微生物学实验重庆医科大学基础医学实验教学中心.pptx

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1、教材高等医学院校基础医学实验教学系列教材 病原生物学实验 科学出版社，2008年6月 主编 杨致邦 叶彬第1页/共26页临床医学本科实验内容及安排实验课内容学时数 显微镜录像1 细菌形态观察 4 需要2细菌的生长现象与消毒灭细菌的生长现象与消毒灭菌菌 4 有3 致病性球菌 4 需要有4 肠道杆菌 4 有5 白喉杆菌、厌氧菌4 需要6 四体、真菌、病毒 4 需要有第2页/共26页非临床医学本科实验内容及安排实验课内容实验课内容学时学时数数显微镜显微镜录像录像1 1 细菌形态细菌形态结构的结构的观察观察 4 4 需要需要2 2 细菌的细菌的生长现象与消毒灭菌生长现象与消毒灭菌 4 4 有有3 3

2、四体、真菌、病毒四体、真菌、病毒 4 4 需要需要有有 第3页/共26页实验一细菌形态结构的观察 Observe on Morphology and Structure of Bacteria第4页/共26页【目的要求】1.1.熟悉实验室生物安全规则,掌握无菌操作技术；2.掌握细菌标本革兰染色的操作步骤和方法；显微镜(油镜)下细菌形态的观察;革兰染色结果判断；3.掌握细菌的特殊结构（荚膜、鞭毛、芽孢）的形态特点。第5页/共26页【实验内容】1.1.实验室生物安全规则；2.2.细菌标本革兰染色观察（Grams Stain)()(每人做）；3.3.复习显微镜(油镜)的使用(每人做）；4.4.细菌特

3、殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）的观察（示教镜）。第6页/共26页【实验材料】(1)菌种:葡萄球菌、大肠杆菌斜面培养物。(2)试剂:革兰染色液。(3)其他:生理盐水、载玻片、酒精灯、接种环、显微镜、香柏油、擦镜纸、二甲苯等。第7页/共26页【实验方法】1 1细菌涂片的制作步骤：涂片 干燥 固定 注意点：1）无菌操作2）加生理盐水（固体培养物）第8页/共26页生理盐水 生理盐水 生理盐水 +葡萄球菌 大肠杆菌 葡萄球菌+大肠杆菌载玻片第9页/共26页2.革兰染色1)方法初染:结晶紫和碳酸氢钠各13滴,3s-5s，水冲净,甩干。媒染:碘液13滴,3s-5s秒钟，水冲净,甩干。脱色:95%乙醇数滴,5s-

4、10s,水冲净,甩干。复染:稀释石炭酸复红液13滴,10s，水冲净,甩干。关键步骤：掌握脱色程度。第10页/共26页【结果观察】指标:形态、染色性、排列。染色性判断：革兰阳性菌染成蓝紫色,革兰阴性菌染成红色。3.观察标本片自然干燥或在酒精灯火焰上烤干后,在涂菌处滴加1滴香柏油,油镜下观察。第11页/共26页Grams Stain,1000葡萄球菌:革兰阳性球菌,成堆或呈葡萄状排列。第12页/共26页大肠杆菌:革兰阴性杆菌,不规则分散排列。Grams Stain,1000 第13页/共26页4.细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）的观察注意点：观察时只能动显微镜的微调,不要动位置。要求：画图记录。第

5、14页/共26页1）破伤风杆菌的芽胞:芽胞染色1000第15页/共26页鞭毛染色1000 2)变形杆菌的鞭毛:第16页/共26页3)肺炎链球菌的荚膜:荚膜染色1000第17页/共26页【实验注意点】1.生物安全、无菌操作,菌种管清理；2.显微镜(油镜)的使用用后擦镜头；3.用过的载玻片放进有消毒水的玻缸。4.做好清洁卫生。第18页/共26页【实验报告内容】1.细菌标本革兰染色观察（方法、结果画图、讨论）；2.细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）观察（画图）。第19页/共26页【实验报告示范】实验一 细菌形态结构的观察【实验内容】1.实验室生物安全规则（每人掌握）；2.细菌标本革兰染色观察（Gram

6、s Stain)(每人做）；3.复习显微镜(油镜)的使用(每人做）；4.细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）的观察（示教镜）。第20页/共26页【实验材料和方法】一、细菌标本革兰染色观察1细菌涂片的制作菌种：葡萄球菌、大肠杆菌斜面培养物方法：涂片 干燥 固定 1）涂片：在酒精灯火焰旁用接种环无菌操作取生理盐水和葡萄球菌、大肠杆菌斜面培养物，涂抹、混匀于载玻片上，如下图：生理盐水 生理盐水 生理盐水 +葡萄球菌 大肠杆菌 葡萄球菌+大肠杆菌第21页/共26页3）固定将载玻片以均匀的速度通过酒精灯火焰来回3次。2）干燥将涂片在酒精灯火焰上方约20cm高处烤干。2.革兰染色1)方法初染:结晶紫和碳酸氢钠

7、各13滴,3s-5s，水冲净,甩干。媒染:碘液13滴,3s-5s秒钟，水冲净,甩干。脱色:95%乙醇数滴,5s-10s,水冲净,甩干。复染:稀释石炭酸复红液13滴,10s，水冲净,甩干。第22页/共26页3.观察将标本片在酒精灯火焰上烤干后,在涂菌处滴加1滴香柏油,油镜下观察。4.结果见图1:葡萄球菌:革兰阳性球菌,成堆或呈葡萄状排列大肠杆菌:革兰阴性杆菌,不规则分散排列Grams Stain,1000图1：细菌标本革兰染色观察结果第23页/共26页5.讨论 本实验结果表明,通过革兰染色在油镜下可清楚地观察到标本片上细菌的形态、染色性和排列状态。革兰染色可将细菌分为2大类，即染成蓝紫色的革兰阳性菌和染成红色的革兰阴性菌。其原理是革兰阳性菌和革兰阴性菌细胞壁结构的差异。结果不正确的影响因素分析：第24页/共26页二、细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）的观察结果见图2-4。鞭毛染色1000 图2 变形杆菌的鞭毛图3 破伤风杆菌的芽胞芽胞染色1000图4 肺炎链球菌的荚膜荚膜染色1000第25页/共26页感谢您的观看！第26页/共26页