DNA的粗提取和鉴定 (2).ppt

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1、1课题课题 DNA的的粗粗提取与鉴定提取与鉴定染色体成分染色体成分蛋白质蛋白质RNA(少量少量)DNA1.提取DNA的基本思路：利用利用DNADNA与与RNARNA、蛋白质和脂质等在物理和化学、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取性质方面的差异，提取DNADNA，去除其他成分。，去除其他成分。2 DNA DNA的溶解性的溶解性DNADNA和蛋白质等成分和蛋白质等成分在不同浓度的在不同浓度的NaClNaCl溶液溶液中溶解度不同中溶解度不同利用这一特点，利用这一特点，选择适当的盐浓度选择适当的盐浓度就能使就能使DNA充分溶解，充分溶解，而使杂质沉淀；而使杂质沉淀；或者让其他成分溶解，或者

2、让其他成分溶解，DNA析出析出2.DNA2.DNA等大分子的理化性质等大分子的理化性质 DNA不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液 DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性3DNADNA不溶于酒精溶液，不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。将将DNADNA与蛋白质进一步分离。与蛋白质进一步分离。DNA不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液 DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性 蛋白酶蛋白酶水解蛋白质，水解蛋白质，对对DNADNA没有影响没有影响 高高 温温大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受60608080 而而DNADNA在在8

3、080以上才会变性以上才会变性 洗涤剂洗涤剂溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质 但对但对DNADNA没有影响没有影响43.DNA3.DNA3.DNA3.DNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定 1 1原理、方法和目的原理、方法和目的基本原理基本原理基本原理基本原理方法方法方法方法目的目的目的目的DNADNADNADNA在不同在不同在不同在不同浓浓浓浓度的度的度的度的NaClNaClNaClNaCl溶液中的溶解度不同，溶液中的溶解度不同，溶液中的溶解度不同，溶液中的溶解度不同，在在在在0.14 mol/L0.14 mol/L0.14 mol/L0.14

4、 mol/L的的的的NaClNaClNaClNaCl溶液中的溶解度最低溶液中的溶解度最低溶液中的溶解度最低溶液中的溶解度最低溶于溶于溶于溶于NaClNaClNaClNaCl溶液中并溶液中并溶液中并溶液中并稀稀稀稀释释释释NaClNaClNaClNaCl溶液溶液溶液溶液为为为为2 mol/L2 mol/L2 mol/L2 mol/L时时时时，DNADNADNADNA溶解，而部溶解，而部溶解，而部溶解，而部分蛋白分蛋白分蛋白分蛋白质发质发质发质发生生生生盐盐盐盐析生成沉淀，通析生成沉淀，通析生成沉淀，通析生成沉淀，通过过滤过过滤过过滤过过滤可可可可除去部分蛋白除去部分蛋白除去部分蛋白除去部分蛋白质

5、质质质及不溶于及不溶于及不溶于及不溶于NaClNaClNaClNaCl溶液的溶液的溶液的溶液的杂质杂质杂质杂质当当当当NaClNaClNaClNaCl溶液稀溶液稀溶液稀溶液稀释释释释至至至至0.14 mol/L0.14 mol/L0.14 mol/L0.14 mol/L时时时时，DNADNADNADNA析析析析出，出，出，出，过滤过滤过滤过滤可除去溶于可除去溶于可除去溶于可除去溶于NaClNaClNaClNaCl溶液的部分蛋白溶液的部分蛋白溶液的部分蛋白溶液的部分蛋白质质质质和其他和其他和其他和其他杂质杂质杂质杂质DNADNADNADNA不被蛋白不被蛋白不被蛋白不被蛋白酶酶酶酶所水解所水解所水

6、解所水解加入嫩肉粉加入嫩肉粉加入嫩肉粉加入嫩肉粉嫩肉粉中含木瓜蛋白嫩肉粉中含木瓜蛋白嫩肉粉中含木瓜蛋白嫩肉粉中含木瓜蛋白酶酶酶酶，水解蛋白，水解蛋白，水解蛋白，水解蛋白质质质质（酶的专一性）酶的专一性）DNADNADNADNA不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液加入冷却酒加入冷却酒加入冷却酒加入冷却酒精精精精(95%)(95%)(95%)(95%)DNADNADNADNA析出，除去溶于酒精的蛋白析出，除去溶于酒精的蛋白析出，除去溶于酒精的蛋白析出，除去溶于酒精的蛋白质质质质DNADNADNADNA可被二苯胺染成可被二苯胺染成可被二苯胺染成可被二苯胺染成蓝蓝蓝蓝色色色色加入二

7、苯胺，加入二苯胺，加入二苯胺，加入二苯胺，并沸水浴并沸水浴并沸水浴并沸水浴鉴鉴鉴鉴定定定定DNADNADNADNA高温高温DNADNA耐高温耐高温DNADNA和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、DNADNA热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受60608080的高温，而的高温，而DNADNA在在8080以上才会变性。以上才会变性。DNADNA对洗涤剂耐受性对洗涤剂耐受性 洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNADNA没有影响。没有影响。加入加入加入加入洗涤剂洗涤剂51 1）不同浓度）不同浓度NaClNaCl中中DN

8、ADNA溶解度不同。溶解度不同。2 2）DNADNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同，与其他细胞成分在酒精中溶解度不同，DNADNA不溶于酒精，细不溶于酒精，细胞中某些蛋白质则溶于酒精。胞中某些蛋白质则溶于酒精。3 3）DNADNA和蛋白质对酶耐受性不同：酶的专一性和蛋白质对酶耐受性不同：酶的专一性蛋白酶水解蛋蛋白酶水解蛋白质。但是对白质。但是对DNADNA没有影响。没有影响。4 4）DNADNA和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、和蛋白质对高温耐受性不同：蛋白质、DNADNA热稳定性不同。热稳定性不同。大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受60608080的高温，而的高温，而DNADNA在在

9、8080以上才会变以上才会变性。性。5 5）DNADNA和蛋白质对洗涤剂耐受性不同：洗涤剂能够瓦解细胞膜，和蛋白质对洗涤剂耐受性不同：洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对但对DNADNA没有影响。没有影响。提取提取DNA的原理包括的原理包括DNA的的 两个方面两个方面 溶解性和耐受性溶解性和耐受性1.DNA的粗提取的粗提取实验原理实验原理62.2.2.2.实验材料实验材料实验材料实验材料动物动物动物动物鸡血细胞液的优点鸡血细胞液的优点鸡血细胞液的优点鸡血细胞液的优点提醒：提醒：提醒：提醒：人和哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核，也没有人和哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核，也没有人和哺乳动物成熟的红细胞中不

10、含细胞核，也没有人和哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核，也没有DNADNADNADNA，不适于作为，不适于作为，不适于作为，不适于作为DNADNADNADNA提取的材料，但却是提取血红蛋白的提取的材料，但却是提取血红蛋白的提取的材料，但却是提取血红蛋白的提取的材料，但却是提取血红蛋白的理想材料。理想材料。理想材料。理想材料。鸡血红细胞、白细胞中都有细胞鸡血红细胞、白细胞中都有细胞核，含大量的核，含大量的DNA,DNA,既经济又易取既经济又易取 植物：新鲜菜花、蒜黄、菠菜等。植物：新鲜菜花、蒜黄、菠菜等。73 3、方法与过程、方法与过程 1).1).制鸡血细胞液制鸡血细胞液0.1g/mL柠檬酸檬酸

11、钠100mL活活鸡鲜血鸡鲜血180mL500mL烧杯中，玻棒烧杯中，玻棒搅拌搅拌，离心或静置沉淀。离心或静置沉淀。离心或静置后去掉上清液离心或静置后去掉上清液血浆血浆血细胞血细胞8方法步骤方法步骤 加入物质加入物质 目的目的 1 1.制备鸡血细胞液制备鸡血细胞液 柠檬酸钠溶液柠檬酸钠溶液 2 2.提取鸡血细胞细胞核物质提取鸡血细胞细胞核物质 20 m120 m1蒸馏水（过滤：去除破裂的细胞膜和核膜等）蒸馏水（过滤：去除破裂的细胞膜和核膜等）幻灯片 18 3 3.溶解细胞核内的溶解细胞核内的 DNADNA 2 mo12 mo1 L L 的的NaClNaCl溶液溶液4040mLmL 幻灯片 18

12、4 4.析出含析出含DNADNA的黏稠物的黏稠物 蒸馏水蒸馏水 5 5.滤取含滤取含DNADNA的黏稠物的黏稠物 6 6.将将DNADNA的黏稠物再溶解的黏稠物再溶解 2 mol2 molL L 的的NaClNaCl溶液溶液20 mL20 mL 7 7.过滤含过滤含DNADNA的的NaCNaCl l 溶液溶液 8 8.提取含有杂质较少的提取含有杂质较少的 DNADNA 冷却的冷却的9595的酒精的酒精50 mL50 mL 幻灯片 18 A A:(1)1)向试管中加入向试管中加入2 mol2 molL L 的的NaClNaCl溶液溶液5 5mLmL(2)2)加入加入DNADNA(3)43)4 m

13、LmL二苯胺试剂二苯胺试剂 9 9.DNADNA的鉴定的鉴定 B B:(1)(1)向试管中加入向试管中加入2mol2molL L 的的NaClNaCl溶液溶液5 5mLmL(2)4 m2)4 mL 二苯胺试剂二苯胺试剂 用多层纱布用多层纱布过滤过滤，含，含DNA的粘稠物留在纱布上。的粘稠物留在纱布上。用两层纱布过滤用两层纱布过滤滤液中含有滤液中含有DNA。911 注注注注 意意意意 事事事事 项项项项制备鸡血细胞液时，要在取鸡血的同时加入柠檬酸钠，静置后上制备鸡血细胞液时，要在取鸡血的同时加入柠檬酸钠，静置后上制备鸡血细胞液时，要在取鸡血的同时加入柠檬酸钠，静置后上制备鸡血细胞液时，要在取鸡血

14、的同时加入柠檬酸钠，静置后上层是血清，下层为所需要的血细胞。层是血清，下层为所需要的血细胞。层是血清，下层为所需要的血细胞。层是血清，下层为所需要的血细胞。整个实验中整个实验中加入加入“两次蒸馏水，两次蒸馏水，三次三次NaClNaCl溶液溶液，一次酒精，一次酒精”两次加蒸馏水的目的不同，一是涨破细胞，二是稀释两次加蒸馏水的目的不同，一是涨破细胞，二是稀释两次加蒸馏水的目的不同，一是涨破细胞，二是稀释两次加蒸馏水的目的不同，一是涨破细胞，二是稀释NaClNaCl溶液。溶液。溶液。溶液。酒精最好用酒精最好用95%95%的冷酒精的冷酒精;加蒸馏水或加入酒精用玻棒搅拌时加蒸馏水或加入酒精用玻棒搅拌时,

15、动作要动作要轻缓且朝一个方向轻缓且朝一个方向。保证保证DNADNA分子的完整性。分子的完整性。使用时注意玻璃棒不要碰到烧杯底。使用时注意玻璃棒不要碰到烧杯底。使用时注意玻璃棒不要碰到烧杯底。使用时注意玻璃棒不要碰到烧杯底。鉴定鉴定鉴定鉴定DNADNADNADNA时需沸水浴加热。时需沸水浴加热。时需沸水浴加热。时需沸水浴加热。二苯胺试剂要现配现用二苯胺试剂要现配现用二苯胺试剂要现配现用二苯胺试剂要现配现用,否则会影响鉴定的效果否则会影响鉴定的效果否则会影响鉴定的效果否则会影响鉴定的效果.二苯胺是一种有二苯胺是一种有二苯胺是一种有二苯胺是一种有毒性的试剂毒性的试剂毒性的试剂毒性的试剂,使用时注意不

16、要让药液接触到皮肤或身体的其他部位使用时注意不要让药液接触到皮肤或身体的其他部位使用时注意不要让药液接触到皮肤或身体的其他部位使用时注意不要让药液接触到皮肤或身体的其他部位.盛放鸡血细胞的容器盛放鸡血细胞的容器盛放鸡血细胞的容器盛放鸡血细胞的容器最好是塑料容器最好是塑料容器最好是塑料容器最好是塑料容器（鸡血细胞破碎后释放的（鸡血细胞破碎后释放的（鸡血细胞破碎后释放的（鸡血细胞破碎后释放的DNADNADNADNA，容易被玻璃容器吸附，造成提取过程中，容易被玻璃容器吸附，造成提取过程中，容易被玻璃容器吸附，造成提取过程中，容易被玻璃容器吸附，造成提取过程中DNADNADNADNA的损失）的损失）的

17、损失）的损失）121.1.下图为下图为“DNADNA粗提取和鉴定粗提取和鉴定”实验的相关操作。这些操作目的正实验的相关操作。这些操作目的正确的是确的是（）A.A.是洗涤血细胞，去除血细胞表面的杂质是洗涤血细胞，去除血细胞表面的杂质B.B.是溶解是溶解DNADNA，去除不溶于酒精的杂质，去除不溶于酒精的杂质C.C.是溶解是溶解DNADNA，去除不溶于，去除不溶于2 mol/L NaCl2 mol/L NaCl溶液的杂质溶液的杂质D.D.是稀释是稀释NaClNaCl溶液，去除不溶于低浓度溶液，去除不溶于低浓度NaClNaCl溶液的杂质溶液的杂质 是释放核物质是释放核物质是提纯是提纯DNADNA，去

18、除溶于酒，去除溶于酒精的杂质，精的杂质，稀释稀释NaClNaCl溶液，析出溶液，析出DNADNA。C13植物细胞植物细胞需要先用需要先用洗涤剂洗涤剂（洗发香波、沐浴液、洗洁（洗发香波、沐浴液、洗洁精等）精等）溶解细胞膜。溶解细胞膜。洗涤剂可以瓦解细胞膜洗涤剂可以瓦解细胞膜的原因是：的原因是：洗涤液中含有十二烷基硫酸钠和洗涤液中含有十二烷基硫酸钠和碱，碱，它们可使细胞膜破裂，蛋白它们可使细胞膜破裂，蛋白质变性，使蛋白质与质变性，使蛋白质与DNADNA分离开来。分离开来。利于利于利于利于DNADNADNADNA的释放。的释放。的释放。的释放。动物细胞膜是不用试剂（动物细胞膜是不用试剂（洗涤剂）洗涤

19、剂）破坏的，破坏的，因为动物细胞膜外面没因为动物细胞膜外面没有细胞壁的保护有细胞壁的保护，放在清水中自，放在清水中自然的就会吸水而胀破，释放出其然的就会吸水而胀破，释放出其中的中的DNADNA等物质。等物质。4 4、植物：新鲜菜花、蒜黄、菠菜等。植物：新鲜菜花、蒜黄、菠菜等。142.2.（20072007年高考生物试题）年高考生物试题）在某些深海鱼中发现的抗冻蛋白基因，对提高在某些深海鱼中发现的抗冻蛋白基因，对提高农作物的抗寒能力有较好的应用价值，该基因农作物的抗寒能力有较好的应用价值，该基因可以从这些鱼的可以从这些鱼的DNADNA中扩增得到。中扩增得到。试述在提取和试述在提取和纯化纯化DNA

20、DNA时影响提纯效果的因素及其依据。（时影响提纯效果的因素及其依据。（列列举两点）举两点）选择选择NaCl溶液的合适浓度，利用溶液的合适浓度，利用DNA和其它杂质在和其它杂质在不同不同NaCl溶液中溶解溶液中溶解 度不同的特性，达到分离目的；度不同的特性，达到分离目的；加人一定量酒精，使部分蛋白质杂质溶解于酒精，加人一定量酒精，使部分蛋白质杂质溶解于酒精，与与DNA分离；分离；加人蛋白酶，除去蛋白质杂质的干扰；加人蛋白酶，除去蛋白质杂质的干扰；控制控制DNA提取的温度，使大多数蛋白质杂质变性。提取的温度，使大多数蛋白质杂质变性。153.3.（多选）（多选）下下表是关于表是关于DNADNA粗提取

21、与鉴定实验中所使用粗提取与鉴定实验中所使用的材料、操作及其作用的表述。正确的是（的材料、操作及其作用的表述。正确的是（）试剂试剂操作操作作用作用A A柠檬酸钠溶液柠檬酸钠溶液与鸡血混合与鸡血混合防止血液凝固防止血液凝固B B蒸馏水蒸馏水与鸡血细胞混合与鸡血细胞混合保持细胞形状保持细胞形状C C蒸馏水蒸馏水加入到溶解有加入到溶解有DNADNA的的NaClNaCl中中析出析出DNADNA丝状物丝状物D D冷却的酒精冷却的酒精加入到过滤后加入到过滤后DNADNA的的NaClNaCl中中产生特定的颜色反应产生特定的颜色反应AC164.4.实验中实验中NaClNaCl的物质的量浓度为的物质的量浓度为2

22、mol2 molL L和和0.14 mol0.14 molL L对对DNADNA有何影响有何影响?3.3.在在DNADNA的粗提取实验过程中，两次向烧杯中的粗提取实验过程中，两次向烧杯中加入蒸馏水的作用是加入蒸馏水的作用是()()。A.A.稀释血液、冲洗样品稀释血液、冲洗样品B.B.使血细胞破裂、降低使血细胞破裂、降低NaClNaCl浓度使浓度使DNADNA析出析出C.C.使血细胞破裂、增大使血细胞破裂、增大DNADNA溶解量溶解量 D.D.使血细胞破裂、提取含杂质较少的使血细胞破裂、提取含杂质较少的DNADNAB答：前者是答：前者是溶解溶解DNADNA，后者是使，后者是使DNADNA析出析出

23、5.DNA5.DNA遇二苯胺遇二苯胺(沸水浴沸水浴)会染成会染成()()A.A.砖红色砖红色 B.B.橘黄色橘黄色 C.C.紫色紫色 D.D.蓝色蓝色D17 6.DNA6.DNA在在 NaClNaCl溶溶液液中中的的溶溶解解度度有有两两重重性性，随随着着 NaClNaCl溶溶液浓度的变化而变化。液浓度的变化而变化。(1)(1)请请在在下下列列浓浓度度的的 NaClNaCl溶溶液液中中，选选出出能能使使DNADNA析析出出最最彻彻底的一种和溶解度最高的一种底的一种和溶解度最高的一种_。A A0.14 mol/L0.14 mol/LB B2 mol/L2 mol/L C C0.15 mol/L 0

24、.15 mol/L D D0.3 mol/L0.3 mol/L(2)(2)DNADNA不不溶溶于于酒酒精精，但但细细胞胞中中的的某某些些物物质质却却可可以以溶溶于于酒酒精精溶溶液液，利利用用这这一一原原理理可可以以_，可可以以推推测测溶溶于酒精中的可能有于酒精中的可能有_ 。A A、B B去除杂质去除杂质某些脂质、蛋白质、糖类或某些脂质、蛋白质、糖类或其他大分子物质其他大分子物质187 7(2011(2011(2011(2011江苏卷，江苏卷，江苏卷，江苏卷，19)19)19)19)在利用鸡血进行在利用鸡血进行在利用鸡血进行在利用鸡血进行“DNADNADNADNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定的

25、粗提取与鉴定的粗提取与鉴定”的实验中，相关叙述正确的是的实验中，相关叙述正确的是的实验中，相关叙述正确的是的实验中，相关叙述正确的是 ()A A A A用蒸馏水将用蒸馏水将用蒸馏水将用蒸馏水将NaClNaClNaClNaCl溶液浓度调至溶液浓度调至溶液浓度调至溶液浓度调至0.14 mol/L0.14 mol/L0.14 mol/L0.14 mol/L，滤去析出物，滤去析出物，滤去析出物，滤去析出物B B B B调节调节调节调节NaClNaClNaClNaCl溶液浓度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质溶液浓度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质溶液浓度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质溶液浓

26、度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质C C C C将丝状物溶解在将丝状物溶解在将丝状物溶解在将丝状物溶解在2 mol/L NaCl2 mol/L NaCl2 mol/L NaCl2 mol/L NaCl溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色D D D D用菜花替代鸡血作为实验材料，其实验操作步骤相同用菜花替代鸡血作为实验材料，其实验操作步骤相同用菜花替代鸡血作为实验材料，其实验操作步骤相同用菜花替代鸡血作为实验材料，其实验操作步骤相同解析解析解析解析用蒸馏水将用蒸馏水将用蒸馏水将用蒸馏水将NaClNaClNaC

27、lNaCl溶液浓度调至溶液浓度调至溶液浓度调至溶液浓度调至0.14 mol/L0.14 mol/L0.14 mol/L0.14 mol/L时，滤取时，滤取时，滤取时，滤取析出物；将丝状物溶解在析出物；将丝状物溶解在析出物；将丝状物溶解在析出物；将丝状物溶解在2 mol/L2 mol/L2 mol/L2 mol/L的的的的NaClNaClNaClNaCl溶液中，加入二溶液中，加入二溶液中，加入二溶液中，加入二苯胺试剂，需沸水浴加热几分钟，才呈蓝色；用菜花替代苯胺试剂，需沸水浴加热几分钟，才呈蓝色；用菜花替代苯胺试剂，需沸水浴加热几分钟，才呈蓝色；用菜花替代苯胺试剂，需沸水浴加热几分钟，才呈蓝色；

28、用菜花替代鸡血为实验材料，需要对材料的细胞壁进行处理。调节鸡血为实验材料，需要对材料的细胞壁进行处理。调节鸡血为实验材料，需要对材料的细胞壁进行处理。调节鸡血为实验材料，需要对材料的细胞壁进行处理。调节NaClNaClNaClNaCl溶液浓度改变不同物质在其中的溶解度，加入木瓜蛋溶液浓度改变不同物质在其中的溶解度，加入木瓜蛋溶液浓度改变不同物质在其中的溶解度，加入木瓜蛋溶液浓度改变不同物质在其中的溶解度，加入木瓜蛋白酶分解蛋白质都可以去除部分杂质，故白酶分解蛋白质都可以去除部分杂质，故白酶分解蛋白质都可以去除部分杂质，故白酶分解蛋白质都可以去除部分杂质，故B B B B正确。正确。正确。正确。B