皮肤病实验室检查.ppt
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1、安徽省中医院皮肤性病科安徽省中医院皮肤性病科皮肤病实验室检查 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望安徽省中医院皮肤性病科安徽省中医院皮肤性病科真菌病真菌病由由真菌真菌引起的感染性疾病引起的感染性疾病属于真核微生物,有真正的细胞核和属于真核微生物,有真正的细胞核和细胞器,不含叶绿素,以寄生和腐生方细胞器,不含叶绿素,以寄生和腐生方式吸取营养。在上万种的真菌中,仅有式吸取营养。在上万种的真菌中,仅有几百种真菌对人类或动物有致病性。几百种真菌对人类或动物有致病
2、性。安徽省中医院皮肤性病科安徽省中医院皮肤性病科真菌病真菌病p 真菌的形态:孢子(单细胞真菌的形态:孢子(单细胞个体)和菌丝(多细胞丝状体)。个体)和菌丝(多细胞丝状体)。安徽省中医院皮肤性病科安徽省中医院皮肤性病科真菌病安徽省中医院皮肤性病科安徽省中医院皮肤性病科真菌病真菌病真菌的分类(依据菌落形态的不同)真菌的分类(依据菌落形态的不同)n 酵母菌:酵母菌:菌落呈乳酪状,由孢子和芽生孢菌落呈乳酪状,由孢子和芽生孢子组成子组成n霉菌(丝状真菌):霉菌(丝状真菌):菌落呈毛状,由菌丝菌落呈毛状,由菌丝组成组成n双相真菌:双相真菌:有些真菌在不同温度培养时,有些真菌在不同温度培养时,菌落形态可转变
3、,呈丝状形态和酵母形态。菌落形态可转变,呈丝状形态和酵母形态。安徽省中医院皮肤性病科安徽省中医院皮肤性病科真菌病真菌病安徽省中医院皮肤性病科安徽省中医院皮肤性病科真菌病真菌病安徽省中医院皮肤性病科安徽省中医院皮肤性病科真菌病真菌病o目前真菌感染的实验室检查方法主要目前真菌感染的实验室检查方法主要包括包括常规检查法常规检查法和和特殊检查法特殊检查法两类。两类。o常规检查法主要包括:常规检查法主要包括:形态学检查形态学检查(直接镜检(直接镜检+染色镜检)。染色镜检)。培养检培养检查。查。组织病理学检查。组织病理学检查。o特殊检查主要包括:特殊检查主要包括:血清学方法。血清学方法。分子生物学方法。分
4、子生物学方法。安徽省中医院皮肤性病科安徽省中医院皮肤性病科真菌病真菌病o临床样本的采集与处理临床样本的采集与处理o(一)皮屑(一)皮屑边缘、疱壁、脓液、深层趾(指)边缘、疱壁、脓液、深层趾(指)间皮屑或活动边缘皮屑,取材前间皮屑或活动边缘皮屑,取材前75%酒精消酒精消毒,作毒,作KOH涂片,同时种于沙氏琼脂加氯霉涂片,同时种于沙氏琼脂加氯霉素素2管,置管,置25培养培养2周。周。o(二)甲屑(二)甲屑用细挫或牙科磨钻取病甲与正常用细挫或牙科磨钻取病甲与正常甲交界处并且贴近甲床部的甲屑,标本用酒甲交界处并且贴近甲床部的甲屑,标本用酒精浸泡待干燥后种于沙氏(精浸泡待干燥后种于沙氏(SDA)培养)培
5、养4周,周,并同时作并同时作KOH涂片。涂片。安徽省中医院皮肤性病科安徽省中医院皮肤性病科真菌病真菌病o(三)毛发(三)毛发取病发(变色,无光泽,弯曲,取病发(变色,无光泽,弯曲,脆易折断,松动易拔除)脆易折断,松动易拔除)15根,根,75%酒精酒精消毒,消毒,35根作直接镜检,根作直接镜检,510根种于沙根种于沙氏琼脂(加氯霉素),划破斜面掩埋。氏琼脂(加氯霉素),划破斜面掩埋。o(四)脓液(四)脓液无菌采集,注意颗粒,用无菌蒸无菌采集,注意颗粒,用无菌蒸馏水稀释后寻找。可作馏水稀释后寻找。可作G染色或抗酸染色。常染色或抗酸染色。常规的规的KOH涂片及涂片及SDA接种培养也是必要的。接种培养
6、也是必要的。安徽省中医院皮肤性病科安徽省中医院皮肤性病科真菌病真菌病o(五)五)CSF采集于无菌试管采集于无菌试管35ml,立即送,立即送检。置冰箱不宜超过检。置冰箱不宜超过1h。离心后以无菌吸管吸。离心后以无菌吸管吸取离心沉淀物取离心沉淀物1ml,作墨汁涂片镜检和培养,作墨汁涂片镜检和培养(SDA)25或或374周。周。o(六)血液(六)血液无菌抽血无菌抽血35ml立即于无菌抗凝立即于无菌抗凝管中,血标本量为培养基量的管中,血标本量为培养基量的1/10,3757d出现浑浊或菌团,挑取镜检同时移种出现浑浊或菌团,挑取镜检同时移种SDA(注:每天检查完毕后需摇动培养基,(注:每天检查完毕后需摇动
7、培养基,37震震荡培养可加速真菌的生长,提高检出率。不作直荡培养可加速真菌的生长,提高检出率。不作直接检查,因其直接检查阳性率低。接检查,因其直接检查阳性率低。安徽省中医院皮肤性病科安徽省中医院皮肤性病科真菌病真菌病o(七)体液、痰液、尿液、粪便(七)体液、痰液、尿液、粪便。o(八)组织:标本置无菌平皿中立即送检,(八)组织:标本置无菌平皿中立即送检,置无菌匀浆器加置无菌匀浆器加2ml蒸馏水,研磨成浆或蒸馏水,研磨成浆或12mm3的小块,的小块,KOH涂片培养。涂片培养。安徽省中医院皮肤性病科安徽省中医院皮肤性病科真菌病真菌病安徽省中医院皮肤性病科安徽省中医院皮肤性病科真菌病真菌病安徽省中医院
8、皮肤性病科安徽省中医院皮肤性病科真菌病真菌病o真菌学检验的基本技术真菌学检验的基本技术(一)直接镜检(一)直接镜检标本置于载玻片上,加一滴浮载液,盖上盖标本置于载玻片上,加一滴浮载液,盖上盖玻片,放置片刻或微加热,即在火焰上快速玻片,放置片刻或微加热,即在火焰上快速通过通过23次,不应使其沸腾,以免结晶,然次,不应使其沸腾,以免结晶,然后轻压盖玻片,驱逐气泡并将标本压薄,用后轻压盖玻片,驱逐气泡并将标本压薄,用棉拭或吸水纸吸去周围溢液,置于显微镜下棉拭或吸水纸吸去周围溢液,置于显微镜下检查。检查时应遮去强光,先在低倍镜下检检查。检查时应遮去强光,先在低倍镜下检查有无菌丝和孢子,然后用高倍镜观察
9、孢子查有无菌丝和孢子,然后用高倍镜观察孢子和菌丝的形态、特征、位置、大小和排列。和菌丝的形态、特征、位置、大小和排列。安徽省中医院皮肤性病科安徽省中医院皮肤性病科真菌病真菌病o直接镜检是最简单也是最有用的实验室诊断直接镜检是最简单也是最有用的实验室诊断方法,常用的方法有:方法,常用的方法有:o氢氧化钾氢氧化钾/复方氢氧化钾法复方氢氧化钾法o胶纸粘贴法胶纸粘贴法o涂片染色检查法涂片染色检查法 安徽省中医院皮肤性病科安徽省中医院皮肤性病科真菌病真菌病o(二)(二)真菌培养真菌培养o根据不同的临床标本,大体可分为点植法和根据不同的临床标本,大体可分为点植法和划线法两种。划线法两种。点植法:适用于皮屑
10、、甲屑、毛发、痂皮、点植法:适用于皮屑、甲屑、毛发、痂皮、组织等有形固体标本,将标本直接与培养基组织等有形固体标本,将标本直接与培养基表面点状接触。表面点状接触。划线法:适用于痰、分泌物、脓液、组织划线法:适用于痰、分泌物、脓液、组织液、组织块的研磨液等液体标本,用接种针液、组织块的研磨液等液体标本,用接种针(环)划线接种在培养基表面。(环)划线接种在培养基表面。安徽省中医院皮肤性病科安徽省中医院皮肤性病科真菌病真菌病安徽省中医院皮肤性病科安徽省中医院皮肤性病科真菌病真菌病安徽省中医院皮肤性病科安徽省中医院皮肤性病科真菌病真菌病o临床标本接种时间分为直接培养临床标本接种时间分为直接培养法和间接
11、培养法;法和间接培养法;o直接培养:采集标本后直接接直接培养:采集标本后直接接种于培养基上。种于培养基上。间接培养:采集标本后,暂保间接培养:采集标本后,暂保存,以后集中接种。存,以后集中接种。安徽省中医院皮肤性病科安徽省中医院皮肤性病科真菌病真菌病o按培养方法分为试管法、平皿法(大培养)和玻片法按培养方法分为试管法、平皿法(大培养)和玻片法(小培养)。(小培养)。o试管培养:是临床上最常用的培养方法之一,培养基试管培养:是临床上最常用的培养方法之一,培养基置于试管中,主要用于临床标本分离的初代培养和置于试管中,主要用于临床标本分离的初代培养和菌种保存。菌种保存。o大培养:将培养物接种在培养皿
12、或特别的培养瓶内,大培养:将培养物接种在培养皿或特别的培养瓶内,主要用于纯菌种的培养和研究。主要用于纯菌种的培养和研究。o小培养:主要用于菌种鉴定,大致分为三种:玻片法,小培养:主要用于菌种鉴定,大致分为三种:玻片法,方块法和钢圈法。小培养可置普通显微镜下直接观方块法和钢圈法。小培养可置普通显微镜下直接观察,而试管和平皿培养的菌落则需挑起后做涂片检察,而试管和平皿培养的菌落则需挑起后做涂片检查。查。安徽省中医院皮肤性病科安徽省中医院皮肤性病科真菌病真菌病o培养物观察指标培养物观察指标标本接种后,每周至少检查标本接种后,每周至少检查2次。次。1.菌落生长速度:缓慢生长菌:菌落生长速度:缓慢生长菌
13、:714d,快速生长菌:,快速生长菌:27d。一般浅部真菌超过。一般浅部真菌超过2周,深部真菌超过周,深部真菌超过4周仍无周仍无生长,可报告阴性。生长,可报告阴性。o2.外观:外观:a.扁平。扁平。b.疣状。疣状。c.折叠规则或不规则。折叠规则或不规则。d.缠缠结或垫状。结或垫状。e.其他。其他。o3.大小:菌落大小用大小:菌落大小用cm来表示,菌落大小与生长速度和来表示,菌落大小与生长速度和培养时间有关。培养时间有关。安徽省中医院皮肤性病科安徽省中医院皮肤性病科真菌病真菌病o4.质地:质地:a.平滑状。平滑状。b.粉状。粉状。c.粒状。粒状。d.棉花棉花状。状。e.粗毛状。粗毛状。of.皮革
14、状。皮革状。g.粘液状。粘液状。h.膜状。膜状。o5.顔色:不同的菌种表现出不同的顔色,呈鲜顔色:不同的菌种表现出不同的顔色,呈鲜艳或暗淡。致病性真菌的顔色多较淡,呈白色或艳或暗淡。致病性真菌的顔色多较淡,呈白色或淡黄色,而且其培养基也可变色,如马尔尼菲青淡黄色,而且其培养基也可变色,如马尔尼菲青霉等,有些真菌菌落不但正面有顔色,其背面也霉等,有些真菌菌落不但正面有顔色,其背面也有深浅不同的顔色有深浅不同的顔色。安徽省中医院皮肤性病科安徽省中医院皮肤性病科真菌病真菌病o(三三)组织病理学检查组织病理学检查真菌病的组织病理检查与直接镜真菌病的组织病理检查与直接镜检培养同样具有相当重要的价值,检培
15、养同样具有相当重要的价值,尤其对深部真菌病的诊断意义更尤其对深部真菌病的诊断意义更大,如用特殊染色可提高阳性率大,如用特殊染色可提高阳性率。安徽省中医院皮肤性病科安徽省中医院皮肤性病科真菌病真菌病o(四)免疫诊断方法:(四)免疫诊断方法:特异性抗原的检测:乳胶凝集试验特异性抗原的检测:乳胶凝集试验(LA)、酶联免疫试验()、酶联免疫试验(EIA)、荧)、荧光免疫测定法(光免疫测定法(FA)。)。特异性抗体检测:由于受检者都为特异性抗体检测:由于受检者都为免疫低下患者,因其致阳性率低,故免疫低下患者,因其致阳性率低,故现已少用现已少用。安徽省中医院皮肤性病科安徽省中医院皮肤性病科真菌病真菌病o(
16、五)分子生物学方法(五)分子生物学方法o近年来随着分子生物学的发展,已有聚合酶近年来随着分子生物学的发展,已有聚合酶链反应(链反应(PCR)扩增、分子探针、限制性酶)扩增、分子探针、限制性酶切片段长度多态性分析(切片段长度多态性分析(RFLP)、)、DNA指指纹图谱、随机扩增纹图谱、随机扩增DNA多态性(多态性(RAPD)等)等方法。用于深部真菌病的诊断和分型研究,方法。用于深部真菌病的诊断和分型研究,形成了以形成了以PCR技术为基础的一系列分子诊断技术为基础的一系列分子诊断方法方法安徽省中医院皮肤性病科安徽省中医院皮肤性病科真菌病真菌病安徽省中医院皮肤性病科安徽省中医院皮肤性病科真菌病真菌病
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