时间：时间：时间：时间：温度：温度：温度：温度：时间：时间：时间：时间：检验结果检验结果检验结果检验结果 MPN/g=1.1 MPN/g=1.1备注备注备注备注标准值：标准值：标准值：标准值：单项检验结论：符合（不符合）单项检验结论：符合（不符合）单项检验结论：符合（不符合）单项检验结论：符合（不符合）检验人：检验人：检验日期：检验日期：固体样品固体样品第二十一页，共二十四页。检验结果记录检验结果记录检样量检样量检样量检样量初发酵结果（管）初发酵结果（管）初发酵结果（管）初发酵结果（管）复发酵结果（管）复发酵结果（管）复发酵结果（管）复发酵结果（管）阳性管数阳性管数阳性管数阳性管

13、数10mL10mL+-+-1 11g1g（或（或（或（或mLmL）+-+-1 10.1g0.1g（或（或（或（或mLmL）-+-+-1 10.01g 0.01g（或（或（或（或mLmL）0.001g 0.001g（或（或（或（或mLmL）培养条件培养条件培养条件培养条件温度：温度：温度：温度：时间：时间：时间：时间：温度：温度：温度：温度：时间：时间：时间：时间：检验结果检验结果检验结果检验结果 MPN/mL=0.11 MPN/mL=0.11备注备注备注备注标准值：标准值：标准值：标准值：单项检验结论：符合（不符合）单项检验结论：符合（不符合）单项检验结论：符合（不符合）单项检验结论：符合（不

14、符合）检验人：检验人：检验日期：检验日期：液体样品液体样品第二十二页，共二十四页。小 结本次检验操作共取：本次检验操作共取：双料管双料管3 3支，单料管支，单料管6 6支，装有灭菌生理盐水的锥形瓶支，装有灭菌生理盐水的锥形瓶1 1个，个，装有装有9mL9mL灭菌生理盐水的试管灭菌生理盐水的试管1 1支固体样品，复发酵管假支固体样品，复发酵管假设干支根据初发酵结果设干支根据初发酵结果本次检验操作共用：本次检验操作共用：固体样品：固体样品：10mL10mL吸量管吸量管1 1支，支，1mL1mL吸量管吸量管2 2支，接种支，接种环环 液体样品：液体样品：25mL25mL移液管移液管1 1支，支，10mL10mL吸量管吸量管1 1支，支，1mL1mL吸吸量管量管2 2支，接种环支，接种环第二十三页，共二十四页。内容总结大肠菌群检测。361。装有0.85%灭菌生理盐水的生理盐水灌1个。注意：稀释瓶、带塞锥形瓶开盖前要过火，量筒、装有0.85%灭菌生理盐水的锥形瓶及其塞子应放在酒精灯周围15cm的范围内。吸取25mL液体样品至稀释瓶中，参加225mL0.85%灭菌生理盐水，盖上盖子，混匀。从稀释瓶中分别吸取1mL被稀释10倍的饮用水至最后三支单料管中。将样液参加装有稀释液的试管后，振摇试管，混匀。复 发 酵第二十四页，共二十四页。