仪器分析-色谱定性定量.ppt

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1、三、色谱定性与定量方法三、色谱定性与定量方法人参药材的HPLC图谱5118754236人参皂苷标准品的HPLC色谱图Rg1Rb1Re丙二酰基人参皂苷Rb1面积归一：Rg1=1.0%,Rb1=3.5%外标法：Rg1=0.2%,Rb1=0.5%1.1.色谱定性分析色谱定性分析两类方法：（1）利用保留值及其规律定性（2）与其它仪器或化学方法联合定性 （1）利用保留值及其规律定性 各物质在一定的色谱条件下均有确定不变的保留值，因此保留值可作为定性指标。利用纯物对照定性 利用文献值对照定性（很少用）纯物质对照定性纯物质对照定性n n实现方法利用保留时间和保留体积定性 用相对保留值定性 用已知物增加峰高法

2、定性 n n应用范围：适用于简单混合物，对该样品已有了解并具有纯物质的情况。n n优点：应用简便，不需要其他仪器。n n缺点：定性结果的可信度不高。提高可信度的方法：双柱、双体系定性提高可信度的方法：双柱、双体系定性文献值对照定性分析文献值对照定性分析（GC）n n实现方法测定相对保留值测定相对保留值r ri,si,s测定保留指数测定保留指数I I n n优点：无需纯物质；保留指数具有较好的重无需纯物质；保留指数具有较好的重现性和精密度；参数只与固定相和柱温有关。现性和精密度；参数只与固定相和柱温有关。n n缺点：对结构复杂的物质，缺乏数据。对结构复杂的物质，缺乏数据。n n适用范围：适用于简

3、单混合物，无需纯物质。适用于简单混合物，无需纯物质。(2)与其它仪器或化学方法联合定性n n离线联用方式n n在线联用方式离线联用方式离线联用方式收集方法：收集方法：GCGC中一般采用液氮冷阱冷却后中一般采用液氮冷阱冷却后收集收集 应用范围：无标准物时，可对较为复杂的应用范围：无标准物时，可对较为复杂的混合物进行定性分析混合物进行定性分析缺点：麻烦缺点：麻烦在线联用方式在线联用方式混混合合物物经经色色谱谱分分离离后后，将将各各组组分分直直接接由由接接接接口口口口导导入入其其它它仪仪器器中中进进行行定定性性。常常用用的的联联用用方方法法有有：GC-MSGC-MSGC-MSGC-MS、GC-FTI

4、RGC-FTIRGC-FTIRGC-FTIR、LC-MS,LC-MS,LC-MS,LC-MS,其其它它仪仪器器相相当当于于色色色色谱谱谱谱仪仪仪仪的的的的检检检检测器。测器。测器。测器。使用范围：使用范围：复杂样品的定性。复杂样品的定性。优点：优点：不需要标准物，定性结果可信度高，操作不需要标准物，定性结果可信度高，操作方便。方便。缺点：缺点：需要特殊仪器或设备。需要特殊仪器或设备。GC-MS2 2、色谱定量分析、色谱定量分析n n 定量基础 色色谱谱定定量量分分析析是是基基于于被被测测物物质质的的量量与与峰峰面积成正比面积成正比。在一定色谱条件下有：n n定量要解决的问题定量要解决的问题n

5、n峰面积的测量和计算n n校正因子的测量与计算n n色谱定量方法及其应用峰面积的测量与计算峰面积的测量与计算积分仪积分仪色谱工作站色谱工作站 简便、速度快，精度高，可达0.2-2%0.2-2%，对小峰及不对称峰的结果准确，是色谱发展趋势。重叠峰的测量重叠峰的测量切线分峰切线分峰垂线分峰连线分峰计算机拟合分峰校正因子的测量与计算校正因子的测量与计算相对校正因子相对校正因子 由于绝对校正因子与仪器的灵敏度有关，又由于灵敏度与实验条件相关，且每一检测器的灵敏度都是不同的，它不容易测量准确，亦无通用性，所以实际工作中使用相对校正因子相对校正因子。相对校正因子的表达式相对校正因子的表达式质量校正因子质量

6、校正因子 摩尔校正因子摩尔校正因子 相对响应值相对响应值 被测组分被测组分的质量的质量标准物质量标准物质量分子量分子量 相对校正因子的测量相对校正因子的测量n n 理论上相对校正因子与试样、标准物质、检测理论上相对校正因子与试样、标准物质、检测器类型、载气类型有关，与其它色谱条件无关。器类型、载气类型有关，与其它色谱条件无关。n n 无纯物质时或对结果准确度要求不高时，相对无纯物质时或对结果准确度要求不高时，相对校正因子可通过查表得。校正因子可通过查表得。n n 即无纯物，手册上又无数据时，可用一些计算即无纯物，手册上又无数据时，可用一些计算方法估算这些物质的相对校正因子。方法估算这些物质的相

7、对校正因子。定量方法定量方法校正归一化法 含归一化内标法 含内标标准曲线法外标法 含单点校正（1 1）校正归一化法）校正归一化法推导：应应用用范范围围：当当试试样样中中各各组组分分都都能能流流出出色色谱谱柱柱，且且在在检检测测器器上上均均有有响响应应，各各组组分分峰峰没没有有重重叠叠时，可用此法。时，可用此法。优优点点：简简便便、准准确确，当当操操作作条条件件如如进进样样量量等等变变化化时时，对对定定量量结结果果影影响响很很小小，该该法法适适合合于于常常量物质的定量。量物质的定量。缺点缺点：对该法的苛刻要求限制了它的使用。对该法的苛刻要求限制了它的使用。归一化法归一化法n n若若各各组组分分的

8、的定定量量校校正正因因子子相相近近或或相相同同，则则上上式可简化为：式可简化为：（2 2）内标法）内标法推导 将将一一定定量量的的纯纯物物质质作作为为内内标标物物，加加入入到到准准确称量的试样中。确称量的试样中。适用范围：适用范围：当只需测定试样中某几个组分，当只需测定试样中某几个组分，且试样中所有组分不能全部出峰时可用。且试样中所有组分不能全部出峰时可用。优优点点：受受操操作作条条件件的的影影响响较较小小，定定量量结结果果较较准准确确，使使用用上上不不象象归归一一化化法法那那样样受受到到限限制制，此此法适合于微量物质的分析。法适合于微量物质的分析。缺缺点点：每每次次分分析析必必须须准准确确称

9、称量量被被测测物物和和内内标标物物，不适合于快速分析。不适合于快速分析。内标标准曲线法 f fi,si,sm ms s/m/m为常数K K，此时C Ci i%=K(A%=K(Ai i/A/As s)，以C Ci i%对A Ai i/A/As s作标准曲线。优点：优点：不必测校正因子，消除了某些操作条件的影响，方法简便，适合液体试样的常规分析。如白酒分析国标中采用此法。外标法（标准曲线法）外标法（标准曲线法）用于常规分析用于常规分析用于常规分析用于常规分析优优点点：操操作作简简单单，计计算算方方便。便。缺缺点点：结结果果的的准准确确度度取取决决于于进进样样量量的的重重现现性性和和操操作作条条件件的的稳稳定定性性。该该法法必须定量进样。必须定量进样。单点校正当当被被测测试试样样中中各各组组分分的的浓浓度度变变化化范范围围不不大大时时而而用用单点校正法。单点校正法。即即配配制制一一个个与与被被测测组组分分含含量量十十分分接接近近的的标标准准溶溶液液，定量进样，计算被测物的含量。定量进样，计算被测物的含量。n 定量中的误差问题n n样品的代表性（样品的前处理）n n进样系统的影响n n柱系统的影响n n测量误差n n定量结果的误差分析