艾滋病、梅毒及乙肝实验室检测.pptx

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1、梅毒的实验室检测梅毒的实验室检测永昌县妇幼保健站永昌县妇幼保健站综合产前检查服务综合产前检查服务+检测检测孕产妇参加产前检查服务检测前信息HBV 检测梅毒检测HIV 检测全血细胞计数和其它检测取血样2 梅毒的实验室检测梅毒的实验室检测3梅毒筛查检测梅毒筛查检测l 筛查检测筛查检测用于诊断产检、临产及分娩的孕产妇是否感染用于诊断产检、临产及分娩的孕产妇是否感染梅毒：梅毒血清学检测梅毒：梅毒血清学检测筛查检测应筛查检测应具有较高的灵敏度和特异度具有较高的灵敏度和特异度操作简单、容易获得、便宜操作简单、容易获得、便宜尽可能在尽可能在“当日当日”获得结果获得结果4筛查检测何时使用何种检测？筛查检测何时

2、使用何种检测？梅毒梅毒检测方法检测方法非梅毒螺旋体抗原血清学试验非梅毒螺旋体抗原血清学试验（RPRRPR或TRUSTTRUST检测）梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验（TPPATPPA、ELISA或梅毒快速检测）检测时间检测时间第一次产检（孕早期）第一次产检（孕早期）或下一次产检时如有必要，孕晚期再次检测此前无检测结果，则在分娩时检测5梅毒血清学试验基本实验室设备梅毒血清学试验基本实验室设备检方法检方法检测样本类型检测样本类型必要设备必要设备血清血清血浆血浆全血全血RPR/TRUSTRPR/TRUST水平旋转仪TPPATPPA震荡仪ELISAELISA酶标仪、洗板机POCTPOC

3、T检测检测无需特殊设备6血清学试验检测梅毒感染相关抗体血清学试验检测梅毒感染相关抗体u 非梅毒螺旋体抗原血清学试验（检测非特异性抗体）非梅毒螺旋体抗原血清学试验（检测非特异性抗体）RPR（快速血浆反应素环状卡片试验）TRUST（甲苯胺红不加热血清试验）VDRL（性病研究实验室试验）u梅毒螺旋体抗原血清学试验（检测特异性梅毒螺旋梅毒螺旋体抗原血清学试验（检测特异性梅毒螺旋体抗体）体抗体）TPPA（梅毒螺旋体颗粒凝集试验）ELISA（酶联免疫吸附试验）POC（快速检测、一站式检测）梅毒诊断检测梅毒诊断检测7l 梅毒早期诊断的依据之一是病原学检测，即在组织或分泌物中检测到苍白螺旋体：暗视野显微镜 镀

4、银染色镜检 梅毒诊断检测梅毒诊断检测8非梅毒螺旋体抗原血清学试验非梅毒螺旋体抗原血清学试验 梅毒螺旋体感染可产生非特异性抗体（非梅毒螺旋体抗体）非梅毒螺旋体抗体又称之为反应素，是抗心磷脂等抗原的抗体随菌体和宿主细胞的类脂质抗原量升高 除梅毒外，其他医学情况会造成非梅毒螺旋体抗原血清学试验假阳性结果，包括结核、疟疾、妊娠和风湿关节炎、狼疮及硬皮病等自体免疫学疾病9非梅毒螺旋体抗原血清学试验的特点非梅毒螺旋体抗原血清学试验的特点非梅毒螺旋体抗原血清学试验：非梅毒螺旋体抗原血清学试验：快速、简便、便宜 敏感性和特异性较高 硬下疳后1-2周变为阳性 可用于 筛查样本 评估对治疗的反应 鉴别复燃还是再次

5、感染10确保非梅毒螺旋体抗原血清学试验确保非梅毒螺旋体抗原血清学试验质量的关键点质量的关键点1.按照标准操作程序（SOPs）进行操作2.推荐使用评价特性较好的试剂*3.按照统一的标准报告结果4.开展实验室质控（QC）和参加室间能力验证（PT）*由中国疾病预防控制中心性病中心国家参比实验室提供11非梅毒螺旋体抗原血清学试验非梅毒螺旋体抗原血清学试验抗体滴度通常与疾病活动度有关。治疗后（可能几个月）非梅毒螺旋体抗原血清学试验通常转变为不反应如果用同一种实验，相同试验滴度4倍变化（如从1:16下降到1:4或从1:8上升到1:32）为临床显著变化有些病人，抗体滴度可始终处于较低水平，有时可持续终生（血

6、清固定）注意：注意：病人血清学监测应在同一个实验室使用同一种检测方法（RPR、TRUST）进行连续多次检测；RPR和TRUST方法均有效，但检测的滴度结果不能直接进行比较12治疗后非梅毒螺旋体抗原血清学试验治疗后非梅毒螺旋体抗原血清学试验抗体滴度变化的临床意义抗体滴度变化的临床意义一期梅毒和二期梅毒：成功治疗，抗体滴度应3个月后下降2倍6个月后下降4倍 一期梅毒：1年后抗体滴度转阴 二期梅毒：2年后抗体滴度转阴晚期梅毒：治疗后抗体滴度缓慢下降 50%的病人2年后抗体滴度仍为阳性13梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验梅毒螺旋体抗原血清学试验 检测梅毒螺旋体抗

7、原特异性抗体 可用于确认非梅毒螺旋体抗原血清学试验的阳性 结果，排除其假阳性 阳性结果可持续存在，即使治疗后仍可为阳性。*梅毒螺旋体抗原血清学试验与疾病的活动度无关，不能用于鉴别现症感染还是既往感染，也不能用于判断疗效*一期梅毒治疗病人中，一期梅毒治疗病人中，15%-25%15%-25%可在可在2-32-3年后转为血清学阴性年后转为血清学阴性14妊娠期梅毒检测妊娠期梅毒检测p 所有孕产妇应进行梅毒筛查检测：孕期尽早（如果可能，在孕早期时）以及 如果在分娩前/临产时没有筛查检测结果，在分娩时检测p 筛查检测可应用以下任何一类方法：非梅毒螺旋体抗原血清学试验（滴度）或 梅毒螺旋体抗原血清学试验p

8、所有筛查检测结果阳性的孕产妇都应用另外一类检测方法进行复检确认是否为现症梅毒p 所有产妇及所生婴儿出院前，产妇梅毒检测结果都应记录在病历中，以确保需要时给予治疗15孕产妇梅毒检测流程孕产妇梅毒检测流程非梅毒螺旋体抗原血清学非梅毒螺旋体抗原血清学试验试验梅毒螺旋体抗原血清学试梅毒螺旋体抗原血清学试验验孕产妇孕产妇治疗后，随访监测非治疗后，随访监测非梅毒螺旋体抗原血清梅毒螺旋体抗原血清学试验学试验非梅毒螺旋体抗原血清学非梅毒螺旋体抗原血清学试验试验梅毒螺旋体抗原血清学试梅毒螺旋体抗原血清学试验验每3个月进行非梅毒螺旋体个月进行非梅毒螺旋体抗原血清学试验抗原血清学试验如果需要进行治疗如果需要进行治疗

9、报告：报告：非梅毒螺旋体抗原非梅毒螺旋体抗原血清学试验阴性血清学试验阴性报告：两种检测均阳性两种检测均阳性治疗病人治疗病人报告：报告：梅毒螺旋体抗梅毒螺旋体抗原血清学试验原血清学试验阴性阴性报告：报告：非梅毒螺旋体抗原非梅毒螺旋体抗原血清学试验阳性血清学试验阳性梅毒螺旋体抗原血梅毒螺旋体抗原血清学试验阴性清学试验阴性报告：报告：梅毒螺旋体抗原血梅毒螺旋体抗原血清学试验阳性清学试验阳性非梅毒螺旋体抗原非梅毒螺旋体抗原血清学试验阴性血清学试验阴性阳性反应阴性反应阴性反应阳性反应阳性反应或阴性反应阳性反应阴性反应阳性反应16HIVHIV感染病人的梅毒血清学试验感染病人的梅毒血清学试验一些HIV感染病

10、人，其梅毒血清学试验结果不典型，包括滴度超常高或超常低滴度不断变动如果临床表现提示早期梅毒，而血清学试验结果与此不一致，考虑病灶活检 或暗视野显微镜检查注意：注意：对于大多数HIV感染病人而言，梅毒血清学试验是诊断梅毒感染、随访观察疗效准确、可靠的检测方法17梅毒血清学检测结果的解释梅毒血清学检测结果的解释非梅毒螺非梅毒螺旋体试验旋体试验梅毒螺旋梅毒螺旋体试验体试验临床参考意义临床参考意义+-RPR假阳性 考虑其他医学状况*+现症梅毒现症梅毒-+既往感染既往感染或极早期梅毒极早期梅毒-排除梅毒感染由于免疫缺陷，也可发生于艾滋病晚期*包括结核、疟疾、风湿性关节炎或妊娠。18 暴露婴儿的梅毒检测暴

11、露婴儿的梅毒检测19梅毒暴露婴儿先天梅毒检测梅毒暴露婴儿先天梅毒检测 母体非梅毒螺旋体和梅毒螺旋体IgG抗体可通过胎盘，所以应谨慎地对婴儿梅毒血清学试验结果进行解释 婴儿需要接受预防性治疗还是规范的抗梅毒治疗应根据：母亲确诊梅毒感染母亲治疗情况婴儿梅毒感染的临床表现、实验室或放射线检查结果母亲及婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验滴度水平的比较（尽可能在同一个实验室使用相同的试验方法）20先天梅毒的诊断先天梅毒的诊断先天梅毒的诊断标准：先天梅毒的诊断标准：梅毒暴露婴儿具有以下条件之一：梅毒暴露婴儿具有以下条件之一：任何先天梅毒临床表现暗视野显微镜检梅毒螺旋体阳性（+）梅毒螺旋体IgM抗体阳性*RPR

12、/TRUST检测阳性，滴度比母亲分娩前最近一次 滴度高4倍及以上RPR/TRUST监测随访中，任何一次滴度不下降或反 而上升满18月龄后，TPPA检测阳性*IgM抗体反映近期感染，可帮助鉴别婴儿先天梅毒，但我国尚不能广泛开展21梅毒暴露婴儿的评估梅毒暴露婴儿的评估梅毒暴露婴儿：l婴儿RPR检测 婴儿RPR检测不能使用脐带血，因其易被母体 血液 污染，从而出现假阳性结果l检查先天梅毒临床表现：非免疫性水肿、黄疸、肝脾大、鼻炎、皮疹、末端肢体假性麻痹l对可疑病灶或体液进行暗视野显微镜检查22先天梅毒检测流程先天梅毒检测流程 婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验定量检测梅毒暴露婴儿母亲、婴儿非梅毒螺旋体抗

13、原血清学试验定量检测（应同时进行梅毒螺旋体抗原血清学试验，用于随访诊断）组织或分泌物暗视野显微镜检，有条件进行IgM抗体检测报告母亲、婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验检测滴度水平报告婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验检测滴度水平报告暗视野显微镜检或IgM抗体检测结果阳性阴性或没有梅毒感染的症状有梅毒感染的症状23梅毒梅毒p早期梅毒诊断可根据在组织或分泌物样本中通过显微检测到早期梅毒诊断可根据在组织或分泌物样本中通过显微检测到苍白螺旋体而诊断苍白螺旋体而诊断p应用梅毒血清学试验进行梅毒筛查应用梅毒血清学试验进行梅毒筛查非梅毒螺旋体抗原血清学试验检测梅毒感染过程中产生的非特异抗体。滴度通常与疾病的活动度

14、有关，因此可用于监测对治疗的反应梅毒螺旋体抗原血清学试验检测对抗梅毒螺旋体抗原的特异性抗体，可用于确认临床诊断或非梅毒螺旋体抗原血清学试验的阳性结果，可反映任何阶段的梅毒暴露p先天梅毒的诊断复杂，应根据：先天梅毒的诊断复杂，应根据：1.母亲梅毒感染状态2.母亲梅毒治疗情况3.婴儿梅毒感染的临床表现、实验室或X线检查结果4.母亲、婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验滴度水平的比较5.随访24HIVHIV和和HBVHBV的实验室检测的实验室检测HIVHIV和和HBVHBV筛查检测筛查检测p筛查检测筛查检测n 用于诊断产检、临产及分娩的孕产妇是否感染用于诊断产检、临产及分娩的孕产妇是否感染 HIV HIV

15、和和HBVHBVHIVHIV抗体检测抗体检测乙肝表面抗原（乙肝表面抗原（HBsAgHBsAg）检测）检测n 筛查检测应筛查检测应具有较高的灵敏度和特异度具有较高的灵敏度和特异度操作简单、容易获得、便宜操作简单、容易获得、便宜尽可能在尽可能在“当日当日”获得结果获得结果26何时使用何种检测？何时使用何种检测？HIVHBV检测方法检测方法 HIV HIV快速检测快速检测 和/或 ELISA HBsAg HBsAg检测检测 如果有条件，其他乙肝 标记物检测检测时间检测时间第一次产检（孕早期）第一次产检（孕早期）或下一次产检时此前未检测，分娩时应检测第一次产检（孕早期）第一次产检（孕早期）或下一次产检

16、时此前未检测，分娩时应检测27 HIVHIV试验和检测试验和检测28HIVHIV检测：抗体检测检测：抗体检测p 一个人感染了一个人感染了HIVHIV病毒后，体内将产生特异性抗体病毒后，体内将产生特异性抗体 对抗对抗HIVHIV病毒病毒*。p HIV HIV抗体通常在感染后抗体通常在感染后4 4 6 6周出现，但也周出现，但也有时也会有时也会 在在感染后感染后3 3个月才出现。个月才出现。p 从从感染感染HIVHIV病毒到病毒到出现特异的出现特异的HIVHIV抗体抗体的一段时期的一段时期 称为称为“窗口期窗口期”。标准的标准的HIVHIV诊断检测是识别诊断检测是识别HIVHIV抗体抗体*注意：注

17、意：*与其他大多数疾病不同，与其他大多数疾病不同，HIVHIV抗体没有保护性作用。抗体没有保护性作用。29HIVHIV检测：病毒核酸检测检测：病毒核酸检测这些检测这些检测检测HIV感染者血液或血浆中的病毒必须由经过专门培训的实验室人员操作实验室需有资质，并配备专门设备昂贵，不是针对所有人进行的常规检测方法PCRPCR（多聚酶连反应法）检测（多聚酶连反应法）检测HIV DNAHIV DNA定性检测血液中是否含有病毒，用于诊断诊断 18 18月龄内婴儿是否感染月龄内婴儿是否感染HIVHIVHIV RNAHIV RNA定量检测病毒载量病毒载量，即血浆中的病毒数量，用于监测对抗病毒治疗的反应监测对抗病

18、毒治疗的反应。30HIVHIV筛查检测结果的含义筛查检测结果的含义HIV筛查检测结果“阴性阴性(-)(-)”：受检者没有受检者没有感染HIV或者或者受检者已经感染了HIV，但处于窗口期：3个月后 再次进行检测HIV筛查检测结果“阳性阳性(+)(+)”：病人可能可能已经感染HIV,但应再次重复检测31HIVHIV确认试验结果的含义确认试验结果的含义l 如果筛查检测结果阳性阳性，两次重复检测中1次 或2次检测结果为阳性阳性，需要进行确认试验l 免疫印迹法（WB）确认试验结果：阳性阳性病人确认确认感染HIV阴性阴性受检者没有受检者没有感染HIV不确定不确定结果为“不确定”受检者必须在4周后再次采血，

19、重复前述所有步骤进行检测32产时产时HIVHIV抗体检测流程抗体检测流程中中国国预预防防艾艾滋滋病病、梅梅毒毒和和乙乙肝肝母母婴婴传播传播HIVHIV检测流程检测流程33儿童儿童HIV HIV 检测检测34HIVHIV暴露婴儿和儿童的暴露婴儿和儿童的HIVHIV抗体检测抗体检测 不是所有不是所有HIVHIV感染母亲所生儿童都会感染感染母亲所生儿童都会感染HIVHIV，但，但是如果对是如果对12-1812-18个月以内的婴儿进行个月以内的婴儿进行HIVHIV抗体检测抗体检测，所，所有有HIVHIV感染母亲所生婴儿都将是感染母亲所生婴儿都将是HIVHIV检测结果阳性。检测结果阳性。即使婴儿并没有感

20、染即使婴儿并没有感染HIVHIV 由于母体自身抗体可通过胎盘进入胎儿体内由于母体自身抗体可通过胎盘进入胎儿体内母体传入的抗体可在婴儿体内持续18个月，所以12-18月龄以内的婴儿不能应用抗体检测方法进行诊断。35婴儿感染早期诊断（婴儿感染早期诊断（EIDEID）HIVHIV病毒检测（病毒检测（DNA-PCRDNA-PCR）HIVHIV病毒检测（病毒检测（DNA-PCRDNA-PCR）检测细胞内的HIV病毒，能够检测低至1 10 拷贝前病毒DNA，以及 可在HIV暴露婴儿出生后6周内诊断HIV感染 用于HIV暴露婴儿HIV感染早期诊断（EID）36应用应用DNA-PCRDNA-PCR方法进行方法

21、进行婴儿感染早期诊断（婴儿感染早期诊断（EIDEID）（）（1 1）如果可以开展HIV DNA-PCR检测，应用干血斑（DBS）在婴儿6 6周龄周龄时进行PCR检测。如果PCR检测结果阳性阳性 尽快再次采血再次进行DNA-PCR检测如果第二次PCR检测结果阳性阳性，婴儿确定感染HIV如果PCR检测结果阴性阴性 婴儿出生后3个月再次进行PCR检测37应用应用DNA-PCRDNA-PCR方法进行方法进行婴儿感染早期诊断（婴儿感染早期诊断（EIDEID）（）（2 2）出生后出生后3 3个月个月再次进行HIV DNA-PCR检测如果PCR检测结果阳性阳性 尽快再次采血再次进行DNA-PCR检测如果第二

22、次PCR检测结果阳性阳性，婴儿确定感染HIV如果PCR检测结果阴性阴性 婴儿视为未感染HIV考虑在婴儿满12月龄时进行HIV抗体检测（如有必要，在18月龄时再次进行检测）检测结果阴性的检测结果阴性的婴儿婴儿接受接受母乳喂养，必须在停止母乳母乳喂养，必须在停止母乳喂养后喂养后6 6周再次进行周再次进行PCRPCR检测，以确保婴儿没有在母乳检测，以确保婴儿没有在母乳喂养期间感染喂养期间感染HIVHIV。38婴儿婴儿HIVHIV感染早期诊断流程感染早期诊断流程39HIVHIV暴露婴儿暴露婴儿/儿童的儿童的HIVHIV抗体检测抗体检测所有HIV感染母亲所生儿童，在出生后6周或3个月未接受早期感染检测者

23、，应进行HIV抗体检测。检测时间：满12月龄 和满18月龄（必要时，见HIV抗体检测流程）出生后3个月（接受早期感染检测者）检测结果为阴性的儿童也应接受HIV抗体检测满18月龄HIV抗体检测阳性，可确认儿童HIV感染。40HIVHIV暴露儿童暴露儿童HIVHIV抗体检测流程抗体检测流程41HIVHIV感染的实验室监测感染的实验室监测42检测检测检测检测对象对象原因原因临床指导临床指导CD4+T淋巴细胞计数所有HIV感染孕产妇基线评估是否需要抗病毒治疗抗病毒治疗：CD4 350个细胞/mm3预防应用抗病毒药物：CD4 350个细胞/mm3全血细胞计数（CBC）所有HIV感染孕产妇AZT(叠氮胸苷

24、）可引起贫血或白细胞计数降低如果Hb1000万IU/ml），婴 儿有免疫保护l 如果HBsAg阴性和抗HBs抗体 1000万IU/ml，婴儿应再次接受3剂乙肝疫苗接种48要点要点-HIVHIVp 使用快速筛查试验诊断HIV感染。筛查检测结果阳性 进行确认试验以保证结果的准确性。p HIV感染抗病毒治疗应根据：CD4+T淋巴细胞计数检测结果，反映HIV对免疫系统 的影响 HIV病毒载量检测结果，反映血液中HIV病毒的数量p 如果有条件，应用 PCR方法检测HIV-DNA诊断婴儿 是否HIV感染p 儿童满12-18月龄，HIV抗体检测方可确认儿童是否感染49要点要点-HBVHBVp 通过筛查HBs

25、Ag诊断HBV感染p 如有条件，筛查HBsAg结果阳性，可进一步检测 其他 HBV标记物p HBsAg阳性母亲所生婴儿，出生时接受乙肝疫苗 接种，应在出生后12个月接受HBsAg和抗HBs抗体 检测50梅毒甲苯胺红不加热血清试验诊断试剂梅毒甲苯胺红不加热血清试验诊断试剂操作操作SOP一、目的：本试剂采用VDRL抗原重悬于含有特制的甲苯胺红溶液中制成。供在白色卡片上进行试验，以检测血清或血浆中反应素用。可作为梅毒病人的诊断和疗效之参考。二、适用范围：适用于TRUST检测法，手工操作。三、支持性文件：TRUST试剂盒操作说明书。四、原理：梅毒甲苯胺红不加热血清试验。五、仪器：六、试剂：购买上海荣盛

26、生物药业TRUST试剂。规格为1*120Test或1*480Test。七、样本要求：标本应尽快送实验室2小时内离心分离，在室温（15-30）中放置不超过8h，2-8保存可稳定2天。不能在48h内完成，需分离血清置-15-20保存，不能反复冻溶。尽量不使用溶血标本，每天检测一次。标本保存三天，具体要求详见标本采集及处理的SOP文件。八、操作步骤：1、平衡：将试剂盒各组分别从盒中取出，平衡至室温（1825），方可开封，余者及时封存。TRUST试剂使用前应充分摇匀。2、编号：将纸卡固定于机器上，按序编号。3、定性试验：（1）分别吸取50微升梅毒阳性对照和阴性对照均匀铺加在纸卡的两个圆圈中。（2）取待

27、检血清或血浆50微升（不需灭活）置于纸卡的另一圆圈中。（3）用专用滴管及针头垂直分别滴加TRUST试剂1滴（或25ul30ul）于上述血清中。（4）按每分钟100转摇动8分钟，肉眼观察结果。4、定量试验：将待检血清用生理盐水作倍比稀释，然后按上述定性方法进行比较试验，以呈现明显凝集反应的最高稀释度作为该血清的凝集效价。5、结果判定：（1）阳性反应（+）：可见中等或较大的红色凝聚物。（2）弱阳性反应（+）：可见较小的红色凝聚物。（3）阴性反应（-）：可见均匀的抗原颗粒而无凝聚物。6、出具结果检验报告。九、注意事项：1、本实验在2329条件下进行。2、TRUST试剂使用前应充分摇匀。3、本实验系非特异性反应，需结合临床进行综合分析，必要时需作梅毒螺旋体抗体特异性试验。十、失控处理：查看试剂、检查仪器状态、重检。谢谢 谢！谢！56