基因扩增实验室常用仪器设备的使用和维护.ppt
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1、 基因扩增实验室常用仪器设备基因扩增实验室常用仪器设备的使用和维护的使用和维护卫生部临床检验中心 王露楠第一页,编辑于星期六:二十一点 二十三分。PCR热循环仪(热循环仪(DNA扩增仪)扩增仪)高速高速(冷冻冷冻)离心机离心机漩涡振荡混旋器漩涡振荡混旋器恒温水浴箱恒温水浴箱/恒温金属浴恒温金属浴洗板机(洗板机(PCR-ELISA)PCR-ELISA)酶标仪酶标仪(PCR-ELISA)(PCR-ELISA)加样器加样器-http:/www.sx-http:/-http:/-第二页,编辑于星期六:二十一点 二十三分。PCR热循环仪(热循环仪(DNA扩增仪)扩增仪)PCR扩增仪的原理及发展状况扩增仪
2、的原理及发展状况:PCRPCR扩增仪原理扩增仪原理 国内常见扩增仪简介国内常见扩增仪简介 国内常见荧光定量国内常见荧光定量PCR仪简介仪简介PCR扩增仪的使用与保养扩增仪的使用与保养第三页,编辑于星期六:二十一点 二十三分。PCR扩增仪的原理及发展状况扩增仪的原理及发展状况(1 1)梯度水浴法)梯度水浴法第四页,编辑于星期六:二十一点 二十三分。(2 2)空气驱动循环恒温装置)空气驱动循环恒温装置本本系系统统力力求求降降低低部部件件的的成成本本,用用空空气气作作为为热热传传导导媒媒介介。装装置置包包括括机机箱箱(外外壳壳)、热热源源、冷冷空空气气源源、控制器和辅助电器元件等部分。控制器和辅助电
3、器元件等部分。优优点点:不不用用金金属属的的精精密密加加工工,成成本本降降低低。整整个个系系统统没没有有液液体体流流动动,不不用用致致冷冷液液,因因而而安安全程度高。恒温精度可达全程度高。恒温精度可达 1 。缺缺点点:单单纯纯靠靠外外部部空空气气制制冷冷,受受环环境境温温度度影影响。响。第五页,编辑于星期六:二十一点 二十三分。(3)变温金属块作恒温装置)变温金属块作恒温装置加热方式有电热发热、半导体发热,制加热方式有电热发热、半导体发热,制冷方式有半导体制冷和压缩机制冷等多冷方式有半导体制冷和压缩机制冷等多种方式。种方式。国外产品的特点是产品质量和性能较稳定。国外产品的特点是产品质量和性能较
4、稳定。机型:适用,建议机型:适用,建议 8*12孔德模式。孔德模式。第六页,编辑于星期六:二十一点 二十三分。国内常见扩增仪简介国内常见扩增仪简介T11-IIT11-II型基因扩增仪(华美生物工程公型基因扩增仪(华美生物工程公司)司)温度设定范围:温度设定范围:温度设定范围:温度设定范围:室温室温室温室温-99-99-99-99 C C C C样品批量能力:样品批量能力:样品批量能力:样品批量能力:48484848 0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml或或或或16161616 1.5ml1.5ml离心管离心管动动动动态态态态显显显显示示示示内内内内容容容容:实实实实时时时时温温温温度度度度
5、、到到到到计计计计数数数数时时时时间间间间、到到到到计计计计数数数数循循循循环数环数环数环数主主主主要要要要功功功功能能能能:整整整整机机机机全全全全自自自自动动动动化化化化运运运运行行行行,线线线线性性性性运运运运动动动动臂臂臂臂同同同同时时时时具具具具有自动和手动功能;具有断有自动和手动功能;具有断有自动和手动功能;具有断有自动和手动功能;具有断电恢复功能;可贮存电恢复功能;可贮存128128个用户文件。个用户文件。-http:/-http:/-http:/-http:/-第七页,编辑于星期六:二十一点 二十三分。2400型型DNA扩增系统扩增系统(美国应用生物系统公司)美国应用生物系统公
6、司)最大样本数:可同时扩增最大样本数:可同时扩增3*83*8个个0.2ml PCR0.2ml PCR反应管。反应管。温度范围:温度范围:4-99.94-99.9加热冷却速度:样本实际升降温速度平均为加热冷却速度:样本实际升降温速度平均为1/1/秒。秒。静态样本均衡性:静态样本均衡性:0.50.5,35-10035-100范围。范围。温度精度:温度精度:35-10035-100间误差小于间误差小于0.750.75。特特点点:所所附附加加热热盖盖保保证证防防止止样样品品蒸蒸发发,无无需需加加石石蜡蜡油油操操作作,满满足足最最小小5 5 l l体体积积;扩扩增增反反应应的的要要求求;可可储储存存68
7、68个个PCRPCR方方法法,每每个个方方法法包包括括PCRPCR前前处处理理,保保温温,PCRPCR循循环环及及PCRPCR扩扩增增后后保保温温条条件件;断断电电后后有自动启动功能。有自动启动功能。第八页,编辑于星期六:二十一点 二十三分。PTC-200 热循环仪(MJ公司产品)最最最最大大大大样样样样本本本本数数数数:多多多多样样样样本本本本载载载载板板板板可可可可选选选选择择择择,其其其其中中中中包包包包括括括括扩扩扩扩增增增增96969696个个个个0.2ml PCR0.2ml PCR0.2ml PCR0.2ml PCR反应管。反应管。反应管。反应管。温度范围:温度范围:-5-105-
8、5-105加热速度:样本实际升温速度为加热速度:样本实际升温速度为加热速度:样本实际升温速度为加热速度:样本实际升温速度为3.5/3.5/3.5/3.5/秒。秒。秒。秒。温度精度:孔间温度差异小于温度精度:孔间温度差异小于0.30.3。特特点点:采采用用可可调调压压力力和和高高度度的的热热盖盖,防防止止样样品品蒸蒸发发,无无需需加加石石蜡蜡油油操操作作;三三种种温温控控选选择择:模模块、样本内参或电脑模拟计算。块、样本内参或电脑模拟计算。第九页,编辑于星期六:二十一点 二十三分。Eppendorf梯度PCR仪最最最最大大大大样样样样本本本本数数数数:是是是是唯唯唯唯一一一一可可可可同同同同时时
9、时时防防防防置置置置0.2ml0.2ml0.2ml0.2ml和和和和0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml反反反反应应应应管管管管的的的的扩扩扩扩增增增增仪仪仪仪,可可可可同同同同时时时时扩扩扩扩增增增增96969696个个个个0.2ml 0.2ml 0.2ml 0.2ml PCRPCRPCRPCR反反反反应应应应管管管管和和和和77777777个个个个0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml反应管。反应管。反应管。反应管。温度范围:温度范围:温度范围:温度范围:4-994-994-994-99加热速度:加热速度:3/3/秒。冷却速度:秒。冷却速度:2/2/秒。秒。温度准确性:温度准确性:温
10、度准确性:温度准确性:0.2 0.2。特特特特点点点点:循循循循环环环环时时时时可可可可对对对对变变变变性性性性、退退退退火火火火和和和和延延延延伸伸伸伸同同同同时时时时设设设设温温温温度度度度梯度。梯度。梯度。梯度。第十页,编辑于星期六:二十一点 二十三分。PCR扩增仪的使用与保养扩增仪的使用与保养PCRPCR仪应放在临床基因扩增实验室的第三区。仪应放在临床基因扩增实验室的第三区。仪应放在临床基因扩增实验室的第三区。仪应放在临床基因扩增实验室的第三区。仪器应放置水平台上,电源电压须与仪器要求电压仪器应放置水平台上,电源电压须与仪器要求电压仪器应放置水平台上,电源电压须与仪器要求电压仪器应放置
11、水平台上,电源电压须与仪器要求电压相一致,并连接可靠的地线。仪器远离水源、明火相一致,并连接可靠的地线。仪器远离水源、明火相一致,并连接可靠的地线。仪器远离水源、明火相一致,并连接可靠的地线。仪器远离水源、明火及腐蚀性物质。及腐蚀性物质。及腐蚀性物质。及腐蚀性物质。工作室温要求:工作室温要求:工作室温要求:工作室温要求:15-25 15-25,通风保证散热。,通风保证散热。,通风保证散热。,通风保证散热。接稳压电源。尤其是半导体升温降温的设备。接稳压电源。尤其是半导体升温降温的设备。接稳压电源。尤其是半导体升温降温的设备。接稳压电源。尤其是半导体升温降温的设备。每每次次实实验验时时,最最好好能
12、能将将扩扩增增仪仪内内的的孔孔位位全全部部放放置置样样品品管管,若若样样品品管管少少时时可可用用空空管管代代替替,以以保保证实验的一致性和重复性。证实验的一致性和重复性。第十一页,编辑于星期六:二十一点 二十三分。PCR扩增仪的使用与保养扩增仪的使用与保养实实验验结结束束后后应应及及时时擦擦干干孔孔位位内内呆呆能能存存在在的的水水分,盖上机盖。分,盖上机盖。应定期使用电子测温仪校准温度。应定期使用电子测温仪校准温度。水浴式扩增仪应及时补充水,以免水量过水浴式扩增仪应及时补充水,以免水量过少,影响温度稳定性。少,影响温度稳定性。定期清洁热盖和反应孔。定期清洁热盖和反应孔。http:/第十二页,编
13、辑于星期六:二十一点 二十三分。国内常见荧光定量国内常见荧光定量PCR仪简介仪简介GeneAmp 5700GeneAmp 5700型荧光定量型荧光定量PCRPCR仪仪Lightcycler 荧光定量荧光定量PCR系统系统ABI 7000ABI 7000型荧光定量型荧光定量PCRPCR仪仪杭州博日杭州博日 Line-gene Line-gene第十三页,编辑于星期六:二十一点 二十三分。LightCycler(Roche)Rotor-Gene(Corbett Research)ABI Prism(Applied Biosystems)第十四页,编辑于星期六:二十一点 二十三分。GeneAmp 5
14、700GeneAmp 5700型荧光定量型荧光定量PCRPCR仪仪仪器特点外标定量,熔点曲线分析。外标定量,熔点曲线分析。外标定量,熔点曲线分析。外标定量,熔点曲线分析。5700采用基于采用基于CT值之实时动态荧光定量值之实时动态荧光定量值之实时动态荧光定量值之实时动态荧光定量PCRPCR方法,方法,方法,方法,结果重复性好,线性范围广,可分别用于结果重复性好,线性范围广,可分别用于结果重复性好,线性范围广,可分别用于结果重复性好,线性范围广,可分别用于TaqMan TaqMan 荧光探针技术作定量荧光探针技术作定量荧光探针技术作定量荧光探针技术作定量PCRPCR和和和和SYBR GreenS
15、YBR Green荧光染料作荧光染料作荧光染料作荧光染料作定量定量定量定量PCRPCR。一次最多可同时分析一次最多可同时分析一次最多可同时分析一次最多可同时分析9696个样品,荧光检测波长范围个样品,荧光检测波长范围个样品,荧光检测波长范围个样品,荧光检测波长范围530-590nm530-590nm。第十五页,编辑于星期六:二十一点 二十三分。GeneAmp 5700GeneAmp 5700型荧光定量型荧光定量PCRPCR仪仪 影响测定结果的因素域值设定域值设定域值设定域值设定光路维护光路维护光路维护光路维护加样的准确性和反应体系的均一性加样的准确性和反应体系的均一性加样的准确性和反应体系的均
16、一性加样的准确性和反应体系的均一性反应管中是否有气泡反应管中是否有气泡反应管中是否有气泡反应管中是否有气泡反应管不符合荧光检测要求或疏水性差反应管不符合荧光检测要求或疏水性差反应管不符合荧光检测要求或疏水性差反应管不符合荧光检测要求或疏水性差反应管或反应槽被荧光物质污染反应管或反应槽被荧光物质污染反应管或反应槽被荧光物质污染反应管或反应槽被荧光物质污染反应管用记号笔做标记反应管用记号笔做标记反应管用记号笔做标记反应管用记号笔做标记淘宝网热卖女装淘宝网热卖女装淘宝网热卖女装淘宝网热卖女装 http:/ http:/第十六页,编辑于星期六:二十一点 二十三分。第十七页,编辑于星期六:二十一点 二十
17、三分。第十八页,编辑于星期六:二十一点 二十三分。Lightcycler 荧光定量荧光定量PCR系统系统 原理和特点可使用外标法定量,可加内对照,可做熔点曲线分析。单一光路的三个检测点对样本同时进行三个波长的荧光检测,扩赠与检测同时进行,提供实时分析和在线监测。引入独特的颜色补偿试剂和软件以消除个检测通道其它染料荧光的干扰。一次可做32个样本。公用热室,保证单次PCR个样本的状况连续一致。循环速度快,20-30分钟完成30-40个循环,一次检测样本数32个。第十九页,编辑于星期六:二十一点 二十三分。Lightcycler 荧光定量荧光定量PCR系统系统清洁和维护清洁和维护反应槽和内壁均可用家
18、用洗涤剂清洁,但反应槽和内壁均可用家用洗涤剂清洁,但反应槽必须在取出后才能进行清洁。反应槽必须在取出后才能进行清洁。当毛细管破碎时,首先用仪器厂家提供的毛当毛细管破碎时,首先用仪器厂家提供的毛刷将碎片去除,再用刷将碎片去除,再用70%乙醇清洗反应槽。乙醇清洗反应槽。光路部分须用无水乙醇清洁光路部分须用无水乙醇清洁第二十页,编辑于星期六:二十一点 二十三分。ABI 7000ABI 7000型荧光定量型荧光定量PCRPCR仪仪检测原理和特点检测原理和特点采用精确的化学原理和多组分计算方法,可准确采用精确的化学原理和多组分计算方法,可准确采用精确的化学原理和多组分计算方法,可准确采用精确的化学原理和
19、多组分计算方法,可准确检测和处理检测和处理检测和处理检测和处理PCRPCR指数级扩增的数据,得出高精度重指数级扩增的数据,得出高精度重指数级扩增的数据,得出高精度重指数级扩增的数据,得出高精度重现的现的现的现的C Ct t值,多色荧光检测,实时数据监控,并有值,多色荧光检测,实时数据监控,并有值,多色荧光检测,实时数据监控,并有值,多色荧光检测,实时数据监控,并有熔点曲线分析。熔点曲线分析。熔点曲线分析。熔点曲线分析。荧光波长范围荧光波长范围荧光波长范围荧光波长范围500-660nm,可分别用于可分别用于可分别用于可分别用于TaqMan TaqMan 荧光探针技术作定量荧光探针技术作定量荧光探
20、针技术作定量荧光探针技术作定量PCRPCR和和和和SYBR GreenSYBR Green荧光染料作定量荧光染料作定量荧光染料作定量荧光染料作定量PCRPCR。第二十一页,编辑于星期六:二十一点 二十三分。杭州博日杭州博日 Line-geneLine-gene检测原理和特点检测原理和特点内标定量和外标定量,激发光波长内标定量和外标定量,激发光波长470nm,荧光检测波长荧光检测波长530nm、640nm和和710nm。对对PCR扩增全过程进行实时动态监测。扩增全过程进行实时动态监测。一次最多可同时分析一次最多可同时分析33个样品,最大循个样品,最大循环数为环数为99。第二十二页,编辑于星期六:
21、二十一点 二十三分。高速高速(冷冻冷冻)离心机离心机使用方法使用方法注意事项注意事项维护和保养维护和保养第二十三页,编辑于星期六:二十一点 二十三分。使用方法使用方法离心机应放置在水平坚固的地板或平台上,并离心机应放置在水平坚固的地板或平台上,并力求使机器处于水平位置以免离心时造成机器力求使机器处于水平位置以免离心时造成机器震动。震动。打打打打开开开开电电电电源源源源开开开开关关关关,按按按按要要要要求求求求装装装装上上上上所所所所需需需需的的的的转转转转头头头头,将将将将预预预预先先先先平平平平衡衡衡衡好好好好的的的的样样样样品品品品放放放放置置置置于于于于转转转转头头头头样样样样品品品品架
22、架架架上上上上(离离离离心心心心筒筒筒筒须须须须与与与与样样样样品品品品同时平衡),关闭机盖。同时平衡),关闭机盖。同时平衡),关闭机盖。同时平衡),关闭机盖。按按按按功功功功能能能能选选选选择择择择键键键键,设设设设置置置置各各各各项项项项要要要要求求求求:温温温温度度度度、速速速速度度度度、时时时时间间间间、加加加加速速速速度度度度及及及及减减减减速速速速度度度度,带带带带电电电电脑脑脑脑控控控控制制制制的的的的机机机机器器器器还还还还需需需需按按按按储存键,以便记忆输入的各项信息。储存键,以便记忆输入的各项信息。储存键,以便记忆输入的各项信息。储存键,以便记忆输入的各项信息。待待待待离离
23、离离心心心心机机机机完完完完全全全全停停停停止止止止转转转转动动动动时时时时打打打打开开开开机机机机盖盖盖盖,取取取取出出出出离离离离心心心心样样样样品品品品,用用用用柔柔柔柔软软软软干干干干净净净净的的的的布布布布擦擦擦擦净净净净转转转转头头头头和和和和机机机机腔腔腔腔内内内内壁壁壁壁,待待待待离离离离心心心心机机机机腔腔腔腔内温度与室温平衡后方可盖上机盖。内温度与室温平衡后方可盖上机盖。内温度与室温平衡后方可盖上机盖。内温度与室温平衡后方可盖上机盖。第二十四页,编辑于星期六:二十一点 二十三分。注意事项注意事项机机体体应应始始终终处处于于水水平平位位置置,外外接接电电源源系系统统的的电电压
24、要匹配,并要求有良好的接地线。压要匹配,并要求有良好的接地线。开开开开机机机机前前前前应应应应检检检检查查查查转转转转头头头头按按按按装装装装是是是是否否否否牢牢牢牢固固固固,机机机机腔腔腔腔有有有有无无无无异异异异物物物物掉入。掉入。掉入。掉入。样品应预先平衡。样品应预先平衡。样品应预先平衡。样品应预先平衡。离离离离心心心心机机机机运运运运行行行行时时时时,离离离离心心心心机机机机周周周周围围围围30cm30cm30cm30cm范范范范围围围围内内内内不不不不能能能能有有有有人人人人和危险物品。和危险物品。和危险物品。和危险物品。挥挥挥挥发发发发性性性性或或或或腐腐腐腐蚀蚀蚀蚀性性性性液液液
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