抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)的检测及临床意义.pdf

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1、抗中性粒细胞胞浆抗体抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)(ANCA)的检测及临床意义的检测及临床意义抗中性粒细胞胞浆抗体抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)(ANCA)检测及临床意义检测及临床意义间接荧光免疫间接荧光免疫(IIF)(IIF)方法（欧盟）方法（欧盟）一、一、ANCAANCA 概念及分类概念及分类抗中性粒细胞胞浆抗体是一种以中性粒细胞和单核细胞胞浆成份为靶抗原抗中性粒细胞胞浆抗体是一种以中性粒细胞和单核细胞胞浆成份为靶抗原的自身抗体，对系统性血管炎炎症性肠病等多种疾病的诊断和鉴别诊断具有重要的自身抗体，对系统性血管炎炎症性肠病等多种疾病的诊断和鉴别诊断具有重要的意义，已成为自身免疫性疾病的

2、一项非常重要的常规检测项目。的意义，已成为自身免疫性疾病的一项非常重要的常规检测项目。目前，已经有十余种中性粒细胞胞浆成分被证实为目前，已经有十余种中性粒细胞胞浆成分被证实为ANCAANCA 的靶抗原，蛋白酶的靶抗原，蛋白酶3(PR3)3(PR3)，髓过氧化物酶，髓过氧化物酶(MPO)(MPO)，人白细胞弹性蛋白酶，人白细胞弹性蛋白酶(HEL)(HEL)，乳铁蛋白，乳铁蛋白(LF)(LF)，组织，组织蛋蛋白酶白酶 G(CathG(Cath G)G)，杀杀菌菌/通通透性透性 增强增强 蛋蛋白白(BPI)(BPI)，人溶，人溶 酶酶体相体相 关膜关膜 蛋白蛋白 2 2(H-LAMP2)(H-LAM

3、P2)，溶菌素，溶菌素(LYS)(LYS)，天青杀素，防御素，烯醇化酶，葡萄糖醛酸酶。，天青杀素，防御素，烯醇化酶，葡萄糖醛酸酶。根据乙醇固定的中性粒细胞基质片中，可以区分两种不同的荧光模型：根据乙醇固定的中性粒细胞基质片中，可以区分两种不同的荧光模型：一种胞浆型一种胞浆型（c-ANCAc-ANCA），是均匀分布在整个中性粒细胞胞浆中的颗粒型荧光，是均匀分布在整个中性粒细胞胞浆中的颗粒型荧光，细胞核无荧光。在乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片中，其荧光模型表现相同。其细胞核无荧光。在乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片中，其荧光模型表现相同。其主要的靶抗原是蛋白酶主要的靶抗原是蛋白酶 3(PR3)3(PR3

4、)。另一种是核周型另一种是核周型（p-ANCAp-ANCA），是围绕中性粒细胞细胞核周围的平滑带状荧光。是围绕中性粒细胞细胞核周围的平滑带状荧光。由多种抗原引起，主要靶抗原是髓过氧化物酶由多种抗原引起，主要靶抗原是髓过氧化物酶(MPO)(MPO)，人白细胞弹性蛋白酶，人白细胞弹性蛋白酶(HEL)(HEL)，乳铁蛋白，乳铁蛋白(LF)(LF)，组织蛋白酶，组织蛋白酶 G(Cath G)G(Cath G)，杀菌，杀菌/通透性增强蛋白通透性增强蛋白(BPI)(BPI)，人，人溶酶体相关膜蛋白溶酶体相关膜蛋白 2(H-LAMP2)2(H-LAMP2)，溶菌素溶菌素(LYS)(LYS)等。等。不同抗体在

5、乙醇和甲醛固定的不同抗体在乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片中，其荧光模型表现有所不同。抗中性粒细胞片中，其荧光模型表现有所不同。抗 MPOMPO 抗体产生的抗体产生的 p-ANCAp-ANCA 因耐因耐甲醛，其荧光模型与在乙醇固定的中性粒细胞中出现的甲醛，其荧光模型与在乙醇固定的中性粒细胞中出现的 c-ANCAc-ANCA 类似故叫甲醛抗类似故叫甲醛抗性的性的 p-ANCAp-ANCA。而其他非。而其他非 MPOMPO 抗体不与甲醛固定的中性粒细胞反应，无荧光表抗体不与甲醛固定的中性粒细胞反应，无荧光表现，这种类型又称为甲醛敏感的现，这种类型又称为甲醛敏感的 p-ANCAp-ANCA。故根据乙醇和

6、甲醛固定的中性粒细胞。故根据乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片表现，可初步判定片表现，可初步判定 ANCAANCA 的靶抗原的靶抗原 PR3PR3，MPOMPO，非，非 MPOMPO 三类。三类。二、二、ANCAANCA 的检测的检测胞胞 质质 呈呈 现现 胞胞 质质 呈呈 现现弥弥 散散 的的 细细 弥弥 散散 的的 细细颗粒荧光，颗粒荧光，颗粒荧光，颗粒荧光，c-ANCc-ANCA A 阳性阳性胞胞 质质 荧荧 光光 胞胞 质质 荧荧 光光清清 晰晰 勾勾 勒勒 清清 晰晰 勾勾 勒勒出出 核核 的的 轮轮 出出 核核 的的 轮轮廓，廓，分页核分页核 廓，廓，分页核分页核之之 间间 荧荧 光光

7、之之 间间 荧荧 光光增强。增强。A AN NA A阴阴增强。增强。甲甲呈呈 现现 核核 周周 胞胞 质质 呈呈 现现醛醛胞胞 质质 平平 滑滑 弥弥 散散 的的 细细耐耐丝丝 状状 带带 荧荧 颗粒荧光，颗粒荧光，受受光。光。荧光阳荧光阳 胞胞 质质 荧荧 光光性性 的的 胞胞 质质 清清 晰晰 勾勾 勒勒主主 要要 集集 中中 出出 核核 的的 轮轮在在 分分 页页 核核 廓，廓，分页核分页核周围，周围，形成形成 之之 间间 荧荧 光光环环 状状 或或 不不 增强。增强。规规 则则 的的 块块状。状。甲甲呈呈 现现 核核 周周醛醛胞胞 质质 平平 滑滑敏敏丝丝 状状 带带 荧荧阴性阴性肝细

8、胞本身肝细胞本身无荧光。无荧光。仅肝血窦粒仅肝血窦粒阴性阴性细胞出现荧细胞出现荧光。光。肝脏细胞本肝脏细胞本身无荧光。身无荧光。仅肝血窦粒仅肝血窦粒细胞出现荧细胞出现荧阴性阴性光。光。性性p-p-p-Ap-AA ANCNCN NA AC C阳阳A A性性肝脏细胞本肝脏细胞本阴性阴性身无荧光。身无荧光。感感光。光。荧光阳荧光阳p-p-A AN NC C性性 的的 胞胞 质质主主 要要 集集 中中在在 分分 页页 核核周围，周围，形成形成规规 则则 的的 块块状。状。仅肝血窦粒仅肝血窦粒细胞出现荧细胞出现荧光。光。A A环环 状状 或或 不不细胞核细胞核 肝细胞核阳肝细胞核阳ANCAANCA阴性阴

9、性细胞核阳细胞核阳性，性，荧光强荧光强度增强度增强阴性阴性呈现荧呈现荧 性。性。光表光表肝血窦粒细肝血窦粒细现，如现，如 胞胞 未未 见见 荧荧ANAANA光。光。所述所述荧光表现荧光表现细胞核细胞核甲醛耐甲醛耐受受细胞核阳细胞核阳性，性，荧光强荧光强度增强度增强如如c-ANCAc-ANCA 呈现荧呈现荧阳性，乙阳性，乙定粒细胞定粒细胞所述所述甲醛敏甲醛敏感感p-ANCp-ANCA A 阳性阳性细胞核阳细胞核阳性，性，荧光强荧光强度增强度增强阴性阴性光表光表ANAANA所述。所述。细胞核细胞核呈现荧呈现荧光表光表现，如现，如肝细胞和肝肝细胞和肝血窦粒细胞血窦粒细胞都有荧光。都有荧光。醇，醇，甲

10、醛固甲醛固 现，如现，如肝细胞和肝肝细胞和肝血窦粒细胞血窦粒细胞都有荧光。都有荧光。A AN NA A阳阳p-ANCp-ANC性性A A 阳性阳性ANAANA所述。所述。三、注意事项三、注意事项为提高对疾病诊断的特异性，检测时应注意以下问题为提高对疾病诊断的特异性，检测时应注意以下问题1 1、检测、检测 ANCAANCA，一般建议同时做，一般建议同时做 IIFIIF 初筛和确认实验，以提高初筛和确认实验，以提高 ANCAANCA 的临床应的临床应用价值，不做单独初筛或单独确认实验，以免降低对疾病诊断的特异性。用价值，不做单独初筛或单独确认实验，以免降低对疾病诊断的特异性。2 2、不能仅检测抗不

11、能仅检测抗 PR3PR3 和和 MPOMPO 两种特异性抗体，两种特异性抗体，而不检测，而不检测，这样容易限制这样容易限制 ANCAANCA对疾病诊断的特异性。对疾病诊断的特异性。3 3、用、用IIFIIF 检测时，仅使用乙醇固定的粒细胞片，这样不能严格排除检测时，仅使用乙醇固定的粒细胞片，这样不能严格排除ANAANA 的干扰，的干扰，容易出现假阳性。容易出现假阳性。四、临床意义四、临床意义（一）（一）ANCAANCA 与原发性小血管炎与原发性小血管炎韦格纳肉芽肿韦格纳肉芽肿(WG)(WG)，显微多动脉炎，显微多动脉炎(MPA)(MPA)，坏死性新月体性肾小球肾炎，坏死性新月体性肾小球肾炎(N

12、CGN)(NCGN)和变应性肉芽肿性血管炎和变应性肉芽肿性血管炎(CSS)(CSS)等等原发性系统性小血管炎的发病与等等原发性系统性小血管炎的发病与ANCAANCA 密切相关，密切相关，临床上已将上述疾病统称为临床上已将上述疾病统称为 ANCAANCA 相关小血管炎。相关小血管炎。ANCA,ANCA,特异特异性性 PR3PR3 抗体和抗抗体和抗 MPOMPO 抗体的检测已成为原发性小血管炎的敏感特异的血清学检抗体的检测已成为原发性小血管炎的敏感特异的血清学检测项目。测项目。1 1、抗、抗 PR3PR3 抗体抗体特异性特异性 PR3PR3 抗体为抗体为 WGWG 的标志性抗体，抗的标志性抗体，抗

13、 PR3PR3 抗体荧光模型以抗体荧光模型以 c-ANCAc-ANCA 为为主。主。但以但以c-ANCAc-ANCA诊断诊断WGWG特异性为特异性为9090，而以抗而以抗PR3PR3抗体的特异性可超过抗体的特异性可超过9595。抗抗 PR3PR3 抗体在其他的原发性血管炎中业可以检测出来，但阳性率较低。抗体在其他的原发性血管炎中业可以检测出来，但阳性率较低。抗抗 PR3PR3 抗体敏感度与疾病的活动性及病程有关，抗体敏感度与疾病的活动性及病程有关，在疾病的早期症状不明显时，在疾病的早期症状不明显时，就可出现阳性。因而抗就可出现阳性。因而抗PR3PR3 抗体常作为抗体常作为 WGWG 的早期诊断

14、、疗效判断、复发估计的的早期诊断、疗效判断、复发估计的指标，对临床治疗有重要的参考价值。指标，对临床治疗有重要的参考价值。2 2、抗、抗 MPOMPO 抗体抗体抗抗 MPOMPO 抗体荧光模型以抗体荧光模型以 p-ANCAp-ANCA 为主，主要与为主，主要与 MPAMPA、NCGNNCGN、CSSCSS 相关。相关。还可见于其他疾病，如节结性多动脉炎，抗肾小球基底膜肾病，还可见于其他疾病，如节结性多动脉炎，抗肾小球基底膜肾病，WGWG，SLESLE，RARA，药物诱导的狼疮，药物诱导的狼疮，FeltyFelty 综合症等。综合症等。抗体滴度与疾病活动性相关，抗体滴度与疾病活动性相关，可用于早

15、期诊断、可用于早期诊断、疗效判断、复发估计的指标，对临床治疗有重要的参考价值。疗效判断、复发估计的指标，对临床治疗有重要的参考价值。抗抗 MPOMPO 抗体阳性高度提示坏死性血管炎或特发性抗体阳性高度提示坏死性血管炎或特发性 NCGNNCGN，对诊断原发性小，对诊断原发性小血管炎的特异性达到血管炎的特异性达到 9999。因而每一个不明原因的血管炎或肾小球肾炎的患者，。因而每一个不明原因的血管炎或肾小球肾炎的患者，都应该检测都应该检测 ANCAANCA。表三：表三：ANCAANCA 与原发性小血管炎与原发性小血管炎相关疾病相关疾病韦格纳肉芽肿韦格纳肉芽肿(WG)(WG)显微多动脉炎显微多动脉炎(

16、MPA)(MPA)荧光模型荧光模型C C，P P（少见）（少见）C C，P P靶抗原（）靶抗原（）PR3PR3（8585），MPOMPO（1010）PR3PR3（4545），MPOMPO（4545）PR3PR3（2525），MPOMPO（6565）坏死坏死 性新月体性肾小性新月体性肾小球肾炎球肾炎C C，P P（少见）（少见）(NCGN)(NCGN)变应性肉芽肿性血管炎变应性肉芽肿性血管炎(CSS)(CSS)结节性多动脉炎（结节性多动脉炎（PANPAN）C C，P P（少见）（少见）少见少见PR3PR3（1010），MPOMPO（6060）PR3PR3（5 5），MPOMPO（1515）MPO

17、MPO抗肾小球基底膜病（抗抗肾小球基底膜病（抗 GBNGBN）P P（二）（二）ANCAANCA 与药物诱导性血管炎与药物诱导性血管炎近年来不断有药物治疗引起的近年来不断有药物治疗引起的 ANCAANCA 阳性的病例报道，如丙基硫氧嘧啶，阳性的病例报道，如丙基硫氧嘧啶，肼苯哒嗪，普鲁卡因酰胺，青酶胺，美满霉素，他巴唑肼苯哒嗪，普鲁卡因酰胺，青酶胺，美满霉素，他巴唑/甲巯咪唑等。其中报道比甲巯咪唑等。其中报道比较多的是长期使用丙基硫氧嘧啶引起的较多的是长期使用丙基硫氧嘧啶引起的 ANCAANCA，其特点是滴度高，抗体谱广（抗，其特点是滴度高，抗体谱广（抗原主要是原主要是 MPOMPO，也可同时伴

18、有或单独出现其他靶抗原，如，也可同时伴有或单独出现其他靶抗原，如 PR3PR3，LFLF，CathCath G G，BPIBPI，LYSLYS等）等）。药物诱导性血管炎患者临床表现与原发性血管炎类似，停止丙基硫氧嘧啶用药物诱导性血管炎患者临床表现与原发性血管炎类似，停止丙基硫氧嘧啶用药后，临床症状好转，药后，临床症状好转，ANCAANCA 可转阴。因此，长期使用丙基硫氧嘧啶治疗过程中，可转阴。因此，长期使用丙基硫氧嘧啶治疗过程中，应定期检测应定期检测 ANCAANCA，及早发现药物诱导性血管炎。，及早发现药物诱导性血管炎。（三）（三）ANCAANCA 与其他疾病与其他疾病除原发性血管炎外，其他

19、一些疾病中也可出现除原发性血管炎外，其他一些疾病中也可出现 ANCAANCA，主要为，主要为 p-ANCAp-ANCA，其，其靶抗原并非靶抗原并非 PRPR，MPOMPO，而是，而是 LFLF，Cath GCath G，BPIBPI，LYSLYS等等1 1、慢性炎症性肠病、慢性炎症性肠病(CIBD)(CIBD)CIBDCIBD 是一种消化系统的自身免疫性疾病，包括溃疡性结肠炎（是一种消化系统的自身免疫性疾病，包括溃疡性结肠炎（UCUC），克罗，克罗恩病（恩病（CDCD）两种。以往的）两种。以往的CIBDCIBD 诊断依赖诊断依赖 X X 线检查，内窥镜及组织学诊断，缺乏线检查，内窥镜及组织学诊

20、断，缺乏有效的试验室指标。近年来研究发现有效的试验室指标。近年来研究发现 UCUC 病人血清中病人血清中 ANCAANCA 阳性率为阳性率为 60-8060-80，而而 CDCD 患者的阳性率为患者的阳性率为 10-2010-20，多为多为 p-ANCAp-ANCA，相关靶抗原有相关靶抗原有 BPIBPI 等。等。滴度与疾滴度与疾病的活动度和病程无关。因为病的活动度和病程无关。因为 p-ANCAp-ANCA 在在 UCUC 阳性率高，阳性率高，CDCD 阳性率低，故可作阳性率低，故可作为两者的鉴别诊断及为两者的鉴别诊断及 UCUC 早期诊断指标。早期诊断指标。2 2、结缔组织病、结缔组织病在结

21、缔组织病中，在结缔组织病中，ANCAANCA 阳性主要见于阳性主要见于 SLESLE 和和 RARA，其他结缔组织病中少见。其他结缔组织病中少见。但文献报道在但文献报道在 SLESLE 和和 RARA 阳性率差异特别大（阳性率差异特别大（16-6916-69），这可能与使用方法，抗，这可能与使用方法，抗原基质片及工作人员水平有很大关系。原基质片及工作人员水平有很大关系。SLESLE 中中 ANCAANCA 阳性可能与慢性炎症反应有关，阳性可能与慢性炎症反应有关，如动脉炎，如动脉炎，浆膜炎和浆膜炎和 CRPCRP 增增加等。有报道抗加等。有报道抗 MPOMPO 抗体与抗体与 RARA 的关节外损害及血管损害有关。的关节外损害及血管损害有关。3 3、自身免疫性肝病、自身免疫性肝病在自身免疫性肝病中，也可检测到在自身免疫性肝病中，也可检测到 p-ANCAp-ANCA。在原发性硬化性胆管炎。在原发性硬化性胆管炎(PSC)(PSC)患者中，患者中，p-ANCAp-ANCA 阳性率高达阳性率高达 70-8070-80，是该病重要的血清学指标。，是该病重要的血清学指标。4 4、其他疾病、其他疾病有文献报道，有文献报道，HIVHIV,阿米巴，阿米巴，细菌感染以及不明原因的肺部慢性炎症及纤维化细菌感染以及不明原因的肺部慢性炎症及纤维化患者中有患者中有 p-ANCAp-ANCA 阳性。阳性。