医学专题—动物细胞融合与单克隆抗体6705.ppt

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1、“番茄番茄(fnqi)马铃薯马铃薯”理想理想图图 通过长期的实验通过长期的实验(shyn)，科学家们采用体细胞杂科学家们采用体细胞杂交技术获得了交技术获得了“番茄番茄马马铃薯铃薯”植株。植株。第一页，共三十五页。杂杂种种(zzhng)植植株株融合融合(rngh)(rngh)的的原生质原生质体体ABAB再再生生(zishng)出出细细胞胞壁壁脱脱分分化化愈愈伤伤组组织织再再分分化化植物细胞的融合植物细胞的融合植物组织培养植物组织培养植物细胞植物细胞A原生质体原生质体B原生质体原生质体A杂种杂种细胞细胞AB去去 壁壁去去 壁壁人人工工诱诱导导方法？方法？促进融合的促进融合的方法？方法？融合融合完成

2、完成的的标志标志植物细胞植物细胞B植物体细胞杂交技术过程植物体细胞杂交技术过程第二页，共三十五页。成果成果(chnggu)(chnggu)和未解决的问和未解决的问题题 成果：克服不同生物远缘杂交的障碍成果：克服不同生物远缘杂交的障碍(zhng i)(zhng i)，出出 现自然界没有的新品种现自然界没有的新品种。未解决的问题：未能让杂种植物按照人们未解决的问题：未能让杂种植物按照人们 的需要表现出亲代的需要表现出亲代(qndi)(qndi)的优良。的优良。第三页，共三十五页。如果将牛的细胞与植物细胞杂交，得到绿色的小奶牛，如果将牛的细胞与植物细胞杂交，得到绿色的小奶牛，那岂不是只要晒晒太阳就可

3、以挤出那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出(j ch)牛奶啦！牛奶啦！动物细胞也能融合动物细胞也能融合(rngh)吗？吗？第四页，共三十五页。一、动物一、动物(dngw)细胞融合细胞融合细胞细胞(xbo)A细胞细胞(xbo)B杂交细胞杂交细胞灭活的病毒灭活的病毒物理法物理法化学法化学法仙台病毒仙台病毒疱疹病毒疱疹病毒新城鸡瘟病毒新城鸡瘟病毒第五页，共三十五页。不同不同DNADNA的两个的两个(lin)(lin)细胞细胞灭活病毒灭活病毒(bngd)(bngd)诱导细胞融合诱导细胞融合融合融合(rngh)(rngh)后的细后的细胞进行有丝分裂胞进行有丝分裂1 1、动物细胞融合过程、动物细胞融合过程第六页

4、，共三十五页。思考题思考题1、植物体细胞、植物体细胞(xbo)杂交前做何处理？怎么处理？杂交前做何处理？怎么处理？去壁去壁 酶解法酶解法(ji f)，如纤维素酶或果，如纤维素酶或果胶酶胶酶2、动物细胞融合时需要、动物细胞融合时需要(xyo)进行去壁处理吗？为什么？进行去壁处理吗？为什么？无需，因为动物细胞无细胞壁无需，因为动物细胞无细胞壁3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？离心、振动、电激等物理方法；离心、振动、电激等物理方法；PEG等化学方法等化学方法第七页，共三十五页。4、动物细胞融合能利用上述两类方法、动物细胞融合能利用上

5、述两类方法(fngf)吗？还有其他方法吗？还有其他方法(fngf)？能能 还可以利用还可以利用(lyng)灭活的病毒灭活的病毒进行诱导进行诱导5、植物体细胞杂交、植物体细胞杂交(zjio)过程应先进行原生质体融合再进行组织过程应先进行原生质体融合再进行组织培养形成完整的个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？培养形成完整的个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？不能不能6、你能归纳出什么叫做动物细胞融合吗？、你能归纳出什么叫做动物细胞融合吗？思考题第八页，共三十五页。2、动物(dngw)细胞融合的概念 动物细胞融合也称细胞杂交，动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个是指两个或多个(du)

6、动物细胞形成动物细胞形成一个细胞的过程。一个细胞的过程。第九页，共三十五页。7、你推测一下、你推测一下(yxi)动物细胞融合有哪些方面的应用吗？动物细胞融合有哪些方面的应用吗？思考题 利用利用(lyng)动物细胞融合技术诱导形成杂交瘤细胞动物细胞融合技术诱导形成杂交瘤细胞8、在生产实际中杂交瘤细胞有怎样、在生产实际中杂交瘤细胞有怎样(znyng)的应用的应用？生产单克隆抗体生产单克隆抗体第十页，共三十五页。细胞融合与融合诱导细胞融合与融合诱导(yudo)细胞融合物质：细胞融合物质：诱导剂：仙台病毒、聚乙二醇诱导剂：仙台病毒、聚乙二醇诱导细胞融合的仙台病毒必须诱导细胞融合的仙台病毒必须灭活灭活。

7、思考讨论思考讨论(toln)(toln)：为什么细胞融合过程中使用为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？的病毒需要灭活？不灭活行吗？因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子(fnz)和脂和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。细胞融合技术应用于哪些方面？细胞融合技术应用于哪些方面？细胞学、遗传学、免疫学及制备单克隆抗体。细胞学、遗传学、免疫学及制备单克隆抗体。第十一页，共三十五页。1.抗体是由何种细胞产生的？抗体是

8、由何种细胞产生的？2.如何如何(rh)得到抗体？得到抗体？提提问问？二、单克隆抗体二、单克隆抗体(kngt)第十二页，共三十五页。抗体抗体(kngt)(kngt)1 1、抗原抗原 动物动物(dngw)(dngw)体内体内刺激刺激浆细胞浆细胞 抗原抗原 动物体内动物体内刺激刺激浆细胞浆细胞 抗体抗体抗原抗原(kngyun)不纯不纯抗体不纯抗体不纯筛选单一浆细胞筛选单一浆细胞不能增殖产生大量抗体不能增殖产生大量抗体2 2、特异性差、纯度低；、特异性差、纯度低；产量低、反应不够灵敏产量低、反应不够灵敏二、单克隆抗体二、单克隆抗体第十三页，共三十五页。设计方案：设计方案：一个一个B B淋巴细胞只分泌淋

9、巴细胞只分泌(fnm)(fnm)一种特异性抗体一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖小鼠骨髓瘤细胞能无限增殖如何如何(rh)(rh)获得化学性质单一、特异性强的抗体？获得化学性质单一、特异性强的抗体？杂种杂种(zzhng)细胞细胞二、单克隆抗体二、单克隆抗体第十四页，共三十五页。？诱导其融合的方法诱导其融合的方法(fngf)有哪些？有哪些？抗原抗原(kngyun)浆细胞浆细胞2.2.制备制备(zhbi)(zhbi)过程：过程：二、单克隆抗体二、单克隆抗体第十五页，共三十五页。B BB B瘤瘤 瘤瘤瘤瘤 瘤瘤细胞融合后培养液中有几种细胞融合后培养液中有几种(j zhn)细胞？细胞？筛选（特定的筛

10、选（特定的选择性培养基）选择性培养基）杂种杂种(zzhng)细胞细胞第十六页，共三十五页。整个制备过程要经过整个制备过程要经过(jnggu)(jnggu)几次筛选几次筛选?（第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），（第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞能产生特异性抗体的细胞群。群。由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所以产生的抗体必然产生的抗体必然(brn)(brn)是化学性

11、质单一的，特异性强的单是化学性质单一的，特异性强的单克隆抗体。这里的克隆抗体。这里的单克隆单克隆确有确有单个细胞单个细胞克隆的含义，只克隆的含义，只不过克隆的不是不过克隆的不是B B淋巴细胞，而是淋巴细胞，而是杂交瘤细胞杂交瘤细胞。）。）第十七页，共三十五页。3.单克隆抗体(kngt)的应用：作为作为(zuwi)(zuwi)诊断试剂诊断试剂用于治疗用于治疗(zhlio)(zhlio)疾病和运载药物疾病和运载药物生物导弹生物导弹 特异性高、灵敏度高等优越性。特异性高、灵敏度高等优越性。第十八页，共三十五页。主要用于制备(zhbi)单克隆抗体获得杂种(zzhng)植株用途(yngt)物理、化学方法

12、（同左）灭活的病毒物理（离心、振动、电刺激）化学（聚乙二醇）诱导方法使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物、动物细胞融合的比较植物、动物细胞融合的比较第十九页，共三十五页。下图为某同学根据下图为某同学根据(gnj)杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案风杆菌的实验方案3、图中、图中B为为_过程，常用过程，常用_作为诱导剂，该细胞继作为诱导剂，该细胞继承承_的遗传特性，既能的遗传特性，既能_,又能又能_。1、该实验方案的目的是、该实验方案的目

13、的是_2、A是从小鼠的脾脏中取得是从小鼠的脾脏中取得_,该细胞能够产生该细胞能够产生_4、C过程指细胞培养，该过程包括过程指细胞培养，该过程包括_培养和培养和_培养两个阶段。培养两个阶段。制备制备(zhbi)单克隆单克隆抗体抗体B细胞细胞(xbo)抗体抗体细胞融合细胞融合灭活病毒灭活病毒双亲细胞双亲细胞分泌抗体分泌抗体无限增殖无限增殖原代原代传代传代B体外培养体外培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔AC第二十页，共三十五页。下列属于动物细胞培养与植物组织培养主要区别的是A.培养基成分不同(b tn)B.动物细胞培养不需要在无菌

14、条件下进行C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株下列与动物细胞培养有关的表述中，不正确的是 A培养液通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清B原代培养的细胞一般传至10代左右便会出现生长停滞C动物细胞培养一般能够传到4050代，但其遗传物质发生了改变D动物细胞培养可用于检测有毒物质(wzh)和获得大量自身健康细胞AC第二十一页，共三十五页。生物技术(jsh)的发展速度很快，已灭绝生物的“复生”将不再是神话。如果世界上最后一只野驴刚死亡，以下较易成功“复生”野驴的方法是 A将野驴的体细胞取出，利用组织培养技术，经脱分化、再分化，培育成新

15、个体B将野驴的体细胞两两融合，再经组织培养培育成新个体C取出野驴的体细胞核移植到母家驴的去核卵细胞中，经孕育培养成新个体D将野驴的基因导入家驴的受精卵中，培育成新个体C第二十二页，共三十五页。一只羊的卵细胞核被另一只羊的体细胞核置换后，这个卵细胞经过多次分裂，再植入第三只羊的子宫内发育，结果产下一只羊羔。这种克隆技术具有多种用途，但是不能A有选择地繁殖某一性别(xngbi)的家畜 B繁殖家畜中的优秀个体C用于保存物种 D改变动物的基因型D第二十三页，共三十五页。下列哪项属于克隆A将鸡的某个DNA片段整合到小鼠的DNA分子中 B将抗药菌的某基因引入草履虫的细胞内C将鼠骨髓瘤细胞与经过(jnggu

16、)免疫的脾细胞融合成杂交瘤细胞 D将某肿瘤细胞在体外培养繁殖成一个细胞系试管婴儿、试管苗和克隆羊三者均属于生物工程技术的杰出成果，下面叙述(xsh)正确的是A.都属于无性生殖能保持母本性状 B.都是细胞工程的技术范围C.都充分体现了体细胞的全能性 D.都不会发生基因重组和变异DB第二十四页，共三十五页。下图是动物细胞培养的基本(jbn)过程示意图。请据此回答：（1）A中放置的是动物(dngw)器官或组织。它一般取自 。（2）容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是 ，然 后用 酶处理，使细胞分散开来，这样做的目的是 。（3）培养首先在B瓶中进行，瓶中的培养基成分有_等。在此瓶中培养一段时间后

17、，有许多细胞衰老死亡，这是培养到第 代，到这时的培养称为 。（4）为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用 处理，然后配置成 ，再分装。（5）在C瓶中正常培养了一段时间后，发现细胞全部死亡，原因是 。第二十五页，共三十五页。CCTV一2于2005年4月7日报道，卫生部4月6日发布了苏丹红危险性报告评估，报道中提到苏丹红一号是一种人工色素(工业染料)，它在人体内代谢生成相应的胺类。科研人员欲采用一定(ydng)的技术手段探究苏丹红是否对人体有危害。请回答：（1）根据所学的动物细胞工程知识，你认为采取下列哪种技术手段最合适：A动物细胞融合 B动物细胞培养 C胚胎移植 D核移植第二十六页，共三十五页。（2

18、）根据上述选择，请你设计一个实验来探究“苏丹红一号”是否对人体有危害。1该实验的原理是：。2实验方法步骤：材料准备：从医院妇产科获取所需要的原材料组织，浓度为0.09“苏丹红一号”试剂，高倍显微镜，培养瓶若干，配制(pizh)好的培养液，剪刀，培养箱，所需要的酶。制备检测细胞：a配制细胞悬浮液：。b将悬浮液分装到两个以上的培养瓶中，置于培养箱中培养一段时间。检测过程：。实验结果观察、分析得出结论。(略)第二十七页，共三十五页。动物细胞融合和植物原生质体融合比较，在动物细胞融合中有特殊性的是 A融合的原理 B融合的过程(guchng)C融合的诱导手段 D融合的结果C第二十八页，共三十五页。下表为

19、动、植物细胞工程的有关内容(nirng)比较，你认为错误的有植物细胞工程动物细胞工程特殊处理酶解法去除细胞壁胰蛋白酶处理配制细胞悬液融合方法物理方法，化学方法物理方法，化学方法，生物方法典型应用人工种子，种间杂种植物单克隆抗体的制备培养基的区别麦芽糖是离体组织赖以生长的成分动物血清不可缺少A0处 B1处 C2处 D3处第二十九页，共三十五页。（1）若A、B是植物细胞，在细胞融合之前已用 处理，除去了 ；由A、B到细胞C的过程中，常用的物理方法是 。融合完成的标志是 。（2）若A、B是植物细胞，则形成的D细胞还要应用(yngyng)技术把D培养成植株。（3）若A、B是动物细胞，一般取自 ，然后用

20、 使其分散开来；由A、B到C的过程中，常用的不同于植物(zhw)细胞融合的手段是 ，所形成的D称为 ，A、B融合为C的过程说明了细胞膜具有 。（1）纤维素酶和果胶酶 细胞壁 电刺激、振动、离心(lxn)产生新的细胞壁 （2）植物组织培养(3)动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织 胰蛋白酶 灭活的病毒诱导 杂种细胞 一定的流动性第三十页，共三十五页。（4）若该过程是制备单克隆抗体，A为小鼠效应B细胞，那么，在获得此细胞之前，小鼠已经被注射了 。注射后小鼠身体发生了相应的免疫反应，生成(shn chn)了_，图中B为 。（5）若该过程仍是制备单克隆抗体，在A、B到C的过程中，所形成的C有 种，

21、用来培养的D细胞应该是 。从中选择出它的方法是 培养，获得D后，常用的培养方法是培养液中培养和 。(4)抗原 效应B细胞 抗体和记忆细胞 骨髓瘤细胞(5)3 杂交瘤细胞 用特定的选择培养基 小鼠腹腔(fqing)内增殖第三十一页，共三十五页。若人基因的作用不受鼠基因影响，则支配a、b、c、d和e酶合成(hchng)的基因依次位于人的 号染色体上。将分离出的杂种细胞(xbo)在不同条件下继续培养，获得A、B、C三细胞株。各细胞株内含有的人染色体如有表（“+”有，“”无）测定各细胞株中人体所具有的五种酶的活性。结果是：B株有a酶活性；A、B、C株均有 b酶活性：A、B株有c酶活性；C株有d酶活性；

22、A、B、C株均无e酶活性。细胞株人染色体编号12345678A株 B株 C株 第三十二页，共三十五页。比特尔等在1941年提出了“一个基因一种酶假说”。在生物体内，各类物质或分子是经过一系列代谢步骤合成的，每一步都受特定的酶所催化。现假设已分离到某微生物的5种突变体（15），它们都不能合成生长所需的物质C，但是该微生物在合成途径中，物质A、B、C、D、E都是必需的，但不知它们的合成顺序；于是(ysh)分析了这几种物质对各种突变体生长的影响。结果如下：第三十三页，共三十五页。（1）上述A物质合成的顺序为：。（2）物质是突变体3的生长因子。（3）突变体1在 两种物质之间合成被阻断(z dun)。原

23、因是 。加 入 的 物 质ABCDEG突变体1 2 3 4 5 基因突变不能合成催化基因突变不能合成催化(cu hu)B D过程的酶过程的酶 E A C B D G G B与与D 第三十四页，共三十五页。内容(nirng)总结“番茄马铃薯”理想图。5、植物体细胞杂交过程应先进行原生质体融合再进行组织培养形成完整的个体，动物(dngw)细胞融合后能形成杂种动物(dngw)个体吗。细胞融合与融合诱导细胞融合物质：。诱导剂：仙台病毒、聚乙二醇诱导细胞融合的仙台病毒必须灭活。（第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），。4、C过程指细胞培养，该过程包括_培养和_培养两个阶段。D.动物(dngw)细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株。B与D第三十五页，共三十五页。