实验2土壤中细菌的分离与纯化.ppt

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1、实验十实验十微生物的分离与纯化微生物的分离与纯化 一、目的要求一、目的要求1.掌握土壤微生物的分离纯化方法和无菌操作掌握土壤微生物的分离纯化方法和无菌操作掌握土壤微生物的分离纯化方法和无菌操作掌握土壤微生物的分离纯化方法和无菌操作技术；技术；技术；技术；2.初步掌握微生物的鉴定技术。初步掌握微生物的鉴定技术。初步掌握微生物的鉴定技术。初步掌握微生物的鉴定技术。二、实验原理二、实验原理1.自然界中各种微生物混杂生活在一起，要研究自然界中各种微生物混杂生活在一起，要研究自然界中各种微生物混杂生活在一起，要研究自然界中各种微生物混杂生活在一起，要研究某种微生物的特性，首先须使该微生物处于纯某种微生物

2、的特性，首先须使该微生物处于纯某种微生物的特性，首先须使该微生物处于纯某种微生物的特性，首先须使该微生物处于纯培养状态。从混杂的微生物群体中获得只含有培养状态。从混杂的微生物群体中获得只含有培养状态。从混杂的微生物群体中获得只含有培养状态。从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或一株微生物的过程称为微生物的分离某一种或一株微生物的过程称为微生物的分离某一种或一株微生物的过程称为微生物的分离某一种或一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。与纯化。与纯化。与纯化。2.土壤是微生物生活的大本营，可以从中分离到土壤是微生物生活的大本营，可以从中分离到土壤是微生物生活的大本营，可以从中分离到土壤是微生物生

3、活的大本营，可以从中分离到很多有价值的菌株。本实验将采用三种不同的很多有价值的菌株。本实验将采用三种不同的很多有价值的菌株。本实验将采用三种不同的很多有价值的菌株。本实验将采用三种不同的培养基从土壤中分离不同类型的微生物。培养基从土壤中分离不同类型的微生物。培养基从土壤中分离不同类型的微生物。培养基从土壤中分离不同类型的微生物。三、实验器材三、实验器材1.土样：土样：土样：土样：采集校园土壤采集校园土壤2.培养基：培养基：培养基：培养基：牛肉膏蛋白胨培养基牛肉膏蛋白胨培养基细菌细菌3.高氏高氏 号培养基号培养基放线菌放线菌4.马丁氏培养基马丁氏培养基真菌真菌3.其他：其他：其他：其他：无菌的培

4、养皿、盛无菌的培养皿、盛90mL90mL无菌水并带无菌水并带玻璃珠的三角瓶、盛玻璃珠的三角瓶、盛9mL9mL无菌水的试管、小无菌水的试管、小铁铲、吸头、移液器、无菌玻璃涂棒、接种铁铲、吸头、移液器、无菌玻璃涂棒、接种环、显微镜、染色液等。环、显微镜、染色液等。四、操作步骤（四、操作步骤（1 1）1.制备土壤稀释液制备土壤稀释液制备土壤稀释液制备土壤稀释液2.涂布平板涂布平板涂布平板涂布平板3.培养培养培养培养4.挑菌落挑菌落挑菌落挑菌落5.平板划线分离平板划线分离平板划线分离平板划线分离6.转入斜面转入斜面转入斜面转入斜面7.观察菌落特征、制片镜检菌体形态观察菌落特征、制片镜检菌体形态观察菌落

5、特征、制片镜检菌体形态观察菌落特征、制片镜检菌体形态8.菌种保藏菌种保藏菌种保藏菌种保藏1.1.制备土壤稀释液制备土壤稀释液制备土壤稀释液制备土壤稀释液 四、操作步骤（四、操作步骤（2 2）2.2.涂布涂布涂布涂布四、操作步骤（四、操作步骤（3 3）四、操作步骤（四、操作步骤（4 4）3.3.培养：培养：培养：培养：高氏高氏 号培养基平板和马丁氏培养基平板倒置号培养基平板和马丁氏培养基平板倒置于于2828培养箱中培养培养箱中培养35 d35 d，牛肉膏蛋白胨培养基平板，牛肉膏蛋白胨培养基平板倒置于倒置于3737培养箱中培养培养箱中培养23 d23 d。四、操作步骤（四、操作步骤（5 5）4.4

6、.挑菌落挑菌落挑菌落挑菌落接种和分离工具接种和分离工具1.接种针；2.接种环；3.接种钩；4.5.玻璃涂棒；6.接种圈；7.接种锄；8.小解剖刀 四、操作步骤（四、操作步骤（6 6）5.5.平板划线分离平板划线分离平板划线分离平板划线分离 平板划线分离的方法平板划线分离的方法1.斜线法；2.曲线法；3.方格法；4.放射法；5.四格法四、操作步骤（四、操作步骤（6 6）平板划线法平板划线法平板划线法平板划线法四、操作步骤（四、操作步骤（6 6）平板划线分离平板划线分离平板划线分离平板划线分离斜面接种时的无菌操作斜面接种时的无菌操作(1)接种灭菌;(2)开启棉塞;(3)管口灭菌;(4)挑起菌苔;(

7、5)接种;(6)塞好棉塞 四、操作步骤（四、操作步骤（7 7）6.6.转入斜面转入斜面转入斜面转入斜面四、操作步骤四、操作步骤初步鉴定初步鉴定观察和记录菌种的培养特征观察和记录菌种的培养特征观察和记录菌种的培养特征观察和记录菌种的培养特征革兰氏染色，观察和记录菌体特征与染色特性革兰氏染色，观察和记录菌体特征与染色特性革兰氏染色，观察和记录菌体特征与染色特性革兰氏染色，观察和记录菌体特征与染色特性芽孢染色芽孢染色芽孢染色芽孢染色鞭毛染色鞭毛染色鞭毛染色鞭毛染色查查查查伯杰氏手册伯杰氏手册伯杰氏手册伯杰氏手册等文献，初步对菌种进行鉴定。等文献，初步对菌种进行鉴定。等文献，初步对菌种进行鉴定。等文献

8、，初步对菌种进行鉴定。将转入斜面的菌种置将转入斜面的菌种置将转入斜面的菌种置将转入斜面的菌种置4 4冰箱保藏。冰箱保藏。冰箱保藏。冰箱保藏。通过已掌握的实验技术，对分离到的纯菌株进通过已掌握的实验技术，对分离到的纯菌株进通过已掌握的实验技术，对分离到的纯菌株进通过已掌握的实验技术，对分离到的纯菌株进行初步鉴定。行初步鉴定。行初步鉴定。行初步鉴定。五、实验报告五、实验报告n n在三种不同的平板上，你分离得到哪些类群的在三种不同的平板上，你分离得到哪些类群的在三种不同的平板上，你分离得到哪些类群的在三种不同的平板上，你分离得到哪些类群的微生物？简述它们的菌落特征和菌体形态。微生物？简述它们的菌落特征和菌体形态。微生物？简述它们的菌落特征和菌体形态。微生物？简述它们的菌落特征和菌体形态。1.试拟出从土壤中分离芽孢杆菌的主要实验步试拟出从土壤中分离芽孢杆菌的主要实验步试拟出从土壤中分离芽孢杆菌的主要实验步试拟出从土壤中分离芽孢杆菌的主要实验步骤。骤。骤。骤。2.如何检验平板上某个单菌落是不是纯培养？如何检验平板上某个单菌落是不是纯培养？如何检验平板上某个单菌落是不是纯培养？如何检验平板上某个单菌落是不是纯培养？六、思考题六、思考题