《实验沉淀反应》PPT课件.ppt

《《实验沉淀反应》PPT课件.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《《实验沉淀反应》PPT课件.ppt（13页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、实验二实验二 沉淀反应沉淀反应定义：定义：可溶性Ag +相应Ab 形成肉眼 可见的沉淀物质 （Ag-Ab复合物）实验内容实验内容对流免疫电泳对流免疫电泳双向琼脂扩散试验双向琼脂扩散试验试剂和器材双扩实验：双扩实验：标本1、标本2、阳性对照、阴性对照、Ab（抗白蛋白）、1.2%的琼脂、湿盒、37度温箱等对流实验：对流实验：对流Ag、Ab（抗白蛋白）、巴比妥缓冲液、1.2%的琼脂、电泳仪、电泳槽、加样器 双向琼脂扩散试验双向琼脂扩散试验原理：原理：定性试验定性试验。将可溶性抗原与相应抗体分别加入琼脂板上相对应的孔内，抗原抗体从孔内向四周扩散，在两者对应比例适宜处形成沉淀线。意义意义：可用已知抗原（

2、抗体）来检测未知的抗体（抗原），同时检测抗原抗体的纯度。临床上常用来检测甲胎蛋白（AFP），作为原发性肝癌等的辅助诊断。实验方法实验方法（1）制板）制板：4ml/块块（2）打孔）打孔：孔径：孔径3mm，孔间距，孔间距5mm。（3）加样）加样（各（各10ul）：标本：标本 1 ：标本：标本 2 ：阳性对照阳性对照 ：Ab（4）扩散）扩散：置湿盒置湿盒37C、24小时观察结果小时观察结果。231123实验方法实验方法（1）制板）制板：4ml/块块（2）打孔）打孔：孔径：孔径3mm，孔间距，孔间距5mm。（3）加样）加样（各（各10ul）：标本：标本1 :标本标本2 ：阴性对照：阴性对照 ：阳性对照

3、阳性对照 ：Ab （4）扩散）扩散：置湿盒置湿盒37C、24小时观察结果小时观察结果。561426423153结果判断结果判断1.在阳性对照孔与中间的抗体孔之间出现一条或多条白色沉淀线（一对抗原抗体系统即可出现一条沉淀线，如有多对抗原抗体可出现多条沉淀线）。2.观察标本孔与中间的抗体孔之间有无出现沉淀线，有即为阳性，无即为阴性。对流免疫电泳原理原理：利用利用电场电场的作用的作用加强加强和和加快加快双向扩散双向扩散的一种的一种方法。方法。在pH8.6的碱性缓冲液琼脂中进行电泳，带有较多负电荷的Ag泳向阳极，而Ab球蛋白等电点偏高（约为6-7），在pH8.6时带负电荷较少，加上分子量较大，泳动慢，

4、受电渗（指电场中液体对固体支持物的相对移动）干扰后向阴极倒退，这样抗原抗体作相对运动，在较短时间内即可相遇，在孔间两者分子比例合适的地方形成沉淀线。结果判断结果判断 1.有沉淀线：+无沉淀线：-2.沉淀线的位置与Ag、Ab分子电荷情况有关，也与 Ag、Ab比例有关。3.特点：优：操作简便，观察结果快，敏感度比双扩高8-16倍。缺：分辨率差，当有多种Ag、Ab 系统存在时，形成 的沉淀线位置易重叠，难以分辨，所以用此目的 时，不如双扩。意义：意义：对流免疫电泳主要用于检测标本中的抗原如抗原如AFP、HBsAg等。本法较双向琼脂扩散时间大为缩短（一般只需30分钟到1小时），且灵敏度比双扩高约数十倍。