消毒与灭菌.ppt

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1、病原微生物实验室的 消毒与灭菌 湖南省疾病预防控制中心湖南省疾病预防控制中心张张 红红2010.52010.5消毒和灭菌是保护操作人员和环境消毒和灭菌是保护操作人员和环境不被病原微生物污染和感染的重要环节不被病原微生物污染和感染的重要环节含有病原微生物的废物必须经过含有病原微生物的废物必须经过灭菌灭菌才能才能作为普通废物处理。作为普通废物处理。操作中可能产生的操作中可能产生的迸溅或泄漏迸溅或泄漏，必须通过，必须通过消毒消毒/灭菌达到对病原微生物的杀灭，灭菌达到对病原微生物的杀灭，-保护操作人员，保护环境。保护操作人员，保护环境。消毒和灭菌基本常识对于实验室生物安全消毒和灭菌基本常识对于实验室生

2、物安全至关重要。至关重要。实验室生物危害废物示例实验室生物危害废物示例消毒和灭菌的基本原则消毒和灭菌的基本原则:适用于所有已知不同类别的病原微生物适用于所有已知不同类别的病原微生物 清除污染的特殊要求清除污染的特殊要求:根据根据实验工作类型实验工作类型以及所操作的以及所操作的感染性物质感染性物质的特的特性来决定性来决定提供的一般性资料提供的一般性资料:可用于各病原微生物实验室可用于各病原微生物实验室建立标准和操作程序建立标准和操作程序，以处理特定实验室中所涉及的生物危害以处理特定实验室中所涉及的生物危害清洁清洁 清洁剂清洁剂消毒消毒消毒剂消毒剂/抗菌剂抗菌剂灭菌灭菌灭菌剂灭菌剂/杀菌剂杀菌剂/

3、化学灭菌化学灭菌剂剂化学方法化学方法物理方法物理方法 基本概念基本概念 基本概念基本概念 消毒与灭菌：消毒与灭菌：-消毒和灭菌为两个不同概念消毒和灭菌为两个不同概念-消毒处理不一定都能达到灭菌要求消毒处理不一定都能达到灭菌要求 而灭菌一定都能达到消毒而灭菌一定都能达到消毒目的目的 1.1.消毒消毒（disinfection）：通过物理或化学手段去除或杀灭病原微生物通过物理或化学手段去除或杀灭病原微生物（不一定杀灭其孢子）（不一定杀灭其孢子）2.2.灭菌灭菌（sterilization）：杀灭和或去除杀灭和或去除所有所有微生物及其孢子的过程微生物及其孢子的过程3 3抗菌剂抗菌剂（antimicr

4、obialantimicrobial）能够杀灭或去除微生物或抑制其生长和繁殖的制剂能够杀灭或去除微生物或抑制其生长和繁殖的制剂4 4消毒剂消毒剂（disinfectantdisinfectant）用用于于杀杀灭灭微微生生物物的的化化学学品品或或化化学学混混合合物物，但但不不一一定定杀杀灭孢子灭孢子,消毒剂常用于非生命物体或其表面消毒剂常用于非生命物体或其表面5 5化学杀菌剂化学杀菌剂（chemical chemical germcidegermcide）用于杀灭微生物的化学品或化学混合物用于杀灭微生物的化学品或化学混合物基本概念基本概念 6 6灭菌剂灭菌剂（microbicidemicrobi

5、cide）能能够够杀杀灭灭微微生生物物的的化化学学品品或或化化学学混混合合物物，其其杀杀灭灭细细菌菌芽孢的能力达到灭菌水平的称为灭菌剂。芽孢的能力达到灭菌水平的称为灭菌剂。7 7防腐剂防腐剂 （antisepticantiseptic）能够抑制微生物生长和繁殖但不足以杀灭的化学物质能够抑制微生物生长和繁殖但不足以杀灭的化学物质基本概念基本概念 基本概念基本概念气体消毒剂与烟雾灭菌剂气体消毒剂与烟雾灭菌剂 -熏蒸消毒熏蒸消毒 在密闭空间内进行熏蒸以达到消毒目的的一种方法（污染的空气、表面）清洁与预清洁清洁与预清洁去垢去垢/污剂污剂 指去除污垢、有机物和污渍 必须通过预清洁才能实现消毒和灭菌的目的

6、清除污染清除污染 指去除/杀死微生物的任何过程，清除污染的应用范围更广消毒与灭菌的方法消毒与灭菌的方法化学消毒灭菌化学消毒灭菌 通过液体化学试剂杀灭微生物繁殖体繁殖体或芽孢芽孢 对象：包括物体表面、空气和污染物等。方式：有擦洗消毒、熏蒸和浸泡等。物理消毒灭菌物理消毒灭菌紫外线高压蒸汽灭菌焚烧HEPA过滤除菌 使用方法：使用方法：刷、吸、干擦、洗涤或用浸泡肥皂水或清洁剂的湿墩布擦洗严重污染的物品会严重污染的物品会影响除污染剂的杀菌作用，不能被迅速地消毒或灭菌；许多杀菌剂只对经过预只对经过预清洁的物品清洁的物品才具有杀菌活性。注意！注意！预清洁时必须谨慎，以避免暴露于感染性物质;必须使用与以后使用

7、的杀菌剂化学上相容的物质;通常采用相同的化学杀菌剂进行预清洁和消毒;是否进行预清洁应根据工作性质和需要来决定是否进行预清洁应根据工作性质和需要来决定化学消毒方法化学消毒方法清洁化学消毒方法化学消毒方法消毒剂与灭菌剂：消毒剂与灭菌剂：用于杀死病原微生物的化学品或化学混合物用于杀死病原微生物的化学品或化学混合物抗菌剂与防腐剂抗菌剂与防腐剂气体消毒剂与烟雾灭菌剂气体消毒剂与烟雾灭菌剂（同熏蒸消毒）（同熏蒸消毒）熏蒸消毒熏蒸消毒 在密闭空间内进行熏蒸以达到消毒目的的一种方法在密闭空间内进行熏蒸以达到消毒目的的一种方法（污染的空气、表面）（污染的空气、表面）防止过度使用消毒剂防止过度使用消毒剂!正确使用

8、化学消毒剂以确保实验场所的安全，减少来自感染性物质的危险-选择合适的化学消毒剂 应考虑经济、控制库存以及限制环境污染等因素，尽可能减少化学消毒剂的使用量化学消毒剂的作用时间因品种和厂商而异应按产品说明书配制和使用消毒剂的浓度（浓度越高,消毒效果越好？）消毒剂的作用时间注意消毒剂有效期！注意消毒剂有效期！-消毒剂的有效期消毒剂使用的有效期限包膜病毒包膜病毒（如：（如：HSV,CMV,RSV,HIV）细菌繁殖体（如：金葡，绿脓）细菌繁殖体（如：金葡，绿脓）真菌（如，念珠菌属，曲霉属）真菌（如，念珠菌属，曲霉属）非脂类或小病毒（如脊非脂类或小病毒（如脊髓灰质炎病毒髓灰质炎病毒,柯萨奇病毒，柯萨奇病毒

9、，HBV）分枝杆菌（如分枝杆菌（如TB，M.terrae）Cryptosporidium parvum细菌芽孢细菌芽孢Prions敏感敏感耐受耐受低效中效 高 效灭菌灭菌（高，延时）（高，延时）消毒剂水平消毒剂水平气体灭菌气体灭菌蒸汽灭菌蒸汽灭菌 消毒剂种类（按标签说明使用）（1 1）高效）高效（水平）消毒剂：（水平）消毒剂：杀灭所有微生物，除了杀灭所有微生物，除了大量细菌芽孢大量细菌芽孢（2 2）中效）中效：杀灭所有微生物，除了细菌芽孢杀灭所有微生物，除了细菌芽孢（3 3）低效）低效：杀灭多数细菌繁殖体和有包膜（亲脂性）的病毒杀灭多数细菌繁殖体和有包膜（亲脂性）的病毒（4 4）最低有效浓度）

10、最低有效浓度：液体化学杀菌剂能达到产品标明液体化学杀菌剂能达到产品标明 ，能杀灭的微生物范围的能杀灭的微生物范围的活性活性 注意产地和产家注意产地和产家 -防假冒伪劣产品防假冒伪劣产品 实际有效浓度与产品实际有效浓度与产品标示标示不同不同常用化学灭菌剂的性能比较常用化学灭菌剂的性能比较常用化学灭菌剂的性能比较常用化学灭菌剂的性能比较杀菌剂杀菌剂使用浓度使用浓度消毒水平消毒水平被灭活被灭活微生物微生物特征特征（）（）细菌细菌包膜病毒包膜病毒无包膜无包膜病毒病毒结核分结核分枝杆菌枝杆菌细菌芽孢细菌芽孢含氯含氯 高效高效+/-过氧乙过氧乙酸酸 0.0010.2高效高效+戊二醛戊二醛 2化学灭菌化学灭

11、菌/高效高效+甲醛甲醛 3 8高效高效/中效中效+/-酒精酒精 70%中效+-+-季胺盐季胺盐0.41.6低效+-常用化学灭菌剂的安全性及特征常用化学灭菌剂的安全性及特征常用化学灭菌剂的安全性及特征常用化学灭菌剂的安全性及特征杀菌剂杀菌剂腐蚀性腐蚀性 残留物残留物 有有害害被有机物被有机物灭活灭活皮肤、眼皮肤、眼刺激性刺激性呼吸道呼吸道刺激性刺激性含氯含氯+-过氧乙酸过氧乙酸+-+-戊二醛戊二醛-+-+甲醛甲醛-+-+酒精酒精+/-+-季胺季胺 盐盐-+-（一）表面消毒1.1.氯及氯化物氯及氯化物广泛应用的广谱化学杀菌剂 杀灭细菌、真菌、结核杆菌、病毒及芽孢廉价、速效（1）氯（次氯酸钠）氯作为

12、消毒剂氯作为消毒剂/漂白剂使用时为强碱性，具腐蚀性（金属）漂白剂使用时为强碱性，具腐蚀性（金属）1 1）更换频率取决于）更换频率取决于 有机物（有机物（蛋白质蛋白质）开口容器开口容器(无盖无盖)工作液的初始浓度工作液的初始浓度(储藏高浓度或使用浓度储藏高浓度或使用浓度)使用频率使用频率和特性和特性室内条件室内条件(高温时能释放氯气高温时能释放氯气)一般情况：一般情况：一一天天多多次次浸浸泡泡、含含高高浓浓度度有有机机物物的的材材料料，应应每每天天至至少少更更换换一次；一次；使用频率较低的漂白剂溶液，则可以维持一周时间。使用频率较低的漂白剂溶液，则可以维持一周时间。2 2）有效氯浓度）有效氯浓度

13、常规实验室用于消毒的有效氯浓度应为1 g/L。感染性物质的溢出以及含有大量有机物的物质，推荐使用更强作用的含5 g/L有效氯的溶液来处理。-家用漂白剂的次氯酸钠溶液含有50 g/L的有效氯 -工业用漂白剂的次氯酸钠溶液含有近120 g/L的有效氯。（2 2）次氯酸钙）次氯酸钙次氯酸钙Ca（ClO）2的颗粒或片剂一般含有70%的有效氯；其有效氯浓度分别为1g/L和5 g/L；用颗粒或片剂配制浓度1.4 g/L或7.0 g/L溶液不要把漂白剂当作防腐剂使用不要把漂白剂当作防腐剂使用可以用作普通目的的消毒剂 用于浸泡非金属类浸泡非金属类的的污染材料 在紧急情况下可用终浓度含12 mg/L有效氯的漂白

14、剂消毒饮用水注意事项1）氯气具有强毒性！因此只能在通风良好的地方储存和使用。2）漂白剂也不能与酸混合不能与酸混合以避免氯气快速释放。3）氯的许多副产物可能对人体及环境有害对人体及环境有害，避免滥用含氯消毒剂，特别是漂白剂。（3）二氯异氰尿酸钠二氯异氰尿酸钠（NaDCC）的粉剂含有60%的有效氯。用NaDCC粉剂配制的浓度为1.7 g/L和8.5 g/L的溶液将分别含有1 g/L和5 g/L的有效氯 NaDCC粉剂和片剂储存方便、安全 血液或其他生物危害性液体溢出时，可以使用固体NaDCC，并使其作用至少10min后再除去，然后对污染区进行进一步的清理。（4 4）氯胺）氯胺氯胺粉剂含有大约25的

15、有效氯 -氯胺释放氯的速度比次氯酸慢 因此如果需要获得与次氯酸相同的效力，就需需要要较较高的初始浓度高的初始浓度。-有机物对氯胺溶液的影响没有次氯酸溶液那么大 在在“清清洁洁”和和“污污染染”情情况况下下都都推推荐荐使使用用20 20 g/Lg/L的的浓度浓度。-在氯胺中浸浸泡泡过过的的物物品品必必须须要要彻彻底底清清洗洗，以除去加入到氯胺-T（甲苯磺酰氯醛甲酰胺钠）粉剂中的填充剂的残留物。（5）二氧化氯二氧化氯是一种高效快速杀菌剂、防腐剂和氧化剂二氧化氯是一种高效快速杀菌剂、防腐剂和氧化剂在浓度低于漂白粉的含氯浓度时即具活性。在浓度低于漂白粉的含氯浓度时即具活性。气气态态的的二二氧氧化化氯氯

16、不不稳稳定定，可可分分解解为为氯氯气气（ClCl2 2）和和氧氧气气（O O2 2），），并释放热。并释放热。二二氧氧化化氯氯溶溶于于水水，在在水水溶溶液液中中稳稳定定。有有两两种种方方法法可可获获得得二二氧化氯：氧化氯：1 1）将将盐盐酸酸（HClHCl）和和亚亚氯氯酸酸钠钠（NaClONaClO2 2）两两种种单单独独成成分分混混合时即可生成；合时即可生成；2 2）订购其稳定态，然后在需要时随时活化生成。）订购其稳定态，然后在需要时随时活化生成。二氧化氯是高选择性的氧化剂（强还原有机物二氧化氯是高选择性的氧化剂（强还原有机物/硫化物）硫化物）在有机物较多的情况下，使用适量的二氧化氯比臭氧和

17、氯在有机物较多的情况下，使用适量的二氧化氯比臭氧和氯更有效。更有效。常规含氯消毒剂的推荐使用浓度常规含氯消毒剂的推荐使用浓度常规含氯消毒剂的推荐使用浓度常规含氯消毒剂的推荐使用浓度“清洁”条件下a“污染”条件下b所需有效氯浓度所需有效氯浓度0.1%（1g/L）0.5%（5g/L）次氯酸钠溶液次氯酸钠溶液（含5%有效氯）20mL/L100mL/L次氯酸钙次氯酸钙（含70%有效氯）1.4g/L7.0g/L二二氯氯异异氰氰尿尿酸酸钠钠粉粉剂剂（含60%有效氯）1.7g/L8.5g/L二二氯氯异异氰氰尿尿酸酸钠钠片片剂剂（每片含1.5 g有效氯）每升1片每升4片氯胺氯胺（含（含25%25%有效氯）有效

18、氯）20g/L20g/La 去除大部分污染材料后b 溢流情况（如血液）或大量污染材料没有除去时2 2 2 2酒精酒精酒精酒精医用酒精包括乙醇和异丙醇，都具有快速杀灭细菌作用，可杀灭结核分枝杆菌、真菌和包膜病毒。不能杀灭芽孢不能杀灭芽孢。最佳杀菌浓度为最佳杀菌浓度为7070酒精主要通过使微生物蛋白质变性来达到杀菌作用，可作为仪器外表面和手仪器外表面和手的消毒剂酒精能破坏用胶镶嵌的仪器镜头，可使橡胶及某些塑料管在延长使用或重复使用后变硬膨胀，故用酒精来消毒仪器应加以注意。酒精属易燃物，需置冷及通风处冷及通风处保存。易挥发-防爆冰箱防爆冰箱标记清楚，以防高压灭菌标记清楚，以防高压灭菌3 3 3 3戊

19、二醛戊二醛戊二醛戊二醛戊二醛OHC（CH2）3CHO对细菌繁殖体、芽孢、真菌和含脂或不含脂的病毒具有杀灭作用戊二醛不具有腐蚀性，比甲醛作用迅速，但也需要几几个个小小时时才才能能杀死细菌芽孢。杀死细菌芽孢。商品化的戊二醛是浓度约20 g/L（2）的溶液绝大部分产品使用前需要加入与产品一同提供的碳酸氢盐混合物进行“活化”（使之变成碱性）活化的溶液可以重复使用14周与产品一同提供的浓度测试条（dipstick）仅用于粗略指示溶液中的活性戊二醛含量，当浓度达不到产品要求的使用浓度或戊二醛溶液变混浊时，则应废弃。戊二醛有毒性毒性，并对皮肤和黏膜具有刺激性皮肤和黏膜具有刺激性，应当避免直接接触，必须在通风

20、橱或通风良好的地方使用不宜采用其喷雾剂或溶液来清除环境表面的污染必须遵守化学品安全的国家规定。4 4 4 4过氧乙酸过氧乙酸过氧乙酸过氧乙酸过乙酸或过氧乙酸可在低浓度（0.001%0.2%）下快速杀灭所有微生物，包括细菌的芽孢。作用机制：使蛋白质变性，破坏细胞壁的渗透性，将蛋白质、酶及其他代谢产物氧化、巯基化和硫基化。过氧乙酸的突出优点：分解产物无害（如乙酸、水、氧和过氧化氢）缺点：腐蚀性大，能腐蚀铜、黄铜、白钢、镀锌铁皮（马口铁）。不稳定，特别当稀释后，6 天后1%溶液损失一半效力，40%溶液每月活性丢失1%2%。5.5.季胺盐类化合物季胺盐类化合物季胺化合物只能用作消毒剂通常用于环境卫生消

21、毒，如地面、家具、及墙壁。可杀灭真菌、细菌、包膜病毒，不能杀灭芽孢、结核分枝杆菌及无包膜病毒。有机物水的硬度影响其消毒效果阴离子去污剂使用时，选择预清洁剂的品种（二）空气熏蒸（二）空气熏蒸多使用甲醛（多使用甲醛（HCHOHCHO）进行空气熏蒸进行空气熏蒸在在温温度度高高于于2020时时，甲甲醛醛是是一一种种能能够够杀杀灭灭所所有有微生物及其孢子的气体微生物及其孢子的气体甲醛对朊病毒没有杀灭活性对朊病毒没有杀灭活性甲醛起效相对较慢，需要7070左左右右的的相相对对湿湿度度。市场上出售的产品：甲醛多聚体甲醛多聚体 （固体）（固体）福福尔尔马马林林甲醛浓度约为370 g/L（37）的气体水溶液，其中

22、含甲醇（100 mL/L）作为稳定剂 甲醛两种产品经加热都可以产生气体，用于封封闭闭空空间间（如生物安全柜和房间）（如生物安全柜和房间）的清除污染和消毒（见本章“清除局部环境污染”部分）甲醛（5福尔马林水溶液）可以作为液体消毒剂；甲醛被怀疑是一种致癌剂，具有刺鼻的气味，其气体能够刺激眼睛和黏膜；因此必须在通风橱或通风良好的地方储存和使用；甲醛的使用必须遵守国家化学品安全规定；物理方法一一.紫外线紫外线 紫外线适用于空气紫外线适用于空气、物体表面等消毒物体表面等消毒 消毒使用的紫外线是C波紫外线，波长范围是200nm275nm杀菌作用最强的波段是250nm270nm紫外线光源必须使用能够产生达到

23、国家标准的辐照值杀菌紫外灯 普通30W30W 直管紫外灯在距离灯管1m1m处检测的辐射253.7nm紫外线强度不得低于70uW/cm2室内安装紫外灯的数量为平均每m3不少于1.5W，照照射时间不少于射时间不少于30min30min。二二.高压蒸汽灭菌和其他加热灭菌消毒高压蒸汽灭菌和其他加热灭菌消毒加热加热是最常用的清除病原体污染的物理手段。是最常用的清除病原体污染的物理手段。“干干”热热没没有有腐腐蚀蚀性性，可可用用来来处处理理实实验验器器材材中中许多可耐受许多可耐受160160或更高温度或更高温度2 24 h4 h的物品的物品 燃烧或焚化燃烧或焚化也是一种干热方式也是一种干热方式 湿热高压灭

24、菌湿热高压灭菌则最为有效则最为有效煮煮沸沸并并不不一一定定能能杀杀灭灭所所有有的的微微生生物物或或病病原原体体，但但在在其其他他方方法法（化化学学杀杀菌菌、清清除除污污染染、高高压压灭灭菌菌）不不可可行行或或没没有有条条件件时时，也也可可以以作作为为一一种种最最起起码码的的消毒措施。消毒措施。-海拔高度对沸点温度的影响海拔高度对沸点温度的影响：3000m3000m90.290.2度度(一)压力饱和蒸汽灭菌（高压蒸气灭菌）灭菌后的物品必须小心操作并保存，以保证在使用之前不被污染。压压力力饱饱和和蒸蒸汽汽灭灭菌菌（高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌）是对实验材料进行灭菌的最有效和最可靠最有效和最可靠的方法对

25、于大多数目的，下列组合可以确保正确装载的高压灭菌器的灭菌效果：1.134 4 min2.126 10 min3.121 15 min4.115 25 min1.预真空式高压灭菌器蒸汽进入前使空气从灭菌器排出。气体是通过一个装有HEPA过滤器的排气阀排出。在灭菌结束时，蒸汽自动排出。这种高压灭菌可以在134下进行，因此灭菌周期可以缩短至3min。预真空式高压灭菌器对于多孔性物品的灭菌很理想，但由于要抽真空而不能用于液体的高不能用于液体的高压灭菌。压灭菌。预真空式高压灭菌器（双门互锁）2.重力置换式（“下排气式”）高压蒸汽灭菌器蒸汽在压力作用下进入灭菌器，由上而下置换较重（冷）的空气并通过灭菌器的

26、排气阀（装有HEPA过滤器）排出。3.燃料加热压力锅式高压灭菌器只有在没有重力置换式高压灭菌器的情况下才使用这一种灭菌器。从其顶部装载物品，通过燃气、电力或其他燃料来加热。通过加热容器底部的水来产生蒸汽，由下而上置换空气并经排气孔排出。当所有的空气排出后，关闭排气孔的阀门，缓慢加热使压力和温度上升到安全阀预置的水平。此时记为灭菌开始时间。灭菌结束后停止加热，让温度下降到80以下再打开盖子。燃料加热压力锅式高压灭菌器4.脉动真空蒸汽内循环高压灭菌器脉动真空压力蒸汽灭菌器利用真空控制系统、经预抽真空及有限次脉动抽取，通过压力蒸汽循环，强制以饱和蒸汽替换残余空气，可将柜内冷空气抽除98以上；避免了因

27、内部冷空气排除不彻底而存在的灭菌效果不稳定等问题。灭菌后真空加温热烘干，可快速干燥灭菌物品。脉动真空蒸汽内循环高压灭菌器（二）高压蒸汽灭菌器的装载高压蒸汽灭菌器的高压蒸汽灭菌器的待灭菌物品应松松散散包包装装放置在灭菌器内：上下左右均应有空隙；不能接触器壁；物品应放在金属网状篮筐内或金属网架上；物品装载量不应超过灭菌器内总体积的80%80%-利于蒸汽的渗透和空气排出-使蒸汽能够作用到其内容物；压力蒸汽灭菌包内化学指示卡/条（三）高压蒸汽灭菌质量保证的生物指标1.干热灭菌 常用灭菌时间和温度是170,60min；160,120 min;150,150 min。应用枯草芽孢杆菌（106）监测灭菌效果

28、。监测培养物应置3537培养2448h后观察。2.高压蒸汽灭菌 常用嗜热芽孢杆菌（105）监测灭菌效果。监测培养物应置55培养2448h后观察。（四）高压灭菌器使用注意事项下列规定能够减少操作压力容器时可能发生的危害下列规定能够减少操作压力容器时可能发生的危害：1.应由受过良好培训人员良好培训人员负责高压灭菌器的操作和维护。2.预预防防性性的的维维护护程程序序应包括：由有资质人员定期检查灭菌器柜腔、门的密封性以及所有的仪表和控制器。3.应使用不含腐蚀性抑制剂或其他化学品饱和蒸汽，否则可能污染灭菌的物品。4.所有需要高压蒸汽灭菌的物品都应放在空气能够排出并具有良良好好热热渗渗透透性性的的容容器器

29、中；灭菌器柜腔装载要松散，以便蒸汽可以均匀作用于装载物。5.当灭菌器内部加压时，互锁安全装置可以防止门被打开，而没有互锁装置的高压蒸汽灭菌器，应当关闭主蒸汽阀并待温度下降到80以下时再打开门。！（四）高压灭菌器使用注意事项6.当对液液体体高压蒸汽灭菌时，由于取出液体时可能因过热而沸腾，故应采用慢排式慢排式设置。7.即使温度下降到8080以以下下，操作者打开门时也应当戴适当的手套和面罩来进行防护手套和面罩来进行防护。8.在进行高压灭菌效果的常规监测中，生生物物指指示示剂剂或热热电电偶偶计计应置于每件高压灭菌物品的中心。最好在满载时用热偶计和记录仪进行定时监测，以确定灭菌程序是否恰当。(或用化学指

30、示条或用化学指示条)9.如果有灭菌器的排水过滤器应当每天拆下清洗。10.应当注意保持高压灭菌器安全阀的通畅。影响清除污染效果的因素1.处理剂量2.微生物污染的程度3.温度4.湿度5.酸碱度6.化学拮抗物质7.穿透条件8.表面张力三.焚烧在在处处理理经经或或未未经经清清除除污污染染的的动动物物尸尸体体以以及及解解剖剖组组织织或或其其他他实验室废弃物时，焚烧是一种有效的方法。实验室废弃物时，焚烧是一种有效的方法。只只有有在在实实验验室室可可以以控控制制焚焚烧烧炉炉的的条条件件下下，才才能能用用焚焚烧烧代代替替高压灭菌来处理感染性物质。高压灭菌来处理感染性物质。需需要要有有效效控控制制温温度度，并并

31、配配备备二二级级焚焚烧烧室室时时才才能能实实现现彻彻底底焚焚烧。烧。许许多多焚焚烧烧炉炉，尤尤其其是是那那些些只只有有单单个个焚焚烧烧室室的的，不不能能满满足足处处理理感感染染性性物物质质、动动物物尸尸体体和和塑塑料料制制品品的的要要求求，微微生生物物、有有毒化学品和烟尘可能通过烟囱排放而污染大气毒化学品和烟尘可能通过烟囱排放而污染大气理想的是一级焚烧室的温度至少应达到理想的是一级焚烧室的温度至少应达到800800 二级焚烧室的温度至少应达到二级焚烧室的温度至少应达到10001000四四.HEPA.HEPA过滤过滤空气经空气经HEPAHEPA滤器过滤、更新后，可在实验室内滤器过滤、更新后，可在

32、实验室内再循环使用。再循环使用。当实验室空气（来自生物安全柜的除外）排到当实验室空气（来自生物安全柜的除外）排到建筑物以外时，必须在远离该建筑及进气口的建筑物以外时，必须在远离该建筑及进气口的地方扩散。地方扩散。根据所操作的微生物因子不同，空气可以经根据所操作的微生物因子不同，空气可以经HEPAHEPA滤器过滤后排放。可以安装取暖、通风和滤器过滤后排放。可以安装取暖、通风和空调（空调（HVACHVAC）控制系统来防止实验室出现持续控制系统来防止实验室出现持续正压。正压。应考虑安装视听警报器，向工作人员发出应考虑安装视听警报器，向工作人员发出HVACHVAC系统故障信号。系统故障信号。HEPA滤

33、器更换程序1HEPAHEPA滤器消毒滤器消毒 1）福尔马林熏蒸(同生物安全柜消毒步骤)2）或用过氧乙酸对HEPA滤器的滤膜、外周和滤器后方检测孔处喷雾消毒,消毒时间依所用消毒剂种类而定。2HEPAHEPA滤器卸载滤器卸载 卸载HEPA滤器时，根据所从事的病原微生物的分类来对操作人员进行相应的防护。将HEPA滤器装入医用废物塑料袋。3高压灭菌高压灭菌 压力及时间依病原微生物种类而定。4焚烧焚烧 高压灭菌完成后，用医用废物塑料袋包装后送焚烧。实验室消毒灭菌的应用实验室消毒灭菌的应用化学消毒剂一般不用于地面、墙壁、设备和家具的常规清洁。但是，在控制疾病暴发时可以使用。（实验室实验台的材料）清除局部环

34、境污染清除局部环境污染一.一.局部环境污染的清除局部环境污染的清除需要联合应用液体和气体消毒剂清除实验室空间、用需要联合应用液体和气体消毒剂清除实验室空间、用具和设备的污染具和设备的污染1 1表面污染的清除表面污染的清除 使用次氯酸钠（使用次氯酸钠（NaOClNaOCl）溶液溶液 含有含有1 1有效氯的溶液适于普通的环境卫生设备有效氯的溶液适于普通的环境卫生设备当处理高危环境时当处理高危环境时:建议使用高浓度（建议使用高浓度（5 g/L5 g/L）溶液。用于清除环境污时；溶液。用于清除环境污时；含有含有3 3过氧化氢的溶液也可以作为漂白剂的代用品。过氧化氢的溶液也可以作为漂白剂的代用品。2房间

35、和仪器污染的清除通过加热多聚甲醛或煮沸福尔马林所产生的甲醛通过加热多聚甲醛或煮沸福尔马林所产生的甲醛蒸气熏蒸清除房间和仪器的污染。蒸气熏蒸清除房间和仪器的污染。这是一项需要由专门培训的专业人员来进行的、这是一项需要由专门培训的专业人员来进行的、非常危险的操作。非常危险的操作。产生甲醛蒸气前，房间的所有开口（如门窗等）产生甲醛蒸气前，房间的所有开口（如门窗等）都应用密封带或类似物加以密封。熏蒸应当在室都应用密封带或类似物加以密封。熏蒸应当在室温不低于温不低于2121且相对湿度且相对湿度70%70%的条件下进行的条件下进行清除污染时气体需要与物体表面至少接触清除污染时气体需要与物体表面至少接触8

36、h8 h。熏蒸后，该区域必须彻底通风后才能允许人员进熏蒸后，该区域必须彻底通风后才能允许人员进入。在通风之前需要进入房间时，必须戴适当的入。在通风之前需要进入房间时，必须戴适当的防毒面具。可以采用气态的碳酸氢铵来中和甲醛。防毒面具。可以采用气态的碳酸氢铵来中和甲醛。采用过氧化氢溶液对小空间进行气雾熏蒸同样有采用过氧化氢溶液对小空间进行气雾熏蒸同样有效，但需要专门的蒸气发生设备。效，但需要专门的蒸气发生设备。生物安全柜污染的清除 在实验结束时，包括仪器在内的生物安全柜里的所有物品应清除表面污染后，才能移出安全柜；在每次使用前后清除生物安全柜内表面的污染，工作台面和内壁要用消毒剂进行擦拭（杀灭任何

37、微工作台面和内壁要用消毒剂进行擦拭（杀灭任何微生物），生物），但不包括送风滤器的扩散板但不包括送风滤器的扩散板；在每天实验结束时，应擦拭生物安全柜的工作台面、四周以及玻璃的内外侧等部位来清除表面的污染。在对目标生物体有效时，可以采用漂白剂溶液或70%酒精来消毒。在使用如漂白剂等腐蚀性消毒剂后，还必须用无菌水再次进行擦拭。研究试剂溢漏或泼洒后，立即清除污染物及污染的表面在更换HEPA过滤器或内部维修之前，必须对已用于感染性材料工作的生物安全柜进行消毒在生物安全柜维护、更换过滤器、以及性能测试或重新安置之前，必需消毒最普通的气体消毒方法：甲醛熏蒸推荐将安全柜一直维持运行状态。如果要关闭的话，则应在

38、关机前运行5min以净化内部的气体。生物安全柜污染的清除生物安全柜甲醛熏蒸消毒的基本程序生物安全柜甲醛熏蒸消毒的基本程序清除生物安全柜之前需确定 型号、大小、循环参数等消毒剂的降解、吸收、与安全柜材料的兼容性以维持生物安全柜的完整性和确定消毒时间要使用能让甲醛气体独立发生、循环和中和的设备可使用甲醛蒸汽发生器来进行安全柜的熏蒸，使用参照厂家说明书使用参照厂家说明书1）计算生物安全柜的总体积；2）总体积x 11g/m3 确定多聚甲醛的用量；（中和甲醛：计算以氨气的形式来中和甲醛气体所需的NH4HCO3或其他替代品的理论当量，按110%称取以确保完全中和甲醛）3）确保生物安全柜排风管道的气密性（关

39、闭风阀）；）确保生物安全柜排风管道的气密性（关闭风阀）；4）为能够紧急排出甲醛，以及在生物安全柜旁预先放置一根）为能够紧急排出甲醛，以及在生物安全柜旁预先放置一根软管，其必须与排风装置相连软管，其必须与排风装置相连5）加热设备放置于工作台面，多聚甲醛均匀分布在加热设备）加热设备放置于工作台面，多聚甲醛均匀分布在加热设备的加热表面上的加热表面上6）在生物安全柜内的另一加热装置盛放中和试剂（）在生物安全柜内的另一加热装置盛放中和试剂（NH4HCO3或相当的产品），密闭，与安全柜中的空气隔绝，以免熏蒸时或相当的产品），密闭，与安全柜中的空气隔绝，以免熏蒸时发生中和作用。发生中和作用。7）封闭生物安全

40、柜的工作区开口，如电线出口、观察窗连接）封闭生物安全柜的工作区开口，如电线出口、观察窗连接处等等处等等8）接通加热装置的电源（生物安全柜外）接通加热装置的电源（生物安全柜外）9 9）在多聚甲醛完全蒸发时拔掉插头以断电，使生物安全柜静）在多聚甲醛完全蒸发时拔掉插头以断电，使生物安全柜静置至少置至少6 h6 h。10）给放有第二个加热装置通电，使碳酸氢铵蒸发。然后拔掉电插头，接通生物安全柜电源两次，每次启动约2秒钟让碳酸氢铵气体循环。在移去前封闭板（或塑料布）和排气口罩单前，应使生物安全柜静置30min。11）使用前应擦掉生物安全柜表面上的残渣。实验室中要张贴如何处理溢出物的实验室操作规则，每一位

41、实验室的成员均需阅读并理解这些规程在生物安全柜中发生有生物学危害的物品溢出时，应在安全在生物安全柜中发生有生物学危害的物品溢出时，应在安全柜处于工作状态下立即进行清理。柜处于工作状态下立即进行清理。要使用有效的消毒剂使用有效的消毒剂，并在处理过程中尽可能减少气溶胶的生成。所有接触溢出物品的材料都要进行消毒和或高压蒸汽灭菌。生物安全柜污染的清除生物安全柜污染的清除生物安全柜在移动以及更换过滤器之前，必须清除污染。最常用的方法是采用甲醛蒸气熏蒸。应该由有资质的专业人员来清除生物安全柜的污染。仪器设备在使用时，有些操作可能造成微生物学危害，此外，还必须预测并预防与仪器设备相关的其他安全危害。废物的处

42、理实验室和医疗废物的处理要遵守国家标准实验室和医疗废物的处理要遵守国家标准 医疗废物的定义：医疗废物的定义：医疗卫生机构在医疗、预防、保健以及医疗卫生机构在医疗、预防、保健以及其他相关活动中产生的具有直接或者间接感染性的废物。其他相关活动中产生的具有直接或者间接感染性的废物。-及时收集单位产生的医疗废物及时收集单位产生的医疗废物-按照类别分置于防渗漏、防锐器穿透的专用包装物或密按照类别分置于防渗漏、防锐器穿透的专用包装物或密闭容器闭容器-医疗废物专用包装物、容器，应当有明显的警示标示和医疗废物专用包装物、容器，应当有明显的警示标示和警示说明警示说明在设计和执行关于生物危害性废弃物处理、运输和废弃的在设计和执行关于生物危害性废弃物处理、运输和废弃的规划之前，必须参考最新版的相关文件。规划之前，必须参考最新版的相关文件。高压蒸汽灭菌过的废物可以在其他地方焚烧后处理，或在高压蒸汽灭菌过的废物可以在其他地方焚烧后处理，或在指定垃圾场掩埋处理指定垃圾场掩埋处理 谢 谢