ELISA检测溶血素.ppt

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1、ELISAELISA检测溶血素检测溶血素本文由探生科技技术人员提供，Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家【试剂与器材试剂与器材】u绵羊红细胞（绵羊红细胞（SRBCSRBC）免疫小鼠血清）免疫小鼠血清u抗抗SRBCSRBC阳性和阴性血清阳性和阴性血清u辣根过氧化物酶（辣根过氧化物酶（HRPHRP）标记的抗甲胎蛋）标记的抗甲胎蛋白抗体白抗体u碳酸盐缓冲液（碳酸盐缓冲液（PH9.6PH9.6）u磷酸盐缓冲液（磷酸盐缓冲液（PBSPBS，PH7.4PH7.4）u邻笨二胺液邻笨二胺液u硫酸（硫酸（2M2M）u酶标反应板、微量加样器、温箱、冰箱、酶标反应板、微量加样器、温箱、冰箱、酶标仪等

2、。酶标仪等。本文由探生科技技术人员提供，Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家【试剂与器材试剂与器材】u包被稀释液（包被稀释液（0.05mol/L Na2CO3NaHCO3 0.05mol/L Na2CO3NaHCO3 缓缓冲液，冲液，PH9.6PH9.6）Na2CO3 1.5gNa2CO3 1.5g NaHCO3 2.9g NaHCO3 2.9g 加双蒸水至加双蒸水至1000ml1000mlu封闭液（封闭液（5%5%小牛血清小牛血清/PBS/PBS 溶液）溶液）小牛血清小牛血清50ml50ml PBS PBS（PH7.4PH7.4）950ml950mlu洗涤液（洗涤液（PBST

3、PBST，PH7.4PH7.4）NaClNaCl 8.0g 8.0g KH2PO4 0.2g KH2PO4 0.2g Na2HPO4.12H2O 2.9g Na2HPO4.12H2O 2.9g KClKCl 0.2g 0.2g TweenTween 20 0.5ml 20 0.5ml 加双蒸水至加双蒸水至1000ml1000ml本文由探生科技技术人员提供，Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家【试剂与器材试剂与器材】u样本稀释液（样本稀释液（PBSPBS，PH7.4PH7.4）NaClNaCl 8.0g 8.0g KH2PO4 0.2g KH2PO4 0.2g Na2HPO4.1

4、2H2O 2.9g Na2HPO4.12H2O 2.9g KClKCl 0.2g 0.2g 加双蒸水至加双蒸水至1000ml1000mlu酶标第二抗体：羊抗人酶标第二抗体：羊抗人IgGIgG 标记标记HRPHRP（1 1：20002000）本文由探生科技技术人员提供，Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家【试剂与器材试剂与器材】u底物液（底物液（OPDH2O2OPDH2O2）A A 液液 （0.1mol/L 0.1mol/L 柠檬酸溶液）柠檬酸溶液）柠檬酸柠檬酸19.2g 19.2g 加双蒸水至加双蒸水至1000ml1000ml B B 液液 （0.2mol/L Na2HPO4

5、0.2mol/L Na2HPO4 溶液）溶液）Na2HPO4.12H2O 71.7g Na2HPO4.12H2O 71.7g 加双蒸水加双蒸水1000ml1000ml 临用前取临用前取A A 液液24.3ml24.3ml，B B 液液25.7ml25.7mlu终止液（终止液（2mol/LH2SO4 2mol/LH2SO4 溶液）溶液）双蒸水双蒸水600ml600ml，浓硫酸，浓硫酸100ml100ml（缓慢滴加并（缓慢滴加并不断搅拌），加双蒸水至不断搅拌），加双蒸水至900ml900ml本文由探生科技技术人员提供，Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家【操作方法操作方法】（1 1

6、）包被酶标反应板）包被酶标反应板u用用pH9.6 pH9.6 的碳酸盐缓冲液的碳酸盐缓冲液1 1：200 200 稀释抗体，用稀释抗体，用之包被聚乙烯塑料板，每孔加之包被聚乙烯塑料板，每孔加0.2ml0.2ml，4C 4C 1224h1224h。（2 2）封闭酶标反应板）封闭酶标反应板u弃掉包被液，用弃掉包被液，用PBS PBS 洗涤洗涤3 3 次，甩干后用次，甩干后用5%5%小小牛血清牛血清/PBS/PBS 液封闭。放液封闭。放37C40min37C40min（或（或4C 4C 过夜）。封闭结束后用洗涤液洗板，并在滤纸过夜）。封闭结束后用洗涤液洗板，并在滤纸上拍干，每孔洗上拍干，每孔洗3 3

7、遍，每遍遍，每遍3min3min。本文由探生科技技术人员提供，Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家ELISAELISA平板包被平板包被间接法间接法u抗抗 原原 包包 被被:将将 包包 被被 液液 稀稀 释释 的的 抗抗 原原（SRBCSRBC）BSA BSA（2-10ug/ml2-10ug/ml）加加入入9696孔孔酶酶标标版版中中，每每孔孔100ul100ul，4C4C过过夜夜。吸吸出出上上清清液液，加加入入封封闭闭液液200ul/200ul/孔孔。37C37C封封闭闭1-1-1.51.5小小时时或或4C4C过过夜夜。封封闭闭结结束束后后用用洗洗涤涤液液洗板洗板3 3次，每次

8、次，每次3 3分钟。分钟。本文由探生科技技术人员提供，Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家【操作方法操作方法】（3 3）按图）按图1-11 1-11 所示加入待测样品及阳性所示加入待测样品及阳性对照（用对照（用PBS PBS 稀释）稀释）u将稀释好的待测血清样品加入酶标反应将稀释好的待测血清样品加入酶标反应板中，每孔板中，每孔0.2ml0.2ml，阳性对照样品亦相应，阳性对照样品亦相应稀释。置于稀释。置于37C 37C 温箱温箱0.51h0.51h。弃去孔。弃去孔中液体，用洗涤液洗涤中液体，用洗涤液洗涤3 3 遍，每遍遍，每遍3min3min。（4 4）加酶标二抗）加酶标二抗

9、（用（用PBS PBS 稀释）稀释）u加入辣根过氧化物酶标记的抗甲胎蛋抗加入辣根过氧化物酶标记的抗甲胎蛋抗体，每孔体，每孔0.2ml 0.2ml 置于置于37C 37C 温箱，温箱，3045 3045 minmin。弃去孔中液体，拍干，每孔洗涤。弃去孔中液体，拍干，每孔洗涤3 3 遍，每遍遍，每遍3min3min。本文由探生科技技术人员提供，Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家【操作方法操作方法】（5 5）加入底物液）加入底物液u取底物液：取底物液：A A 液液24.3ml24.3ml，B B 液液25.7ml25.7ml，加双蒸水，加双蒸水50ml 50ml 得得pH5.0

10、pH5.0 的磷酸的磷酸枸枸缘酸缓冲液缘酸缓冲液100ml100ml。再加入邻苯二胺。再加入邻苯二胺40mg40mg，充分溶解，最后加入，充分溶解，最后加入30%H2O2 30%H2O2 0.15ml0.15ml。每孔加入底物液。每孔加入底物液100l100l。避。避光室温作用光室温作用510min510min。（6 6）终止反应）终止反应u当阳性对照出现明显颜色变化后，每当阳性对照出现明显颜色变化后，每孔加入终止液孔加入终止液50l 50l 终止反应。终止反应。本文由探生科技技术人员提供，Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家【结果分析结果分析】目测：根据显色深浅，用（目测：根

11、据显色深浅，用（-）为无色，（）为无色，（+）为浅）为浅色，（色，（+）为黄色，（）为黄色，（+）为棕黄色表示。）为棕黄色表示。一般呈一般呈+以上者为阳性以上者为阳性酶标仪测定：在酶标仪测定：在492nm 492nm 波长下测波长下测OD OD 值（值（A A492492）。u当待测样品当待测样品A A492492值与阴性对照值与阴性对照A A492492值值的比值（的比值（P/NP/N）大于大于2.12.1时，或待测样品时，或待测样品A A492492 对照对照A A492492值值 +3s，即可判断为阳性。以最大显色至阳性显色孔的即可判断为阳性。以最大显色至阳性显色孔的50%反应孔的抗体稀

12、释倍数为抗体效价。反应孔的抗体稀释倍数为抗体效价。x本文由探生科技技术人员提供，Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家【注意事项注意事项】1.1.封闭时注意将封闭液加满各反应孔，并去除各封闭时注意将封闭液加满各反应孔，并去除各孔中可能产生的贴孔壁气泡。孔中可能产生的贴孔壁气泡。2.2.加洗涤液时，每孔加满，但不要溢出。加洗涤液时，每孔加满，但不要溢出。3.3.每次洗涤液在孔中的停留时间不应少于每次洗涤液在孔中的停留时间不应少于1 1 分钟。分钟。4.4.洗涤后板要甩干，不要残留液体。洗涤后板要甩干，不要残留液体。本文由探生科技技术人员提供，Fantibody全球抗体搜索引擎，您身

13、边的抗体专家感谢您的浏览感谢您的浏览u相关帮助u需要相关抗体试剂的可以访问Fantibody全球抗体搜索引擎ufantibody全球抗体搜索引擎是一个供公共检索的抗体数据库，其抗体信息数据来源于全球范围的研究机构与商业公司。该引擎由商品化抗体数据库与抗体应用评价数据库两部分组成，以帮助研究者更高效的寻找并评估该抗体的性能。全球抗体搜索引擎是继基因与蛋白数据库之后更为复杂的应用型检索平台u需要相关的实验室仪器设备、生物试剂、医疗器械、制药设备、医药原料、体外诊断试剂及耗材与技术服务信息的，可以访问探生网biomean进行咨询，期待您的加入本文由探生科技技术人员提供，Fantibody全球抗体搜索引擎，您身边的抗体专家