绪论蛋白质结构和功能级.pptx

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1、 生物化学生物化学生命的化学，应用化学的理论、技术及物理学、免疫学等原理和方法研究生物体（植物、动物、微生物、人体等）的化学组成和生命过程中化学变化规律的一门基础生命科学。第1页/共90页分子生物学分子生物学 是从生物化学、生物物理学、遗传学、微生物学等多种学科经过相互杂交、相互渗透而形成的，主要研究核酸和蛋白质等生物大分子的结构及其在遗传信息传递和细胞信息转导过程中的作用。第2页/共90页生物化学发展史：生物化学发展史：叙述生物化学阶段（2020世纪2020年代以前）以分析和研究组成生物体的成分及生物体的分泌物和排泄物为主。动态生物化学阶段（2020世纪2020年代至5050年代）主要研究体

2、内各种物质的合成和分解途径及动态平衡。机能生物化学阶段（近5050多年）探讨生物大分子的结构和机能的关系。第3页/共90页第 一 篇 生物大分子的结构与功能 构件分子 生物大分子 细胞器 细胞 组织器官 生物体 第4页/共90页蛋白质的结构与功能第 一 章Structure and Function of Protein第5页/共90页一、什么是蛋白质?蛋白质(protein)(protein)是由许多氨基酸(amino(amino acids)acids)通过肽键(peptide bond)(peptide bond)相连形成的高分子含氮化合物。第6页/共90页二、蛋白质的生物学重要性1.1

3、.蛋白质是生物体重要组成成分分布广：所有器官、组织都含有蛋白质；细胞的各个部分都含有蛋白质。含量高：是细胞内最丰富的有机分子，占人体干重的4545，某些组织含量更高，例如脾、肺及横纹肌等高达8080。第7页/共90页1 1）作为生物催化剂（酶）2 2）代谢调节作用3 3）免疫保护作用4 4）物质的转运和存储5 5）运动与支持作用6 6）参与细胞间信息传递2.2.蛋白质重要的生物学功能3.3.氧化供能第8页/共90页蛋 白 质 的 分 子 组 成The Molecular Component of Protein第 一 节第9页/共90页 组成蛋白质的元素 主要有C C、H H、O O、N N和

4、S S。有些蛋白质含有少量磷或金属元素铁、铜、锌、锰、钴、钼，个别蛋白质还含有碘 。第10页/共90页 各种蛋白质的含氮量很接近，平均为1616 由于体内的含氮物质以蛋白质为主，因此，只要测定生物样品中的含氮量，就可以根据以下公式推算出蛋白质的大致含量：100克样品中蛋白质的含量克样品中蛋白质的含量(g%)=每克样品含氮克数每克样品含氮克数 6.251001/16%蛋白质元素组成的特点第11页/共90页一、氨基酸 组成蛋白质的基本单位存在自然界中的氨基酸有300300余种，但组成人体蛋白质的氨基酸仅有2020种，且均属 L-L-氨基酸（甘氨酸除外）。第12页/共90页H甘氨酸甘氨酸CH3丙氨酸

5、丙氨酸L-L-氨基酸的通式氨基酸的通式R第13页/共90页极性中性氨基酸极性中性氨基酸非极性疏水性氨基酸非极性疏水性氨基酸酸性氨基酸酸性氨基酸碱性氨基酸碱性氨基酸（一）氨基酸的分类第14页/共90页甘氨酸甘氨酸 glycine Gly G 5.97丙氨酸丙氨酸 alanine Ala A 6.00缬氨酸缬氨酸 valine Val V 5.96亮氨酸亮氨酸 leucine Leu L 5.98 异亮氨酸异亮氨酸 isoleucine Ile I 6.02 苯丙氨酸苯丙氨酸 phenylalanine Phe F 5.48脯氨酸脯氨酸 proline Pro P 6.301.非极性疏水性氨基酸非

6、极性疏水性氨基酸目 录第15页/共90页色氨酸色氨酸 tryptophan Try W 5.89丝氨酸丝氨酸 serine Ser S 5.68酪氨酸酪氨酸 tyrosine Tyr Y 5.66 半胱氨酸半胱氨酸 cysteine Cys C 5.07 蛋氨酸蛋氨酸 methionine Met M 5.74天冬酰胺天冬酰胺 asparagine Asn N 5.41 谷氨酰胺谷氨酰胺 glutamine Gln Q 5.65 苏氨酸苏氨酸 threonine Thr T 5.602.2.极性中性氨基酸极性中性氨基酸目 录第16页/共90页天冬氨酸天冬氨酸 aspartic acid Asp

7、 D 2.97谷氨酸谷氨酸 glutamic acid Glu E 3.22赖氨酸赖氨酸 lysine Lys K 9.74精氨酸精氨酸 arginine Arg R 10.76组氨酸组氨酸 histidine His H 7.593.3.酸性氨基酸4.4.碱性氨基酸目 录第17页/共90页几种特殊氨基酸 脯氨酸（亚氨基酸）第18页/共90页 半胱氨酸 +胱氨酸二硫键二硫键-HH第19页/共90页（二）氨基酸的理化性质1.1.两性解离及等电点氨基酸是两性电解质，其解离程度氨基酸是两性电解质，其解离程度和带电性质取决于其所处溶液的酸碱度。和带电性质取决于其所处溶液的酸碱度。等电点(isoelec

8、tric point,pI)(isoelectric point,pI)在某一pHpH的溶液中，氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等，成为兼性离子，呈电中性。此时溶液的pHpH值称为该氨基酸的等电点。第20页/共90页pH=pI+OH-pHpI+H+OH-+H+pHpI氨基酸兼性离子 阳离子阴离子第21页/共90页2.2.紫外吸收 色氨酸、酪氨酸色氨酸、酪氨酸的最大吸收峰分别的最大吸收峰分别280nm280nm和和275nm275nm 附近。附近。大大多多数数蛋蛋白白质质含含有有这这两两种种氨氨基基酸酸残残基基，所所以以测测定定蛋蛋白白质质溶溶液液280nm280nm的的光光吸吸收收值值

9、是是分分析析溶溶液液中中蛋蛋白白质质含含量的快速简便的方法。量的快速简便的方法。第22页/共90页3.3.茚三酮反应 氨氨基基酸酸与与茚茚三三酮酮水水合合物物共共热热，可可生生成成蓝蓝紫紫色色化化合合物物，其其最最大大吸吸收收峰峰在在570nm570nm处处。由由于于此此吸吸收收峰峰值值与与氨氨基基酸酸的的含含量量存存在在正正比比关关系系，因因此此可可作作为为氨氨基基酸酸定量分析方法。定量分析方法。第23页/共90页二、肽 肽键(peptide(peptide bond)bond)是由一个氨基酸的-羧基与另一个氨基酸的-氨基脱水缩合而形成的化学键。（一）肽(peptide)(peptide)第

10、24页/共90页+-HOH甘氨酰甘氨酸甘氨酰甘氨酸肽键第25页/共90页 肽肽是由氨基酸通过肽键缩合而形成的是由氨基酸通过肽键缩合而形成的化合物。化合物。两分子氨基酸缩合形成两分子氨基酸缩合形成二肽二肽，三分子，三分子氨基酸缩合则形成氨基酸缩合则形成三肽三肽 肽链中的氨基酸分子因为脱水缩合而基团不全，被称为氨基酸残基(residue)(residue)。由十个以内氨基酸相连而成的肽称为由十个以内氨基酸相连而成的肽称为寡肽寡肽(oligopeptide)(oligopeptide)，由更多的氨基，由更多的氨基酸相连形成的肽称酸相连形成的肽称多肽多肽(polypeptide)(polypeptid

11、e)。第26页/共90页N N 末端：有自由氨基的一端C C 末端：有自由羧基的一端多肽链有两端 多肽链(polypeptide(polypeptide chain)chain)是指许多氨基酸之间以肽键连接而成的一种结构。第27页/共90页N末端末端C末端末端牛核糖核酸酶牛核糖核酸酶第28页/共90页（二）几种生物活性肽 1.1.谷胱甘肽(glutathione,GSH)(glutathione,GSH)第29页/共90页GSH过氧过氧化物酶化物酶H2O2 2GSH 2H2O GSSG GSH还原酶还原酶NADPH+H+NADP+第30页/共90页体内许多激素属寡肽或多肽 神经肽(neurop

12、eptide)(neuropeptide)2.2.多肽类激素及神经肽第31页/共90页蛋 白 质 的 分 子 结 构The Molecular Structure of Protein 第 二 节第32页/共90页蛋白质的分子结构包括 一级结构(primary structure)(primary structure)二级结构(secondary structure)(secondary structure)三级结构(tertiary structure)(tertiary structure)四级结构(quaternary structure)(quaternary structure)高

13、级 结 构第33页/共90页定义 指多肽链中氨基酸的排列顺序。一、蛋白质的一级结构主要的化学键 肽键，有些蛋白质还包括二硫键。第34页/共90页一级结构是蛋白质空间构象和特异生一级结构是蛋白质空间构象和特异生物学功能的基础。物学功能的基础。目 录第35页/共90页二、蛋白质的二级结构二、蛋白质的二级结构 蛋蛋白白质质分分子子中中某某一一段段肽肽链链的的局局部部空空间间结结构构，即即该该段段肽肽链链主主链链骨骨架架原原子子的的相相对对空空间间位位置置，并并不不涉涉及及氨氨基基酸酸残残基侧链的构象基侧链的构象。定义 主要的化学键：氢键 第36页/共90页（一）肽单元参与肽键的6 6个原子C C 1

14、 1、C C、O O、N N、H H、C C 2 2位于同一平面，C C 1 1和C C 2 2在平面上所处的位置为反式(trans)(trans)构型，此同一平面上的6 6个原子构成了所谓的肽单元 (peptide unit)peptide unit)。第37页/共90页 蛋白质二级结构的主要形式 -螺旋 (-helix)-helix)-折叠 (-pleated sheet)-pleated sheet)-转角 (-turn)-turn)无规卷曲 (random coil)(random coil)第38页/共90页（二）-螺旋目 录第39页/共90页（三）-折叠第40页/共90页（四）-转

15、角和无规卷曲-转角无规卷曲是指没有规律性的那部分肽链结构。第41页/共90页（五）模体在许多蛋白质分子中，可发现二个在许多蛋白质分子中，可发现二个或三个具有二级结构的肽段，在空间上或三个具有二级结构的肽段，在空间上相互接近，形成一个具有特殊功能的空相互接近，形成一个具有特殊功能的空间构象，被称为模体间构象，被称为模体(motif)(motif)。第42页/共90页钙结合蛋白中结合钙离子的模体 锌指结构 第43页/共90页三、蛋白质的三级结构疏水键、离子键、氢键等。主要的化学键整条肽链中全部氨基酸残基的相对空整条肽链中全部氨基酸残基的相对空间位置间位置,即肽链中所有原子在三维空间的即肽链中所有原

16、子在三维空间的排布位置。排布位置。（一）定义 第44页/共90页目 录第45页/共90页肌红蛋白 (Mb)(Mb)N 端端 C端端第46页/共90页纤连蛋白分子的结构域 （二）结构域大分子蛋白质的三级结构常可分割成一大分子蛋白质的三级结构常可分割成一个或数个球状或纤维状的区域，折叠得较个或数个球状或纤维状的区域，折叠得较为紧密，各行使其功能，称为结构域为紧密，各行使其功能，称为结构域(domain)(domain)。第47页/共90页（三）分子伴侣通过提供一个保护环境而加速蛋白质折通过提供一个保护环境而加速蛋白质折叠成天然构象或形成四级结构。叠成天然构象或形成四级结构。可逆地与未折叠肽段的疏水

17、部分结合随后松开，如此重复进行可防止错误的聚集发生，使肽链正确折叠。与错误聚集的肽段结合，使之解聚后，再诱导其正确折叠。折叠中对二硫键的正确形成起重要。(chaperon)第48页/共90页 亚基之间的结合力主要是离子键，其次亚基之间的结合力主要是离子键，其次是氢键和疏水作用。是氢键和疏水作用。四、蛋白质的四级结构四、蛋白质的四级结构蛋白质分子中各亚基的空间排布及亚蛋白质分子中各亚基的空间排布及亚基接触部位的布局和相互作用，称为基接触部位的布局和相互作用，称为蛋白蛋白质的四级结构质的四级结构。有些蛋白质分子含有二条或多条多肽有些蛋白质分子含有二条或多条多肽链，每一条多肽链都有完整的三级结构，链

18、，每一条多肽链都有完整的三级结构，称为蛋白质的称为蛋白质的亚基亚基 (subunit)(subunit)。第49页/共90页血红蛋白的四级结构 第50页/共90页 五、蛋白质的分类 根据折叠方式和复杂程度 一级结构蛋白质 二级结构蛋白质 三级结构蛋白质 四级结构蛋白质 根据功能 活性蛋白质 非活性蛋白质 第51页/共90页根据组成成分 单纯蛋白质结合蛋白质 =蛋白质部分 +非蛋白质 部分 根据外观形状 纤维状蛋白质球状蛋白质第52页/共90页蛋白质结构与功能的关系The Relation of Structure and Function of Protein第 三 节第53页/共90页（一）

19、一级结构是空间构象的基础 一、蛋白质一级结构与功能的关系 牛核糖核酸酶的一级结构二二硫硫键键第54页/共90页 天然状态，有催化活性 尿素、-巯基乙醇 去除尿素、-巯基乙醇非折叠状态，无活性第55页/共90页（二）一级结构与功能的关系例：镰刀形红细胞贫血N-val his leu thr pro glu glu C(146)HbS 肽链肽链HbA 肽肽 链链N-val his leu thr pro val glu C(146)这种由蛋白质分子发生变异所导致的这种由蛋白质分子发生变异所导致的疾病，称为疾病，称为“分子病分子病”。第56页/共90页（一）肌红蛋白与血红蛋白的结构 二、蛋白质空间结

20、构与功能的关系 目 录第57页/共90页HbHb与MbMb一样能可逆地与O O2 2结合，HbHb与O O2 2结合后称为氧合HbHb。氧合HbHb占总HbHb的百分数（称百分饱和度）随O O2 2浓度变化而改变。（二）血红蛋白的构象变化与结合氧 第58页/共90页肌红蛋白(Mb)(Mb)和血红蛋白(Hb)(Hb)的氧解离曲线第59页/共90页 协同效应(cooperativity)(cooperativity)一个寡聚体蛋白质的一个亚基与其配体结合后，能影响此寡聚体中另一一个寡聚体蛋白质的一个亚基与其配体结合后，能影响此寡聚体中另一个亚基与配体结合能力的现象，称为个亚基与配体结合能力的现象，

21、称为协同效应协同效应。如果是促进作用则称为如果是促进作用则称为正协同效应正协同效应 (positive cooperativity)(positive cooperativity)如果是抑制作用则称为如果是抑制作用则称为负协同效应负协同效应 (negative cooperativity)(negative cooperativity)第60页/共90页第61页/共90页O2血血红红素素与与氧氧结结合合后后，铁铁原原子子半半径径变变小小，就就能能进进入入卟卟啉啉环环的的小小孔孔中中，继继而而引引起起肽链位置的变动。肽链位置的变动。第62页/共90页变构效应(allosteric(alloste

22、ric effect)effect)在变构剂的作用下，变构蛋白质的空间构象发生改变，导致其功能发生改变的现象称为变构效应。第63页/共90页（三）蛋白质构象改变与疾病 蛋白质构象疾病：若蛋白质的折叠发生错误，尽管其一级结构不变，但蛋白质的构象发生改变，仍可影响其功能，严重时可导致疾病发生。第64页/共90页蛋白质构象改变导致疾病的机理：有些蛋白质错误折叠后相互聚集，常形成抗蛋白水解酶的淀粉样纤维沉淀，产生毒性而致病，表现为蛋白质淀粉样纤维沉淀的病理改变。这类疾病包括：人纹状体脊髓变性病、老年痴呆症、亨停顿舞蹈病、这类疾病包括：人纹状体脊髓变性病、老年痴呆症、亨停顿舞蹈病、疯牛病等。疯牛病等。第

23、65页/共90页疯牛病中的蛋白质构象改变疯牛病是由朊病毒蛋白(prion(prion protein,PrP)protein,PrP)引起的一组人和动物神经退行性病变。正常的PrPPrP富含-螺旋，称为PrPPrPc c。PrPPrPc c在某种未知蛋白质的作用下可转变成全为-折叠的PrPPrPscsc，从而致病。PrPc-螺旋螺旋PrPsc-折叠折叠正常疯牛病第66页/共90页第四节蛋白质的理化性质与分离纯化The Physical and Chemical Characters and Separation and Purification of Protein第67页/共90页（一）蛋白

24、质的两性解离 一、理化性质 蛋白质分子除两端的氨基和羧基可解离外，氨基酸残基侧链中某些基团，在一定的溶液pHpH条件下都可解离成带负电荷或正电荷的基团。蛋白质的等电点(isoelectric isoelectric point,point,pI)pI)当蛋白质处于某一pHpH时，解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的pHpH称为蛋白质的等电点。第68页/共90页（二）蛋白质的胶体性质 蛋白质属于生物大分子之一，分子量可自1 1万至100100万之巨，其分子的直径可达1 1100nm100nm，为胶粒范围之内。蛋白质胶体稳定的因素颗粒表面电荷水化膜第69页/共90页+

25、带正电荷的蛋白质带正电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质在等电点的蛋白质在等电点的蛋白质水化膜水化膜+带正电荷的蛋白质带正电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质带负电荷的蛋白质不稳定的蛋白质颗粒不稳定的蛋白质颗粒酸酸碱碱酸酸碱碱酸酸碱碱脱水作用脱水作用脱水作用脱水作用脱水作用脱水作用溶液中蛋白质的聚沉第70页/共90页（三）蛋白质的变性、沉淀和凝固 蛋白质的变性(denaturation)(denaturation)在某些物理或化学因素作用下，其特定的空间构象被破坏，即有序的空间结构变成无序的空间结构，从而导致其理化性质改变和生物活性的丧失。第71页/共90页 造成变性的因素造成变性的因素 如加

26、热如加热,乙醇等有机溶剂乙醇等有机溶剂,强酸、强强酸、强碱、重金属离子及生物碱试剂等碱、重金属离子及生物碱试剂等。变性的本质破坏非共价键和二硫键，不改 变蛋白质的一级结构。第72页/共90页 应用举例应用举例 临床医学上临床医学上,变性常被应用来消毒及灭菌。变性常被应用来消毒及灭菌。此外此外,防止蛋白质变性也是有效保存蛋白防止蛋白质变性也是有效保存蛋白质制剂（如疫苗等）的必要条件。质制剂（如疫苗等）的必要条件。第73页/共90页若蛋白质变性程度较轻，去除变性因素后，蛋白质仍可恢复或部分恢复其原有的构象和功能，称为复性(renaturation)(renaturation)。第74页/共90页

27、天然状态，有催化活性 尿素、-巯基乙醇 去除尿素、-巯基乙醇非折叠状态，无活性第75页/共90页蛋白质沉淀在一定条件下，蛋白疏水侧链暴露在外，肽链融会相互缠绕继而聚集，因而从溶液中析出。变性的蛋白质易于沉淀，有时蛋白质发生沉淀，但并不变性。蛋白质的凝固作用蛋白质变性后的絮状物加热可变成比较坚固的凝块，此凝块不再溶于强酸和强碱中。第76页/共90页（四）蛋白质的紫外吸收蛋白质分子中含有共轭双键的苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸，在280nm280nm波长处有特征性吸收峰。蛋白质的ODOD280280与其浓度呈正比关系，可作蛋白质定量测定。第77页/共90页（五）蛋白质的呈色反应茚三酮反应(ninhydr

28、in reaction)(ninhydrin reaction)蛋白质经水解后产生的氨基酸可发生茚三酮反应。双缩脲反应(biuret reaction)(biuret reaction)蛋白质和多肽中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热，呈现紫红色，用来检测蛋白质水解程度。第78页/共90页二、蛋白质的分离和纯化（一）透析及超滤法 透析(dialysis)(dialysis)利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。超滤法 应用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一定截留分子量的超滤膜，达到浓缩蛋白质溶液的目的。第79页/共90页（二）丙酮沉淀、盐析及免疫沉淀 丙酮(或乙醇）沉淀时，必须在0 044

29、低温下进行，丙酮用量一般1010倍于蛋白质溶液体积。蛋白质被丙酮沉淀后，应立即分离。盐析法(salt precipitation)(salt precipitation)，是将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等中性盐加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和及水化膜被破坏，导致蛋白质沉淀。第80页/共90页 免疫沉淀法：将某一纯化蛋白质免疫动物可获得抗该蛋白的特异抗体。利用特异抗体识别相应的抗原蛋白，并形成抗原抗体复合物的性质，可从蛋白质混合溶液中分离获得抗原蛋白。第81页/共90页（三）电泳（elctrophoresiselctrophoresis）蛋白质在高于或低于其pIpI的溶液中为带电的颗粒，在电场

30、中能向正极或负极移动。这种通过蛋白质在电场中泳动而达到分离各种蛋白质的技术,称为电泳。根据支撑物的不同，可分为薄膜电泳、凝胶电泳等。第82页/共90页 几种重要的蛋白质电泳几种重要的蛋白质电泳 SDS-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳，常用于蛋，常用于蛋白质分子量的测定。白质分子量的测定。等电聚焦电泳等电聚焦电泳，通过蛋白质等电点的，通过蛋白质等电点的差异而分离蛋白质的电泳方法。差异而分离蛋白质的电泳方法。双向凝胶电泳双向凝胶电泳是蛋白质组学研究的重是蛋白质组学研究的重要技术。要技术。第83页/共90页（四）层析（chromatographychromatography）待分离蛋白

31、质溶液（流动相）经过一个固态物质（固定相）时，根据溶液中待分离的蛋白质颗粒大小、电荷多少及亲和力等，使待分离的蛋白质组分在两相中反复分配，并以不同速度流经固定相而达到分离蛋白质的目的 。第84页/共90页 蛋白质分离常用的层析方法 离子交换层析：利用各蛋白质的电荷量及性质不同进行分离。凝胶过滤(gel filtration)(gel filtration)又称分子筛层析，利用各蛋白质分子大小不同分离。第85页/共90页目 录第86页/共90页目 录第87页/共90页（五）超速离心 超速离心法(ultracentrifugation)(ultracentrifugation)既可以用来分离纯化蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量。蛋白质在离心场中的行为用沉降系数(sedimentation(sedimentation coefficient,coefficient,S)S)表示,沉降系数与蛋白质的密度和形状相关 。第88页/共90页因为沉降系数S S大体上和分子量成正比关系，可应用超速离心法测定蛋白质分子量，但对分子形状的高度不对称的大多数纤维状蛋白质不适用。第89页/共90页感谢您的观看！第90页/共90页