肝功能检查指标选择及评价.ppt

《肝功能检查指标选择及评价.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《肝功能检查指标选择及评价.ppt（19页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、肝功能检查肝功能检查指标的选择与评价指标的选择与评价一、实验目的一、实验目的掌握：掌握：血清转氨酶、胆红素测定的方法和原理；血清转氨酶、胆红素测定的方法和原理；熟悉：熟悉：重氮试剂法测定血清胆红素的操作步骤；重氮试剂法测定血清胆红素的操作步骤；了解：了解：血清转氨酶、胆红素测定的临床意义。血清转氨酶、胆红素测定的临床意义。ALT、AST测定测定测定方法：测定方法：连续监测法、连续监测法、赖氏法赖氏法连续监测法测定丙氨酸氨基转移酶基本原理：连续监测法测定丙氨酸氨基转移酶基本原理：L-L-丙氨酸丙氨酸+-酮戊二酸酮戊二酸 -丙酮酸丙酮酸+L-+L-谷氨酸谷氨酸 -丙酮酸丙酮酸+NADH +NADH

2、 乳酸乳酸+NAD+NAD+连续监测法测定连续监测法测定天门冬氨酸氨基转移酶基本原理天门冬氨酸氨基转移酶基本原理：L-L-天门冬氨酸天门冬氨酸+-酮戊二酸酮戊二酸 草酰乙酸草酰乙酸+L-+L-谷氨酸谷氨酸 草酰乙酸草酰乙酸+NADH+H+NADH+H+L-L-苹果酸苹果酸+NAD+NAD+连续监测法测定连续监测法测定NADHNADH被氧化为被氧化为NAD+,NAD+,可在可在340nm340nm处连处连续监测到续监测到NADHNADH被氧化引起吸光度下降速率，被氧化引起吸光度下降速率，该下降速率该下降速率与与ALTALT、ASTAST活性呈正比。活性呈正比。二二实实验验原原理理ALTALTLD

3、HLDHASTASTMDHMDH三、试剂与器材三、试剂与器材丙氨酸氨基转移酶试剂盒：丙氨酸氨基转移酶试剂盒：R1:R1:-酮戊二酸、酮戊二酸、NADHNADH、乳酸脱氢酶（、乳酸脱氢酶（LDHLDH）R2R2：L-L-丙氨酸丙氨酸 、TrisTris缓冲液缓冲液天冬氨酸氨基转移酶试剂盒：天冬氨酸氨基转移酶试剂盒：R1:R1:-酮戊二酸、酮戊二酸、NADHNADH、苹果酸脱氢酶（、苹果酸脱氢酶（MDHMDH）、）、乳酸脱氢酶（乳酸脱氢酶（LDHLDH）R2R2：L-L-天门冬氨酸天门冬氨酸 、TrisTris缓冲液缓冲液 四、操作步骤四、操作步骤1.1.试剂准备：取试剂准备：取 10ml10ml

4、的的R2R2，溶解一瓶，溶解一瓶R1R1，充分溶解后即为工作液。，充分溶解后即为工作液。2.2.仪器准备：水浴锅调温仪器准备：水浴锅调温 37 37。紫外分光光度计，预热，波长。紫外分光光度计，预热，波长340nm340nm。2.2.按表操作：按表操作：3.3.混匀，混匀，3737水浴水浴1min1min，于空白管校零，精确读取，于空白管校零，精确读取1 1、2 2、3min3min吸光度，计算样本吸光度，计算样本每分钟吸光度变化率每分钟吸光度变化率A/minA/min。注：为减小误差，可先把工作液注：为减小误差，可先把工作液3737水浴水浴5min5min，混匀直接上机检测。，混匀直接上机检

5、测。加入物 空白管 样本管 血清 -300uL 生理盐水 300uL -工作液 3mL 3mL 五、结果计算五、结果计算ALTALT或或ASTAST（U/LU/L）=A/min=A/min =A/min=A/min 1 1000000 VtVtVsVs100010006 6.2222VtVtVsVsA/minA/min为两次测定的平均值为两次测定的平均值Vt=Vt=反应总体积反应总体积 Vs=Vs=血清体积血清体积=6 6.2222为为NADHNADH在在340nm340nm波长，比色皿光径波长，比色皿光径1cm1cm时的摩尔吸光系数时的摩尔吸光系数。六、参考范围六、参考范围 ALT ALT（

6、3737）：男性）：男性40U/L40U/L 女性女性31U/L31U/L AST AST（3737）：男性）：男性37U/L37U/L 女性女性31U/L31U/L 七、临床意义七、临床意义1.1.肝细胞损伤的灵敏指标肝细胞损伤的灵敏指标2.2.肝癌、肝硬化肝癌、肝硬化3.3.某些化学药物引起的肝脏损害某些化学药物引起的肝脏损害4.4.其他疾病或因素（肌炎、胸膜炎、其他疾病或因素（肌炎、胸膜炎、肾炎、肺炎）肾炎、肺炎）八、注意事项八、注意事项1.1.血清不易反复冻融，避免影响酶活性；血清不易反复冻融，避免影响酶活性；2.2.避免标本溶血；避免标本溶血；3.3.试剂变浑浊或者空白吸光度小于试剂

7、变浑浊或者空白吸光度小于0.9000.900，试，试剂不能使用。剂不能使用。TBIL、DBIL测定测定结合胆红素结合胆红素 未结合胆红素未结合胆红素+加速剂（破坏氢键）加速剂（破坏氢键）二、实验原理二、实验原理+重氮试剂重氮试剂偶氮胆红素偶氮胆红素 呈紫红色，测呈紫红色，测A A546546nmnm重氮盐法重氮盐法：（亚硝酸钠、对氨基苯磺酸）：（亚硝酸钠、对氨基苯磺酸）对氨基苯磺酸对氨基苯磺酸+HCL+NaNO2+HCL+NaNO2氯化重氮苯磺酸氯化重氮苯磺酸+NaCL+NaCL三、试剂与器材三、试剂与器材TBILTBIL试剂试剂R1R1主要成分：对氨基苯磺酸主要成分：对氨基苯磺酸 盐酸盐酸

8、十二烷基三甲基氯化铵十二烷基三甲基氯化铵DBILDBIL试剂试剂R1R1主要成分：主要成分：EDTAEDTA 对氨基苯磺酸对氨基苯磺酸 盐酸盐酸TBILTBIL、DBILDBIL试剂试剂R2R2主要成分：亚硝酸钠主要成分：亚硝酸钠TBILTBIL、DBILDBIL校准品（校准品（2.0mL2.0mL蒸馏水复溶后使用）蒸馏水复溶后使用）四四操操作作步步骤骤TBILTBIL测定：测定：1.TBIL1.TBIL工作液配制：取工作液配制：取R1R1和和R2R2按按5:15:1的比例混合待用；的比例混合待用；2.TBIL2.TBIL校准校准液配制液配制：取：取2ml2ml蒸馏水复溶待用；蒸馏水复溶待用；

9、3.3.按表操作：按表操作：4.4.混匀，混匀，3737保温保温1010minmin，于，于5 54646nmnm测定测定“A A”。DBILDBIL测定：测定：1.DBIL1.DBIL工作液配制：取工作液配制：取R1R1和和R2R2按按40:140:1的比例混合待用；的比例混合待用；2.DBIL2.DBIL校准校准液配制液配制：取：取2ml2ml蒸馏水复溶待用；蒸馏水复溶待用；3.3.按表操作：按表操作：4.4.混匀，混匀，3737保温保温2min2min，于，于546546nmnm测定测定“A A”。加入物 空白管 校准管 测定管 血清 -200uL 校准品 -200uL -生理盐水 20

10、0uL -工作液 4mL 4mL 4mL 加入物 空白管 校准管 测定管 血清 -160uL 校准品 -160uL -生理盐水 160uL -工作液 4mL 4mL 4mL五、结果计算五、结果计算C C样品样品=A=A样品样品/A/A校准校准*C C校准校准六、参考范围六、参考范围TBILTBIL：3.4-17.1umol/L3.4-17.1umol/LDBILDBIL：0-3.4umol/L0-3.4umol/L七、注意事项七、注意事项1.1.血液标本和标准液应避免阳光直照血液标本和标准液应避免阳光直照2.2.溶血、脂血对测定有干扰；溶血、脂血对测定有干扰；3.3.试剂具有一定的强酸性，注意

11、个人防护。试剂具有一定的强酸性，注意个人防护。八、临床意义八、临床意义1.1.血清总胆红素测定的意义：血清总胆红素测定的意义：（1 1）黄疸及黄疸程度的鉴别）黄疸及黄疸程度的鉴别 （2 2）肝细胞损伤程度和预后的判断）肝细胞损伤程度和预后的判断 （3 3）新生儿溶血症）新生儿溶血症 （4 4）再生障碍性贫血及数种继发性贫血血清总胆红）再生障碍性贫血及数种继发性贫血血清总胆红 素减少。素减少。2.2.血清结合胆红素测定的意义：结合胆红素与总胆红血清结合胆红素测定的意义：结合胆红素与总胆红 素的比值可用于鉴别黄疸类型。素的比值可用于鉴别黄疸类型。思考题思考题1.1.血清转氨酶测定为什么首选双试剂法？血清转氨酶测定为什么首选双试剂法？2.2.胆红素标本为什么要低温、避光保存？胆红素标本为什么要低温、避光保存？