临床微生物标本采集.ppt
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1、微生物检验标本采集微生物检验标本采集罗南英罗南英2016年年2月月25日日基本原则基本原则基本原则基本原则v 1.1.抗生素使用前;抗生素使用前;v 2.2.无菌采集,避免污染(环境、正常菌群等)无菌采集,避免污染(环境、正常菌群等)v 3.3.及时送检,通常室温不超过及时送检,通常室温不超过2h2h。v 4.4.运送过程避免污染、渗漏、脱盖、密封不好等运送过程避免污染、渗漏、脱盖、密封不好等v 5.5.如疑似对低温敏感的淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、如疑似对低温敏感的淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌感染标本应立即处理。流感嗜血杆菌感染标本应立即处理。脑脊髓液、生殖道、眼睛、内耳标本绝不可以
2、冷藏。脑脊髓液、生殖道、眼睛、内耳标本绝不可以冷藏。血液及骨髓标本血液及骨髓标本血液及骨髓标本血液及骨髓标本v 一、标本送检指征一、标本送检指征 病人出现以下临床表现之一时病人出现以下临床表现之一时,应采集血培应采集血培养。养。v 发热(发热(3838)或低温()或低温(3636););寒战;寒战;白细胞增多(白细胞增多(1010109/L109/L,特别,特别有有“核左移核左移”时);时);粒细胞减少(成熟的粒细胞减少(成熟的多形核白细胞多形核白细胞1 1109/L109/L););血小板减少;血小板减少;皮肤、粘膜出血;皮肤、粘膜出血;昏迷;昏迷;多器官衰多器官衰 竭;竭;血压降低;血压降
3、低;呼吸加快。呼吸加快。几种特殊情况:几种特殊情况:v可疑新生儿败血症时,除发热或低温外,很少培养可疑新生儿败血症时,除发热或低温外,很少培养 出细菌,应增加尿液和脑脊液培养。出细菌,应增加尿液和脑脊液培养。v老年菌血症病人可能不发热或不低温,如伴有身体不适、老年菌血症病人可能不发热或不低温,如伴有身体不适、肌痛或中风,可能是感染性心内膜炎,也应采取血培养。肌痛或中风,可能是感染性心内膜炎,也应采取血培养。v 骨髓培养与血液培养的送检指征是基本一致的,临骨髓培养与血液培养的送检指征是基本一致的,临 床常规血液感染有指征时以抽取血培养为主。但当骨床常规血液感染有指征时以抽取血培养为主。但当骨 髓
4、炎时或长期使用抗菌药物患者,抽取骨髓培养阳性髓炎时或长期使用抗菌药物患者,抽取骨髓培养阳性 率会远高于血培养。率会远高于血培养。【标本的采集方法标本的采集方法】v 防止皮肤寄生菌或环境微生物引起的污染是血培防止皮肤寄生菌或环境微生物引起的污染是血培养的关键问题,采血前严格执行消毒程序是十分重养的关键问题,采血前严格执行消毒程序是十分重要的。要的。v 1 1 皮肤消毒程序:皮肤消毒程序:用蘸有复合碘棉签从穿刺点向外以用蘸有复合碘棉签从穿刺点向外以1.51.52cm2cm直径直径画圈进行消毒,消毒皮肤作用画圈进行消毒,消毒皮肤作用60s60s。v 对碘过敏的病人只能用对碘过敏的病人只能用75%75
5、%酒精消毒,消毒酒精消毒,消毒60s60s,待穿刺,待穿刺v消毒部位干燥后穿刺采血。消毒部位干燥后穿刺采血。v2 2 培养瓶消毒程序培养瓶消毒程序 用用7575酒精擦拭血培养瓶橡皮塞子,作用酒精擦拭血培养瓶橡皮塞子,作用60s60s。在血液注入血培养瓶之前,用无菌纱布或棉签在血液注入血培养瓶之前,用无菌纱布或棉签清除橡皮塞子表面剩余的酒精,然后注入血液。清除橡皮塞子表面剩余的酒精,然后注入血液。v3 3 培养瓶接种程序培养瓶接种程序 抽取血液后,不要换针头,直接注入血培养瓶中,抽取血液后,不要换针头,直接注入血培养瓶中,轻轻颠倒混匀,以防血液凝固。如果同时作需氧和轻轻颠倒混匀,以防血液凝固。如
6、果同时作需氧和厌氧培养,应先将标本接种到厌氧瓶中,然后再注厌氧培养,应先将标本接种到厌氧瓶中,然后再注入需氧瓶,严格防止将空气注入厌氧瓶中。(蝶形入需氧瓶,严格防止将空气注入厌氧瓶中。(蝶形针针/注射器)注射器)血培养采集的时间和频率血培养采集的时间和频率血培养采集的时间和频率血培养采集的时间和频率v采血培养应尽量在抗菌药物使用之前,在采血培养应尽量在抗菌药物使用之前,在24h24h内采集内采集2 23 3套血培养,每套包括套血培养,每套包括1 1个需氧瓶个需氧瓶+厌氧瓶。因为研究已厌氧瓶。因为研究已证实,证实,2 23 3套血培养足以检测所有的菌血症和真菌血症。套血培养足以检测所有的菌血症和
7、真菌血症。v 入院前入院前2 2周内接受抗菌药物治疗的患者,连续周内接受抗菌药物治疗的患者,连续3 3天,每天,每天采集天采集2 2套,可选用能中和或吸附抗菌药物的培养基。套,可选用能中和或吸附抗菌药物的培养基。v 对间歇性寒战或发热的患者,应在寒战或体温高峰到对间歇性寒战或发热的患者,应在寒战或体温高峰到来之前来之前0.50.51h1h采集血液,或于寒战或发热后采集血液,或于寒战或发热后1h1h采集。因采集。因为发热时血液中可能没有细菌。为发热时血液中可能没有细菌。v 怀疑为急性原发性菌血症、真菌血症、脑膜炎、骨髓怀疑为急性原发性菌血症、真菌血症、脑膜炎、骨髓炎、关节炎或肺炎的患者,应在不同
8、部位采集炎、关节炎或肺炎的患者,应在不同部位采集2 23 3套血套血培养。培养。v不明原因发热,如隐性脓肿、伤寒热和波不明原因发热,如隐性脓肿、伤寒热和波浪热,先采集浪热,先采集2 23 3套血标本,套血标本,242436h36h后估后估计体温升高之前,再采集计体温升高之前,再采集2 2套以上。套以上。v 怀疑为菌血症或真菌血症,但血培养持怀疑为菌血症或真菌血症,但血培养持续阴性,应改变血培养方法,选择其它种类续阴性,应改变血培养方法,选择其它种类的培养瓶,如高渗培养瓶,中和抗生素培养的培养瓶,如高渗培养瓶,中和抗生素培养瓶,结核菌培养瓶等,以获得罕见的或苛氧瓶,结核菌培养瓶等,以获得罕见的或
9、苛氧的微生物。的微生物。v 怀疑为细菌性心内膜炎,在怀疑为细菌性心内膜炎,在1 12h2h内多部内多部位采集位采集3 3份血标本,如果份血标本,如果24h24h阴性,再采取阴性,再采取3 3套以上的血标本。套以上的血标本。v怀疑为细菌性脑膜炎应在发热的头怀疑为细菌性脑膜炎应在发热的头1 12 2天天内,怀疑为伤寒应在发热第一周内;怀疑为内,怀疑为伤寒应在发热第一周内;怀疑为布鲁菌病应在预期发热前取血;经培养布鲁菌病应在预期发热前取血;经培养24244848小时如未见细菌生长,应再连续取血两次。小时如未见细菌生长,应再连续取血两次。v 静脉采血通常用肘正中静脉,怀疑亚急静脉采血通常用肘正中静脉,
10、怀疑亚急性细菌性心内膜炎也可自股动脉采血。对血性细菌性心内膜炎也可自股动脉采血。对血培养阴性而高度怀疑伤寒或布鲁菌病者,可培养阴性而高度怀疑伤寒或布鲁菌病者,可抽取骨髓培养和辅助血清学试验有助于诊断。抽取骨髓培养和辅助血清学试验有助于诊断。2 2 2 2 采血量采血量采血量采血量v 成人:推荐每个血培养瓶应加的血量为成人:推荐每个血培养瓶应加的血量为8 810ml10ml。儿童:因很难获得大量的血液,一般。儿童:因很难获得大量的血液,一般静脉采血静脉采血1 13ml3ml用于血培养。骨髓采血量一用于血培养。骨髓采血量一般为般为1 12ml2ml。v 血液量太多或太少都不利于细菌的检出,血液量太
11、多或太少都不利于细菌的检出,血液的培养量每增加血液的培养量每增加1ml,1ml,阳性率增加阳性率增加3 35 5。人体血液内包含各种抑制细菌生长的因子或人体血液内包含各种抑制细菌生长的因子或抗生素,注入血液太多可能会抑制细菌的生抗生素,注入血液太多可能会抑制细菌的生长。长。3 3 标本的保存及运送标本的保存及运送v 含血样的培养瓶应立即送往实验室;如不能及时含血样的培养瓶应立即送往实验室;如不能及时送检,应将其放在送检,应将其放在室温室温,切忌冰箱存放切忌冰箱存放。因为某些。因为某些苛氧菌可在冰箱温度中死亡,而使培养阳性率下降苛氧菌可在冰箱温度中死亡,而使培养阳性率下降v 在运往实验室的途中如
12、果天气寒冷,应采取一定在运往实验室的途中如果天气寒冷,应采取一定的保温措施。的保温措施。v 标本运送过程中必须保证其安全,防止溢出,避标本运送过程中必须保证其安全,防止溢出,避免细菌污染。免细菌污染。(痰)上呼吸道标本(痰)上呼吸道标本(痰)上呼吸道标本(痰)上呼吸道标本v 一、标本送检指征一、标本送检指征v 咳嗽、咳痰:痰液可为脓性、血性、铁咳嗽、咳痰:痰液可为脓性、血性、铁锈色或红棕色胶胨样痰锈色或红棕色胶胨样痰;咯血:肺结核病咯血:肺结核病人常痰中带血人常痰中带血;呼吸困难呼吸困难;发热发热;胸痛:胸痛:当炎症病变累及壁层胸膜时,会发生胸痛。当炎症病变累及壁层胸膜时,会发生胸痛。v 肺部
13、感染的患者有肺部感染的患者有25255050可能发生菌可能发生菌血症,应同时作血培养。血症,应同时作血培养。二、标本采集二、标本采集二、标本采集二、标本采集v【标本采集容器标本采集容器】一次性无菌痰培养杯。一次性无菌痰培养杯。v 【标本采集方法标本采集方法】v 1 1 自然咳痰法:咳痰前,先用清水或漱口液反复自然咳痰法:咳痰前,先用清水或漱口液反复漱口(为减少口腔正常菌群污染标本),有假牙者漱口(为减少口腔正常菌群污染标本),有假牙者应取下假牙,然后用力自气管中咳出第一口痰于无应取下假牙,然后用力自气管中咳出第一口痰于无菌容器内。菌容器内。对于痰量少或无痰的患者可采用雾化吸入对于痰量少或无痰的
14、患者可采用雾化吸入45104510NaCLNaCL水溶液,使痰液易于排出。对咳痰少的幼儿,水溶液,使痰液易于排出。对咳痰少的幼儿,可轻轻压迫胸骨上部的气管,使其咳嗽。可轻轻压迫胸骨上部的气管,使其咳嗽。v2 2 支气管镜采集法:用支气管镜在肺内病灶附近用支气管镜采集法:用支气管镜在肺内病灶附近用导管吸引或用支气管刷直接取得标本。采集标本时导管吸引或用支气管刷直接取得标本。采集标本时尽可能避免咽喉部正常菌群的污染。尽可能避免咽喉部正常菌群的污染。v 3 3 胃内采痰法:无自觉症状的肺结核病人尤其婴胃内采痰法:无自觉症状的肺结核病人尤其婴幼儿不会咳嗽,有时将痰误咽入胃中,可采集胃内幼儿不会咳嗽,有
15、时将痰误咽入胃中,可采集胃内容物做结核分支杆菌培养。容物做结核分支杆菌培养。v 4 4气管穿刺法:主要用于厌氧菌培养。气管穿刺法:主要用于厌氧菌培养。v 5 5小儿取痰法:用弯压舌板向后压舌,用棉拭子深小儿取痰法:用弯压舌板向后压舌,用棉拭子深入咽部,小儿受到刺激咳嗽时,可喷出肺部或气管入咽部,小儿受到刺激咳嗽时,可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上。分泌物粘在拭子上。v6 6咽拭子法:采样前用清水反复漱口,由检查者将舌咽拭子法:采样前用清水反复漱口,由检查者将舌向外拉,使腭垂尽可能向外牵引,用无菌棉拭子通向外拉,使腭垂尽可能向外牵引,用无菌棉拭子通过舌根到咽后壁或腭垂的后侧,涂抹数次,拭子要过舌
16、根到咽后壁或腭垂的后侧,涂抹数次,拭子要避免接触口腔和舌粘膜。避免接触口腔和舌粘膜。v 7.7.鼻拭子法:用被无菌盐水湿润的棉拭子(尖端的鼻拭子法:用被无菌盐水湿润的棉拭子(尖端的棉花必须紧密)直接插入鼻腔约棉花必须紧密)直接插入鼻腔约2cm2cm,对鼻黏膜用力,对鼻黏膜用力旋转,然后取出。旋转,然后取出。v 8.8.鼻咽拭子法:用无菌拭子经鼻轻轻插入鼻咽部鼻咽拭子法:用无菌拭子经鼻轻轻插入鼻咽部后部,慢慢旋转拭子后部,慢慢旋转拭子5s5s,吸收分泌物,然后取出。,吸收分泌物,然后取出。【标本采集注意事项标本采集注意事项标本采集注意事项标本采集注意事项】v 1 1 采集时间:采集时间:v (1
17、 1)以晨痰为好。多数病人清晨痰较多,易于采)以晨痰为好。多数病人清晨痰较多,易于采集。且清晨痰含有的病理成分较多。会增加培养的集。且清晨痰含有的病理成分较多。会增加培养的阳性率。阳性率。v (2 2)最好在应用抗菌药物之前采集标本。)最好在应用抗菌药物之前采集标本。v 2 2 送检送检v 采集后应立即送检,以防止某些细菌在外环境中采集后应立即送检,以防止某些细菌在外环境中死亡,室温保存死亡,室温保存2h 2h。做真菌培养的标本如不能。做真菌培养的标本如不能及时送检,可放及时送检,可放44保存,以免杂菌生长。保存,以免杂菌生长。v 标本运送过程中必须保证其安全,防止溢出,避标本运送过程中必须保
18、证其安全,防止溢出,避免细菌污染。免细菌污染。尿液标本尿液标本尿液标本尿液标本 一、标本送检指征一、标本送检指征v 有典型的尿路感染症状(发热、尿频、有典型的尿路感染症状(发热、尿频、尿急、尿痛、排尿困难和耻骨上压痛);尿急、尿痛、排尿困难和耻骨上压痛);v肉眼脓尿或血尿;肉眼脓尿或血尿;v尿常规检查表现为白细胞和尿常规检查表现为白细胞和/或亚硝酸盐或亚硝酸盐阳性;阳性;v不明原因的发热,无其他局部症状;不明原因的发热,无其他局部症状;v留置导尿管的病人出现发热;留置导尿管的病人出现发热;v膀胱排空功能受损;膀胱排空功能受损;v泌尿系统疾病手术前泌尿系统疾病手术前二、标本采集二、标本采集二、标
19、本采集二、标本采集v【标本采集容器标本采集容器】培养杯。培养杯。v 【标本采集方法标本采集方法】v 1 1 清洁中段尿标本:嘱咐患者睡前少饮水,清晨起床后用清洁中段尿标本:嘱咐患者睡前少饮水,清晨起床后用肥皂水清洗会阴部,女性应用手分开大阴唇,男性应翻上肥皂水清洗会阴部,女性应用手分开大阴唇,男性应翻上包皮,仔细清洗,再用清水冲洗尿道口周围,开始排尿,包皮,仔细清洗,再用清水冲洗尿道口周围,开始排尿,将前段尿排去,接取中段尿约将前段尿排去,接取中段尿约10ml10ml于无菌容器,于无菌容器,v立即送检于一小时内接种。该方法简单、易行,是最常用立即送检于一小时内接种。该方法简单、易行,是最常用的
20、尿培养标本收集方法,但很容易受到会阴部细菌污染应的尿培养标本收集方法,但很容易受到会阴部细菌污染应由医护人员采集或在医护人员指导下由患者正确留取。由医护人员采集或在医护人员指导下由患者正确留取。v2 2 耻骨上膀胱穿刺:使用无菌注射器直接从耻骨上耻骨上膀胱穿刺:使用无菌注射器直接从耻骨上经皮穿入膀胱吸取尿液,是评估膀胱内细菌感染的经皮穿入膀胱吸取尿液,是评估膀胱内细菌感染的“金标准金标准”方法,但有一定的痛苦,病人难以接受。方法,但有一定的痛苦,病人难以接受。主要用于厌氧菌培养或留取标本困难的婴儿尿标本主要用于厌氧菌培养或留取标本困难的婴儿尿标本的采集。的采集。v 3 3 直接导尿:按常规方法
21、对会阴部进行清洗消毒直接导尿:按常规方法对会阴部进行清洗消毒后,用导尿管直接经尿道插入膀胱,获取膀胱尿液。后,用导尿管直接经尿道插入膀胱,获取膀胱尿液。可减少尿液标本的污染,准确地反映膀胱感染情况。可减少尿液标本的污染,准确地反映膀胱感染情况。但有可能将下尿道的细菌引入膀胱,导致继发感染,但有可能将下尿道的细菌引入膀胱,导致继发感染,一般不提倡使用。一般不提倡使用。v4 4 小儿收集包:对于无控制能力的小儿可应用收集小儿收集包:对于无控制能力的小儿可应用收集包收集尿液,这种装置由于很难避免会阴部菌群污包收集尿液,这种装置由于很难避免会阴部菌群污染产生假阳性,所以只有在检验结果为阴性时才有染产生
22、假阳性,所以只有在检验结果为阴性时才有意义。如果检验结果为阳性,应结合临床进行分析,意义。如果检验结果为阳性,应结合临床进行分析,必要时可使用耻骨上膀胱穿刺或导尿法留取尿液进必要时可使用耻骨上膀胱穿刺或导尿法留取尿液进行复查。行复查。v 5 5 留置导尿管收集尿液:利用留置导尿管采集标留置导尿管收集尿液:利用留置导尿管采集标本时,应先消毒导尿管外部,按无菌操作方法用注本时,应先消毒导尿管外部,按无菌操作方法用注射器穿刺导尿管吸取尿液,操作时应防止混入消毒射器穿刺导尿管吸取尿液,操作时应防止混入消毒剂,不能从收集袋中采集尿液。长期留置导尿患者,剂,不能从收集袋中采集尿液。长期留置导尿患者,应在更
23、换新尿管时留取尿标本。应在更换新尿管时留取尿标本。【标本采集注意事项标本采集注意事项标本采集注意事项标本采集注意事项】v 1.1.尽量采集晨尿标本,应保证尿液在膀胱内停留尽量采集晨尿标本,应保证尿液在膀胱内停留4h4h以上。(一般于晨起第一次尿液送检。)以上。(一般于晨起第一次尿液送检。)v 2.2.应选在抗菌药物应用之前。应选在抗菌药物应用之前。v 3.3.标本采集后应尽快送检,标本采集后应尽快送检,1h1h内接种。内接种。v 4.4.标本运送过程中必须保证其安全,防止溢出,标本运送过程中必须保证其安全,防止溢出,避免细菌污染。避免细菌污染。粪便标本微生物检验的采集粪便标本微生物检验的采集粪
24、便标本微生物检验的采集粪便标本微生物检验的采集v一、标本送检指征一、标本送检指征v 1 1 急性腹泻:大便次数明显增多,腹痛,里急后急性腹泻:大便次数明显增多,腹痛,里急后重,往往伴有发热,大便性状为粘液便或脓血便。重,往往伴有发热,大便性状为粘液便或脓血便。v 2 2 慢性腹泻:大便次数多,多为稀便,伴有全身慢性腹泻:大便次数多,多为稀便,伴有全身乏力等症状。乏力等症状。v 3 3 无痛性大量水样便或米泔样稀便。无痛性大量水样便或米泔样稀便。v 4 4 先吐后泻:恶心、呕吐、腹痛、腹泻。先吐后泻:恶心、呕吐、腹痛、腹泻。有集体发病史,多为细菌性食物中毒所致。有集体发病史,多为细菌性食物中毒所
25、致。v 5 5 抗生素治疗后腹泻:常发生于长期抗生抗生素治疗后腹泻:常发生于长期抗生素治疗后,糊状便,排便次数增加。素治疗后,糊状便,排便次数增加。v 6 6 高热惊厥:通常为中毒性痢疾,多见于高热惊厥:通常为中毒性痢疾,多见于婴幼儿和小儿。婴幼儿和小儿。二、标本采集二、标本采集二、标本采集二、标本采集v【标本的采集容器标本的采集容器】一次性无菌培养杯。一次性无菌培养杯。v 【标本的采集方法标本的采集方法】v 1 1 自然排便采集法:自然排便后,调取有脓血粘自然排便采集法:自然排便后,调取有脓血粘液部位的粪便液部位的粪便2 23g3g,液状粪便取絮状物盛于无菌,液状粪便取絮状物盛于无菌的容器内
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