生物化工工艺实例.ppt
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1、生物化工工艺实例 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望按氨基酸在人体内是否能被合成,分为:按氨基酸在人体内是否能被合成,分为:(1 1)必需氨基酸)必需氨基酸 指人体内不能合成或合指人体内不能合成或合成的速度不能满足机体需要的氨基酸。异亮氨成的速度不能满足机体需要的氨基酸。异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、苏酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸、色氨酸和缬氨酸为必需氨基酸。氨酸、色氨酸和缬氨酸为必需氨基酸。(2 2)非必需氨基酸)非必需
2、氨基酸 除上述八种必需氨基除上述八种必需氨基酸外,其它均属非必需氨基酸。酸外,其它均属非必需氨基酸。提取法提取法 18201820年有人在实验室水解蛋白制取氨基酸。年有人在实验室水解蛋白制取氨基酸。1866 1866年立好生年立好生Ritthansen利用利用H H2 2SOSO4 4从小麦面筋制取从小麦面筋制取GluGlu(名称来源于此)。(名称来源于此)。1908 1908年从海带中提取了年从海带中提取了GluGlu,并制取了味之素(味精,并制取了味之素(味精,Monosodium Glutamate Monosodium Glutamate,MSGMSG)。)。1910 1910年日本人
3、开始利用小麦面筋工业化制取味精。年日本人开始利用小麦面筋工业化制取味精。1936 1936年美国人开始从年美国人开始从Stiffen molassesStiffen molasses(废糖蜜)制(废糖蜜)制取味精。取味精。(1)氨基酸生产的发展史)氨基酸生产的发展史1 1、概述、概述 过去氨基酸都是从蛋白质水解液中分离提取过去氨基酸都是从蛋白质水解液中分离提取的,的,19561956年,日本人首先利用发酵法生产谷氨年,日本人首先利用发酵法生产谷氨酸后,氨基酸的发酵生产发展很快,目前绝大酸后,氨基酸的发酵生产发展很快,目前绝大多数氨基酸已能用发酵法或酶法生产。多数氨基酸已能用发酵法或酶法生产。见
4、表见表6-16-1(2 2)我国氨基酸生产的发展情况我国氨基酸生产的发展情况我国起始于我国起始于19231923(上海天厨),(上海天厨),19321932沈阳味精沈阳味精厂,当时年产量厂,当时年产量200-300T200-300T(提取法)。(提取法)。我国发酵法生产味精起始于我国发酵法生产味精起始于19641964年,年,20002000年年8080万万T T,20052005年接近年接近100100万万T T。中国现有氨基酸企业以谷氨酸生产为主,其次中国现有氨基酸企业以谷氨酸生产为主,其次是赖氨酸,其它有几种生产规模较小的工业化是赖氨酸,其它有几种生产规模较小的工业化产品。产品。2.2.
5、氨基酸的应用氨基酸的应用 氨基酸在食品、医药、饲料、化工、农业等行业有氨基酸在食品、医药、饲料、化工、农业等行业有广泛用途。广泛用途。(1 1)食品工业)食品工业 是最早应用氨基酸的领域,是最早应用氨基酸的领域,消费量占总量的消费量占总量的6060,主要用于强化食品,调,主要用于强化食品,调味调香、抗氧化剂、消除异味,防止食品色香味调香、抗氧化剂、消除异味,防止食品色香味的变化,提高食品风味及营养价值。如苯丙味的变化,提高食品风味及营养价值。如苯丙氨酸和天冬氨酸制成的氨酸和天冬氨酸制成的甜味肽甜味肽,其甜味是蔗糖,其甜味是蔗糖的的200200倍。倍。生活实例生活实例:新型:新型甜味剂甜味剂阿斯
6、巴甜阿斯巴甜 又名蛋白糖,是天冬氨酸和苯丙氨酸合成的二又名蛋白糖,是天冬氨酸和苯丙氨酸合成的二肽甜味剂,是一种相当蔗糖甜度肽甜味剂,是一种相当蔗糖甜度200200倍的低热倍的低热值高甜度的新型甜味剂。它具有安全、易吸收、值高甜度的新型甜味剂。它具有安全、易吸收、不致龋齿等优点,可供糖尿病患者及忌糖者的不致龋齿等优点,可供糖尿病患者及忌糖者的婴幼儿食用,是老年营养食品和保健食品的优婴幼儿食用,是老年营养食品和保健食品的优良甜味剂;可以制成新型糖的替代品直接加入良甜味剂;可以制成新型糖的替代品直接加入饮料或食品中;大量用于饮料,果酱、口香糖、饮料或食品中;大量用于饮料,果酱、口香糖、乳制品、罐头、
7、蜜饯婴幼儿食品等多种食品中,乳制品、罐头、蜜饯婴幼儿食品等多种食品中,至今已有至今已有30003000多种食品使用多种食品使用阿斯巴甜阿斯巴甜。(2)医药工业)医药工业 氨基酸是构成蛋白质的基本单位,参与体内氨基酸是构成蛋白质的基本单位,参与体内代谢和各种生理活动,因此可用于治疗各种代谢和各种生理活动,因此可用于治疗各种疾病。可制成有治疗作用的药物及各种氨基疾病。可制成有治疗作用的药物及各种氨基酸营养制剂。酸营养制剂。-大输液和治疗药物。大输液和治疗药物。(3 3)饲料工业)饲料工业 及无公害农药及无公害农药在在饲饲料料中中加加入入赖赖氨氨酸酸、苏苏氨氨酸酸和和DL-DL-蛋蛋氨氨酸酸,能能提
8、提高高饲饲料料中中蛋蛋白白质质利利用用率率,校校正正配配合合饲饲料料中中氨氨基基酸不全或配比失衡,增加饲料营养价值。酸不全或配比失衡,增加饲料营养价值。合成氨基酸衍生物可作为锄草剂和无毒农药。合成氨基酸衍生物可作为锄草剂和无毒农药。(4 4)化工)化工 用谷氨酸可制成无刺激性能洗涤用谷氨酸可制成无刺激性能洗涤剂剂十二烷基谷氨酸钠肥皂,能保持皮肤湿润十二烷基谷氨酸钠肥皂,能保持皮肤湿润的润肤剂的润肤剂焦谷氨酸钠和质量接近天然皮革的焦谷氨酸钠和质量接近天然皮革的聚谷氨酸人造革,以及人造纤维和涂料。丝氨酸聚谷氨酸人造革,以及人造纤维和涂料。丝氨酸用于用于雪花膏等。雪花膏等。二、谷氨酸发酵二、谷氨酸发
9、酵 谷氨酸可用用蛋白质水解法和合成法制取,但谷氨酸可用用蛋白质水解法和合成法制取,但目前主要采用发酵法。目前主要采用发酵法。1 1淀粉水解糖的制备淀粉水解糖的制备 发酵法生产谷氨酸的原料是薯类、玉米、木发酵法生产谷氨酸的原料是薯类、玉米、木薯淀粉、椰子树淀粉等淀粉的水解糖或糖蜜。薯淀粉、椰子树淀粉等淀粉的水解糖或糖蜜。生产菌为短杆菌,北京棒杆菌等。生产菌为短杆菌,北京棒杆菌等。淀粉淀粉-需要用酶法水解转化为葡萄糖需要用酶法水解转化为葡萄糖谷氨酸谷氨酸 (-氨基戊二酸)氨基戊二酸)O C-OH 第一代鲜味剂第一代鲜味剂 H2N-C-H L-L-谷氨酸单钠盐谷氨酸单钠盐味精味精 H-C-H H-C
10、-H H-C O OH L-型酶法水解过程:液化酶法水解过程:液化-糖化糖化-葡萄糖葡萄糖淀粉酶淀粉酶糖化酶糖化酶2 2、生物合成机制、生物合成机制谷氨酸的生物合成途径大致是:谷氨酸的生物合成途径大致是:葡萄糖经糖酵解(葡萄糖经糖酵解(EMPEMP途径)途径)和己糖磷酸和己糖磷酸支路(支路(HMPHMP途径)生成丙酮酸,一部分氧化成途径)生成丙酮酸,一部分氧化成乙酰辅酶乙酰辅酶A A(乙酰(乙酰C CO OA A),一部分固定),一部分固定COCO2 2生成草生成草酰乙酸。然后进入三羧酸循环,生成酰乙酸。然后进入三羧酸循环,生成酮戊酮戊二酸二酸。酮戊二酸在谷氨酸脱氢酶的催化及酮戊二酸在谷氨酸脱
11、氢酶的催化及有有NH4+NH4+存在的条件下,生成谷氨酸。即,谷氨存在的条件下,生成谷氨酸。即,谷氨酸的生物合成途径包括酸的生物合成途径包括EMPEMP、HMPHMP、TCATCA循环、循环、DCADCA循环和循环和COCO2 2固定作用等。固定作用等。谷氨酸生产菌种谷氨酸生产菌种谷氨酸谷氨酸谷氨酸谷氨酸脱氢酶脱氢酶脱氢酶脱氢酶NH4抑抑 制制2.2.谷氨酸的生物合成谷氨酸的生物合成生物素缺乏生物素缺乏lC6H12O6 +NH4+=C5H9O4 N+CO2 l理论产率:理论产率:147/180=81.7%l实际产率?实际产率?l谷氨酸积累后不断地透过细胞膜分泌到培养基谷氨酸积累后不断地透过细胞
12、膜分泌到培养基中得到积累。中得到积累。谷氨酸发酵受环境条件影响很大,氧、铵、谷氨酸发酵受环境条件影响很大,氧、铵、pHpH、生物素等若控制不当,往往会发生发酵、生物素等若控制不当,往往会发生发酵转换现象。转换现象。利用此原理可以人为地控制环境使发酵发生利用此原理可以人为地控制环境使发酵发生转换。转换。三、谷氨酸发酵的工艺控制三、谷氨酸发酵的工艺控制(一)培养基(一)培养基 1.1.碳源:碳源:淀粉水解糖淀粉水解糖、糖蜜、乙醇、烷烃、糖蜜、乙醇、烷烃 (1 1)淀粉水解糖的制备)淀粉水解糖的制备 (2 2)糖蜜原料)糖蜜原料目前以糖质原料为碳源的谷氨酸产生菌均为生目前以糖质原料为碳源的谷氨酸产生
13、菌均为生物素缺陷型物素缺陷型 2.2.氮源:铵盐、尿素、氨水氮源:铵盐、尿素、氨水 C/N C/N100100:1515 2121,实际高达,实际高达100100:2828 因为:因为:1 1)用于调整)用于调整pHpH。2 2)分解产生的)分解产生的NHNH3 3从发酵液中逸出。从发酵液中逸出。产酸阶段:产酸阶段:NH NH4 4+不足:使不足:使-酮戊二酸蓄积而很少有谷氨酸生成。酮戊二酸蓄积而很少有谷氨酸生成。NH NH4 4+过量:促使谷氨酸生成谷氨酰胺。过量:促使谷氨酸生成谷氨酰胺。3.3.无机盐:磷酸盐、镁、钾、钠、铁、锰、铜,其中无机盐:磷酸盐、镁、钾、钠、铁、锰、铜,其中 磷酸盐
14、对发酵有显著影响。磷酸盐对发酵有显著影响。不足:糖代谢受抑制,菌体生长不足。不足:糖代谢受抑制,菌体生长不足。过多:过多:a.a.细胞膜磷脂生成量多,不利于谷氨酸排出。细胞膜磷脂生成量多,不利于谷氨酸排出。b.b.促使丙酮酸和乙醛(由丙酮酸脱羧生成)缩促使丙酮酸和乙醛(由丙酮酸脱羧生成)缩 合生成缬氨酸的前体物合生成缬氨酸的前体物 乙醛乳酸,乙醛乳酸,使使缬氨酸在发酵液中蓄积。缬氨酸在发酵液中蓄积。4.4.生长因子:生物素生长因子:生物素 作用:影响细胞膜通透性和代谢途径。作用:影响细胞膜通透性和代谢途径。(1 1)作为催化脂肪酸生物合成最初反应的关键酶乙酰)作为催化脂肪酸生物合成最初反应的关
15、键酶乙酰 CoA CoA的辅酶,参与脂肪酸的生物合成,进而影响的辅酶,参与脂肪酸的生物合成,进而影响 磷酯的合成。磷酯的合成。(2 2)浓度过大:促进菌体生长,谷氨酸产量低。因为:)浓度过大:促进菌体生长,谷氨酸产量低。因为:a.a.乙醛酸循环活跃,乙醛酸循环活跃,-酮戊二酸生成量减少。酮戊二酸生成量减少。b.b.转氨酶活力增强,谷氨酸转变成其它氨基酸。转氨酶活力增强,谷氨酸转变成其它氨基酸。生物素:生物素:B B族维生素的一种,又称维生素族维生素的一种,又称维生素H H或辅酶或辅酶R R。是合成脂肪酸所必需的。目前生。是合成脂肪酸所必需的。目前生产上以玉米浆、麸皮煮出汁、糖蜜等天然原产上以玉
16、米浆、麸皮煮出汁、糖蜜等天然原料作为其来源。料作为其来源。浓度一般为浓度一般为2-5g/L2-5g/L。若生物素缺乏若生物素缺乏菌体生长不好,谷氨酸产量菌体生长不好,谷氨酸产量低低 (二)(二)pHpH的影响及其控制的影响及其控制 作用机理:主要影响酶的活性和菌的代谢。作用机理:主要影响酶的活性和菌的代谢。在氮源供应充分和微酸性条件下,谷氨酸发在氮源供应充分和微酸性条件下,谷氨酸发酵转向谷氨酰胺发酵。酵转向谷氨酰胺发酵。pH pH控制在中性或微碱性控制在中性或微碱性7-87-8。方法:流加尿素和氨水。方法:流加尿素和氨水。(三)温度的影响及其控制(三)温度的影响及其控制菌体生长达一定程度后开始
17、产生氨基酸,菌体菌体生长达一定程度后开始产生氨基酸,菌体生长最适温度和氨基酸合成的最适温度不同。生长最适温度和氨基酸合成的最适温度不同。菌体生长阶段:菌体生长阶段:3030 3434产酸阶段:产酸阶段:3535 3737四、谷氨酸的生产工艺四、谷氨酸的生产工艺 谷氨酸的生产工艺包括谷氨酸的生产工艺包括发酵和提纯发酵和提纯两部分。两部分。生产工艺示意图生产工艺示意图1 1、发酵方法、发酵方法 发酵培养基:发酵培养基组成的质量分数()如下:发酵培养基:发酵培养基组成的质量分数()如下:水解糖水解糖 12 1214 KCl14 KCl:0.05 0.05MgSOMgSO4 47H7H2 2O O 0
18、.06 0.06 尿素尿素 0.5 0.50.80.8玉米浆玉米浆 0.6 ml pH 7.0 0.6 ml pH 7.0NaNa2 2HPOHPO2 2 0.17 0.17 其种子培养基为:一级种子培养基中其种子培养基为:一级种子培养基中含糖量要含糖量要低,一般在低,一般在2.52.5左右,其配方的质量分数()如下:左右,其配方的质量分数()如下:葡萄糖葡萄糖 2.5 2.5K K2 2HPOHPO4 4 0.1 0.1玉米浆玉米浆 2.5 2.53.0ml3.0mlMgSOMgSO4 47H7H2 2O 0.04O 0.04pH 7.0pH 7.0二级培养基组成的质量分数()二级培养基组成
19、的质量分数()水解糖水解糖 3.0 3.0 尿素尿素 0.6 0.6 水解糖水解糖 0.5 0.50.60.6 MgSO MgSO4 47H7H2 2O 0.1O 0.10.20.2 pH 7.0 pH 7.0 培养条件:一级种子培养条件培养条件:一级种子培养条件 在在1000ml1000ml三角烧瓶中,装入一三角烧瓶中,装入一级种子培养基级种子培养基180180200ml200ml,以,以8 8层纱布覆盖瓶口,并用细绳扎紧,层纱布覆盖瓶口,并用细绳扎紧,瓶口外再用牛皮纸裹紧,同样用细绳扎牢。将三角烧瓶放在高瓶口外再用牛皮纸裹紧,同样用细绳扎牢。将三角烧瓶放在高压蒸汽灭菌锅中灭菌。灭菌后接种,
20、然后置摇床上,在压蒸汽灭菌锅中灭菌。灭菌后接种,然后置摇床上,在30303232振荡培养振荡培养10101212小时。小时。2.2.提取方法提取方法 谷氨酸的提取方法有水解等电点法、低温等电点谷氨酸的提取方法有水解等电点法、低温等电点法、离子交换法、等电点离子交换法、盐酸盐法、法、离子交换法、等电点离子交换法、盐酸盐法、锌盐法、钙盐法、电渗析法等方法。其中以锌盐法、钙盐法、电渗析法等方法。其中以等电点等电点法和离子交换法法和离子交换法较普遍。较普遍。等电点法等电点法 谷氨酸的等电点为谷氨酸的等电点为pI=3.22pI=3.22故将发酵故将发酵液用盐酸调节到液用盐酸调节到pH=3.22pH=3.
21、22,谷氨酸就可分离析出。此,谷氨酸就可分离析出。此法操作方便,设备简单,一次收率达法操作方便,设备简单,一次收率达7070左右;缺左右;缺点是周期长,占地面积大。下图表示等电点法提取点是周期长,占地面积大。下图表示等电点法提取谷氨酸的工艺流程。谷氨酸的工艺流程。等电点法提取谷氨酸工艺流程等电点法提取谷氨酸工艺流程 离子交换法离子交换法 当发酵液的当发酵液的pHpH值低于值低于3.223.22时时,谷氨酸以阳离子状态存在,可用阳离子交换树脂谷氨酸以阳离子状态存在,可用阳离子交换树脂来提取吸附在树脂上的谷氨酸阳离子,并可用碱来提取吸附在树脂上的谷氨酸阳离子,并可用碱洗下来,收集谷氨酸洗脱流分,经
22、冷却,加盐酸洗下来,收集谷氨酸洗脱流分,经冷却,加盐酸调调pH=3.0pH=3.03.23.2进行结晶进行结晶,再用离心分离机分离即再用离心分离机分离即可得谷氨酸结晶可得谷氨酸结晶.此法过程简单此法过程简单,周期短周期短,设。设设。设备省,占地少,提取总收率可达备省,占地少,提取总收率可达85859090,缺点,缺点是酸碱用量大是酸碱用量大,废液污染环境。下图表示离子交废液污染环境。下图表示离子交换法提取谷按酸的工艺流程。换法提取谷按酸的工艺流程。离子交换法提取谷氨酸的工艺流程离子交换法提取谷氨酸的工艺流程 五、谷氨酸钠(味精)的生产五、谷氨酸钠(味精)的生产 谷氨酸的中和谷氨酸的中和 味精是
23、谷氨酸单钠盐味精是谷氨酸单钠盐谷氨酸的饱和溶液加碱进行中和,中和反应的谷氨酸的饱和溶液加碱进行中和,中和反应的pHpH值应控制在第二等电点值应控制在第二等电点pH=6.96pH=6.96。当当pHpH值太高时,值太高时,生成的谷氨酸二钠增多,而谷氨酸二钠没有鲜味。生成的谷氨酸二钠增多,而谷氨酸二钠没有鲜味。中和液的除铁、除锌中和液的除铁、除锌 由于生产原料不纯、生产设备腐蚀及生产工艺由于生产原料不纯、生产设备腐蚀及生产工艺等原因,使中和液中铁、锌离子超标,必须将等原因,使中和液中铁、锌离子超标,必须将其除去。目前除铁、锌离子的方法主要有硫化其除去。目前除铁、锌离子的方法主要有硫化钠和树脂法两种
24、。钠和树脂法两种。硫化钠法是利用硫化钠可与硫化钠法是利用硫化钠可与Fe2+Fe2+、Zn2+Zn2+反反应生成硫化盐沉淀而除去铁、锌杂质。应生成硫化盐沉淀而除去铁、锌杂质。树脂法是利用弱酸性阳离子交换树脂,吸树脂法是利用弱酸性阳离子交换树脂,吸附铁或锌得以将其除去。这种方法不但解决了附铁或锌得以将其除去。这种方法不但解决了硫化法引起的环境污染问题,改善了操作条件,硫化法引起的环境污染问题,改善了操作条件,而且提高了味精质量,是一种较为理想的除铁而且提高了味精质量,是一种较为理想的除铁方法方法 3 3谷氨酸中和液的脱色谷氨酸中和液的脱色 一般谷氨酸中和液都具有深浅不同的一般谷氨酸中和液都具有深浅
25、不同的褐色色素褐色色素,必须,必须在结晶前将其脱除,常用的脱色方法有活性炭脱色法和离在结晶前将其脱除,常用的脱色方法有活性炭脱色法和离子交换树脂法两种。子交换树脂法两种。活性脱色主要是粉末状的药用炭和活性脱色主要是粉末状的药用炭和GH-15GH-15颗粒活性炭颗粒活性炭两种。粉末活性炭脱色,一种方法是在中和过程中加炭脱两种。粉末活性炭脱色,一种方法是在中和过程中加炭脱色后除去铁,另一种方法是中和液洗涤除铁,用谷氨回调色后除去铁,另一种方法是中和液洗涤除铁,用谷氨回调pH=6.2pH=6.26.46.4蒸汽加热蒸汽加热6060,使谷氨酸全部溶解,再加入,使谷氨酸全部溶解,再加入适量的活性炭脱色。
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