糖尿病自身抗体.pdf

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1、糖糖 尿尿 病病 自自 身身 抗抗 体体联联 检检 试试 剂剂 盒（玻片法）盒（玻片法）说说 明明 书书【产品名称产品名称】通用名：糖尿病自身抗体联检试剂盒（玻片法）【包装规格包装规格】2020T/盒【预期用途预期用途】本试剂盒用于定性同时检测人血清/血浆中存在的IAA、ICA 和 GAD 抗体。对 I 型糖尿病的诊断和胰岛素治疗效果监测有重要的参考价值。抗胰岛素抗体（IAA）存在于用胰岛素治疗的糠尿病患者的血清中。主要为 IgG，少数接受胰岛素治疗者可查到 IgM，IgA，IgD 及 IgE，其中 IgE 主要出现在对胰岛素过敏反应的患者。Ins-Ab 的产生与胰岛素制剂的免疫原性有关，亦与

2、受药者各体“体质性”不同有关。接受胰岛素治疗后，Ins-Ab 一般在 36 个月出现，912 个月达高峰，以后变化不大。如停止用药，则 39 个月内抗体可消退，停药后再使用胰岛素，抗体迅速出现并可上升到比以前更高的水平。因用药 6个月以后始检出抗体者少见，Ins-Ab 的大量产生可导致患者对胰岛素不敏感。因此，Ins-Ab 的测定为改进糖尿病治疗方案提供重要依据，也是评价药用胰岛素的质量（免疫原性和纯度）的一种可靠指标。抗胰岛细胞抗体（ICA）或称抗胰岛细胞胞浆抗体存在于 1 型糖尿病患者血清中，为一免疫球蛋白，属IgG，对所有胰岛内分泌细胞的胞浆成分都起作用，与胰岛 细胞起反应而产生细胞毒效

3、应。新近发现的1 型糖尿病患者，ICA 阳性率可达 70%90%而非糖尿病群体中仅 0.1%0.5%存在 ICA。1 型糖尿病一级亲属中 5%ICA 阳性，这些个体构成了患 1 型糖尿病的高危人群。许多研究表明，血清中有 ICA 和 Ins-Ab的存在是评价患 1 型糖尿病可能性的一个指标。因此ICA 的血清学检测是早期诊断 1 型糖尿病强有力的工具。抗谷氨酸脱羧酶抗体（GAD）为1 型糖尿病患者血中存在又一自身抗体。人类新发病的1 型糖尿病患者中，70%左右可检测到 GAD-Ab。谷氨酸脱羧酶是抑制性神经递质-氨基丁酸的生物合成酶，有 GAD65和 GAD67 两种形式由同一基因产生，具有高

4、度同源性。存在于脑和胰岛细胞中。1 型糖尿病患者血清中的 GAD-Ab 绝大部分为 GAD65 抗体。针对胰岛 GAD的反应最早出现在疾病临床发病前几年甚至十几年，故在临床前期（无症状）早而准确地预报疾病的发生将有助于干预胰岛细胞破坏，最大限度地保护胰岛细胞的体积。ICA 和 GAD-Ab 是目前诊断成人迟发性自身免疫性糖尿病的两个重要指标。且 GAD-Ab 优于ICA。【检验原理检验原理】本试剂盒应用蛋白质化学技术将高度纯化的胰岛素基因工程抗原、胰岛细胞基质抗原和基因工程GAD 抗原按特定图案设计，固定于活化后的玻璃基质上作为载体，加入患者血清后，血清中的抗体与片基上的抗原结合，再加入示踪物

5、，在底物的作用下形成按点样设计的图形，一次实验即可检测出三种糖尿病患者自身抗体的血清状况，具有省时、高效、高通量平行检测的优点。是现代免疫学技术和蛋白质化学技术的结晶。检测结果既可肉眼定性观察，也可配置阅读仪半定量检测，结果可长期保存，是传统检测方法无可比拟的。【主要组成成份主要组成成份】1)玻璃基片（已点样有胰岛素抗原、胰岛细胞抗原和 GAD 抗原及质控点兔 IgG。不同批号间不能互换）20X1T 片2)标本稀释液（磷酸缓冲液为主，含 BSA、0.1%NaN3，不同批号可互换）1 瓶（10ml）3)示踪物（酶标记SPA，含蛋白稳定剂、0.02%硫柳汞，不同批号间不能互换）1 瓶（3ml）4)

6、显色剂（四甲基联苯胺、醋酸缓冲液，不同批号可互换）1 瓶（3ml）5)洗涤液(磷酸缓冲液为主,含 TW-20、0.1%NaN3，不同批号间可互换)2 瓶（15mlX3，直接使用）6)说明书（不同批号间可通用）1 份7)湿盒自备：于饭盒内放湿纱布两层即可。【贮存条件及有效期贮存条件及有效期】2-8密封保存，避免冻结。有效期10 个月。【适用仪器适用仪器】本公司阅读仪及各类灰度扫描仪。【样本要求样本要求】尽量用新鲜标本，如需保存，可于 2-8冷藏 48小时或-20冻存 4 周（样本应避光）。避免反复冻溶（3 次以上）。避免用溶血、混浊或脂血标本。样本若需运输，应保持 2-8或冻存状态。标本中避免加

7、入抗凝剂或保护剂或防腐剂，以免影响试验结果。【检验方法检验方法】1)将试剂盒平衡至室温。标本稀释：用标本稀释液121（即 15ul 血清标本加于 300ul 稀释液中）稀释血清标本于试管中混匀。2)加样：取出玻璃基片拆封并平放于实验台上，于每方格中加入 300ul 已稀释的标本，注意使标本布满方格。3)孵育：将玻片置于湿盒中并放置 37温育 30 分钟，甩去方格内液体，于每格内加入 6 滴洗涤液，停顿 1 秒钟后甩掉洗液。连续洗涤3 次，最后用蒸馏水流洗 1 秒钟，甩干后在吸水纸上吸干方格周围水滴。4)加示踪物：每格滴 2 滴示踪物，勿溢出方格外。湿盒中 37温育 30 分钟，同上法洗涤 3

8、次，在吸水纸上吸干周围水滴。5)显色：每格加入 2 滴显色剂，37孵育箱显色10-12 分钟。甩去方格内液体，用蒸馏水流洗1秒种。甩干，吸水纸吸干液滴。【检验结果的解释检验结果的解释】1 目测：在白色背景下观察各方格内显色情况，阳性和质控点显兰色点，阴性无色：123A IAAB ICAC GADA1、B1、C1、代表质控点A2、A3 代表 IAA 显色位点B2、B3 代表 ICA 显色位点C2、C3 代表 GAD 显色位点注：每次实验质控点均显色，否则实验无效。2.阅读仪分析在阅读仪上进行，由软件自动分析，自动生成蓝色斑点的灰度值。T/cutoff1.0 为阴性，T/cutoff1.0 为阳性

9、（详见阅读仪说明书）。3判断方法释疑：（1）本系统设计中阴性标本不显色，即为背景色。本基片所指背景是片基基质的颜色、点与点之间的部分为背景。显蓝色斑点色即为阳性。（2）一般情况下标本位点的显色深度不超过质控点。（3）个别情况下，当标本显色较弱时，可出现“空心”或“半空心”，尤其当甩掉显色液吸干后会出现此现象，仍判为阳性。（4）本系统以双位点设计，若双位点中只有一个显色，另一位点未显色，则实验需重复。（5）实验完毕的基片若要长期保存可存放于黑暗干燥处，并做为污染物处理。（6）室温过低（低于 20）会致显色较慢且偏淡，可适当延长时间或置 37恒温箱中解决。（7）本试剂盒可目测判断结果，属定性判断。

10、若要打印结果及半定量判别，则可在阅读仪上进行。【参考值（参考范围）参考值（参考范围）】正常范围应为阴性。即待测标本位点不显色。【检验方法的局限性检验方法的局限性】1.本试剂盒检测结果只作定性辅助诊断，疾病的确诊需要结合临床症状/体征和其他检查方法方可做出综合判断。2.仪器阅读结果只是灰度值之间的差别，不是严格意义上的定量。【产品性能指标产品性能指标】1)阴性符合率：对三个项目的阴性质控标本的检测全部为阴性。2)阳性符合率：对三个项目的阳性质控标本的检测全部为阳性。3)重复性：批内、批间变异系数均15%。【注意事项注意事项】本试剂盒仅供体外诊断用。1)洗涤要彻底，否则易引起非特异显色。尤其方格周

11、围避免残留液滴。2)基片在湿盒和实验台上必须放平，否则易引起液体外溢。3)本试剂盒只作为辅助诊断用，疾病的确诊需结合其他检查和临床症状。4)应避免长时间将基片暴露在光线下，否则影响反应结果。5)玻璃基片须密封防潮，从冷藏环境中取出时，应置室温平衡至潮气尽干后方可开启使用，余者封存置 2-8。6)洗涤时每孔均须加满，防止孔内有游离酶不能洗净。7)试剂置 2-8存放，不能冻结。8)本试剂盒中虽不含人源性血清成分，但应严格按常规作为污染物处理。9)液体中含有微量防腐剂，废弃后应尽量用大水冲洗干净，以免残留或腐蚀下水管。10)废弃的血清标本应按各实验室常规方法严格处理，以免污染环境。【参考文献参考文献

12、】1.Bonifacio E,et al.Quantification of islet cell antibodiesandpredictionofinsulindependentdiabetes.Lancet,1990,335:147-1492.Schmidli R S,et al.High level of concordance betweenassays for glutamic acid decarboxylase antibodies.The first International Glutamic acid DecarboxylaseAntibody Workshop.Diabetes,1994;43:1005-1009【生产企业】【生产企业】