吸收放散实验.pptx

《吸收放散实验.pptx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《吸收放散实验.pptx（21页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、 吸收试验吸收试验（absorption testabsorption test）抗原与抗体的结合是特异性的，因此具有抗抗原与抗体的结合是特异性的，因此具有抗体活体活性的血清加入相应抗原后，抗体的活性下降或消失，性的血清加入相应抗原后，抗体的活性下降或消失，这种作用称为这种作用称为吸收试验吸收试验 对一未知抗体可以用已知抗原进行吸收，吸对一未知抗体可以用已知抗原进行吸收，吸收后收后抗体活性下降或消失，说明未知抗体中含有与已知抗体活性下降或消失，说明未知抗体中含有与已知抗抗原相对应的抗体。有时被检血清中有多种抗体，可原相对应的抗体。有时被检血清中有多种抗体，可用用已知抗原分别吸收及鉴定抗体的性质

2、已知抗原分别吸收及鉴定抗体的性质 第1页/共21页 放散试验原理 抗原与抗体的结合是可逆的。在物理条件抗原与抗体的结合是可逆的。在物理条件 改变时，抗体又会从抗原抗体复合物上分离下改变时，抗体又会从抗原抗体复合物上分离下 来，将抗体由抗原抗体复合物上分离下来的试来，将抗体由抗原抗体复合物上分离下来的试 验称为放散试验验称为放散试验 第2页/共21页第3页/共21页 吸收试验的方法冷吸收冷吸收 一份盐水洗涤的已知抗原的压积红细胞一份盐水洗涤的已知抗原的压积红细胞 加一份被检血清，混匀后置加一份被检血清，混匀后置 4 4 冰箱冰箱吸吸 收收1212小时小时 （ABOABO、MNMN、P P系统系统

3、等）等）热吸收热吸收 混匀后置混匀后置3737水浴箱中吸收（水浴箱中吸收（RhRh系统系统等）等）吸收试验可区别真假凝集：真凝集经吸收后吸收试验可区别真假凝集：真凝集经吸收后凝集减弱或呈阴性；假凝集经吸收后凝集不变凝集减弱或呈阴性；假凝集经吸收后凝集不变第4页/共21页 放散试验放散液放散液 用放散试验用放散试验 技术将大量附着于红细胞上的技术将大量附着于红细胞上的抗体放散到小量的生理盐水中，这种含有抗体抗体放散到小量的生理盐水中，这种含有抗体的溶液称为放散液的溶液称为放散液 放散液中的抗体具有特异性，可以与相应放散液中的抗体具有特异性，可以与相应抗原结合，从而可以进一步确定抗体的特异性。抗原

4、结合，从而可以进一步确定抗体的特异性。第5页/共21页第6页/共21页第7页/共21页第8页/共21页第9页/共21页第10页/共21页 热放散试验 主要应用主要应用ABO ABO 血型系统新生儿溶血病及从血型系统新生儿溶血病及从红细胞上洗脱掉红细胞上洗脱掉IgMIgM及及IgGIgG抗体。此方法制备抗抗体。此方法制备抗体最容易，但抗体回收较差，即如果抗体较弱，体最容易，但抗体回收较差，即如果抗体较弱，放散试验可得到假阴性的结果。放散试验可得到假阴性的结果。其优点是适用于一般化验室，缺点是放散其优点是适用于一般化验室，缺点是放散液中含有较多游离白蛋白。液中含有较多游离白蛋白。第11页/共21页

5、热放散试验方法n n将疑有抗体包被的红细胞用生理盐水洗涤将疑有抗体包被的红细胞用生理盐水洗涤3 3 3 3-4-4-4-4次，最后一次尽量压积红细胞和吸取红细次，最后一次尽量压积红细胞和吸取红细胞上层的生理盐水。胞上层的生理盐水。n n在压积红细胞中加等量生理盐水（也可用在压积红细胞中加等量生理盐水（也可用ABABABAB血清或血清或6%6%6%6%白蛋白），置白蛋白），置 56 56 56 56水浴箱中水浴箱中78787878分钟，期间摇动数次。分钟，期间摇动数次。n n取出后立即高速离心，取出后立即高速离心，3 3 3 3000 000 000 000 转转/分分2 2 2 2分钟；取上清

6、液（樱红色的上清液即为放散液），分钟；取上清液（樱红色的上清液即为放散液），与已知红细胞试验。按不同试验要求做试验，将放散液作为抗体使用。与已知红细胞试验。按不同试验要求做试验，将放散液作为抗体使用。第12页/共21页第13页/共21页热放散试验注意事项鉴定放散液应与原抗原抗体反应方法相同，如抗鉴定放散液应与原抗原抗体反应方法相同，如抗体较弱，可用酶处理红细胞做试验体较弱，可用酶处理红细胞做试验放散液用生理盐水制备不稳定，若要保存放散液，放散液用生理盐水制备不稳定，若要保存放散液，用用ABAB血清进行放散血清进行放散受检血清与吸收用红细胞比例要高一些，若抗体受检血清与吸收用红细胞比例要高一些，

7、若抗体弱，可以充分与红细胞结合弱，可以充分与红细胞结合加热放散温度要准确，如温度降低，放散出的抗加热放散温度要准确，如温度降低，放散出的抗体又回重新与抗原结合体又回重新与抗原结合放散抗体时，应不断摇动，促使抗体从抗原抗体放散抗体时，应不断摇动，促使抗体从抗原抗体复合物上分离下来复合物上分离下来第14页/共21页乙醚放散试验 主要应用于温自身抗体（主要应用于温自身抗体（IgGIgG）或同种抗体或同种抗体引起的直抗阳性，以及用于分离引起的直抗阳性，以及用于分离IgGIgG抗体混合物抗体混合物 其最大优点是适用于检查获得性溶血性贫其最大优点是适用于检查获得性溶血性贫血，鉴定血，鉴定RhRh抗体效果最

8、好，不宜用于抗体效果最好，不宜用于 ABO ABO 抗抗体鉴定体鉴定第15页/共21页 乙醚放散试验方法取经洗涤取经洗涤3 3次的受检压积红细胞次的受检压积红细胞1 1份加份加1 1份生理盐水，份生理盐水，2 2份乙醚，用木塞盖紧，颠倒试管，用力振摇份乙醚，用木塞盖紧，颠倒试管，用力振摇1 1 2 2分钟，然后以分钟，然后以30003000转转/分离心分离心5 5分钟分钟 离心后分成离心后分成3 3层，上层是乙醚，中层是红细胞基质，层，上层是乙醚，中层是红细胞基质，下层是具有抗体的放散液（为樱红色或深红色）下层是具有抗体的放散液（为樱红色或深红色）用吸管插入试管底部吸出放散液，若有浑浊可重新用

9、吸管插入试管底部吸出放散液，若有浑浊可重新离心离心1 1次次 将放散液置将放散液置3737水浴水浴1010分钟，除尽乙醚，然后与一分钟，除尽乙醚，然后与一组谱红细胞做间接抗球蛋白试验，以鉴定抗体特异组谱红细胞做间接抗球蛋白试验，以鉴定抗体特异性性第16页/共21页第17页/共21页酸放散第18页/共21页放散试验的应用 鉴定新生儿溶血病患儿红细胞上的抗体鉴定新生儿溶血病患儿红细胞上的抗体 在溶血性贫血和可疑输血反应中，用来鉴定产生直抗阳性的红细胞在溶血性贫血和可疑输血反应中，用来鉴定产生直抗阳性的红细胞 制备少量的单特异性抗体制备少量的单特异性抗体 从病人红细胞上去除抗体，制备可用于自身吸收或鉴定血型及交叉配血次测从病人红细胞上去除抗体，制备可用于自身吸收或鉴定血型及交叉配血次测试验中使用的红细胞试验中使用的红细胞第19页/共21页第20页/共21页谢谢您的观看！第21页/共21页