实验四放线菌、酵母和霉菌形态的观察.ppt

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1、实 验 四四放放线菌、霉菌和酵母菌菌、霉菌和酵母菌形形 态 的的 观 察察一、一、实验目的要求目的要求1.学学习掌握掌握观察放察放线菌、霉菌和酵母菌形菌、霉菌和酵母菌形态的基本方法。的基本方法。2.加深理解放加深理解放线菌、霉菌和酵母菌的形菌、霉菌和酵母菌的形态特征。特征。原核原核类：细菌、古生菌、菌、古生菌、放放线菌菌、蓝细菌、支原菌、支原体、体、立克次氏体、衣原体等。立克次氏体、衣原体等。真核真核类：真菌（：真菌（酵母菌、霉菌酵母菌、霉菌、蕈菌）、原生、蕈菌）、原生动物、物、显微藻微藻类。非非细胞胞类：病毒、：病毒、亚病毒（病毒（类病毒、病毒、朊病毒等）病毒等）二、二、实验原理原理放放线菌

2、、霉菌和酵母菌菌、霉菌和酵母菌分分类地位地位二、二、实验原理原理1放放线菌：菌：是一是一类主要呈菌主要呈菌丝状生状生长和和孢子繁子繁殖的殖的陆生性生性较强的的革革兰氏阳性氏阳性细菌，广泛分布菌，广泛分布于含水量低、有机于含水量低、有机质丰富的微丰富的微碱性土壤中碱性土壤中。放放线菌的菌的菌落形菌落形态特征特征为：形成：形成干燥、不透干燥、不透明、明、表面呈致密表面呈致密丝绒状，上有一状，上有一层彩色彩色“干粉干粉”的菌落。菌落与培养基的菌落。菌落与培养基连接接紧密，密，难以挑取，以挑取，菌落正反面菌落正反面颜色不一致色不一致，在菌落，在菌落边缘的的琼脂平脂平板上有板上有变形的形的现象，有象，有

3、泥腥味泥腥味。链霉霉菌菌不不同同类型型孢子子丝2酵母菌酵母菌：酵母的菌：酵母的菌落形落形态与与细菌的相仿，菌的相仿，由于酵菌由于酵菌细胞比胞比细菌的菌的大，大，细胞胞间隙含水量隙含水量较少，少，不能运不能运动，菌落，菌落较大、大、较厚，外厚，外观较稠、稠、不透明，菌落不透明，菌落颜色多色多为乳白色乳白色或或矿烛色色。二、二、实验原理原理（1）形）形态观察察：不运：不运动、单细胞胞、真核生物，比、真核生物，比常常见细胞大几倍甚至十几倍。胞大几倍甚至十几倍。大多数以大多数以出芽出芽方式方式无性繁殖，分裂繁殖；有性繁殖是通无性繁殖，分裂繁殖；有性繁殖是通过结合合产生生子囊子囊孢子。子。（2）死活）死

4、活鉴定定：美美蓝是一种是一种无毒无毒的染料，的染料，它的氧它的氧化型呈化型呈蓝色，色，还原型呈无色。原型呈无色。用美用美蓝对酵母的活酵母的活细胞胞进行染色行染色时，由于，由于细胞的新胞的新陈代代谢作用，作用，细胞内具有胞内具有较强的的还原能力，能使美原能力，能使美蓝由由蓝色的氧色的氧化型化型变为无色的无色的还原型。因此，原型。因此，具有具有还原能力的原能力的酵母酵母活活细胞是胞是无色无色的的，而，而死死细胞胞或代或代谢作用微弱作用微弱的的衰老衰老细胞胞则成成蓝色色或或淡淡蓝色。色。二、二、实验原理原理2酵母菌酵母菌酵母菌的菌落酵母菌的菌落啤酒酵母啤酒酵母1、菌落较大、较菌落较大、较厚厚、外观较

5、外观较稠稠和和较不透明较不透明。2、与培养基结合与培养基结合不紧不紧密密，易挑起易挑起。3、正面和反面、边缘正面和反面、边缘与中央与中央颜色一致颜色一致。3霉菌霉菌：霉菌的菌：霉菌的菌丝和和孢子子比放比放线菌菌的的粗粗得多。得多。菌落形菌落形态较大，大，质地蔬松地蔬松，外，外观干燥干燥，不透明，不透明，菌落与培养基菌落与培养基间连接接紧密密，不易挑取不易挑取，菌落菌落正反正反面，面，边缘与中心的与中心的颜色色、构造通常、构造通常不一致不一致，有，有霉霉味味。菌。菌丝的的孢子子较大，在低倍大，在低倍镜下即可清晰下即可清晰观察察到有隔或无隔到有隔或无隔菌菌丝和和孢子子及巨大的及巨大的孢子囊子囊。二

6、、二、实验原理原理黑曲霉黑曲霉三、三、实验材料材料1.1.放放线菌培养物：菌培养物：链霉菌霉菌(医学院学生分离医学院学生分离)4天培养物。天培养物。2.2.啤酒酵母啤酒酵母24至至2828h培养物。培养物。3.3.黑曲霉黑曲霉4d平面培养物。平面培养物。显微微镜、载玻片、接种玻片、接种环、解剖刀、酒精灯、解剖刀、酒精灯、镊子、子、酒精、蒸酒精、蒸馏水等。水等。四、四、实验步步骤观察放察放线菌的形菌的形态观察酵母菌的形察酵母菌的形态观察霉菌的形察霉菌的形态1.放放线菌菌孢子子丝形形态观察察(插片法插片法)（1）融化高氏融化高氏1号培养基，冷却至号培养基，冷却至50度倒平板，平度倒平板，平板要厚一

7、些，以利于插片。接种、插片、培养。板要厚一些，以利于插片。接种、插片、培养。（2）染色：）染色：用用镊子小心取出盖玻片，并将其背面附子小心取出盖玻片，并将其背面附着的菌着的菌丝体擦干体擦干净，用用0.05%美美蓝染色染色约1min后水后水洗。洗。然后将盖玻片无菌然后将盖玻片无菌丝体的面放在体的面放在载玻片上。玻片上。（3）镜检：晾干晾干后用后用100X油油镜观察察孢子子丝形形态特征。特征。四、实验步骤四、实验步骤注意：注意：染色水洗染色水洗时水流要水流要缓，以免破坏，以免破坏孢子子丝形形态。10092436俞佩佩枫拍拍摄放放线菌菌放放线菌菌2.酵母菌酵母菌形形态观察及察及死活死活细胞胞鉴别：美

8、美蓝浸片浸片的的观察察:（1）滴一小滴滴一小滴吕氏碱性氏碱性美美蓝染色液染色液于于载玻片玻片中央，中央，按按无菌无菌操作取少量操作取少量酵母菌酵母菌与其混合均匀。与其混合均匀。用用镊子取一子取一块盖玻片盖玻片，将盖玻片一，将盖玻片一边与菌体接触，与菌体接触，缓缓将盖玻片将盖玻片倾斜并斜并覆盖覆盖在菌液上。在菌液上。放置放置约3min后，先用后，先用低倍低倍镜后用后用40X高倍高倍镜(不用油不用油镜),观察酵母的察酵母的形形态和和出芽出芽情况，并根据情况，并根据颜色色区区别死死活活细胞。胞。（2）染色染色后后再次再次观察，注意察，注意死死细胞胞是否增加。是否增加。四、四、实验步步骤注意事注意事项

9、：用接种用接种环将菌体与染液混合将菌体与染液混合时不要不要剧烈涂抹烈涂抹，以免破坏以免破坏细胞。胞。滴加滴加染液要适中染液要适中，否，否则用盖玻片覆盖用盖玻片覆盖时，染，染液液过多会溢出，多会溢出，过少会少会产生大量气泡。生大量气泡。盖玻片要盖玻片要缓慢慢倾斜覆盖，以免斜覆盖，以免产生气泡。生气泡。四、四、实验步步骤2.酵母菌酵母菌形形态观察及察及死活死活细胞胞鉴别：3分分钟10092436俞佩佩枫拍拍摄30分分钟10092436俞佩佩枫拍拍摄3.霉菌霉菌的的形形态观察察：（1）在在载玻片上滴加一滴玻片上滴加一滴0.05%美美蓝染液；染液；（2）用解剖用解剖针或或镊子从霉菌菌落底部小心子从霉菌

10、菌落底部小心挑挑取少量取少量已已经产孢子子的的霉菌菌霉菌菌丝；（3）放在放在载玻片上的染液中，用解剖玻片上的染液中，用解剖针小心小心将将菌菌丝分开分开；（4）盖上盖上盖玻片盖玻片，置于，置于10X低倍低倍镜下下观察，必察，必要要时换40X高倍高倍镜.(不用油不用油镜!)四、四、实验步步骤黑曲霉黑曲霉10092436俞佩佩枫拍拍摄3.霉菌霉菌的的形形态观察察注意：注意：用用镊子取菌和用解剖子取菌和用解剖针分散菌分散菌丝时要要细心，心，尽量减少菌尽量减少菌丝断裂及形断裂及形态被破坏，盖盖玻被破坏，盖盖玻片片时避免气泡避免气泡产生。生。四、四、实验步步骤1.绘图并并说明放明放线菌基内菌菌基内菌丝、气

11、生菌、气生菌丝及及孢子子丝的形的形态和特征和特征2.绘图并并说明酵母菌形明酵母菌形态及出芽生殖情况及出芽生殖情况3.列表列表说明在明在显微微镜下，下，细菌、放菌、放线菌、酵母菌和菌、酵母菌和霉菌的霉菌的主要主要区区别是什么？是什么？4.根据你所根据你所观察到的察到的吕氏碱性美氏碱性美蓝染液染液浓度及作用度及作用时间与酵母死、活与酵母死、活细胞数量胞数量变化的情况，化的情况，填下表：填下表：五、五、实验报告告 酵母死、活细胞数量变化的情况记录表酵母死、活细胞数量变化的情况记录表美蓝染液浓度美蓝染液浓度0.1%作用时间作用时间3min30min每视野活细胞每视野活细胞数数/个个每视野死细胞每视野死细胞数数/个个