核酸凝胶电泳技术.ppt

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1、核酸凝胶电泳技术核酸凝胶电泳技术Made by Made by lionchplionchp一一 原理原理电荷效应：电荷效应：QQVV（可忽略可忽略）分子筛效应：分子筛效应：MMVV（主要主要）电渗：电渗：不计不计M VM V核酸显酸性，在缓冲液中带负电：核酸显酸性，在缓冲液中带负电：向正极向正极电泳电泳电泳速率影响因素：电泳速率影响因素：DNADNA大小、形状、带电大小、形状、带电 量量三种质粒电泳速率三种质粒电泳速率二二 三种凝胶电泳三种凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳：琼脂糖凝胶电泳：特点：特点：平躺式、平躺式、影响因素影响因素DNADNA构象：构象：镶入染料：镶入染料：SDS-PAGESDS-P

2、AGE：特点：特点：竖式电泳，精确竖式电泳，精确SDSSDS的作用：的作用：脉冲场电泳：脉冲场电泳：优点：优点：分离能力更强分离能力更强原理：原理：三三 电泳后的观察电泳后的观察-EB-EB染色染色EBEB：溴乙锭，可镶嵌入，核酸的碱基对平溴乙锭，可镶嵌入，核酸的碱基对平面间对面间对DNADNA染色，染色，300nm300nm紫外灯下发出橘黄紫外灯下发出橘黄色荧光色荧光EBEB嵌入碱基对间，可引起嵌入碱基对间，可引起DNADNA框移：框移：有毒，有毒，可破坏可破坏DNADNA观察方法：观察方法：电泳后，电泳后，300nm300nm紫紫外线照射，发外线照射，发荧光荧光处为处为DNADNADNADNA量越大，荧光越强量越大，荧光越强四四 电泳缓冲液要求电泳缓冲液要求有缓冲液，有缓冲液，DNADNA才电离才电离：带负电，向正极移带负电，向正极移动动三种常用缓冲液：三种常用缓冲液：TAETAE：TrisTris-乙酸乙酸+EDTA+EDTATBETBE：TrisTris-硼酸硼酸+EDTA+EDTATPETPE：TrisTris-磷酸磷酸+EDTA+EDTA五五 对照物对照物-Marker-Marker本章总结本章总结