临床免疫测定技术.ppt

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1、临床免疫测定技术（各论）临床免疫测定技术（各论）凝集试验凝集试验lWidalWidal reaction reactionlWeil-Weil-felixfelix reaction reactionlWright test:Wright test:布鲁菌病布鲁菌病l交叉配血试验交叉配血试验本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!相关帮助相关帮助l需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎lfantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库，其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应

2、用评价数据库两部分组成，以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能。全球抗体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台l需要相关的实验室仪器设备、生物试剂、医疗器械、制药设备、医药原料、体外诊断试剂及耗材与技术服务信息的，可以访问探生网biomean进行咨询，期待您的加入本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!WidalWidal reaction reaction（试管内凝集反应）试管内凝集反应）取：取：（1 1：1010）待）待检血清检血清3.0ml3.0ml 生理盐水生理盐水 3.0ml/3.0ml/管管 l 释度释度1:20 1:

3、40 1:80 1:160 1:320 1:6401:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!待测血清的待测血清的抗体效价抗体效价（滴度）：（滴度）：即出现即出现“+”凝集的最终血清稀释度凝集的最终血清稀释度本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!血型鉴定（玻片凝集反应）（直接）血型鉴定（玻片凝集反应）（直接）+抗抗A A标准血清标准血清+抗抗B B标准血清标准血清 待测待测RBCRBC待测待测RBCRBCA A型型 B B型型本文由探生科技技术人员

4、提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!乳胶凝集试验乳胶凝集试验(间接间接)带现象带现象Zone Zone phenomenonphenomenon前带前带prezoneprezone后带后带postzonepostzone本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!1 1）正向间接凝集试验）正向间接凝集试验 (用抗原致敏载体用抗原致敏载体-检测检测AbAb)2 2）反向间接凝集试验反向间接凝集试验间接凝集间接凝集(用抗体致敏载体用抗体致敏载体-检测检测A

5、gAg）3 3）间接凝集间接凝集抑制抑制试验试验 4)4)协同凝集试验协同凝集试验 (SPA(SPA抗体致敏抗体致敏-测抗原测抗原)本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!反向间接血凝试验反向间接血凝试验(测测Ag)Ag)1/21/41/81/161/321/641/1281/2561/5121/1024Pos.Neg.Titer648512232128324Patient12345678本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!抗球蛋白抗抗球蛋白抗体试验体试验-commbscommbs （抗抗RBCRBC不完不

6、完全抗体）全抗体）A A（间接法间接法游离）游离）B B（直接法直接法结合）：结合）：本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!(In fluid phase)(In fluid phase)絮状沉淀试验：絮状沉淀试验：AgAgAbAb环环状状沉沉淀淀试试验验本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!(In gel phase)(In gel phase)single gel diffusion testsingle gel diffusion test 抗原浓度的抗原浓度的标准曲线标准曲线操作：操作：抗体抗体混于

7、凝胶中混于凝胶中 抗原抗原加入孔内加入孔内 抗原自由扩散抗原自由扩散 测定沉淀环直径测定沉淀环直径 在标准曲线上查找在标准曲线上查找 相应抗原浓度相应抗原浓度本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!影响因素影响因素:1.1.抗原分子量：与扩散速度、沉淀环反相关抗原分子量：与扩散速度、沉淀环反相关2.2.抗体种类：兔抗血清优于马、羊抗体种类：兔抗血清优于马、羊3.3.抗体稀释度：抗体浓度大沉淀环小抗体稀释度：抗体浓度大沉淀环小4.4.扩散时间：抗原含量高，扩散时间长扩散时间：抗原含量高，扩散时间长5.5.扩散温度：扩散温度：4 43737内温度与扩散速度

8、正相内温度与扩散速度正相关关6.6.琼脂板厚度：与沉淀环反相关琼脂板厚度：与沉淀环反相关本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!double gel diffusion testdouble gel diffusion test原理原理:将将可溶性抗原可溶性抗原和和抗体抗体置于置于琼脂凝胶板的对应孔中，琼脂凝胶板的对应孔中，两者各自在凝胶中向四周两者各自在凝胶中向四周自由扩散，当抗原与抗体自由扩散，当抗原与抗体相遇相遇，在，在比例合适比例合适时形成时形成沉淀沉淀线线。本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!琼脂

9、双向扩散试验的琼脂双向扩散试验的应用应用l1.1.检测未知抗原或抗体检测未知抗原或抗体l2.2.抗原性质分析抗原性质分析 l3.3.抗体效价滴定抗体效价滴定l4.4.抗原或抗体纯度鉴定抗原或抗体纯度鉴定本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!1.1.检测未知抗原或抗体检测未知抗原或抗体本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!A:A:浓度浓度AgAg、AbAb及扩散率近似；及扩散率近似；B B：浓度浓度AgAg、AbAb近似，扩散率近似，扩散率AgAgAbAb ；C C：浓度浓度AgAg、AbAb近似，扩散率近似

10、，扩散率AgAgAbAbD D：浓度浓度AgAgAbAb，扩散率近似；扩散率近似；E E：浓度浓度AgAgAbAb，扩散率扩散率AgAgAbAb ；F F：浓度浓度AgAgAbAb，扩散率扩散率AgAgAbAb ；本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!2.2.抗原性质分析抗原性质分析本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!3.3.抗体效价滴定抗体效价滴定本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!4.4.抗原或抗体纯度鉴定抗原或抗体纯度鉴定本文由探生科技技术人员提供,Fa

11、ntibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!l l免疫浊度试验免疫浊度试验(略略)l l免疫球蛋白的检测（简）免疫球蛋白的检测（简）本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!年年 龄龄 IgG IgA IgMIgG IgA IgM脐脐血血 6.56.516.0 0.0116.0 0.010.04 0.04 0.250.251 1月月 2.52.59.0 0.029.0 0.020.5 0.200.5 0.200.80.82 29 9月月 2.02.09.0 0.049.0 0.040.8 0.250.8 0.251.01.010101212月月 2

12、.92.910.7 0.1510.7 0.150.9 0.350.9 0.351.51.51 15 5岁岁 3.43.412.4 0.1512.4 0.151.6 0.451.6 0.452.02.06 61212岁岁 6.56.516.0 0.3516.0 0.352.5 0.502.5 0.502.52.512126060岁岁 6.56.516.0 0.4016.0 0.403.5 0.503.5 0.503.03.0 健康人血清健康人血清IgIg含量（含量（g/Lg/L）本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!免疫固定电泳（测免疫固定电泳（测M蛋

13、白）蛋白）本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!CH50(complement CH50(complement hemolysis hemolysis 50%).50%).原理：组分和功能完整原理：组分和功能完整的补体系统能使抗体致的补体系统能使抗体致敏的羊红细胞（敏的羊红细胞（SRBCSRBC）发生溶血反应。在一定发生溶血反应。在一定范围内，范围内，SRBCSRBC溶血程度溶血程度与补体总活性成正相与补体总活性成正相关。以溶血百分率作纵关。以溶血百分率作纵坐标，相应的血清量为坐标，相应的血清量为横坐标绘图，在一个适横坐标绘图，在一个适当的、稳定的反

14、应体系当的、稳定的反应体系中，溶血程度与补体剂中，溶血程度与补体剂量依赖呈一个量依赖呈一个S S形曲线形曲线 本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!Enzyme linked Enzyme linked immunosorbentimmunosorbent assay assay （ELISAELISA）l原理（原理（PrinciplePrinciple）：将抗原或抗体结合到将抗原或抗体结合到某固相载体表面，保持其免疫活性，测定时某固相载体表面，保持其免疫活性，测定时,把被测把被测samplesample和和conjugateconjugate按不同

15、的步骤与固按不同的步骤与固相载体上的相载体上的immunosorbentimmunosorbent反应。用洗涤的方反应。用洗涤的方法使与固相载体上形成的法使与固相载体上形成的immunocompleximmunocomplex与其与其他物质分开，再加入酶反应他物质分开，再加入酶反应substratesubstrate，经酶经酶的催化作用后的催化作用后substratesubstrate变为有色产物。产物变为有色产物。产物的量与标本中被检物的量直接相关。的量与标本中被检物的量直接相关。本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!ELISAELISA操作的基本

16、步骤：操作的基本步骤：l标本的收集、运送和保存标本的收集、运送和保存l试剂准备试剂准备l加样加样l温育温育l洗板洗板l显色显色l比色比色l结果判断结果判断l结果报告及解释结果报告及解释本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!1 1、标本的收集、运送和保存、标本的收集、运送和保存lELISAELISA检测分析用检测分析用标本标本 血清（浆）血清（浆）特殊项目用：特殊项目用：唾液、脑脊液、尿液、粪便等唾液、脑脊液、尿液、粪便等lELISAELISA检测分析的检测分析的对象对象 病原体抗原病原体抗原/抗体抗体 Tumor markTumor mark、hor

17、monehormone、cytokine et alcytokine et all采集、运送与保存的注意点：采集、运送与保存的注意点：采集时间、运送条件、暂存点温度采集时间、运送条件、暂存点温度本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!l可能影响测定结果的标本因素可能影响测定结果的标本因素一、内源性（标本内）一、内源性（标本内）类风湿因子（类风湿因子（rheumatoid factorrheumatoid factor）补体（补体（complementcomplement）异嗜性抗体（异嗜性抗体（heterophilicheterophilic anti

18、body antibody）治疗或诊断用鼠抗体（抗鼠抗体）治疗或诊断用鼠抗体（抗鼠抗体）自身抗体或溶菌酶等自身抗体或溶菌酶等二、外源性（操作）二、外源性（操作）溶血、反复冻融溶血、反复冻融 细菌污染细菌污染 储存时间过长储存时间过长 标本凝固不全标本凝固不全本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!l对策：对策：1 1、稀释标本、稀释标本 2 2、改变选用的酶标抗体、改变选用的酶标抗体 3 3、预封闭（变性、预封闭（变性IgGIgG）4 4、加入某些还原剂加入某些还原剂 5 5、血清标本的补体灭活（、血清标本的补体灭活（5630min5630min）6

19、6、选择包被或标记抗体如选择包被或标记抗体如F(ab)F(ab)2 2片段片段 7 7、用理化方法解离自身抗体、用理化方法解离自身抗体 8 8、标本中添加、标本中添加CuCu2+2+离子或卵白蛋白离子或卵白蛋白 等等等等本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!2 2、试剂准备、试剂准备l1 1、实验开始前，将试剂盒从冰箱取出置室、实验开始前，将试剂盒从冰箱取出置室温放置温放置20min20min以上启用，谓平衡（以上启用，谓平衡（balancebalance）目的：目的：1 1）保证反应温度的一致性）保证反应温度的一致性 2 2）去湿化，保证试剂浓度）

20、去湿化，保证试剂浓度l2 2、稀释液的质量和特殊试剂配制的要求、稀释液的质量和特殊试剂配制的要求本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!3 3、加样、加样l原则：量准原则：量准l 操作规范操作规范l量准量准移液枪的状态与正确使用移液枪的状态与正确使用l操作规范操作规范 正确使用加样器正确使用加样器本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!3 3、加样、加样l操作规范操作规范 掌握操作要领掌握操作要领 吸头与加样器上吸头套密闭吸头与加样器上吸头套密闭 吸头进入液体的深度要适宜吸头进入液体的深度要适宜 放送液体注意角

21、度（放送液体注意角度（10104040）位置（下位置（下1/31/3）速度（不宜太快）速度（不宜太快）关注加样器的状态关注加样器的状态本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!4 4、温育（、温育（incubationincubation）l温育是温育是ELISAELISA检测反应中可能影响其检测结果检测反应中可能影响其检测结果的最为关键的一个因素。的最为关键的一个因素。l液相的待测抗原液相的待测抗原/抗体与固相的抗体抗体与固相的抗体/抗原反应抗原反应需要一定的温度与时间，

22、以保证结合反应充分。需要一定的温度与时间，以保证结合反应充分。l温育所需要的温育所需要的时间时间与反应温度成反比。与反应温度成反比。l温育温度：温育温度：3737、室温、室温、4343和和2 288l避免避免“边缘效应边缘效应”。本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!5 5、洗板（、洗板（washingwashing）l通过洗涤将特异性结合与固相的抗原或抗体与反应通过洗涤将特异性结合与固相的抗原或抗体与反应温育过程中可能非特异吸附及游离的成分分离，完温育过程中可能非特异吸附及游离的成分分离，完成固相免疫检测程序保证测定的特异性。成固相免疫检测程序保证

23、测定的特异性。l洗涤液洗涤液 :0.05%:0.05%tweentween-phosphate-buffer saline pH7.4-phosphate-buffer saline pH7.4吐温吐温-20(-20(山梨醇山梨醇-20)20)一种非离子去垢剂一种非离子去垢剂含亲水含亲水/疏疏水基团水基团本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!l在洗涤中的作用是通过其疏水基团与被动吸附于在洗涤中的作用是通过其疏水基团与被动吸附于固相载体上蛋白的疏水键相互作用以削弱之；同固相载体上蛋白的疏水键相互作用以削弱之；同时通过其亲水基团结合液相中水分子的作用，促

24、时通过其亲水基团结合液相中水分子的作用，促使非特异的蛋白质吸脱。使非特异的蛋白质吸脱。l吐温吐温-20-20的浓度的浓度（2%2%）l洗涤用量与次数洗涤用量与次数本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!l例：例：选择选择4 4条条8 8孔的已包被抗原（孔的已包被抗原（HBsAgHBsAg）ELISAELISA板条板条每每2 2条分别加条分别加同同一份一份弱阳性弱阳性和和阴性阴性样本样本然后按试剂盒的操作说明加然后按试剂盒的操作说明加conjugateconjugate、温育温育洗涤：洗涤：1 1排排4 4孔洗孔洗1 1次次 4 4排排4 4孔洗孔洗4

25、4次次 2 2排排4 4孔洗孔洗2 2次次 3 3排排4 4孔洗孔洗3 3次次 8 8排排4 4孔洗孔洗8 8次次加底物，显色，比色加底物，显色，比色评判评判原则原则-阳性阳性/阴性值保持阴性值保持最大不变最大不变的次数的次数本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!6 6、显色、显色(Color is appeared)(Color is appeared)l添加酶特异性底物添加酶特异性底物(HRP-TMB/OPD)(HRP-TMB/OPD)l保证底物溶液的有效性保证底物溶液的有效性(无色、避光、显色无色、避光、显色)l反应温度（反应温度（3737、室

26、温）、室温）l反应时间（反应时间（252530min30min）l终止反应（酸溶液终止反应（酸溶液-2mol/L sulfate acid-2mol/L sulfate acid）l及时比色及时比色本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!7 7、比色、比色 (By the plate reader)(By the plate reader)l加酸终止显色反应后，比色测定前应振荡加酸终止显色反应后，比色测定前应振荡混匀混匀l测定时，要注意酶标仪的测定时，要注意酶标仪的波长波长是否已调至合适是否已调至合适l比较好的酶标仪可选择比较好的酶标仪可选择单单波长或

27、波长或双双波长比色测定波长比色测定 所谓双波长比色，即在敏感波长（此时对所显色所谓双波长比色，即在敏感波长（此时对所显色 具最大光吸收）如具最大光吸收）如450 nm450 nm和非敏感波长（所测得和非敏感波长（所测得 的光吸收为微孔板上的划痕、污迹以及指纹等所的光吸收为微孔板上的划痕、污迹以及指纹等所 致），最后从仪器得到的读数为在敏感波长测得致），最后从仪器得到的读数为在敏感波长测得 的吸光度与非敏感波长测得的的吸光度与非敏感波长测得的吸光度之差。吸光度之差。本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!8 8、结果判断、结果判断l临床临床ELISAEL

28、ISA检测的结果报告形式检测的结果报告形式 定性（阴定性（阴/阳）阳）定量（量值定量（量值）lELISAELISA定性测定的定性测定的“阴性阴性”和和“阳性阳性”的判断依据的判断依据是试剂盒所确定的阳性判断值（是试剂盒所确定的阳性判断值（cut-offcut-off）。）。lELISAELISA定量测定的定量测定的“量值量值”依据是试剂盒中所带标依据是试剂盒中所带标准品同时测定出的剂量反应曲线（标准曲线）。准品同时测定出的剂量反应曲线（标准曲线）。lcut-offcut-off的建立的建立(略略)lS/CO1S/CO1时判为阳性时判为阳性lS/NS/N或或P/N2.1P/N2.1阳性为阳性为本

29、文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!l“灰区灰区”（例（例-HBsAgHBsAg）本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!9 9、结果报告及解释、结果报告及解释l结果报告根据测定性质，定性结果报告根据测定性质，定性-阴性阴性/阳性阳性 定量定量-具体数值具体数值l结果解释结合所测项目的相关知识（临床意义），结果解释结合所测项目的相关知识（临床意义），考虑各种可能影响的因素考虑各种可能影响的因素（关注测定操作中的各环节，尤其是加样、温育和（关注测定操作中的各环节，尤其是加样、温育和洗涤）洗涤）本文由探生科技技术

30、人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!例举：临床可能出现的问题及原因例举：临床可能出现的问题及原因现象：现象：1 1、相同的标本两次测定的结果不一致、相同的标本两次测定的结果不一致原因：加样原因：加样/试剂量不准，板孔间有差异试剂量不准，板孔间有差异 加样过快，孔间发生污染加样过快，孔间发生污染 加错样本加错样本 加样加样/试剂时，落在非包被区试剂时，落在非包被区 不同批号的试剂混用不同批号的试剂混用 温育、洗涤及反应时间不一致温育、洗涤及反应时间不一致 孔内污染杂物孔内污染杂物 酶标仪滤光片不正确酶标仪滤光片不正确 血清分离不充分，纤维蛋白原或血细胞入孔血清分离不充

31、分，纤维蛋白原或血细胞入孔 本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!现象：现象：2 2、弱阳性质控样本检测不出、弱阳性质控样本检测不出原因：温育时间或温度不够，显色反应时间过短，原因：温育时间或温度不够，显色反应时间过短，配置缓冲液（洗涤液）的蒸馏水有问题配置缓冲液（洗涤液）的蒸馏水有问题现象：现象：3 3、阳性对照不显色、阳性对照不显色原因：漏加酶结合物原因：漏加酶结合物 洗涤液配置？（含有酶抑制物洗涤液配置？（含有酶抑制物-NaN-NaN3 3）漏加显色剂，错加（将终止液误为显色液）漏加显色剂，错加（将终止液误为显色液）现象：现象：4 4、全部孔都

32、有显色、全部孔都有显色原因：洗涤不够原因：洗涤不够 显色液变质显色液变质 底物或洗涤液被酶污染底物或洗涤液被酶污染本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!临床临床ELISAELISA测定的常用模式测定的常用模式l一、双抗体夹心检测抗原一、双抗体夹心检测抗原l二、竞争法检测抗原二、竞争法检测抗原l三、间接法检测抗体三、间接法检测抗体l四、竞争法检测抗体四、竞争法检测抗体l五、固相捕获法检测抗体五、固相捕获法检测抗体l六、双抗原夹心检测抗体六、双抗原夹心检测抗体l七、七、ABS-ELISAABS-ELISA及其他及其他本文由探生科技技术人员提供,Fanti

33、body全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!一、双抗体夹心检测抗原一、双抗体夹心检测抗原例：例：ELISAELISA双抗体夹心法定性检测乙型肝炎表面抗原双抗体夹心法定性检测乙型肝炎表面抗原原理：原理：本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!AbAbAgAgAbAb*AbAb Ag Ag AbAb*AbAb Ag Ag Ag Ag AbAb*AbAb*Ag Ag AbAb*a b c d a b c d本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!AbAb Ag Ag AbAb Ag Ag（b b复合物）复合物）(1)

34、(1)AbAb Ag AgAbAb*AbAb Ag Ag AbAb*（a a复合物）复合物）(2)(2)本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!HooKHooKS S效效应（钩状效状效应）本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!l评价：评价：被检测的抗原具有两个以上抗原决定族（全抗原）被检测的抗原具有两个以上抗原决定族（全抗原）标本中标本中RFRF会充当抗原分子（干扰）会充当抗原分子（干扰）一步法简便、快捷；存潜在缺陷一步法简便、快捷；存潜在缺陷(hooks effect)(hooks effect)其他其他-

35、判断时判断时ODOD值落在值落在“灰色区灰色区”？假阴性？（假阴性？（hooks effect/hooks effect/变异）变异）假阳性假阳性?本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!二、竞争法检测抗原二、竞争法检测抗原 例例:T:T3 3、T T4 4等激素或地高辛、茶碱等药物浓度检测等激素或地高辛、茶碱等药物浓度检测本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!l评价：评价：结合于固相的酶标记抗原量与被测抗原量呈反比结合于固相的酶标记抗原量与被测抗原量呈反比 检测对象为小分子蛋白（半抗原）检测对象为小分子蛋白

36、（半抗原）检测中需获得酶标记的小分子半抗原（制备难）检测中需获得酶标记的小分子半抗原（制备难）运用于仪器的自动化检测运用于仪器的自动化检测 本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!三、间接法检测抗体三、间接法检测抗体例例:ELISA:ELISA间接法检测各类病原体特异性抗体（间接法检测各类病原体特异性抗体（IgGIgG）本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!l评价：评价：通用性大。只要更换固相抗原，同一种酶标记体通用性大。只要更换固相抗原，同一种酶标记体 体体（IgGIgG/IgAIgA、M M）可用以各种与

37、抗原相应的抗体检可用以各种与抗原相应的抗体检 测。测。标本高浓度时易受非特异标本高浓度时易受非特异IgGIgG的干扰（稀释）的干扰（稀释）易受其他因素的影响（包被抗原的纯度）易受其他因素的影响（包被抗原的纯度）本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!四、竞争法检测抗体四、竞争法检测抗体l抗体的检测一般不选用竞争法。当已知抗原难以纯化或抗体的检测一般不选用竞争法。当已知抗原难以纯化或抗原抗原/抗体的结合特异性不稳定时抗体的结合特异性不稳定时 实例实例-ELISA-ELISA竞争法检测乙型肝炎病毒核心抗体竞争法检测乙型肝炎病毒核心抗体 （基因工程表达的（基

38、因工程表达的HBcAgHBcAg）固相板（包被固相板（包被HBcAgHBcAg ）+待测标本待测标本 +酶标记抗酶标记抗-HBcHBc 待测标本中抗待测标本中抗-HBcHBc/酶标记抗酶标记抗-HBcHBc （竞争）竞争）固相板（包被固相板（包被HBcAgHBcAg ）|酶标记抗酶标记抗-HBcHBc与固相板（包被与固相板（包被HBcAgHBcAg）随随 待测标本中抗待测标本中抗-HBcHBc 的浓度增加的浓度增加 而而 减少减少 本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!五、固相捕获法检测抗体五、固相捕获法检测抗体l间接间接ELISAELISA一般仅适

39、用于检测总抗体或一般仅适用于检测总抗体或IgGIgG型抗型抗体，若用体，若用l抗人抗人IgMIgM作为二抗，使用时需进行标本的预处作为二抗，使用时需进行标本的预处理理l目前临床检测抗体目前临床检测抗体IgMIgM时多采用捕获法时多采用捕获法l标本检测时要求稀释（除干扰）标本检测时要求稀释（除干扰）本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!六、双抗原夹心检测抗体六、双抗原夹心检测抗体例例:ELISA:ELISA双抗原夹心法定性检测抗双抗原夹心法定性检测抗HBsHBs原理：利用

40、针对抗体不同位点的双抗原，将其中一原理：利用针对抗体不同位点的双抗原，将其中一 种（纯化）抗原直接包被，而将另一种抗原种（纯化）抗原直接包被，而将另一种抗原 进行酶标记，用于检测相应抗体。进行酶标记，用于检测相应抗体。（一步（一步/二步法）二步法）注意：抗注意：抗HBsHBs为中和抗体（为中和抗体（10U/L10U/L；100U/L100U/L）待检标本使用防腐剂应避免待检标本使用防腐剂应避免NaNNaN3 3 疑示假阳性疑示假阳性 中和试验中和试验 标本无需稀释可避免非特异性标本无需稀释可避免非特异性IgGIgG干扰，灵敏干扰，灵敏 度提高度提高本文由探生科技技术人员提供,Fantibody

41、全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!七、七、ABS-ELISAABS-ELISA及其他及其他lABS-ELISA:(ABS-ELISA:(avidin avidin biotin-system)biotin-system)的略语的略语ABSABS，指亲和素生物素系统。指亲和素生物素系统。l其他其他ELISAELISA：酶联免疫荧光测定酶联免疫荧光测定 斑点斑点-ELISA-ELISA 酶联免疫化学发光测定酶联免疫化学发光测定 酶联免疫电转移印迹法酶联免疫电转移印迹法本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!室内质量控制室内质量控制（internal quality internal quality controlcontrol，IQCIQC）室间质量控制室间质量控制（external quality external quality controlcontrol，EQCEQC）质量保证质量保证（quality quality assuranceassurance，QA QA）本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!谢谢 谢谢本文由探生科技技术人员提供,Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家!