三氮指标测定与水中亚硝酸盐氮的测定31270.pptx

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1、卫生理化检验卫生理化检验1三氮指标测定三氮指标测定重庆医科大学公共卫生学院重庆医科大学公共卫生学院代兴碧代兴碧2011-05-16卫生理化检验卫生理化检验2三氮指标测定三氮指标测定主要内容主要内容一、概一、概 述述(一一)三氮指标的概念三氮指标的概念(二二)卫生学意义卫生学意义(三）三氮指标的一般情况三）三氮指标的一般情况（四）三氮物质对人体健康的影响及卫生标准（四）三氮物质对人体健康的影响及卫生标准（五）样品的采集和保存（五）样品的采集和保存（六）测定方法（六）测定方法二、水中亚硝酸盐氮的测定二、水中亚硝酸盐氮的测定卫生理化检验卫生理化检验3重点内容：重点内容：水中亚硝酸盐氮的测定水中亚硝酸

2、盐氮的测定卫生理化检验卫生理化检验4三氮指标测定三氮指标测定一、概一、概述述(一一)三氮指标的概念三氮指标的概念1.氨氮氨氮(NH3N，ammonianitrogen)氨氮（氨氮（NH3-N）即以氨（）即以氨（NH3）形式存在）形式存在的氮（的氮（N）。测定的是氨（）。测定的是氨（NH3），但），但测定结果以氮的量表示出来测定结果以氮的量表示出来(N,mg/L)。卫生理化检验卫生理化检验5三氮指标测定三氮指标测定2.亚硝酸盐氮亚硝酸盐氮(NO2N，nitritenitrogen)亚硝酸盐氮（亚硝酸盐氮（NONO2 2-N-N）即以亚硝酸盐（）即以亚硝酸盐（NONO2 2）形式存在的氮（）形式存

3、在的氮（N N）。测定的是亚硝）。测定的是亚硝酸盐（酸盐（NONO2 2），但测定结果以氮的量表），但测定结果以氮的量表示出来示出来(N,mg/L)(N,mg/L)。3.硝酸盐氮硝酸盐氮(NO3N，nitratenitrogen)硝酸盐氮（硝酸盐氮（NONO3 3-N-N）即以硝酸盐（）即以硝酸盐（N NO O3 3）形式存在的氮（形式存在的氮（N N）。测定的是硝酸盐）。测定的是硝酸盐（NONO3 3），但测定结果以氮的量表示出），但测定结果以氮的量表示出来来(N,mg/L)(N,mg/L)。卫生理化检验卫生理化检验6三氮指标测定三氮指标测定（二）卫生学意义（二）卫生学意义 有有机机物物中中

4、含含氮氮有有机机物物最最不不稳稳定定，最最初初进进入入水水中中时时，多多是是复复杂杂的的有有机机氮氮形形式式，例例如如，各各种种蛋蛋白白质质等等。受受微微生生物物作作用用后后，逐逐渐渐分分解解成成多多肽肽、氨氨基基酸酸、氨氨（NHNH4 4+）、亚亚硝酸盐（硝酸盐（NONO2 2）、硝酸盐（）、硝酸盐（NONO3 3 ）。）。蛋白质蛋白质多肽多肽氨基酸氨基酸氨氨亚硝酸盐亚硝酸盐硝酸盐硝酸盐尿素尿素氨氨亚硝酸盐亚硝酸盐硝酸盐硝酸盐 这这样样一一个个过过程程是是有有机机物物无无机机化化的的过过程程，也也是是河河流流自自净净的的过过程程。在在这这个个过过程程中中，如如果果由由于于人人畜畜粪粪便便污污

5、染染而而存存在在致致病病微微生生物物，也也能能逐逐渐渐消消除除。所所以以，测测定定各各类类含含氮氮化化合合物物可可以以了了解解水水源源被被含含氮氮有有机机物物污污染染的的情情况况，并并协协作了解水源自净的情况和致病微生物是否消除的情况。作了解水源自净的情况和致病微生物是否消除的情况。卫生理化检验卫生理化检验7三氮指标测定三氮指标测定用三氮指标进行水质卫生学评价可参考用三氮指标进行水质卫生学评价可参考下表下表：卫生理化检验卫生理化检验8三氮指标测定三氮指标测定表表三种含氮化合物在水中出现的意义三种含氮化合物在水中出现的意义NH3-N NO2-NNO3-N 意意义义+0.050.5-0.01少少

6、-1.0少少表示水新近被污染表示水新近被污染+0.050.5+0.010.3-1.0少少表示新近被污染，分解正在进行表示新近被污染，分解正在进行+0.050.5+0.010.3+1.0多多以前被污染，已开始分解并仍有新污染以前被污染，已开始分解并仍有新污染-0.05少少+0.010.3-1.0少少水中污染物已分解，趋向自净水中污染物已分解，趋向自净+0.050.5-0.01少少+1.0多多污染物分解已完成，现又有污染污染物分解已完成，现又有污染-0.05少少+0.010.3+1.0多多污染物已分解，但未完全自净污染物已分解，但未完全自净,或是硝酸盐还原成还原成亚硝酸盐或是硝酸盐还原成还原成亚硝

7、酸盐-0.05少少-0.01少少+1.0多多水中污染物都已分解达到了净化水中污染物都已分解达到了净化-0.05少少-0.01少少-1.0少少清洁水清洁水注：注：“+”表示出现。表示出现。“-”表示没有出现。表示没有出现。（二）卫生学意义（二）卫生学意义卫生理化检验卫生理化检验9三氮指标测定三氮指标测定(三）三氮指标的一般情况三）三氮指标的一般情况1.氨氮氨氮(NH3N，ammonianitrogen)氨氨氮氮(NH3N，ammonianitrogen)以以游游离离氨氨(NH3，也也称称非非离离子子氨氨)或或铵铵盐盐(NH4+)的的形形式式普普遍遍存存在在于于地地下下水水及及地地面面水水中中，其

8、其存存在在形形式式取取决决于于水水体体的的酸酸碱碱度度。未未受受污污染染的的地地下下水水中中氨氨氮氮含含量量一一般般低低于于0.2mgL，地地表表水水中中氨氨氮氮含含量量比比地地下下水水高高。用用氯氯胺胺消消毒毒的的饮饮水水可可产产生生微微量量氨氨氮氮。由由于于生生活活污污水水中中含含氮氮有有机机物物受受微微生生物物作作用用可可产产生生大大量量氨氨氮氮，人人畜畜粪粪便便和和某某些些工工业业废废水水中中尿尿素素和和氨氨的的含含量量很很高高，所所以以水水体体受受生生活活污污水水、人人畜畜粪粪便便、以以及及某某些些工工业业废废水水污污染染后后，氨氨氮氮浓浓度度将将明明显显增增加加。除除此此之之外外水

9、水中中的的亚亚硝硝酸酸盐盐在在氧氧气气不不足足的的条条件件下下亦亦可可受受微微生生物作用还原成氨，水中尿素也可转变成氨氮。物作用还原成氨，水中尿素也可转变成氨氮。卫生理化检验卫生理化检验10三氮指标测定三氮指标测定2.亚硝酸盐氮亚硝酸盐氮(NO2N，nitritenitrogen)亚亚硝硝酸酸盐盐氮氮是是含含氮氮有有机机物物受受细细菌菌作作用用分分解解的的中中间间产产物物，在在水水中中不不稳稳定定，在在氧氧和和微微生生物物的的作作用用下下易易被被氧氧化化成成硝硝酸酸盐盐，在在缺缺氧氧条条件件下下也也可可被被还还原原为为氨氨。水水中中N02N的的来来源源主主要要为为生生活活污污水水中中含含氮氮有

10、有机机物物的的分分解解和和化化肥肥、酸酸洗洗等等工工业业废废水水，此此外外农农田田排排水水也也可可引引入入较较高高浓浓度度的的NO2。未未受受污污染染地地面面水水中中亚亚硝硝酸酸盐盐氮氮一一般般低低于于0.1mgL，某某些些地地下下水水可可能能会会由由于于地地层层结结构构的的还还原原作作用用出出现现较较高高浓浓度度的的亚硝酸盐亚硝酸盐。卫生理化检验卫生理化检验11三氮指标测定三氮指标测定3.硝酸盐氮硝酸盐氮(NO3N，nitratenitrogen)硝硝酸酸盐盐氮氮是是含含氮氮有有机机化化合合物物的的在在水水体体中中的的最最终终氧氧化化产产物物。环环境境水水体体中中硝硝酸酸盐盐的的污污染染来来

11、源源除除硝硝酸酸盐盐类类化化肥肥使使用用和和生生活活污污水水、生生活活垃垃圾圾、生生产产含含氮氮废废弃弃物物与与人人畜畜粪粪便便等等的的自自然然降降解解过过程程外外，空空气气中中氧氧化化氮氮污污染染物物经经降降水水淋淋溶溶后后形形成成的的硝硝酸酸盐盐也也是是重重要要的的污污染染来来源源。地地表表水水中中硝硝酸酸盐盐氮氮含含量量一一般般较较低低，但但某某些些地地下下水水中中含含量量很很高。高。卫生理化检验卫生理化检验12三氮指标测定三氮指标测定（四）三氮物质对人体健康的影响及卫生标准（四）三氮物质对人体健康的影响及卫生标准1.氨氮氨氮对对鱼鱼类类等等水水生生生生物物有有毒毒害害作作用用。我我国国

12、渔渔业业水水质质标标准准、地地表表水水环环境境质质量量标标准准规规定定I类类水水中中游游离离氨氨的的浓浓度度不不得得超超过过0.02mgL,类类水水不不得得超超过过0.2mg/L。对对人人体体健健康康的的影影响响较较小小，我我国国生生活活饮饮用用水水卫卫生生规规范范(2001)未未规规定定限限量量指指标标，世世界界卫卫生生组组织织和和一一些些发发达达国国家家规规定定饮饮用用水中氨氮含量不得超过水中氨氮含量不得超过0.5mgL。卫生理化检验卫生理化检验13三氮指标测定三氮指标测定2.亚硝酸盐亚硝酸盐可可将将低低铁铁血血红红蛋蛋白白氧氧化化成成高高铁铁血血红红蛋蛋白白，使使之之失失去输送氧的能力。

13、去输送氧的能力。在在酸酸性性介介质质中中亚亚硝硝酸酸盐盐可可与与二二级级胺胺类类形形成成致致癌癌物物亚硝胺。亚硝胺。反应式如下：反应式如下：（仲胺）（仲胺）（亚硝酸）（亚硝酸）亚硝胺亚硝胺卫生理化检验卫生理化检验14三氮指标测定三氮指标测定一一般般饮饮水水中中亚亚硝硝酸酸盐盐氮氮含含量量很很低低，不不会会对对人人体体健健康康产产生生影影响响。某某些些地地下下水水可可能能会会由由于于地地层层结结构构的的还还 原原 作作 用用 出出 现现 较较 高高 浓浓 度度 的的 亚亚 硝硝 酸酸 盐盐。我我国国生生活活饮饮用用水水卫卫生生规规范范(2001)未未对对NO2N作作出出限限量量要要求求。我我国国

14、地地面面水水环环境境质质量量标标准准规规定定I类类水水中中亚亚硝硝酸酸盐盐氮氮含含量量0.06mgL，类类水水0.1mgL；类水类水0.15mgL；V类水类水1.0mgL。卫生理化检验卫生理化检验15三氮指标测定三氮指标测定3.3.硝酸盐氮硝酸盐氮对对人人健健康康的的影影响响与与亚亚硝硝酸酸盐盐一一样样，因因为为进进入入体体内内的的硝硝酸酸盐盐也也可可被被还还原原为为亚亚硝硝酸酸盐盐。亚亚硝硝酸酸盐盐与与人人体体血血液液作作用用，形形成成高高铁铁血血红红蛋蛋白白，从从而而使使血血液液失失去去携携氧氧功功能能，另另外外可可与与二二级级胺胺类类形形成成致致癌癌物物亚亚硝硝胺胺。一一般般饮饮水水中中

15、硝硝酸酸盐盐氮氮均均可可检检出出，我我国国生生活活饮饮用用水水卫卫生生规规范范(2001)(2001)规规定定其其含含量量不得超过不得超过20mg20mgL L。卫生理化检验卫生理化检验16三氮指标测定三氮指标测定（五）样品的采集和保存（五）样品的采集和保存1.1.用用于于氨氨氮氮检检测测的的水水样样需需用用聚聚乙乙烯烯瓶瓶或或玻玻璃瓶采集。璃瓶采集。水水中中氨氨氮氮的的稳稳定定性性差差，一一般般要要求求采采样样后后立立即即测测定定。如如不不能能立立即即测测定定，须须在在每每升升水水样样加加入入0.8ml浓浓硫硫酸酸(调调pH2)，于于4冰冰箱箱保保存存，酸酸化化样样品品应应注注意意防防止止空

16、空气气中中氨氨的污染。的污染。卫生理化检验卫生理化检验17三氮指标测定三氮指标测定2.2.亚硝酸盐氮的亚硝酸盐氮的水样采集水样采集可可用用玻玻璃璃瓶瓶或或聚聚乙乙烯烯塑塑料料瓶瓶，采采样样后后应应尽尽快快测测定定，以以避避免免细细菌菌将将亚亚硝硝酸酸盐盐还还原原成成氨氨。若若不不能能立立即即测测定定，可可于于每每升升水水样样中中加加入入40mg40mg氯氯化化汞汞抑抑菌菌，并并置置44冰冰箱箱闭光保存，可稳定闭光保存，可稳定12d。卫生理化检验卫生理化检验18三氮指标测定三氮指标测定3.用于硝酸盐氮测定的水样用于硝酸盐氮测定的水样需需用用玻玻璃璃瓶瓶或或聚聚乙乙烯烯瓶瓶采采集集，采采样样后后应

17、应尽尽快快测测定定。如如不不能能及及时时测测定定，为为了了抑抑止止微微生生物物活活动动对对氮氮平平衡衡的的影影响响，需需于于每每升升水水样样中中加加入入0.8m1浓浓硫硫酸酸，并并于于04保存，保存，24h内完成测定。内完成测定。卫生理化检验卫生理化检验19三氮指标测定三氮指标测定（六）测定方法（六）测定方法1.水水中中氨氨氮氮测测定定方方法法较较多多。纳纳氏氏试试剂剂光光度度法法是是最最经经典典的的测测定定方方法法，该该法法操操作作简简便便、灵灵敏敏度度较较高高，适适应应范范围围广广，但但该该法法需需使使用用有有毒毒试试剂剂四四碘碘汞汞钾钾和和强强碱碱，对对操操作作人人员员和和环环境境影影响

18、响大大，现现在在使使用用得得较较多多的的是是酚酚盐盐光光度度法法和和水水杨杨酸酸光光度度法法。酚酚盐盐法法也也是是氨氨氮氮测测定定的的经经典典方方法法，国国际际标标准准化化组组织织(InternationaIStandardOrganization，ISO)和和我我国国已已分分别别将将水水杨杨酸酸光光度度法法列列为为推推荐荐方方法法和和标准方法。标准方法。此此外外，水水中中氨氨氮氮测测定定方方法法还还有有氨氨电电极极法法、离离子子色色谱谱法法、蒸馏一滴定法和氨氮在线自动检测法等蒸馏一滴定法和氨氮在线自动检测法等。卫生理化检验卫生理化检验20三氮指标测定三氮指标测定2.水中亚硝酸盐氮的测定方法水

19、中亚硝酸盐氮的测定方法主主要要有有光光度度法法、离离子子色色谱谱法法和和示示波波极极谱谱法法等等。而而应应用用最最广广泛泛的的是是重重氮氮化化偶偶合合光光度度法法，该该法法简简便便快快速速，灵灵敏敏度度高高，但但色色度度和和浊浊度度对对测测定定有有干干扰扰。该法是我国水质检验标准方法。该法是我国水质检验标准方法。离离子子色色谱谱法法简简便便快快速速，可可同同时时测测定定包包括括亚亚硝硝酸酸根根、硝硝酸酸根根、硫硫酸酸根根、氯氯离离子子和和氟氟离离子子等等多多种种阴阴离离子子，但但需需要要离离子子色色谱谱仪仪，分分析析成成本本较较高高。示示波波极极谱谱法法简简便便快快速速，灵灵敏敏度度高高，水水

20、样样色色度度和和浊度对测定基本无干扰。浊度对测定基本无干扰。卫生理化检验卫生理化检验21三氮指标测定三氮指标测定3.3.水水中中硝硝酸酸盐盐氮氮的的测测定定方方法法有有紫紫外外光光度度法法、离离子子选选择择性性电电极极法法、光光度度法法、离离子子色色谱谱法法和和示示波波极极谱谱法法等等。我我国国卫卫生生部部生生活活饮饮用用水水卫卫生生规规范范(2001)(2001)规规定定的的标标准准检检验验方方法法是是麝麝香香草草酚酚光光度度法法、镉镉柱柱还还原原法法、紫紫外外光光度度法法和和离离子子色色谱谱法。法。卫生理化检验卫生理化检验22二、亚硝酸盐氮的测定二、亚硝酸盐氮的测定见见P951.原理原理2

21、.消除干扰消除干扰3.试剂的配制试剂的配制4.测定亚硝酸盐氮测定亚硝酸盐氮5.测定亚硝酸盐氮的有关计算测定亚硝酸盐氮的有关计算卫生理化检验卫生理化检验23N-N-（1-1-萘基）萘基）乙烯二胺分光光度法乙烯二胺分光光度法 (又叫重氮化偶合分光光度法又叫重氮化偶合分光光度法 )分光光度法的方法名称一般用显色剂的名称命名分光光度法的方法名称一般用显色剂的名称命名1.原理原理在在pH值值1.7以下，水中亚硝酸盐与对氨基苯磺酰胺发生重以下，水中亚硝酸盐与对氨基苯磺酰胺发生重氮化反应，再与盐酸氮化反应，再与盐酸N-（1-萘基）萘基）乙烯二胺乙烯二胺（又叫盐又叫盐酸萘乙二胺）酸萘乙二胺）产生偶合反应，生成

22、紫红色的偶氮染料，产生偶合反应，生成紫红色的偶氮染料，比色定量。比色定量。卫生理化检验卫生理化检验24N-N-（1-1-萘基）萘基）乙烯二胺分光光度法乙烯二胺分光光度法 2.消除干扰消除干扰有些金属离子如铁、铅、汞、银等含量较高时，有些金属离子如铁、铅、汞、银等含量较高时，在测定中会产生沉淀，二价铜离子能催化分解重在测定中会产生沉淀，二价铜离子能催化分解重氮盐而产生干扰，必要时可加入适量氮盐而产生干扰，必要时可加入适量EDTAEDTA，使其，使其与上述金属离子形成配合物来消除干扰；若水样与上述金属离子形成配合物来消除干扰；若水样浑浊或色度较大，可加入氢氧化铝悬浮液，利用浑浊或色度较大，可加入氢

23、氧化铝悬浮液，利用混凝沉淀的原理消除干扰。混凝沉淀的原理消除干扰。卫生理化检验卫生理化检验25N-N-（1-1-萘基）萘基）乙烯二胺分光光度法乙烯二胺分光光度法 3.试剂试剂（1）实验用水均为无亚硝酸盐水。无亚硝酸盐水）实验用水均为无亚硝酸盐水。无亚硝酸盐水于纯于纯水中加入少许高锰酸钾晶体，使呈红色，再加氢氧化钠，水中加入少许高锰酸钾晶体，使呈红色，再加氢氧化钠，使呈碱性，置于全玻璃蒸馏器中重蒸馏，弃去使呈碱性，置于全玻璃蒸馏器中重蒸馏，弃去50ml初初馏液，收集中间馏液，收集中间70%部分。部分。（2）0.05mol/L(1/5KMnO4)高锰酸钾溶液高锰酸钾溶液称取高锰酸称取高锰酸钾钾1.

24、6g，溶于，溶于1.2L无亚硝酸盐水中，煮沸无亚硝酸盐水中，煮沸30min，使体，使体积减少至积减少至1L左右，放置过夜，用左右，放置过夜，用G3型玻砂漏斗过滤，型玻砂漏斗过滤，滤液贮于棕色瓶中保存。滤液贮于棕色瓶中保存。（3）0.0500mol/L（1/2Na2C2O4）草酸钠标准溶液）草酸钠标准溶液称称取经取经105干燥干燥2h的草酸钠的草酸钠3.3500g，溶于无亚硝酸盐，溶于无亚硝酸盐水中，并定容于水中，并定容于1L容量瓶中。容量瓶中。卫生理化检验卫生理化检验26N-N-（1-1-萘基）萘基）乙烯二胺分光光度法乙烯二胺分光光度法（4）亚硝酸盐氮标准储备液亚硝酸盐氮标准储备液准确称取亚硝

25、准确称取亚硝酸钠酸钠(NaNO2)1.2321g，溶于无亚硝酸盐水中，溶于无亚硝酸盐水中，并稀释至并稀释至1L，加入氯仿，加入氯仿1ml，其亚硝酸盐氮，其亚硝酸盐氮的浓度为（的浓度为（NO2-N，），）0.25mg/ml。（5）亚硝酸盐氮标准应用溶液）亚硝酸盐氮标准应用溶液临用前，将上临用前，将上述贮备溶液用无亚硝酸盐水稀释成述贮备溶液用无亚硝酸盐水稀释成1ml含含0.1gNO2-N的标准溶液（先稀释成的标准溶液（先稀释成1ml含含50.0gNO2-N的中间溶液）。的中间溶液）。（6）对氨基苯磺酰胺溶液）对氨基苯磺酰胺溶液称取对氨基苯磺酰称取对氨基苯磺酰胺胺5g，溶于，溶于350ml1+6盐酸

26、溶液中，用无亚盐酸溶液中，用无亚硝酸盐水稀释至硝酸盐水稀释至500ml，此溶液可稳定数月。，此溶液可稳定数月。卫生理化检验卫生理化检验27N-N-（1-1-萘基）萘基）乙烯二胺分光光度法乙烯二胺分光光度法（7）盐酸）盐酸N-（1-萘基）萘基）乙烯二胺溶液乙烯二胺溶液称取称取0.5g盐酸盐酸N-（1-萘基）萘基）乙烯二胺，溶于乙烯二胺，溶于500ml无亚硝酸盐水无亚硝酸盐水中，贮于棕色瓶内，于冰箱内保存，可稳定数周。中，贮于棕色瓶内，于冰箱内保存，可稳定数周。如变为深棕色，则应重配，本试剂有毒，避免与皮如变为深棕色，则应重配，本试剂有毒，避免与皮肤接触或吸入体内。肤接触或吸入体内。（8）氢氧化铝

27、悬浮液）氢氧化铝悬浮液称取化学纯硫酸铝钾称取化学纯硫酸铝钾KAl(SO4)212H2O125g,或硫酸铝铵或硫酸铝铵NH4Al(SO4)212H2O125g,溶于溶于1L无亚硝酸盐水中。加热至无亚硝酸盐水中。加热至60，缓缓加，缓缓加入浓氨水入浓氨水55ml，使成氢氧化铝沉淀。充分搅拌后静，使成氢氧化铝沉淀。充分搅拌后静置，弃去上清液，反复用无亚硝酸盐水洗涤沉淀至置，弃去上清液，反复用无亚硝酸盐水洗涤沉淀至倾出液无倾出液无Cl（用硝酸银检查）为止，最后加入无亚（用硝酸银检查）为止，最后加入无亚硝酸盐水硝酸盐水30ml,使成悬浮液。使用前振荡均匀。使成悬浮液。使用前振荡均匀。（9）磷酸）磷酸卫生

28、理化检验卫生理化检验28N-N-（1-1-萘基）萘基）乙烯二胺分光光度法乙烯二胺分光光度法4.测定亚硝酸盐氮测定亚硝酸盐氮（1）取水样（或经处理后的水样）取水样（或经处理后的水样）50.0ml，置于，置于50ml比色管中。比色管中。（2）另取）另取50ml比色管比色管5-7支，分别加入亚硝酸盐氮标支，分别加入亚硝酸盐氮标准应用溶液准应用溶液0ml、0.50ml、1.00ml、2.50ml、5.00ml、7.50ml和和12.50ml，加无亚硝酸盐水至，加无亚硝酸盐水至50ml标线。标线。（3）向水样及标准管中分别加入对氨基苯磺酰胺溶液）向水样及标准管中分别加入对氨基苯磺酰胺溶液1.0ml，摇匀

29、后，放置，摇匀后，放置2min8min。加入盐酸。加入盐酸N-（1-萘基）萘基）乙烯二胺溶液乙烯二胺溶液1.0ml，立即混匀，静置，立即混匀，静置10min。卫生理化检验卫生理化检验29N-N-（1-1-萘基）萘基）乙烯二胺分光光度法乙烯二胺分光光度法 （4）显色后，在）显色后，在2h内于波长内于波长540nm处，用处，用1cm比色皿，比色皿，以无亚硝酸盐水为参比，测量吸光度。若亚硝酸盐以无亚硝酸盐水为参比，测量吸光度。若亚硝酸盐氮浓度低于氮浓度低于4g/L时，用时，用3cm比色皿。比色皿。卫生理化检验卫生理化检验（5）若水样经处理，则以无亚硝酸盐水代替水样，）若水样经处理，则以无亚硝酸盐水代

30、替水样，作全程序空白测定。作全程序空白测定。（6）绘制亚硝酸盐氮含量（）绘制亚硝酸盐氮含量（g）对吸光度）对吸光度(A)的校准的校准曲线。曲线。将水样的吸光度减去空白的吸光度，再从校准曲线上将水样的吸光度减去空白的吸光度，再从校准曲线上查出亚硝酸盐氮含量查出亚硝酸盐氮含量(g)。卫生理化检验卫生理化检验31N-N-（1-1-萘基）萘基）乙烯二胺分光光度法乙烯二胺分光光度法 用表格概括如下表：见后用表格概括如下表：见后卫生理化检验卫生理化检验32标准系列空白标准系列空白钟钟10分分静置静置混匀，混匀，8min2min静置静置混匀混匀1.001.001.001.001.001.001.001.00

31、1.00盐酸萘乙二胺盐酸萘乙二胺(ml)1.001.001.001.001.001.001.001.001.00对氨基苯磺酰对氨基苯磺酰胺溶液胺溶液(ml)？1.000.750.500.250.100.050N氮量氮量(g)50ml容容至至水水定定氮氮酸盐酸盐亚硝亚硝用无用无(ml)空空白白液液50ml样品液样品液50ml10.007.505.002.501.000.500标准应用液标准应用液1ml=0.1g空白液空白液样品液样品液6543210编号编号卫生理化检验卫生理化检验33比色定量比色定量 在在波波长长540nm540nm处处，用用1cm1cm比比色色皿皿，以以溶溶剂剂调零，测量吸光度

32、，记录吸光度值。调零，测量吸光度，记录吸光度值。卫生理化检验卫生理化检验34注意：注意：1.样样品品的的测测定定和和标标准准系系列列的的测测定定应应同同时时进行，以尽量保证实验条件的一致性。进行，以尽量保证实验条件的一致性。2.盐盐酸酸萘萘乙乙二二胺胺有有毒毒，勿勿将将比比色色液液弄弄在在手上。手上。卫生理化检验卫生理化检验35方法方法灵敏度和检测上限灵敏度和检测上限：本法最低检出量为本法最低检出量为0.05gNO2-N，若，若取取50ml水样测定，则最低检出浓度为水样测定，则最低检出浓度为0.001mg/L，测定上限为，测定上限为0.20mg/L。卫生理化检验卫生理化检验365.5.测定亚硝

33、酸盐氮的有关计算测定亚硝酸盐氮的有关计算（1）配制标准溶液的计算）配制标准溶液的计算（2）水样中被测物质含量的计算）水样中被测物质含量的计算 1 1）绘制标准曲线的方法绘制标准曲线的方法 2 2）用最小二乘法公式求回归方程的方法用最小二乘法公式求回归方程的方法 用公式计算的方法用公式计算的方法 用计算器计算的方法用计算器计算的方法（3）是水样亚硝酸盐氮）是水样亚硝酸盐氮(N,mg/L)的计算的计算卫生理化检验卫生理化检验375.5.测定亚硝酸盐氮的有关计算测定亚硝酸盐氮的有关计算（1）配制标准溶液的计算）配制标准溶液的计算已知重量和已知重量和配制的配制的体积体积，求浓度是多少？求浓度是多少？这

34、里有一个考点，这里有一个考点，即对亚硝酸盐氮的概念的理解。亚硝即对亚硝酸盐氮的概念的理解。亚硝酸钠酸钠(NaNO2)的分子量为的分子量为69，其中，其中N的量为的量为14。不是。不是NO2的量，也不是的量，也不是NaNO2的量。的量。例如：亚硝酸盐氮标准贮备溶液的配制。例如：亚硝酸盐氮标准贮备溶液的配制。称取亚硝酸钠称取亚硝酸钠(NaNO2)1.2321g，溶于无亚硝酸盐水中，并，溶于无亚硝酸盐水中，并稀释至稀释至1L，加入氯仿，加入氯仿1ml，其亚硝酸盐氮的浓度，其亚硝酸盐氮的浓度（N，mg/ml）为多少？）为多少？卫生理化检验卫生理化检验38亚硝酸钠中的亚硝酸钠中的“N”的量的量设设1.2

35、321g亚硝酸钠中的亚硝酸钠中的N的量为的量为X，则则求亚硝酸盐氮的浓度（求亚硝酸盐氮的浓度（mg/ml）为多少？）为多少？0.25g1000ml=0.25mg/ml卫生理化检验卫生理化检验395.5.测定亚硝酸盐氮的有关计算测定亚硝酸盐氮的有关计算已知浓度和体积，求亚硝酸钠的准确称量的计算已知浓度和体积，求亚硝酸钠的准确称量的计算这这里有两个考点：里有两个考点：亚硝酸盐氮的概念。亚硝酸盐氮的概念。准确称量的概念。准确称量的概念。例如：欲配例如：欲配0.50mg/ml的亚硝酸盐氮的标准溶液的亚硝酸盐氮的标准溶液500ml，应准确称取多少克亚硝酸钠，应准确称取多少克亚硝酸钠(NaNO2)？计算方

36、法如下：计算方法如下：0.5500=250mg=0.25g（NO2-N）。）。卫生理化检验卫生理化检验40学而时习之学而时习之1、欲配、欲配1.0mg/ml的亚硝酸盐氮的标准溶液的亚硝酸盐氮的标准溶液500.00ml，应准确称取多少克亚硝酸钠，应准确称取多少克亚硝酸钠(NaNO2)？Na=23，N=14，O=16即应准确称取即应准确称取0.2464克亚硝酸钠。计算数据一定要克亚硝酸钠。计算数据一定要书写至小数点后第四位。书写至小数点后第四位。卫生理化检验卫生理化检验41学而时习之学而时习之2、称取亚硝酸钠称取亚硝酸钠(NaNO2)1.5821，溶于无亚硝酸，溶于无亚硝酸盐水中，并稀释至盐水中，

37、并稀释至1L，加入氯仿，加入氯仿1ml，此溶液，此溶液1ml含含亚硝酸盐氮为多少亚硝酸盐氮为多少mg？计算方法如下：计算方法如下：设设1.5821g亚硝酸钠中的亚硝酸钠中的N的量为的量为X，则，则0.32g1000ml=0.32mg/ml卫生理化检验卫生理化检验42（2）水样中被测物质含量的计算）水样中被测物质含量的计算1）标准曲线）标准曲线法法用查图图算的方法计算水样中被测物质含量用查图图算的方法计算水样中被测物质含量及其注意事项及其注意事项卫生理化检验卫生理化检验43亚硝酸盐氮含量（亚硝酸盐氮含量（g）吸吸光光度度(A)正确的绘制方法正确的绘制方法卫生理化检验卫生理化检验44亚硝酸盐氮含量

38、（亚硝酸盐氮含量（g）吸吸光光度度(A)卫生理化检验卫生理化检验45亚硝酸盐氮含量（亚硝酸盐氮含量（g）吸吸光光度度(A)卫生理化检验卫生理化检验462 2）最小二乘法最小二乘法计算计算回归方程的方法回归方程的方法 用公式计算的方法用公式计算的方法 即即 用用 最最 小小 二二 乘乘 法法 公公 式式 计计 算算 出出 直直 线线 回回 归归 方方 程程 （=a+bx=a+bx）中中的的a a值值（直直线线在在Y Y轴轴的的截截距距）和和b b值值（直直线的斜率或称回归系数）。线的斜率或称回归系数）。a a值值、b b值值计计算算出出来来了了，这这条条直直线线也也就就确确定定了了。但但要要注注

39、意意公公式式=a+bx=a+bx中中 的的概概念念，为为响响应应值值的的估估计计值值，表表示示从回归方程式计算出来的值，以区别于实测值从回归方程式计算出来的值，以区别于实测值Y Y。卫生理化检验卫生理化检验47例例如如：用用新新铜铜试试剂剂法法测测定定水水中中铜铜的的含含量量，配配一一标标准准系系列列测测得得吸吸光光度如下：试用计算法拟合标准曲线。度如下：试用计算法拟合标准曲线。表表1 1：新铜试剂法测定水中铜含量和吸光度原始数据：新铜试剂法测定水中铜含量和吸光度原始数据 0.4370.4370.2920.2920.2340.2340.1620.1620.0860.0860.0420.0420

40、 0吸光度吸光度（A A）0.600.600.400.400.300.300.200.200.100.100.040.040.000.00铜含量铜含量x x（gg）7654321编号编号卫生理化检验卫生理化检验48 表表2 2：新铜试剂法测定水中铜的含量相关系数及回归方程计算表：新铜试剂法测定水中铜的含量相关系数及回归方程计算表0.491880.26220.360.190970.4370.670.66160.3676561.2531.640.11680.160.0865260.2920.4600.001680.00860.03240.070200.00160.010.040.0900.0017

41、60.00740.026240.054760.000.0420.0860.1620.2340.000.040.100.200.3012345xyxyx x2 2y y2 2y yx x编号编号解解:列表计算列表计算xx、yy、xx2 2、yy2 2、xyxy卫生理化检验卫生理化检验49 计算计算a a值、值、b b值值卫生理化检验卫生理化检验50即：新铜试剂法测定水中铜的含量，铜含量的即：新铜试剂法测定水中铜的含量，铜含量的标准系列及对应吸光度的直线回归方程为：标准系列及对应吸光度的直线回归方程为：=0.011+0.715 X=0.011+0.715 X卫生理化检验卫生理化检验51计算标准曲线

42、的相关系数计算标准曲线的相关系数计算相关系数计算相关系数(r)公式为：公式为：将将表表2 2中中的的x=1.64x=1.64，y=1.253y=1.253，yy2 2=0.367656=0.367656，x x2 2=0.6616=0.6616，xy=0.49188 xy=0.49188等数据带入公式中即可算出等数据带入公式中即可算出r值。值。卫生理化检验卫生理化检验52用回归方程计算检验结果用回归方程计算检验结果测定样品吸光度（测定样品吸光度（）后，可将）后，可将值看作值看作 代入代入公式中公式中计算出含量计算出含量值值X X，=0.011+0.715X=0.011+0.715X这叫公式计算

43、法。这叫公式计算法。也可在测定范围内任意设也可在测定范围内任意设2 2点，点，如如当当X=0.100 X=0.100 则则 =0.083=0.083当当X=0.600 X=0.600 则则 =0.044=0.044选选择择直直角角坐坐标标纸纸，以以含含量量x x为为横横坐坐标标，以以响响应应值值 为为纵纵坐坐标标，将将这这两两点点描描在在直直角角坐坐标标纸纸上上，并并连连成成一一条条直直线线，即即为为该该测测定定的的标标准准曲曲线线。在在该该标标准准曲曲线线上上，样样品品测测定定的吸光度值（的吸光度值（）对应的）对应的X X值，即为样品的含量值。值，即为样品的含量值。这叫图算法这叫图算法卫生理

44、化检验卫生理化检验53 用计算器计算的方法用计算器计算的方法卫生理化检验卫生理化检验54（3）水样亚硝酸盐氮）水样亚硝酸盐氮(N,mg/L)的计算的计算亚硝酸盐氮亚硝酸盐氮(N,mg/L)=m/V式中：式中：m为从校准曲线上查出的（或回归方程计算出的）为从校准曲线上查出的（或回归方程计算出的）亚硝酸盐氮含量亚硝酸盐氮含量(g)，V为水样体积（为水样体积（ml）卫生理化检验卫生理化检验55【说明】【说明】1、精密度和准确度：五个实验室分析含精密度和准确度：五个实验室分析含0.083mg/L0.18mg/L亚硝酸盐氮的加标水样，单亚硝酸盐氮的加标水样，单个实验室的相对标准偏差不超过个实验室的相对标

45、准偏差不超过2.8%；加标回收；加标回收率为率为96%102%.2、由于重氮化反应的灵敏度很高，测定中应注意、由于重氮化反应的灵敏度很高，测定中应注意避免外来避免外来NO2的污染，如煤气的火焰中可放出相的污染，如煤气的火焰中可放出相当多的氮氧化物，其中的当多的氮氧化物，其中的NO2溶于水成为亚硝酸。溶于水成为亚硝酸。因此，避免在有煤气燃烧的室内测定。因此，避免在有煤气燃烧的室内测定。3、实验要求：相关系数、实验要求：相关系数r0.999，b值在值在0.153左左右，右，a值在值在0.004左右左右卫生理化检验卫生理化检验56重点内容：重点内容：1、卫生学意义、卫生学意义2、方法原理、方法原理3、试剂的作用、试剂的作用4、配制标准溶液的计算、配制标准溶液的计算5、用计算器拟合标准曲线计算检验结果的方法、用计算器拟合标准曲线计算检验结果的方法卫生理化检验卫生理化检验谢谢观看/欢迎下载BY FAITH I MEAN A VISION OF GOOD ONE CHERISHES AND THE ENTHUSIASM THAT PUSHES ONE TO SEEK ITS FULFILLMENT REGARDLESS OF OBSTACLES.BY FAITH I BY FAITH