第12章-分子发光-荧光与磷光-PPT课件.ppt
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1、Modern Instrument Analytical Method仪器分析课程仪器分析课程仪器分析课程仪器分析课程厦门大学精品课程厦门大学精品课程厦门大学精品课程厦门大学精品课程仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析(含实验含实验含实验含实验)第十二章第十二章第十二章第十二章Chapter Twelve分子荧光分子荧光分子荧光分子荧光分子荧光分子荧光:FluorescenceFluorescenceFluorescence分子磷光分子磷光分子磷光分子磷光分子磷光分子磷光:PhosphorescencePhosphorescencePhosphorescenceModern Instrument
2、Analytical Method12.1 分子发光的基本原理分子发光的基本原理vv第第第第一一一一次次次次记记记记录录录录荧荧荧荧光光光光现现现现象象象象的的的的是是是是1616世世世世纪纪纪纪西西西西班班班班牙牙牙牙的的的的内内内内科科科科医医医医生生生生和和和和植植植植物物物物学学学学家家家家N.MonardesN.Monardes,15751575年年年年 他他他他 提提提提 到到到到 在在在在 含含含含 有有有有 一一一一 种种种种 称称称称 为为为为“Lignum Lignum NephriticumNephriticum”的的的的木木木木头头头头切切切切片片片片的的的的水水水水溶
3、溶溶溶液液液液中中中中,呈呈呈呈现现现现了了了了极极极极为为为为可可可可爱爱爱爱的的的的天天天天蓝蓝蓝蓝色。色。色。色。vv直直直直到到到到18521852年年年年,StokesStokes在在在在考考考考察察察察奎奎奎奎宁宁宁宁和和和和叶叶叶叶绿绿绿绿素素素素的的的的荧荧荧荧光光光光时时时时,用用用用分分分分光光光光光光光光度度度度计计计计观观观观察察察察到到到到其其其其荧荧荧荧光光光光的的的的波波波波长长长长比比比比入入入入射射射射光光光光的的的的波波波波长长长长稍稍稍稍微微微微长长长长些些些些,才才才才判判判判断断断断这这这这种种种种现现现现象象象象是是是是这这这这些些些些物物物物质质质
4、质在在在在吸吸吸吸收收收收光光光光能能能能后后后后重重重重新新新新发发发发射射射射不不不不同同同同波波波波长长长长的的的的光光光光,而而而而不不不不是是是是由由由由光光光光的的的的漫漫漫漫射射射射作作作作用用用用所所所所引引引引起起起起的的的的,从从从从而而而而导导导导入入入入了了了了荧荧荧荧光光光光是是是是光光光光发发发发射射射射的的的的概概概概念念念念,他还由发荧光的矿石他还由发荧光的矿石他还由发荧光的矿石他还由发荧光的矿石“萤石萤石萤石萤石”推演而提出推演而提出推演而提出推演而提出“荧光荧光荧光荧光”这一术语。这一术语。这一术语。这一术语。vv18671867年年年年,Goppelsro
5、derGoppelsroder进进进进行行行行了了了了历历历历史史史史上上上上首首首首次次次次的的的的荧荧荧荧光光光光分分分分析析析析工工工工作作作作,应应应应用铝用铝用铝用铝桑色素配合物的荧光进行铝的测定。桑色素配合物的荧光进行铝的测定。桑色素配合物的荧光进行铝的测定。桑色素配合物的荧光进行铝的测定。vv1919世世世世纪纪纪纪以以以以前前前前,荧荧荧荧光光光光的的的的观观观观察察察察是是是是靠靠靠靠肉肉肉肉眼眼眼眼进进进进行行行行的的的的,直直直直到到到到19281928年年年年,才才才才由由由由JetteJette和和和和WestWest提出了第一台荧光计。提出了第一台荧光计。提出了第一
6、台荧光计。提出了第一台荧光计。Modern Instrument Analytical Method一一一一.分子荧光与磷光的产生分子荧光与磷光的产生分子荧光与磷光的产生分子荧光与磷光的产生1.1.单重态与三重态单重态与三重态单重态与三重态单重态与三重态2.2.分子的活化与去活化分子的活化与去活化分子的活化与去活化分子的活化与去活化3.3.分子发光的类型分子发光的类型分子发光的类型分子发光的类型按激发的模式分类:按激发的模式分类:按激发的模式分类:按激发的模式分类:按分子激发态的类型分类:按分子激发态的类型分类:按分子激发态的类型分类:按分子激发态的类型分类:光致发光光致发光光致发光光致发光化
7、学发光化学发光化学发光化学发光/生物发光生物发光生物发光生物发光热致发光热致发光热致发光热致发光场致发光场致发光场致发光场致发光摩擦发光摩擦发光摩擦发光摩擦发光 分子发光分子发光分子发光分子发光分子发光分子发光分子发光分子发光荧光荧光荧光荧光磷光磷光磷光磷光瞬时荧光瞬时荧光瞬时荧光瞬时荧光迟滞荧光迟滞荧光迟滞荧光迟滞荧光按光子能量分类:按光子能量分类:按光子能量分类:按光子能量分类:斯托克斯荧光斯托克斯荧光斯托克斯荧光斯托克斯荧光(Stokes)(Stokes):exex emem共振荧光共振荧光共振荧光共振荧光(Resonance)(Resonance):exex=emem 荧光荧光荧光荧光
8、 Modern Instrument Analytical Method分子的活化与去活化分子的活化与去活化分子的活化与去活化分子的活化与去活化S S0 0S S1 1T T1 1S S2 2紫紫紫紫外外外外可可可可见见见见吸吸吸吸收收收收光光光光谱谱谱谱外转移外转移外转移外转移紫紫紫紫外外外外可可可可见见见见共共共共振振振振荧荧荧荧光光光光光光光光谱谱谱谱内转移内转移内转移内转移荧光荧光荧光荧光系间系间系间系间窜跃窜跃窜跃窜跃磷磷磷磷光光光光反系间反系间反系间反系间窜跃窜跃窜跃窜跃迟迟迟迟滞滞滞滞荧荧荧荧光光光光振动弛豫振动弛豫振动弛豫振动弛豫.无辐射跃迁的类型无辐射跃迁的类型无辐射跃迁的类
9、型无辐射跃迁的类型振动弛豫振动弛豫振动弛豫振动弛豫:V Vr r 1010-12-12secsec外外外外 转转转转 移移移移:无辐射跃迁无辐射跃迁无辐射跃迁无辐射跃迁回到基态回到基态回到基态回到基态内内内内 转转转转 移移移移:S S2 2SS1 1能级能级能级能级之间有重叠之间有重叠之间有重叠之间有重叠系间窜跃系间窜跃系间窜跃系间窜跃:S S2 2TT1 1能级能级能级能级之间有重叠之间有重叠之间有重叠之间有重叠反系间窜跃反系间窜跃反系间窜跃反系间窜跃:由外部获由外部获由外部获由外部获取能量后取能量后取能量后取能量后 T T1 1 S S2 2.辐射跃迁的类型辐射跃迁的类型辐射跃迁的类型辐
10、射跃迁的类型共振荧光:共振荧光:共振荧光:共振荧光:1010-12-12 secsec荧荧荧荧 光:光:光:光:1010-8-8 secsec磷磷磷磷 光:光:光:光:110110-4-4 secsec迟滞荧光迟滞荧光迟滞荧光迟滞荧光:10102 21010-4-4 secsecModern Instrument Analytical Method二二二二.分子荧光分子荧光分子荧光分子荧光(磷光磷光磷光磷光)光谱光谱光谱光谱1.1.荧光荧光荧光荧光(磷光磷光磷光磷光)激发光谱与发射光谱激发光谱与发射光谱激发光谱与发射光谱激发光谱与发射光谱荧光荧光荧光荧光(磷光磷光磷光磷光)均为光致发光,在光辐
11、射的作用下,荧光物质发射出不均为光致发光,在光辐射的作用下,荧光物质发射出不均为光致发光,在光辐射的作用下,荧光物质发射出不均为光致发光,在光辐射的作用下,荧光物质发射出不同波长的荧光。同波长的荧光。同波长的荧光。同波长的荧光。A.A.激发光谱激发光谱激发光谱激发光谱固定固定固定固定 emem=620nm(MAX)=620nm(MAX)exex=290nm =290nm(MAX)(MAX)固定发射波长固定发射波长固定发射波长固定发射波长扫描激发波长扫描激发波长扫描激发波长扫描激发波长荧光激发光谱与荧光激发光谱与荧光激发光谱与荧光激发光谱与紫外紫外紫外紫外-可见吸收光可见吸收光可见吸收光可见吸收
12、光谱类似谱类似谱类似谱类似Modern Instrument Analytical Method exex=290nm =290nm(MAX)(MAX)固定固定固定固定 emem=620nm(MAX)=620nm(MAX)固定固定固定固定 exex=290nm=290nm(MAX)(MAX)emem=620nm 620nm(MAX)(MAX)B.B.发射光谱发射光谱发射光谱发射光谱(荧光光谱荧光光谱荧光光谱荧光光谱)固定激发波长固定激发波长固定激发波长固定激发波长 扫描发射波长扫描发射波长扫描发射波长扫描发射波长C.C.激发光谱与发射激发光谱与发射激发光谱与发射激发光谱与发射光谱的镜像关系光谱
13、的镜像关系光谱的镜像关系光谱的镜像关系S S0 04 43 32 21 1S S1 14 43 32 21 1发射光谱的形状与激发波长无关:发射光谱的形状与激发波长无关:发射光谱的形状与激发波长无关:发射光谱的形状与激发波长无关:分子的激发光谱可能含有几个激发带,但发射光谱只含一个发射带;即分子的激发光谱可能含有几个激发带,但发射光谱只含一个发射带;即分子的激发光谱可能含有几个激发带,但发射光谱只含一个发射带;即分子的激发光谱可能含有几个激发带,但发射光谱只含一个发射带;即使分子被激发到高于使分子被激发到高于使分子被激发到高于使分子被激发到高于S S1 1的电子态,由于经过极快的内转换和振动弛
14、豫降到的电子态,由于经过极快的内转换和振动弛豫降到的电子态,由于经过极快的内转换和振动弛豫降到的电子态,由于经过极快的内转换和振动弛豫降到S S1 1电子态的最低振动、转动能级,然后以辐射形式释放能量回到基态。电子态的最低振动、转动能级,然后以辐射形式释放能量回到基态。电子态的最低振动、转动能级,然后以辐射形式释放能量回到基态。电子态的最低振动、转动能级,然后以辐射形式释放能量回到基态。1 1 4 41 1 3 31 1 2 21 11 11 1 4 41 1 4 41 1 2 21 1 1 1Modern Instrument Analytical MethodI I F F f f f f
15、(exex 、emem)蒽的发射光谱蒽的发射光谱蒽的发射光谱蒽的发射光谱固定激发波长、扫描发射波长固定激发波长、扫描发射波长固定激发波长、扫描发射波长固定激发波长、扫描发射波长蒽的三维等高线光谱图蒽的三维等高线光谱图蒽的三维等高线光谱图蒽的三维等高线光谱图 蒽的三维等荧光强度光谱蒽的三维等荧光强度光谱蒽的三维等荧光强度光谱蒽的三维等荧光强度光谱Modern Instrument Analytical MethodVBVB1 1和和和和VBVB2 2的三维荧光光谱的三维荧光光谱的三维荧光光谱的三维荧光光谱RLSRLSDSDSTSTSATSATSADSADS散射片三维共振光散射光谱散射片三维共振光
16、散射光谱散射片三维共振光散射光谱散射片三维共振光散射光谱3.3.3.3.三维共振光散射光谱三维共振光散射光谱三维共振光散射光谱三维共振光散射光谱ADSADSADSADSATSATSATSATSTS TS TS TSRLSRLSRLSRLSDS DS DS DS散射片三维共振光散射等高线光谱图散射片三维共振光散射等高线光谱图散射片三维共振光散射等高线光谱图散射片三维共振光散射等高线光谱图共振光散射共振光散射共振光散射共振光散射瑞利散射瑞利散射瑞利散射瑞利散射固定固定固定固定 exex=270nm=270nm拉曼光拉曼光拉曼光拉曼光二级共振光散射二级共振光散射二级共振光散射二级共振光散射三级共振光
17、散射三级共振光散射三级共振光散射三级共振光散射荧光光谱有用区间荧光光谱有用区间荧光光谱有用区间荧光光谱有用区间Modern Instrument Analytical Method三三三三.分子荧光分子荧光分子荧光分子荧光(磷光磷光磷光磷光)强度与荧光物质浓度的关强度与荧光物质浓度的关强度与荧光物质浓度的关强度与荧光物质浓度的关系系系系1.1.荧光强度荧光强度荧光强度荧光强度(磷光磷光磷光磷光)与浓度的关系与浓度的关系与浓度的关系与浓度的关系光吸收定律光吸收定律光吸收定律光吸收定律(Lambert Beer LawLambert Beer Law)相应的吸光分数为:相应的吸光分数为:相应的吸光
18、分数为:相应的吸光分数为:荧光强度(荧光强度(荧光强度(荧光强度(I IF F)与相应的吸光分数成正比:)与相应的吸光分数成正比:)与相应的吸光分数成正比:)与相应的吸光分数成正比:按照级数展开式:按照级数展开式:按照级数展开式:按照级数展开式:Modern Instrument Analytical Method对于稀溶液,当对于稀溶液,当对于稀溶液,当对于稀溶液,当 bc bc0.0.0505(磷光磷光磷光磷光 bc bc0.10001000 p p(s)(s)2.62.62.52.51.41.40.230.230.0140.0140.00230.00236.6.溶剂效应溶剂效应溶剂效应溶
19、剂效应蓝移蓝移蓝移蓝移:E E n*n*E E n*n*红移红移红移红移:E E*E E*在极性溶剂中:在极性溶剂中:在极性溶剂中:在极性溶剂中:无溶剂化作用无溶剂化作用无溶剂化作用无溶剂化作用有溶剂化作用有溶剂化作用有溶剂化作用有溶剂化作用Modern Instrument Analytical Method三三三三.金属螯合物的荧光金属螯合物的荧光金属螯合物的荧光金属螯合物的荧光1.1.螯合物中配位体的发光螯合物中配位体的发光螯合物中配位体的发光螯合物中配位体的发光2.2.螯合物中金属离子的发光螯合物中金属离子的发光螯合物中金属离子的发光螯合物中金属离子的发光8-8-羟基喹啉羟基喹啉羟基喹
20、啉羟基喹啉弱荧光弱荧光弱荧光弱荧光8-8-羟基喹啉羟基喹啉羟基喹啉羟基喹啉-Zn-Zn螯合螯合螯合螯合物物物物黄绿色强荧光黄绿色强荧光黄绿色强荧光黄绿色强荧光2,2-2,2-二羟基偶氮苯二羟基偶氮苯二羟基偶氮苯二羟基偶氮苯无荧光无荧光无荧光无荧光2,2-2,2-二羟基偶氮苯二羟基偶氮苯二羟基偶氮苯二羟基偶氮苯-Al-Al螯合物螯合物螯合物螯合物强荧光强荧光强荧光强荧光T T1 1系间窜跃系间窜跃系间窜跃系间窜跃S S0 0S S1 1d d*、f f*d d*d d f f*f f 荧光荧光荧光荧光分子内能量转移分子内能量转移分子内能量转移分子内能量转移Modern Instrument An
21、alytical Method四四四四.荧光的熄灭荧光的熄灭荧光的熄灭荧光的熄灭1.1.碰撞熄灭碰撞熄灭碰撞熄灭碰撞熄灭荧荧荧荧 光光光光 熄熄熄熄 灭灭灭灭:荧光分子与溶剂分子或其它溶质分子相互作用引起:荧光分子与溶剂分子或其它溶质分子相互作用引起:荧光分子与溶剂分子或其它溶质分子相互作用引起:荧光分子与溶剂分子或其它溶质分子相互作用引起荧光强度降低或消失的现象。荧光强度降低或消失的现象。荧光强度降低或消失的现象。荧光强度降低或消失的现象。荧光熄灭剂荧光熄灭剂荧光熄灭剂荧光熄灭剂:这些溶剂分子或其它溶质分子称为荧光熄灭剂。:这些溶剂分子或其它溶质分子称为荧光熄灭剂。:这些溶剂分子或其它溶质分
22、子称为荧光熄灭剂。:这些溶剂分子或其它溶质分子称为荧光熄灭剂。相对速率相对速率相对速率相对速率 1 1K K1 1 M M*K K2 2 MM*Q Q 与分子的直径、与分子的直径、与分子的直径、与分子的直径、粘度、温度等因素粘度、温度等因素粘度、温度等因素粘度、温度等因素有关。有关。有关。有关。2.2.能量转移熄灭能量转移熄灭能量转移熄灭能量转移熄灭再吸收过程:再吸收过程:再吸收过程:再吸收过程:共振能量转移:共振能量转移:共振能量转移:共振能量转移:分子内能量转移:分子内能量转移:分子内能量转移:分子内能量转移:hvhv激发激发激发激发发射发射发射发射熄灭熄灭熄灭熄灭Modern Instr
23、ument Analytical Method3.3.氧的熄灭作用氧的熄灭作用氧的熄灭作用氧的熄灭作用氧分子是荧光、磷光的熄灭剂,氧分子是荧光、磷光的熄灭剂,氧分子是荧光、磷光的熄灭剂,氧分子是荧光、磷光的熄灭剂,4.4.自熄灭与自吸收自熄灭与自吸收自熄灭与自吸收自熄灭与自吸收当荧光物质的浓度大于当荧光物质的浓度大于当荧光物质的浓度大于当荧光物质的浓度大于1g/L1g/L时,常发生荧光的自熄灭时,常发生荧光的自熄灭时,常发生荧光的自熄灭时,常发生荧光的自熄灭(浓度熄灭浓度熄灭浓度熄灭浓度熄灭)自吸收:自吸收:自吸收:自吸收:没有除氧,溶液中没有除氧,溶液中没有除氧,溶液中没有除氧,溶液中难以观
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