讲：课题12：DNA的粗提取与鉴定.pptx

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1、DNADNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定 目的要求1 1、了解从细胞中提取、了解从细胞中提取DNADNA的基本原的基本原理理2 2、初步掌握、初步掌握DNADNA的粗提取和鉴定的的粗提取和鉴定的方法方法3 3、观察提取出来的、观察提取出来的DNADNA实验思路1、DNA从哪提取？2、怎样将DNA与细胞中的其他物质分离？3、怎样鉴定我们提取的DNA？实验原理1.DNA1.DNA在在NaClNaCl溶液中的溶解度，是随着溶液中的溶解度，是随着NaClNaCl的浓的浓度的变化而改变的。当度的变化而改变的。当NaClNaCl的物质的量浓度为的物质的量浓度为0.14 mol0.14 molL L时时,D

2、NA,DNA的溶解度最低。的溶解度最低。利用这一原利用这一原理，可以使溶解在理，可以使溶解在NaClNaCl溶液中的溶液中的DNADNA析出。析出。2.DNA2.DNA不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的步提取出含杂质较少的DNADNA。3.DNA3.DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色，因此，因此，二苯胺可以作为鉴定二苯胺可以作为鉴定DNADNA的试剂。的试剂。实验用具：实验用具：铁架台；铁环；镊子；三铁架台；铁环；镊子；三角架

3、；酒精灯；石棉网；载玻片；玻角架；酒精灯；石棉网；载玻片；玻璃棒；滤纸；滴管；量筒（璃棒；滤纸；滴管；量筒（100ml100ml，一，一个）；烧杯；（个）；烧杯；（100ml100ml，一个，一个，50ml50ml、500ml500ml各二个）；试管（各二个）；试管（20ml20ml，二个）；，二个）；漏斗；试管夹；纱布。漏斗；试管夹；纱布。二、二、DNADNA的粗提取与鉴定的实验设计的粗提取与鉴定的实验设计（一）实验材料的选取（一）实验材料的选取 材料：新鲜的鸡血材料：新鲜的鸡血注意：注意：本实验中，本实验中，要往鸡血中加入抗凝剂要往鸡血中加入抗凝剂（柠檬酸柠檬酸钠溶液钠溶液）原则上只要含原

4、则上只要含DNADNA的生物材料都可以，但的生物材料都可以，但是选取是选取DNADNA含量相对较高的生物组织，成含量相对较高的生物组织，成功率更大。功率更大。(1)(1)先将新鲜的鸡血离心，获得鸡血细胞先将新鲜的鸡血离心，获得鸡血细胞(2)(2)在鸡血细胞中加入一定量的蒸馏水，同时用在鸡血细胞中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可（二）破碎细胞，获取含（二）破碎细胞，获取含DNADNA的滤液的滤液1 1、破碎细胞、破碎细胞讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？讨论：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？利用了什么原理？利用了什么原理？2 2、过滤

5、，获取含、过滤，获取含DNADNA的滤液的滤液讨论：为什么反复地溶解与析出讨论：为什么反复地溶解与析出DNADNA，能够去，能够去除杂质除杂质答：用高盐浓度的溶液溶解答：用高盐浓度的溶液溶解DNADNA，能除去在高，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNADNA析出，析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出复溶解与析出DNADNA，就能够除去与，就能够除去与DNADNA溶解度溶解度不同的多种杂质不同的多种杂质讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？讨论：方案二与方案三的原理有什么不同？答：方案二

6、是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的使提取的DNADNA与蛋白质分开；方案三利用的是与蛋白质分开；方案三利用的是DNADNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与白质变性，与DNADNA分离分离 方案二利用了酶的专一性；方案三利用了方案二利用了酶的专一性；方案三利用了DNADNA的稳定性。的稳定性。（四）（四）DNADNA的析出与鉴定的析出与鉴定DNADNA的析出用的是与滤液体积相等的的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒冷却的酒精溶液（体积分数为精溶液（体积分数为9595），静置，静置2-3min2-3mi

7、n，溶，溶液中会出现液中会出现白色丝状物，白色丝状物，这就是粗提取这就是粗提取DNADNA。用玻璃棒沿用玻璃棒沿一个方向一个方向搅拌，卷起丝状物，并用搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水滤纸吸取上面的水1 1、DNADNA的析出的析出2 2、DNADNA的鉴定的鉴定鉴定鉴定DNADNA时在试管中先加入物质的量的浓度为时在试管中先加入物质的量的浓度为2mol/L 2mol/L 的的NaClNaCl溶液溶液5ml5ml于两只试管中，其中一于两只试管中，其中一只加入只加入DNADNA丝状物，各加入丝状物，各加入二苯胺二苯胺4ml 4ml 试剂。试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min,5min,待试待试管冷却后，比较两只试管中溶液颜色的变化，看管冷却后，比较两只试管中溶液颜色的变化，看看溶解有看溶解有DNADNA的溶液是否有的溶液是否有蓝色蓝色小结1、DNA的粗提取与鉴定的方法2、原理3、实验设计的步骤，原则作业作业尝试用植物细胞（如新鲜的菠菜）来做这尝试用植物细胞（如新鲜的菠菜）来做这个实验。个实验。