免疫血液学2、第五章血液成分制备6336.pptx

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1、输血前免疫血液学检查及血液成分制备第一页，共三十九页。输血前检查的目的和要求 选择与患者血型配合的各种血液成分，使之能在患者体内有效地存活，无不良反响。即输入的红细胞在患者体内必须不溶血，输入的血浆成份不导致患者红细胞破坏，也就是供者与患者之间的血液在免疫血液学方面“相溶从而到达平安、有效输血的目的。第二页，共三十九页。二、输血前检查的内容包括以下几个方面：1、患者的病史和标本等的检查、核对及处理。2、受血者、献血者ABO和Rh血型鉴定。3、不规那么抗体的筛选和鉴定。4、交叉配血试验5、标签和发血。第三页，共三十九页。一标本的要求1、标本必须经鉴定和标记，确实来自患者和献血者。2、符合患者体内

2、状态，能代表患者当前的免疫学情况，3、防止血样的稀释和溶血的产生。输液患者对侧抽血4、最好用血清血浆有纤维蛋白原的干扰配血5、输血后所有标本患者及供者保存2-8一周。第四页，共三十九页。二ABO血型鉴定用抗A和抗B试剂检测红细胞抗原，称之正定型，用A型和B型、O型红细胞检测血清中抗体称之反定型人ABO血型由红细胞抗原和血清抗体所决定，其正、反定型相符。见表 ABO血型常规定型 正定型检查红细胞抗原 反定型检查血清中抗体血型 红细胞标本+抗体试剂 血清标本+标准红细胞试剂 抗A 抗B A细胞 B细胞 O细胞A型 +-+-B型 -+-O型 -+-AB型 +-第五页，共三十九页。2、ABO血型正反定

3、型不符及其原因可能因为操作技术，管理上问题也可能是红细胞和血清标本问题第六页，共三十九页。1技术操作、管理错误假阴性结果：试管中未参加抗体试剂或血清 未能认识溶血也是阳性反响 血清或试剂与红细胞比例太小 离心速度时间不够 使用了失效的抗体和红 细胞试剂 没能正确地记录和解释试验结果。假阳性结果：离心速度过大和离心时间过长 使用了受到细菌污染的试剂 使用了不干净的试管、器皿 错误记录、解释试验结果 第七页，共三十九页。2红细胞标本相关问题红细胞标本相关问题某些某些ABO亚型、白血病或其它恶性疾病病人红细胞亚型、白血病或其它恶性疾病病人红细胞ABO抗原太弱或缺乏，抗抗原太弱或缺乏，抗A抗抗B试剂未

4、能出现预试剂未能出现预期的凝集反响。期的凝集反响。红细胞获得性或遗传性的异常，如获得性红细胞获得性或遗传性的异常，如获得性B抗原红细胞抗原红细胞或或T n/T多凝集红细胞，试剂可与这些异常的红细胞反响多凝集红细胞，试剂可与这些异常的红细胞反响悬浮红细胞的血清或血浆中含的型物质浓度高，中和了悬浮红细胞的血清或血浆中含的型物质浓度高，中和了抗体试剂，出现假阴性，如卵巢囊肿病例。抗体试剂，出现假阴性，如卵巢囊肿病例。病人红细胞自凝，病人血清中高活性，高浓度自身病人红细胞自凝，病人血清中高活性，高浓度自身凝集严重致敏包被自身红细胞，以至在稀释液存凝集严重致敏包被自身红细胞，以至在稀释液存在下，自发地发

5、生凝集，而不是抗体试剂的特异性作在下，自发地发生凝集，而不是抗体试剂的特异性作用。用。近期输血：输入过与自身血型不一致的血液，使标本成为近期输血：输入过与自身血型不一致的血液，使标本成为“混合外观凝集混合外观凝集第八页，共三十九页。3血清标本的问题异常的血浆蛋白：受检查血浆中异常的白蛋白，球蛋白比例某些肝病、传染病如结核、多发性骨髓瘤等疾病患者球蛋白增加高浓度的纤维蛋白原心梗、感染、外伤、肿瘤患者均易使红细胞发生缗钱状凝集现象。免疫抑制疾病或免疫抑制治疗的病人血清中ABO抗体减少或消失。年龄：老年人随年龄增高，ABO抗体减弱，婴儿血清抗体是阴性或很弱0-6月不做反定型不规那么抗体的存在：反复屡

6、次输血者妊娠者血清中有ABO血型以外的同种异型抗体，如盐水抗M、高效价冷凝集素抗I。第九页，共三十九页。三RhD定型和定型中应注意的问题假阳性结果：受检细胞已被免疫球蛋白致敏，受检细胞与血清孵育的时间过长 多凝集细胞造成定型的假阳性 器材或抗血清被污染，造成的假阳性假阴性结果：受检细胞浓度太高，与抗血清比例失调 漏加或错加定型血清 定型血清使用方法错误 抗血清保存不当，导致失效第十页，共三十九页。关于弱D传统称Du型弱D型 Du型是D的弱抗原，这种抗原与大局部盐水抗D试剂不产生直接凝集反响，而与局部的IgG抗D血清用间接抗球蛋白试验反响阳性弱D Du型鉴定：三种不同批号的IgG抗D定型如果全部

7、阴性方可认定患者为RhD阴性，否那么为弱D弱D 临床意义：作为供血者DuRhD阳性 作为受血者DuRhD阴性第十一页，共三十九页。四不规那么抗体筛选和鉴定1对受血者的血清做抗体筛选，以发现有临床意义的不规那么抗体，不规那么抗体是指抗A抗B以外的血型抗体抗体筛选的原那么让受检血清与能看出的试剂红细胞起反响，以发现在37 中有反响的抗体方法：盐水法、凝胶法、聚凝胺法、抗球蛋白试验等抗体筛选阳性的，那么须做鉴定试验，以确定其特异性第十二页，共三十九页。五交叉配血试验1、要求及内容主侧：受血者血清+供者红细胞检测对供者红细胞起反响的抗体。次侧：供者血清+受者红细胞检测对受者红细胞起反响的抗体。自身对照

8、：Rs+Rc显示自身抗体、直抗阳性。第十三页，共三十九页。2、方法盐水交叉配血试验：检出IgM类抗体。检测不完全抗体的交叉配血试验蛋白酶木瓜酶、波萝酶传统抗人球蛋白试验新方法：促凝剂凝聚胺微柱凝胶试验第十四页，共三十九页。3、配血中异常原因与处理缗线状假凝集特点：显微镜下红细胞膜完整，细胞界限清晰地成线串聚集37、室温结果一样，不受温度影响，但加盐水即可散开。解决方法：被检细胞用盐水洗涤后再配血。自身抗体造成配血不合，共同特点是患者血清能凝集自身红细胞天然自身冷凝激素获得性病理性自身冷抗体：直抗阳性/室温较37强/Rs+OcRs+Rc自免溶贫血清中的温型自身抗体，直抗阳性/37室温血清中的不规

9、那么凝集素 第十五页，共三十九页。三、常规和紧急情况下的发血程序血液的申请：医生填写输血申请单护士抽取血样，送至血库检验师进行血型鉴定、抗体筛选选择血液，交叉配血填写输血记录单发血给护士第十六页，共三十九页。第七节第七节 新生儿溶血病新生儿溶血病一、新生儿溶血病的发病机制二、新生儿溶血病的临床病症三、新生儿溶血病的血清学检查四、新生儿溶血病治疗与预防五、新生儿换血和输血第十七页，共三十九页。什么是新生儿溶血病？新生儿溶血病hemolytic disease of the newborn 简称HDN。指母婴血型不合，孕母体内存在着与胎儿红细胞不配合的IgG性质的血型抗体，该抗体通过胎盘进入胎儿体

10、内，作用于胎儿红细胞使之产生不同程度溶血。第十八页，共三十九页。二、临床病症 被IgG抗体体致敏的胎儿红细胞在分娩前后加速破坏，这在临床上有多种表现，严重可致胎儿宫内死亡，轻者只在血清学中有所表现，婴儿却很健康，HDN的病理变化主要同红细胞溶解所引起的，大量红细胞破坏使红细胞数目减少，引起贫血，组织和脏器因供氧减少而发生缺氧、并可影响其功能主要表现为水肿、黄疸、贫血、肝脾肿大、核黄疸。第十九页，共三十九页。水肿全身性、伴低蛋白血症；胸水、腹水、心 包积液。黄疸进行性黄疸增高胆红素51.3mol/L3mg%脐带胶质黄疸 68.4-102.6mmol/L4-6 mg%面部淡黄 256.5-307.

11、815-18 mg%面部+躯干橙黄，手心足底、呈淡黄 34220 mg%手足橙黄色第二十页，共三十九页。贫血组织缺氧：心律快、组织增高、嗜睡、少 吃、少哭、心衰。肝脾肿大骨髓外造血组织来代偿引起核黄疸未结合胆红素是对中枢神经系统有毒害的物质，婴儿大脑发育未成熟，血脑屏障不健全，过多的未结合胆红素可影响脑组织脑神经基底核，使脑神经细胞发生变性表现为发热、嗜睡、吸吮反射弱、痉挛、肌张力 病死率高，存活后有智力不全，运动障碍。第二十一页，共三十九页。三、血清学检查 1、测母子父ABO血型，确定ABO相合/不相合2、患儿标本检查：1直接抗球蛋白试验：ABO溶血病患儿红细胞上抗体结合得很少，常得到阴性结

12、果2释放试验：阳性，红细胞上有IgG抗体3游离抗体：阳性，就证明新生儿病情会继续加重 第二十二页，共三十九页。新生儿血清中游离抗体检查新生儿血清中游离抗体检查 与指示红细胞反响与指示红细胞反响 结果判定结果判定 Ac Bc Oc 有游离的抗有游离的抗A抗体抗体 有游离的抗有游离的抗B抗体抗体 有游离的抗有游离的抗A、抗、抗B或抗或抗A，B抗体抗体 有游离的有游离的ABO系统以外抗体系统以外抗体 无游离的抗体无游离的抗体第二十三页，共三十九页。患儿红细胞抗体释放试验与指示红细胞反响 结果判定Ac Bc Oc 释放出IgG抗A抗体 释放出IgG抗B抗体 释放出IgG抗A、抗B或抗A，B抗体 未释放

13、出抗体 释放出ABO血型系统以外的抗体第二十四页，共三十九页。新生儿ABOHDN血清学试验直接抗球 游离抗体 抗体释放 结果 意义蛋白试验 试验 试验 判定 确诊 ABOHDN 确诊 ABOHDN 确诊 ABOHDN 可疑 可疑ABOHDN 可疑 可疑ABOHDN 否认 血清学试验未能证实HDN第二十五页，共三十九页。四、治疗一药物治疗：葡萄糖、白蛋白二光照蓝光照射：胆红素能吸收光，以波长450-460m作用最强，未结合胆红素Z转化为异物体E后者不能进入脑组织，为无毒水溶性，双吡咯，易从尿内排出，使血清胆红素浓度降低。三换血：换出抗体和致敏红细胞，减轻溶血，纠正贫血，防心衰，换血清胆红素，防核

14、黄疸。ABO系HDN：O型洗涤细胞加AB血浆/同型浆Rh系HDN：ABO血型同患儿，Rh血型同母亲 如子B型母Accdee血清含有抗D选B型D阴性血。第二十六页，共三十九页。一宫内输血二提早分娩 64妊娠期内的治疗：三药物治疗 孕妇服Vc、VE、VK注射葡萄糖，吸氧，苯巴比妥为酶的诱导剂，促进肝脏去除胆红素，新生儿输白蛋白，能结合胆红素防核黄疸。预防：对未致敏的Rh阴性妇女在分娩Rh阳性婴儿72小时内，肌注30mg145-435mg抗Rh(D)IgG，通常可预防Rh阴性妇女发生同种免疫。第二十七页，共三十九页。第五章第五章 血液成份制备血液成份制备第一节第一节 血液的生理功能血液的生理功能输送

15、氧气和二氧化碳，在肺脏和人体组织间进输送氧气和二氧化碳，在肺脏和人体组织间进行气体交换。行气体交换。输送养分到组织，从组织带走代谢产物。输送养分到组织，从组织带走代谢产物。输送激素，维生素和各种药物。输送激素，维生素和各种药物。维持渗透压、酸碱度以及电解质平衡维持渗透压、酸碱度以及电解质平衡保持体温恒定保持体温恒定防御微生物或异物入侵防御微生物或异物入侵有效的凝血和纤维蛋白溶解机制有效的凝血和纤维蛋白溶解机制第二十八页，共三十九页。细 红细胞人体的内呼吸，向机体组织运送O2、带走CO2、由 Hb完成胞 白细胞粒细胞中性、嗜酸、嗜碱、免疫系统，吞噬破坏入 侵细胞成 淋巴细胞T细胞参与细胞免疫B细

16、胞参与体液免疫分40-45%血小板粘附，释放凝固、收缩非 血浆白蛋白保持渗透压和体液平衡；载体蛋白的作用，传递运输细胞 免疫球蛋白血浆中具有抗体活性的球蛋白的统称，它 包括所有血液中的抗体。成分 凝血因子共14个、血浆中含除组织因子FIII外所有因子 55-60%凝血过程分三个阶段，凝血酶原激活物的形成，凝血酶原激活形成凝血酶；纤维蛋白原分解形成纤维蛋白。分内源性途径、外源性途径和共同途径。第二十九页，共三十九页。第二节第二节 全血全血第三十页，共三十九页。血液成分的最佳答案保存条件血液成分的最佳答案保存条件红细胞：红细胞：42血小板：血小板：222 水平振荡，如水平振荡，如4贮存，贮存，24

17、h 50%以上丧失功能，以上丧失功能，48 h减小显著，减小显著，72h根本无根本无止血作用，止血作用，5天全部遭破坏。天全部遭破坏。白细胞：室温白细胞：室温 ，24h微量减弱，微量减弱，3-5天显著减天显著减弱，弱，7天完全消失天完全消失凝血因子：凝血因子：-20以下冷冻保存以下冷冻保存第三十一页，共三十九页。第三节第三节 血液细胞成分的制备血液细胞成分的制备一、制备原理：利用血液细胞比重、体积等因素的不同通过离心分层而得到浓度较高的单一成分。如下图。二、制备方法1、手工法；2、血细胞别离机单采法第三十二页，共三十九页。三、红细胞制品三、红细胞制品浓缩红细胞：全血中大局部血浆别离后剩浓缩红细

18、胞：全血中大局部血浆别离后剩余局部即为浓缩红细胞。余局部即为浓缩红细胞。比积比积0.65-0.80 42悬浮红细胞：全血中大局部血浆别离后，悬浮红细胞：全血中大局部血浆别离后，向剩余局部参加红细胞添加液制成的成分向剩余局部参加红细胞添加液制成的成分即为悬浮红细胞。即为悬浮红细胞。有有MAP甘露醇甘露醇-腺嘌呤腺嘌呤-磷酸盐等添加磷酸盐等添加液液比积比积0.50-0.65 42少白细胞的红细胞：离心或过滤去除白细少白细胞的红细胞：离心或过滤去除白细胞胞比积比积0.60-0.75 42第三十三页，共三十九页。洗涤红细胞：用生理盐水洗去大局部非红细胞洗涤红细胞：用生理盐水洗去大局部非红细胞成分。成分

19、。较彻底地去除血浆较彻底地去除血浆98%和白细胞和白细胞80%红细胞回收率红细胞回收率70%42冰冻解冰去甘油化红细胞冰冻解冰去甘油化红细胞 6日内血，红细胞保日内血，红细胞保护剂为甘油，低温护剂为甘油，低温-80保存，使用时去甘油保存，使用时去甘油化后加生理盐水制成化后加生理盐水制成红细胞回收率红细胞回收率80%42用于稀有血型和自体血保存用于稀有血型和自体血保存辐射红细胞：用射线钴辐射红细胞：用射线钴60辐照，灭活红细辐照，灭活红细胞制品中淋巴细胞胞制品中淋巴细胞预防输血相关性移植物抗主病预防输血相关性移植物抗主病第三十四页，共三十九页。四、白细胞制品：单采用血细胞别离机及配 套耗材一次从

20、单一献血者采集的粒细胞为1人份，容量200ml，含 量1.01010 室温静置保存24小时五、血小板制品：单采用血细胞别离机及配套耗材一次从单一献血者采集的血小板为1人份，容量200ml，含量2.5101120-24振荡保存，24小时普通袋 5天专用袋第三十五页，共三十九页。第四节第四节 血液非细胞成分的制备血液非细胞成分的制备新鲜冰冻血浆：全血采集后6h(ACD保养液)、8hCPD保养液别离出血浆制成的成分称为新鲜冰冻血浆，-20保存1年转为普浆。含全部凝血因子，白蛋白、免疫球蛋白普通冰冻血浆：和新鲜冰冻血浆比较，只缺少不稳定凝血因子V和 ，-20保存5年第三十六页，共三十九页。冷沉淀：以4

21、00ml全血别离的200ml新鲜冰冻血浆制备的冷沉淀为1u，容量20-30ml，含80ID纤维蛋白原150mg 纤维结合蛋白250-500mg/L -30保存1年 根据轻、中、重度出血所需剂量为10IU、25IU、40IU/kg体重，用于儿童血友病甲：血管性血友病，纤维蛋白原缺乏症及手术后出血，严重外伤及DIC等治疗。第三十七页，共三十九页。血浆蛋白制品白蛋白免疫球蛋白：肌肉注射免疫球蛋白，静脉注射免疫球蛋白凝血因子浓缩制剂凝血酶原复合物第三十八页，共三十九页。内容总结输血前免疫血液学检查及血液成分制备。蛋白酶木瓜酶、波萝酶。自身抗体造成配血不合，共同特点是患者血清能凝集自身红细胞。纤维蛋白原分解形成纤维蛋白。少白细胞的红细胞：离心或过滤去除白细胞。20-24振荡保存，24小时普通袋。凝血酶原复合物第三十九页，共三十九页。