实验一葡萄糖一般杂质检查.pdf

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1、实验一:葡萄糖一般杂质检查验一：葡萄糖一般杂质检查一、教学目的：1掌握葡萄糖中氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐等限量的检方法、原理、反应条件及计算。2熟悉纳氏比色管、验砷瓶、量筒、天平等使用方法。3了解药物一般杂质检查项目的意义。二、实验内容：1氯化物的限量检查 取本品 0.6g，加水溶解使成 25ml，再加稀硝酸 10ml，溶液若不澄清、滤过，置50ml 纳氏比色管中，加水使成40ml，加硝酸银试液1ml，用水稀释至50 ml，摇匀在暗处放置 5 分钟，如发生混浊，与标准氯化钠 6 ml 同法操作所制的对照液比较，不得更深（0.01）。2硫酸盐的限量检查 取本品 2g，加水溶解使成40ml

2、，溶液若不澄清、滤过，置50ml 纳氏比色管中，加稀 HCl2ml，摇匀，加 25 氯化钡溶液 5ml，用水稀释成 50 ml，摇匀，放置10 分钟，如发生混浊，与标准硫酸钾溶液 2 ml 同法操作所制的对照液比较，不得更深（0.01）。3重金属的限量检查 取本品 4g，加水 23 ml 溶解，再加稀醋酸 2ml，加硫化氢试液 10ml，摇匀在暗处放置 10 分钟，与标准铅溶液 2 ml 同法操作所制的对照液比较，不得更深（5ppm）。4铁盐的限量检查 取本品 2g，加水 20 ml 溶解，再加硝酸 3 滴，缓缓煮沸 5 分钟，用水稀释至 45 ml，加硫氰酸铵溶液（3100）3 ml 摇匀，

3、如显色，与标准铁溶液2 ml 同法操作所制的对照液比较，不得更深（0.001）。5砷盐的限量检查 演示。思考题 1在进行氯化物检查、硫酸盐或重金属检查时，遇到有颜色的样品如何处理？2重金属检查有几种方法？本实验采用何种方法？该法的最适pH 为多少？3何谓“限度检查”？杂质限度应如何计算？实验二 特殊杂质检查 一、目的要求：熟悉阿斯匹林、盐酸普鲁卡因中的一些特殊杂质的检查原理及操作方法。二、提要 1.特殊杂质是指药物本身特有的根据其生产主艺、自身牲质，而产生的杂质其检查方法在药典中列在各药品的检查项下。2.特殊杂质的检查方法是根据药物与杂质在理化性质及生物活性上的差异，选择灵敏变高，专属性强的方

4、法做为检查方法 如根据其对光的选择性差异，可选用比色法目视、可见、紫外及原子吸收分光光度法，根据理化学性质上的差异可选薄层层折法，气相色谱法，高压液相法等。3.乙酰水杨酸中游离水杨酸（生产中未反应完全或贮存中水解产生的的检查，采用目视比色法。4.盐酸普鲁卡因发生如下分解反应 普鲁卡因 对氨基苯甲酸 利用盐酸普鲁卡因和对氨基苯甲酸在硅胶 G 簿极上吸附行为不同经层析而达到分离的目的。以一定限量的对氨基苯甲酸对照品为标准进行杂质限量，利用对二甲氨基苯甲醛进行显色。三、实验内容：1.乙酰水杨酸中游离水杨酸检查 取本品 0.lg 加乙醇 1ml 溶解后，加冷水至 50ml 立即加新制的硫酸铁铵溶液 1

5、ml 摇匀 30 秒钟内如显色与对照液精密称取取水杨酸 0.1g 加水溶解后，加冰醋酸1ml 摇匀再加水使成 1000 ml 摇匀，精密量取1 ml，加乙醇1ml，加冷水至50ml 立即加新制的硫酸铁铵溶液 1 ml 摇匀，比较不得更深。2、盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查 标准对氨基苯甲酸的制备：精密称对氨基苯甲酸对照品，加乙醇制成每 ml 含 30ug 的溶液。供试液的制备：精密量取盐酸普鲁卡因注射液加乙醇制成每ml 含2.5mg 的盐酸普鲁卡因溶液。2 薄板的制备：取层析用硅胶G 粉约 2.5g，加适量水约按1:2；1:3调匀，研磨、铺在平滑玻璃板上一般厚度 0.20.3mm 阴干

6、 105C 加热活化 1 小时取出放入密闭干燥器内备用 点样：在制好的薄板上距下端边 2.5cm 处用微量注射器分别吸取对照液和在试液各 lOul 分别点样两点间一般距离1.52.0cm，距边缘一侧 1.52.5cm。展开：用丙酮:0.8 盐酸91 混合液作展开剂 1015 ml 展开剂于层析槽中将点好样的薄板放入饱和 5 分钟用倾斜上行法展开展开长度为1015cm 取出后风干。显色：用喷雾器啧射显色剂对二-甲氨基苯醛溶被使其显色2 对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液looml 加 5ml 冰醋酸。供试溶液如显与对照品相应的杂质斑点与对照品溶液的主斑点比较不得更深。四、注意事项1游离水杨酸检查中样品管应

7、尽量干燥，不得带 过多的水否则样品加醇后不易溶解。2.薄板所用的玻璃必须仔细清洗不附着油污，否则易引起薄层的剥落。3用石膏作粘合剂时此法的关键是控制开始凝固的时间过早倒于玻板上则易流过迟则太粘不能成均匀薄层。4如在空气中点样一般不超过 10 分钟所点圆点直径应小于 3mm 并应分次点以免使圆点扩大，直径太大，所有圆点在统一水平线上面积也应尽可能一致。思考题:1.乙酰水杨酸中游离水杨酸检查中为何要在30秒钟内比色 2.盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸杂质限量是多少 3.TLC 杂质检查有儿种类型 4.举例哪一种杂质检查是通过反应灵敏度来控制的 实验三 盐酸普鲁卡因注射液的含量测定（重氮化法）一、

8、教学目的：1掌握重氮化的反应原理，操作条件及注意事项。2熟悉注射液含量的测定基本方法和计算。3熟悉外指示剂法。二、实验内容：盐酸普鲁卡因含有芳伯氨基，在酸性条件下与亚硝酸钠发生重氮化反应。外指示剂法：精密量取本品适量（约相当于盐酸普鲁卡因0.1g）加水40ml 与（12）盐酸液 15ml，而后置电磁搅拌器上，搅拌使混合均匀，再加溴化钾2g，插入铂电极后，将滴定管插入液面下约 2/3 处，在 1520用 0.05mol/L 亚硝酸钠在搅拌下迅速滴定。，在近终点时将滴定管的尖端提出液面上用少量水将尖端洗涤，洗液并入溶液中，继续缓慢滴定，至用细玻棒蘸取溶液少许，划过涂有含锌碘化钾淀粉糊的瓷板上，即显

9、兰色条痕时，停止滴定，3分钟后再蘸取少量划过一次，如仍显兰色条痕时，即为终点。1ml亚硝酸钠液（0.05mol/L）相当于 13.64mgC13H20N2O2.HCl 思考题：1、加入 KBr 的目的？2、重氮化法的影响因素是什么？3、开始滴定时，滴定管为什么要插入液面，不插入是否可以？4、写出标示量的计算公式。指导思想：为提高对理论知识的深入理解和综合利用的能力，提高理论与实验结合的能力，提高自学能力，适应将来实际参加工作能力，安排一定的设计性试验，同学根据所学有关专业知识并查阅相关文献，自己设计药品质控标准的一些实验方法，及应准备用的仪器、试药、试剂。教师课堂给与点评，并指导同学按正确方法

10、完成实验。本实验为设计性实验，使同学自己根据所学知识设计实验方案，然后进行实验操作，完成用紫外分光光度法测定异烟肼片剂含量 1、同学根据所学有关专业知识按照中国药典的格式自己设计用紫外分光光度法测定异烟肼片剂含量实验方案和操作方法（设计两种方法）及应准备用的仪器、试药、试剂。2、写出预习报告。包括实验目的，原理，实验应用的仪器、试药试剂，操作步骤，计算公式，及实验操作中应注意的问题。然后经教师指导进行实验，写出实验报告。3、异烟肼片标示量（或规格）：50mg，或 100mg：中国药典（2000，1995，1990年版；）教科书，有关药学专业期刊文献 原试验四 氟尿嘧啶的含量测定 氧瓶燃烧法 一

11、、目的要求：学习氧瓶燃烧法的原理及操作技术。二、实验内容：1.燃烧瓶的使用 燃烧瓶系取 500ml 碘瓶一个，在瓶塞底部熔封一根铂丝，下端弯成夹状或螺旋状，长度约为瓶身长度的 2/3。将称取的供试品置于无灰滤纸的中心，按虚线折成后，固定于铂丝下端的弯曲处，使尾部露出，另在燃烧瓶中加适量吸收液，并将瓶颈用水润湿，小心急速通入氧气12 分钟（通气管应接近液面，使瓶内空气尽量排尽），立即盖住瓶口，移至防护设备中，点燃包有供试品的滤纸的尾部，迅速放入燃烧瓶，按紧瓶塞，用水封口，等燃烧完毕后（应无黑色碎片），充分震摇，使生成的烟雾完全吸入吸收液中。然后按规定方法进行测定。2.样品测定 取本品 15mg

12、精密称定，用氧瓶燃烧法进行破坏，以水20ml 为吸收液，待生成的烟雾完全吸入吸收液后，移至100ml 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试液。另取105OC 干燥 1 小时的氟化钠约 25mg，精密称定换算成含氟量（）置100ml 量瓶中，加水溶解稀释至刻度，摇匀。临用前，精密量取 20ml 置另一 100ml 量瓶中加水稀释至刻度，摇匀，做对照液。精密量取供试液与对照液各 2ml，分置 50ml 量瓶中，各加茜素氟蓝试液 10ml摇匀，再各加每 100ml 中含 NaAc 12g，与冰醋酸 6ml 的溶液 3ml，硝酸铈液试液 10ml，加水稀释至刻度摇匀，在暗处放置 1hr，照分光光度法

13、置 2cm 吸收池中，在 610nm 波长处测吸收度，并将供试液的吸收度用空白校正，计算即得。注意事项：1 检查氧瓶有无裂纹，氧瓶必须洗净，无有机物，瓶口湿润，铂丝要干燥。注意安全，燃烧时用干布包裹。2 样品固定松紧适度，以防燃烧时脱落或燃烧不完全。3 燃烧瓶中通入氧气量要适度，少则样品燃烧不完全，太多则燃烧时易 将瓶塞冲起，一般通入 12 分钟为宜。4 样品燃烧完毕应充分振摇至瓶中烟雾消失，为使吸收完全，再放置 15 分钟，并用水封口。思考题：1氧瓶燃烧法的成败关键是什么？2如何做空白？3氧瓶燃烧法用于测定哪类药物？4 写出测得结果的 F 计算公式？实验五 硫酸阿托品注射液的含量测定（酸性染

14、料比色法）一、目的要求：掌握酸性染料比色法测定生物碱制剂的基本原理及操作方法。二、实验内容：1 对照液的制备 精密称取在 120OC 干燥至恒重的硫酸阿托品对照品 25mg至 25ml 量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，至 100ml 量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml 含无水硫酸阿托品 50ug）。2 供试液的制备 精密量取本品适量（约相当硫酸阿托品25mg）至 50ml 量瓶中，加水稀释至刻度摇匀即得。3 测定法 精密量取对照液与供试液各 2ml，分别置于预先精密加入氯仿 10ml 的 60ml 分液漏斗中，各加溴甲酚绿溶液 2ml，摇匀提取 2 分钟后，静置分

15、层，分取氯仿层移置 1cm 吸收池中，以水 2ml 按同法操作所得的氯仿液作空白，在420nm 的波长处分别测定吸收度。三、注意事项：1 本实验所用分液漏斗必须干燥无水 2 供试品和对照品平行操作，提取振摇，放置时间等均应一致。3 用甘油淀粉糊均匀地涂在分液漏斗磨口处。4 分取氯仿层测定时，初流液应弃去，所取氯仿层必须澄清、透明、不混有水珠。5 初次振摇，要放气。四、思考题 1 酸性染料比色法测定生物碱的原理是什么？2 如何选择酸性染料，提取溶剂？3 为何要求标准品与供试品同时操作，振摇和放置时间应一致 4 写出标示量百分含量的计算公式？实验六 高效液相色谱法测定血清茶碱浓度 一、目的要求:掌

16、握离效液相色谱法测定血清茶碱样品制备标准曲线的基本方法及测定前样品的制备处理基本操作方法。二、原理:以-羟乙基茶碱为内标用氯仿/异丙醇 95/5.V/V 的混合液提取血清样品中的茶碱将提取液蒸干后用甲醇复溶进行色谱分析用波长254nm 检测分析物的含量。三、仪器与试剂:（1）.仪器:高效液相色谱仪微量进样器。（2）.试药与配制:-羟乙基茶碱与茶碱标准品乙睛、甲醇、氯仿、异丙醇、无水乙醇均为分析纯去离子重蒸水。配制标准茶碱贮备液:浓度为 1mg/ml 的茶碱乙醇溶液。配制内标乙醇应用液:浓度为 0.2mg/ml 的-羟乙基茶碱乙醇液。配制血清茶碱标准应用液:用无药血清配制茶碱浓度分别为5.010

17、.020.0和 40.0g/m1的血清标准液可先配成 40.0g/ml 的茶碱血清标准液.密封于-20冰箱保存用时以无药血清稀释至所需浓度。配制提取液于 95ml 氯仿中加入异丙醇 5ml。3 色谱条件:反相 C18 色谱柱内填无定型十八烷烧基硅烷流速15ml/mim检测波长 254nm。四、操作步骤:取具塞离心试管七只分别精密加入无药血清血清标准应用液分别含茶碱浓度为50100200 及40.og/ml 质控血清及待测血清各 100l。分别精密加入内标乙醇应用液10l。各试管分别精密加入提取液 15m1。将各离心试管置旋涡振荡辘振荡半分钟不要连续振荡应半分钟内间断 5-6 次防止乳化不易分离

18、。振荡后离心3 分钟 2000 转/分。用尖细吸管吸去上层水相。小心将下层有机相吸取1ml 置另一洁净试管切勿带入水相。在通风柜内氮气 60水浴蒸干。9用甲醇 50l 重溶残留物用微量进样器吸取10l 进样进行色谱分析。5 结果计算:分别测量出标准茶碱应用液的茶碱及内标的峰高比或峰丽积比以浓度为横座标以峰高比或峰面积比为纵座标回归标准曲线方程或做标准曲线 o 测量出质控样品及待测样品中茶碱及内标的峰高比或峰面积比分别代入标准曲线计算样品中茶碱的浓度。实验七 复方乙酰水杨酸片的含量测定 一 目的要求：掌握复方制剂中各成分的分离及含量测定的基本原理和操作方法。二提要：1复方乙酰水杨酸片的处方 乙酰

19、水杨酸 230g 扑热息痛 126g咖啡因 30g 辅料 适量 制成 1000 片 2乙酰水杨酸采用提取容量法：以氯仿提取后蒸干，溶于中性醇，以氢氧化钠测定。咖啡因采用剩余碘量法。以 B 代表咖啡因，2B4I2定过量 2KIH2SO42B.HI.I4K2SO4 I2过量 2Na2S2O32NaINa2S4O6 三实验内容：1.取本品 20 片，精密称定，研细备用。水浴蒸干氯仿时间不宜过长。1、乙酰水杨酸得含量测定：精密量取上述细粉适量（约相当于乙酰水杨酸0.4 克）置分液漏斗中加水 15 ml 摇匀用氯仿振摇提取 4 次 20、10、10、10 ml 氯仿液用同一份水 10 ml 洗涤合并氯仿

20、液，置水浴上蒸（8）干，残渣加中性乙醇（对酚酞指示剂呈中性）20 ml 溶液中，加酚酞指示剂液 3 滴用 0.1 mol/L 氢氧化钠液滴定，即得（每 1ml0.1mol/L 氢氧化钠相当于18.02mgC9H8O4）。2、咖非因的含量测定：精密称取上述细粉适量（约相当于咖啡因 50mg）加稀硫酸 5 ml，振摇数分钟使咖非因溶解，用棉花过滤，滤液置50 ml 容量瓶中，滤器与滤渣用水洗涤 5 次，每次3ml。合并滤液与洗液，精密加0.1 mol/L 碘液 25 ml，用水稀释至刻度，摇匀，在约25 闭光放置 15 分钟，滤过，弃去出滤液，精密量取续滤液25 ml，用 0.05mol/L 硫代

21、硫酸钠液滴定至近终点加淀粉指示剂继续滴定至兰色消失并将滴定结果用空白试验校正即得每 1 ml 0.1 mol/L 碘液相当于 5.306mg 的 C8H10O2N4.H2O 四注意事项：2.片子应尽量研细，不应有所损失。3.扑热息痛的水解，务必要保持微沸状态，否则水解不易完全，影响结果。4.过滤咖啡因与碘形成的沉淀时，需用干燥的滤纸，最初的滤液应弃去 10 至 15ml，过少可能影响碘的浓度，过滤时要防止碘液挥发。5.测定乙酰水杨酸时，锥形瓶应干燥，滴定应迅速。五、思考题：1、如何配制中性醇？2、测定咖啡因为何要做空白试验？如何做？3、碘浓度不准时对结果有何影响？4、写出称量范围，计算公式，及标示量计算公式。5、用硫代硫酸钠滴定时加淀粉指示剂多少毫升？药物分析实验讲义药学院药物分析教研室 2005、3 取本品 10 片，精密测定，研细，精密称取细粉适量（约相当于异烟肼 0.1g），置100 ml 量瓶中，加水适量，超声波振荡5 分钟使溶解并用蒸馏水稀至刻度，摇匀，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，精密量取续滤液1 ml，置另一100 ml 量瓶中，并用蒸馏水稀至刻度，摇匀，于263 nm 波长处测定吸收度，按异烟肼（C6H7N3O）的吸收系数（E1cm）为 307 计算标示量的百分含量。本品含异烟肼（C6H7N3O）应为标示量的95.0105.0。