蛋白质的颜色反应.ppt

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1、实验实验 蛋白质的颜色反应蛋白质的颜色反应l一、目的一、目的二、原理二、原理 蛋白质分子中的某种或某些基团与显色剂蛋白质分子中的某种或某些基团与显色剂作用，可产生特定的颜色反应，不同蛋白质所作用，可产生特定的颜色反应，不同蛋白质所含氨基酸不完全相同，颜色反应亦不同。颜色含氨基酸不完全相同，颜色反应亦不同。颜色反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质反应不是蛋白质的专一反应，一些非蛋白物质亦可产生相同颜色反应，因此不能仅根据颜色亦可产生相同颜色反应，因此不能仅根据颜色l掌握鉴定蛋白质的原理和方法。掌握鉴定蛋白质的原理和方法。反应的结果决定被测物是否是蛋白质。颜色反应的结果决定被测物是否是蛋白质。

2、颜色反应是一些常用的蛋白质定性和定量测定的反应是一些常用的蛋白质定性和定量测定的依据。重要的颜色反应有：依据。重要的颜色反应有：1.1.双缩脲反应双缩脲反应 将尿素加热到将尿素加热到180180，则两分子尿素缩合，则两分子尿素缩合成一分子双缩脲，并放出一分子氨。双缩脲成一分子双缩脲，并放出一分子氨。双缩脲在碱性溶液中能与硫酸铜反应产生紫红色络在碱性溶液中能与硫酸铜反应产生紫红色络合物，此反应称双缩脲反应。蛋白质分子中合物，此反应称双缩脲反应。蛋白质分子中含有许多和双缩脲结构相似的肽键，因此也含有许多和双缩脲结构相似的肽键，因此也能起双缩脲反应。通常可用此反应来定性鉴能起双缩脲反应。通常可用此反

3、应来定性鉴定蛋白质，也可根据反应产生的颜色在定蛋白质，也可根据反应产生的颜色在540nm540nm处比色，定量测定蛋白质。处比色，定量测定蛋白质。2.2.蛋白质的黄色反应蛋白质的黄色反应 是含有芳香族氨基酸特别是含有酪氨酸是含有芳香族氨基酸特别是含有酪氨酸和色氨酸的蛋白质所特有的呈色反应。蛋白和色氨酸的蛋白质所特有的呈色反应。蛋白质溶液遇硝酸后，先产生白色沉淀，加热则质溶液遇硝酸后，先产生白色沉淀，加热则白色沉淀变成黄色，再加碱颜色加深呈橙黄白色沉淀变成黄色，再加碱颜色加深呈橙黄色，这是因为硝酸将蛋白质分子中的苯环硝色，这是因为硝酸将蛋白质分子中的苯环硝化，产生了黄色硝基苯衍生物。例如皮肤、化

4、，产生了黄色硝基苯衍生物。例如皮肤、指甲和毛发等遇浓硝酸会变成黄色。指甲和毛发等遇浓硝酸会变成黄色。3.3.米伦反应米伦反应 米伦试剂为硝酸、亚硝酸、硝酸汞、亚米伦试剂为硝酸、亚硝酸、硝酸汞、亚硝酸汞的混合物，蛋白质溶液加入米伦试剂硝酸汞的混合物，蛋白质溶液加入米伦试剂后即产生白色沉淀，加热后沉淀变成红色。后即产生白色沉淀，加热后沉淀变成红色。酚类化合物有此反应，酪氨酸含有酚基，故酚类化合物有此反应，酪氨酸含有酚基，故酪氨酸及含有酪氨酸的蛋白质都有此反应。酪氨酸及含有酪氨酸的蛋白质都有此反应。4.4.茚三酮反应茚三酮反应 蛋白质与茚三酮共热，则产生蓝紫色的蛋白质与茚三酮共热，则产生蓝紫色的还原

5、茚三酮、茚三酮和氨的缩合物。此反应还原茚三酮、茚三酮和氨的缩合物。此反应为一切氨基酸及为一切氨基酸及-氨基酸所共有。含有氨基氨基酸所共有。含有氨基的其他物质亦呈此反应。的其他物质亦呈此反应。三、操作：三、操作：1.1.双缩脲反应双缩脲反应取少许结晶尿素放在干燥试管中，微火加取少许结晶尿素放在干燥试管中，微火加热，尿素溶化并形成双缩脲，释出的氨可用热，尿素溶化并形成双缩脲，释出的氨可用红色石蕊试纸试之。至试管内有白色固体出红色石蕊试纸试之。至试管内有白色固体出现，停止加热，冷却。然后加现，停止加热，冷却。然后加10%NaOH 10%NaOH 溶液溶液1mL 1mL 混匀，观察有无紫色出现。混匀，

6、观察有无紫色出现。另取一试管，加蛋白质溶液另取一试管，加蛋白质溶液1010滴，再加滴，再加10%10%NaOHNaOH 溶液溶液1010滴及滴及1%CuSO41%CuSO4溶液溶液4 4滴，混匀，观滴，混匀，观察是否出现紫玫瑰色。察是否出现紫玫瑰色。2.2.蛋白质的黄色反应蛋白质的黄色反应 在一试管内，加蛋白质溶液在一试管内，加蛋白质溶液1010滴及浓硝酸滴及浓硝酸3 34 4滴，加热，冷却后再加滴，加热，冷却后再加10%NaOH 10%NaOH 溶液溶液5 5滴，滴，观察颜色反应。观察颜色反应。3.3.米伦反应米伦反应 用苯酚做实验：取用苯酚做实验：取0.5%0.5%苯酚溶液苯酚溶液1mL

7、1mL 于于试管中，加米伦试剂约试管中，加米伦试剂约0.5mL0.5mL，小心加热，溶，小心加热，溶液即出现玫瑰红色。液即出现玫瑰红色。用蛋白质溶液做实验：取用蛋白质溶液做实验：取2mL 2mL 蛋白质溶液，蛋白质溶液，加加0.5mL 0.5mL 米伦试剂，此时出现蛋白质的沉淀米伦试剂，此时出现蛋白质的沉淀(因试剂含汞盐及硝酸之故因试剂含汞盐及硝酸之故)，小心加热，凝，小心加热，凝固之蛋白质出现红色。固之蛋白质出现红色。4.4.茚三酮反应茚三酮反应 取取1mL 1mL 蛋白质溶液置于试管中，加蛋白质溶液置于试管中，加0.5mL0.5mL茚三酮试剂，加热至沸，即有蓝紫色出现茚三酮试剂，加热至沸，即有蓝紫色出现(注注意：此反应必须在意：此反应必须在pH5pH57 7进行进行)。四、结果：四、结果：