微生物检验.ppt

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1、培训目的培训目的 熟知微生物检验基础知识熟知微生物检验基础知识1 1课程内容课程内容第一单元第一单元 微生物学基础知识微生物学基础知识第三单元第三单元 培养基及器皿准备培养基及器皿准备第二单元第二单元 消毒、灭菌方式消毒、灭菌方式第四单元第四单元 微生物检验基本方法微生物检验基本方法2 2 第一单元第一单元 微生物学基础知识微生物学基础知识微生物在生物界地位微生物在生物界地位一一微生物定义及特点微生物定义及特点二二微生物分类微生物分类三三影响微生物生长繁殖的因素影响微生物生长繁殖的因素四四3 3生物分类生物分类系统系统病毒界病毒界原核生物界原核生物界真菌界真菌界(真核真核)真核原生界真核原生界

2、动物界动物界植物界植物界病毒病毒细菌细菌酵母菌酵母菌霉菌霉菌藻类藻类原生动物原生动物微生物微生物微生物并非生物分类学上的名词，微生物并非生物分类学上的名词，所有个体微小的低等生物通称所有个体微小的低等生物通称微生物在生物界微生物在生物界地位地位4 4微生物微生物小小简简低低微生物微生物定义定义及特点及特点 个体个体 结构结构 进化进化5 5微生物定义及微生物定义及特点特点微生物微生物分布广、种类多分布广、种类多代谢强、繁殖快代谢强、繁殖快体积小、面积大体积小、面积大适应强、易变异适应强、易变异6 61974年第年第8版：版：2000种种1994年第年第9版版4500种种分类单位：界、门、纲、目

3、、科、属、分类单位：界、门、纲、目、科、属、种种伯杰氏细菌鉴定手册伯杰氏细菌鉴定手册微生物微生物分类分类7 7微生物微生物非细胞形态非细胞形态细胞形态细胞形态病毒病毒原核生物原核生物真核生物真核生物细菌、细菌、支原支原体、衣原体体、衣原体蓝细菌蓝细菌藻类藻类原生动物原生动物微生物微生物分类分类霉菌、酵母霉菌、酵母菌菌8 8细细 菌菌 原核生物：原核生物：呈单细胞呈单细胞无核膜无核膜二分裂方式繁殖二分裂方式繁殖 9 9细菌细菌呼吸类型分呼吸类型分代谢类型分代谢类型分细胞结构（染色）分细胞结构（染色）分形态分形态分球状、杆状、螺旋状球状、杆状、螺旋状自养型自养型 、异养型、异养型需氧、厌氧、兼性厌

4、氧需氧、厌氧、兼性厌氧G+、G-革兰氏染色是鉴别细菌种类的重要方法革兰氏染色是鉴别细菌种类的重要方法细菌分类细菌分类101011球状弧形或螺旋形杆状 细菌细菌形态形态1111G+G-细菌细菌结构（染色）结构（染色）1212 单个细菌 显微镜观察显微镜观察细细菌菌菌菌落落单个细胞繁殖肉眼可见肉眼可见细菌与菌落细菌与菌落1313a.a.大小：大小：b.b.形态：形态：c.c.隆起度：隆起度：d.d.菌落边缘：菌落边缘：e.e.表面性状：表面性状：f.f.表面光泽：表面光泽：g.g.颜色透明度：颜色透明度：细菌菌落形态细菌菌落形态1414同种菌落特征相似同种菌落特征相似生长环境生长环境邻近菌落邻近菌

5、落细胞空间位置不同细胞空间位置不同影响菌落特征的因素：影响菌落特征的因素：细菌菌落形态细菌菌落形态1515基本结构：基本结构：细胞壁细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、细胞膜、细胞质、核质特殊结构：荚膜、鞭毛、菌毛、特殊结构：荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢芽孢细菌细菌结构结构1616芽芽 孢孢原因条件恶劣条件恶劣营养损失营养损失过程1717一个细菌一个细菌 一个芽孢一个芽孢 一个芽孢一个芽孢 一个营养体一个营养体芽孢特点：芽孢特点：壁厚密，折光强，不易着色，壁厚密，折光强，不易着色，耐热，耐杀菌剂，不易杀灭，在高酸中耐热，耐杀菌剂，不易杀灭，在高酸中不易萌发不易萌发芽芽 孢孢1818小测试小测试灭菌是否彻底

6、判定标准？灭菌是否彻底判定标准？化验室灭菌条件？化验室灭菌条件？芽孢是否被杀灭芽孢是否被杀灭湿热湿热 121、20-30分分干热干热 160、2小时小时191920Nt=N0 x 2nn=繁殖代数t =培养时间N0=细菌起始数Nt=细菌生长 t时间后数量 细菌细菌繁殖繁殖个细菌分钟个细菌分钟繁殖代，小时繁殖代，小时后有几个？后有几个？2020微生物数量微生物数量 时间时间衰亡期衰亡期稳定期稳定期对对数数生生长长期期延缓期延缓期细菌生长周期细菌生长周期细菌能否无限繁殖下去？细菌能否无限繁殖下去？2121霉霉 菌菌丝状真菌，一般多细胞，由营养体与丝状真菌，一般多细胞，由营养体与繁殖体构成繁殖体构成

7、结构：结构：个体形态个体形态：2222细胞质细胞质23无性繁殖无性繁殖（为主）（为主）有性繁殖有性繁殖厚垣孢子厚垣孢子分生孢子分生孢子胞囊孢子胞囊孢子接合孢子接合孢子子囊孢子子囊孢子担孢子担孢子TM-00027:36霉菌霉菌繁殖繁殖2323霉菌霉菌菌落菌落菌落形态菌落形态：大，疏松，绒毛状，絮状，蜘蛛网状，初期无色，后期产生孢子有颜色2424个体形态：多数单细胞，卵圆、球形、椭圆形个体形态：多数单细胞，卵圆、球形、椭圆形酵母菌酵母菌2525有性繁殖：有性繁殖：产生子囊和子囊孢子产生子囊和子囊孢子无性繁殖无性繁殖（为主）（为主）酵母菌酵母菌繁殖繁殖生长周期同细菌生长周期同细菌芽殖（普遍）芽殖（普

8、遍）裂殖裂殖2626酵母菌酵母菌菌落菌落菌落：菌落：大而厚，湿润、粘稠、大而厚，湿润、粘稠、易被挑起，多呈乳白易被挑起，多呈乳白色，少数为红色（如色，少数为红色（如红酵母）红酵母）2727小结小结定义定义特点特点分类分类细菌细菌微生物微生物形态形态结构结构繁殖繁殖2828因素因素营养营养温度温度pH渗透渗透压压其他其他水份水份 影响微生物生长繁殖的因素影响微生物生长繁殖的因素2929营营 养养30300 0.6 0.7 0.8 0.9 1.0aw:不腐败不腐败霉菌和酵母球菌G-G+干燥食品干燥食品火腿等火腿等熟奶酪熟奶酪酱酱牛奶、饮料牛奶、饮料浓缩奶浓缩奶蕃茄酱蕃茄酱甜炼乳甜炼乳蕃茄酱蕃茄酱水

9、水 份份aw0.9，大部分细菌受到抑制，大部分细菌受到抑制霉菌、酵母菌的孢子和芽孢菌霉菌、酵母菌的孢子和芽孢菌强强G+G-cb313132aw用来衡量有多少水分可以用来生长aw=pp0p=实际水蒸气压p0=纯水蒸气压0 aw 1水水 份份3232种类种类 最低最低 最佳最佳 最高最高嗜热菌嗜热菌 40 4045 5545 5575 6075 609090嗜温菌嗜温菌 5 515 3015 3045 3545 354747低温菌低温菌 -5 -55 255 2530 3030 303535 嗜冷菌嗜冷菌 -5 -55 125 1215 1515 1520 20 对温度适应能力分对温度适应能力分温

10、温 度度333334酸度酸度(pH值值)4.6pH0 2 4 6 7 9 14原料奶、纯牛奶原料奶、纯牛奶细菌细菌霉菌霉菌酵母酵母TM-00027:54PH4.6 高酸产品PH4.6 低酸产品酸性乳饮料酸性乳饮料3434厌氧菌厌氧菌好氧菌好氧菌兼性厌氧菌兼性厌氧菌微氧菌微氧菌 气气 体体3535 渗透压渗透压等渗压等渗压高渗压高渗压代谢活动代谢活动正常进行正常进行代谢活动呈抑制状代谢活动呈抑制状态甚至死亡态甚至死亡低渗压低渗压细胞吸水过分膨大细胞吸水过分膨大破裂破裂3636 微生物学基本知识微生物学基本知识微生物定义微生物定义微生物特点微生物特点微生物分微生物分类类细菌分类细菌分类影响微生物生

11、长繁殖因素影响微生物生长繁殖因素3737 消毒、灭菌概念消毒、灭菌概念一一 热力灭菌热力灭菌二二 化学消毒化学消毒三三第二单元第二单元 消毒、灭菌方式消毒、灭菌方式3838消毒、灭菌概念消毒、灭菌概念概念概念杀死所有微生物包杀死所有微生物包括芽孢和繁殖体括芽孢和繁殖体杀死病原微生物杀死病原微生物阻止或抑制微阻止或抑制微生物生长繁殖生物生长繁殖无活的微生物无活的微生物灭菌灭菌消毒消毒防腐防腐无菌无菌3939灭菌和消毒前提条件：清洗干净灭菌和消毒前提条件：清洗干净!消毒、灭菌消毒、灭菌清洗清洗4040灭菌（消毒）类型灭菌（消毒）类型温度与时间温度与时间杀菌范围杀菌范围灭菌物品灭菌物品干干热热灭灭菌

12、菌火焰灭菌火焰灭菌火焰灼烧火焰灼烧全全部部微微生生物物耐耐热热物物品品、接接种种环环、试管口等试管口等热空气灭菌热空气灭菌160 2 h160 2 h玻玻璃璃器器皿皿、金金属属用用具具、等耐热物品等耐热物品湿湿热热灭灭菌菌高压高压蒸汽蒸汽灭菌灭菌法法12115-30min12115-30min培培养养基基、生生理理盐盐水水、玻璃器皿等玻璃器皿等11515-20min11515-20min热力灭菌热力灭菌4141微生微生物物蛋白蛋白变性变性代谢代谢故障故障死亡死亡高温高温热力灭菌原理热力灭菌原理4242湿热灭菌优点湿热灭菌优点水蒸汽穿透力强水蒸汽穿透力强蒸汽凝结成水，放出潜热，提高物体温度蒸汽凝

13、结成水，放出潜热，提高物体温度湿热灭菌比干热效果好湿热灭菌比干热效果好菌体蛋白质吸收水分易凝固菌体蛋白质吸收水分易凝固4343类别类别名称名称常用浓度常用浓度应用范围应用范围作用机理作用机理醇类醇类乙醇乙醇70-7570-75皮肤、体温计、器械消毒皮肤、体温计、器械消毒脱水、蛋白质变性脱水、蛋白质变性表面活表面活性剂性剂新洁尔灭新洁尔灭0.05-10.05-1皮肤、器械消毒皮肤、器械消毒破坏细胞膜、改变破坏细胞膜、改变通透性通透性酸类酸类乳酸乳酸0.33-0.33-1mol/L1mol/L空气消毒空气消毒 /氧化剂氧化剂过氧乙酸过氧乙酸0.2-0.5%（需严格控（需严格控制浓度）制浓度）塑料、

14、玻璃、纺织原料及人造塑料、玻璃、纺织原料及人造纤维制品；也适用于食品表面纤维制品；也适用于食品表面消毒（水果、蔬菜、蛋类）和消毒（水果、蔬菜、蛋类）和环境地面消毒环境地面消毒与蛋白质活性基团与蛋白质活性基团反应，酶失活反应，酶失活氯制剂氯制剂漂白粉漂白粉（次（次氯酸钙）氯酸钙）0.5-1.2%饮用水、厂房和用具，饮用水、厂房和用具，澄清溶液可用水果和蔬菜消毒澄清溶液可用水果和蔬菜消毒杀死细菌芽孢杀死细菌芽孢卤素卤素氯气氯气0.2-1ppm0.2-1ppm饮用水消毒饮用水消毒同上同上酚类酚类来苏尔来苏尔1-21-2手、皮肤消毒手、皮肤消毒同上同上3-53-5器械、地面消毒器械、地面消毒化学化学消

15、毒消毒4444病病原原微微生生物物蛋白蛋白酶类酶类细胞破细胞破裂溶解裂溶解变性沉淀变性沉淀系统破坏系统破坏破坏破坏细胞细胞膜膜杀死杀死对非病原微生物不能全部杀死对非病原微生物不能全部杀死消毒防腐剂作用原理消毒防腐剂作用原理4545紫外线消毒原理紫外线消毒原理菌体菌体吸收紫外线吸收紫外线损坏核酸损坏核酸中中DNA致死致死空气空气紫外线照射紫外线照射产生臭产生臭氧氧杀死菌杀死菌体体4646 消毒、灭菌方式消毒、灭菌方式概念概念种类种类选用选用4747 玻璃器皿清洗、包扎玻璃器皿清洗、包扎 培养基分类及制备培养基分类及制备一一二二第三单元第三单元 培养基及器皿准备培养基及器皿准备4848新器皿新器皿

16、未污染未污染 已污染已污染 有油圬有油圬 用过的用过的载玻片载玻片玻璃器皿清洗、包扎玻璃器皿清洗、包扎清洗清洗包扎包扎4949培养基培养基化学成分化学成分用途用途物理状态物理状态半固体半固体液体液体固体固体增增殖殖鉴鉴别别选选择择半合半合成成合合成成天天然然基基础础加加富富厌厌氧氧特特殊殊 培养基培养基分类分类及制备及制备5050容器选择容器选择状态观察状态观察pH验证验证灭菌灭菌存放存放注意事项注意事项 培养基培养基制备制备5151玻璃器皿清洗玻璃器皿清洗培养基分类及制备培养基分类及制备培养基及器皿准备培养基及器皿准备5252 接种、培养接种、培养一一生化反应实验生化反应实验四四 血清学实验

17、血清学实验五五动物实验动物实验六六第四单元第四单元 微生物检验基本方法微生物检验基本方法 制片、染色、观察制片、染色、观察二二 增菌实验增菌实验三三5353一个亲代细胞一个亲代细胞 一个菌落一个菌落检样检样 培养基培养基接种和培养接种和培养接种接种纯培养纯培养分离培养分离培养纯培养过程纯培养过程5454获得获得单个菌落单个菌落倾注倾注涂布涂布划线划线1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法5555染色、制片、镜检染色、制片、镜检染色方法染色方法单染法单染法复染法复染法苯胺黑苯胺黑美兰染色美兰染色革兰氏染色革兰氏染色5656染色原理染色原理革兰氏染色革兰氏染色色差增大，轮廓清晰，便于识别色差增大，轮廓清晰，便于识别菌体细胞壁结构不同菌体细胞壁结构不同固定结构，能够着色，不被水冲掉固定结构，能够着色，不被水冲掉染色目的染色目的固定目的固定目的5757革兰氏染色革兰氏染色结晶紫结晶紫初染初染酒精酒精脱色脱色番红番红复染复染碘液碘液媒染媒染碘液碘液5858镜检结果镜检结果G G+G G-5959显微镜显微镜6060微生物检验基本方法微生物检验基本方法接种、培养接种、培养制片、染色、观察制片、染色、观察6161课程回顾课程回顾 微生物学基本知识微生物学基本知识微生物消毒灭菌微生物消毒灭菌实验准准备工作实验准准备工作检验基本方法检验基本方法6262