微生物的实验室培养红.pptx

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1、阅读P14-16，思考：1.培养基的概念？种类？基本成分？2.无菌技术的概念？3.消毒与灭菌的区别？常用方法？第1页/共16页（一）培养基1.概念：2.种类（按物理性质分）：按照微生物对按照微生物对营养物质营养物质的不同需求，配制出供的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质其生长繁殖的营养基质液体液体培养基、培养基、固体固体培养基培养基（不含琼脂）（不含琼脂）（含琼脂）（含琼脂）第2页/共16页（一）培养基3.基本成分：+满足微生物对满足微生物对pHpH、特殊营养物质、氧气、特殊营养物质、氧气的要求的要求碳源：碳源：氮源：氮源：水水:无机盐无机盐:（葡萄糖、（葡萄糖、COCO2 2等含等含C

2、C物质）物质）（铵盐、硝酸铵等含（铵盐、硝酸铵等含NN物质）物质）碳源碳源氮源氮源无机盐无机盐氮源氮源第3页/共16页（二）无菌技术1.概念：2.种类指培养微生物操作中，所有指培养微生物操作中，所有防止杂菌污染防止杂菌污染的的操作。操作。作用作用作用作用特点特点特点特点杀死杀死杀死杀死微生物微生物微生物微生物芽孢芽孢芽孢芽孢孢子孢子孢子孢子常用的方法常用的方法常用的方法常用的方法消消毒毒灭灭菌菌较为温较为温较为温较为温和和和和杀死杀死杀死杀死部分部分部分部分煮沸消毒法、煮沸消毒法、煮沸消毒法、煮沸消毒法、巴氏消毒法、巴氏消毒法、巴氏消毒法、巴氏消毒法、紫外线、药剂等紫外线、药剂等紫外线、药剂等

3、紫外线、药剂等杀杀杀杀不不不不死死死死强烈强烈强烈强烈杀死全杀死全杀死全杀死全部部部部灼烧灭菌、灼烧灭菌、灼烧灭菌、灼烧灭菌、干热灭菌、干热灭菌、干热灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌杀死杀死杀死杀死P15 P15 旁栏思考题旁栏思考题P16 P16 旁栏思考题旁栏思考题第4页/共16页 灼烧灭菌灼烧灭菌 干热灭菌干热灭菌 高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌160170 12h160170 12h100kPa 121 15-30min100kPa 121 15-30min适用于：耐高温、保干燥的物品适用于：耐高温、保干燥的物品思考：以下物品，应选用哪种方法来灭菌？思考：以下

4、物品，应选用哪种方法来灭菌？用外焰灼烧用外焰灼烧接种环接种环 布器布器培培养养皿皿培培养养基基第5页/共16页实验操作大肠杆菌的纯化培养（一）制备培养基称量称量溶化溶化灭菌灭菌计算计算倒平板倒平板P17 P17 讨论题讨论题第6页/共16页实验操作（大肠杆菌的纯化培养）（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌原理：原理：平板划线法平板划线法纯化方法（接种方法）：纯化方法（接种方法）：在培养基上，将细菌在培养基上，将细菌分散分散或或稀释稀释成单个细胞，使其长成单个菌成单个细胞，使其长成单个菌落落稀释涂布平板法稀释涂布平板法阅读阅读阅读阅读P18-19P18-19，

5、思考：，思考：，思考：，思考：依据的原理？依据的原理？依据的原理？依据的原理？操作的过程？操作的过程？操作的过程？操作的过程？第7页/共16页平板划线法平板划线法原理：通过接种环在琼脂固体培养基表面通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线连续划线的操的操作，将聚集的菌种逐步作，将聚集的菌种逐步稀释分散稀释分散到培养基的表面。到培养基的表面。在数次划线后可以分离到由一个在数次划线后可以分离到由一个细胞细胞繁殖而来的繁殖而来的肉眼可见的子肉眼可见的子细胞群体细胞群体称称菌落菌落。第8页/共16页 操作过程：操作过程：操作过程：操作过程：灼烧目的？灼烧目的？能否划破培养基？能否划破培养基？WhyWhy

6、要冷却接种环？要冷却接种环？第9页/共16页P18 P18 讨论讨论3 3：whywhy总是从上一次划线的总是从上一次划线的末端末端开始划线开始划线？线条线条末端末端的细菌数目比前端少的细菌数目比前端少P18 P18 讨论题讨论题1 1：每次划线前灼烧接种环，每次划线前灼烧接种环，whywhy？划线结束后仍要灼烧接种环，划线结束后仍要灼烧接种环，whywhy？杀死上次划线结束后残留在环上的菌种。杀死上次划线结束后残留在环上的菌种。及时杀死环上残留菌种，避免污染环境和感染操作者及时杀死环上残留菌种，避免污染环境和感染操作者第10页/共16页复习1.培养基的基本成分？2.无菌技术的种类？3.微生物

7、常用的接种方法？碳源、氮源、水、无机盐碳源、氮源、水、无机盐消毒、灭菌消毒、灭菌平板划线法平板划线法、稀释涂布平板法、稀释涂布平板法第11页/共16页稀释涂布平板法稀释涂布平板法原理：两大步骤：将菌液进行一系列的梯度稀释，再将将菌液进行一系列的梯度稀释，再将不同稀释度不同稀释度的菌液的菌液分别涂布分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养。到琼脂固体培养基的表面进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将分散成将分散成单个细胞单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的，从而能在培养基表面形成单个的菌落菌落。涂布器涂布器第12页/共16页1 1、系列稀

8、释操作、系列稀释操作101102103104105106第13页/共16页2 2、涂布平板操作、涂布平板操作思考：思考：P18 P18 讨论：讨论：涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行，目涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行，目的？的？第14页/共16页（四）课题延伸（四）课题延伸（菌种的保藏菌种的保藏）临时保藏临时保藏：长期保存长期保存：（三）结果分析与评价（三）结果分析与评价P20接种到接种到固体斜面培养基固体斜面培养基，菌落长成后菌落长成后44保存保存采用采用采用采用甘油管藏甘油管藏甘油管藏甘油管藏法，法，法，法，-20-20-20-20保存保存保存保存第15页/共16页感谢您的观看！第16页/共16页