《层析分离法》PPT课件.ppt

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1、第九章第九章 分析测定中的分分析测定中的分离方法离方法9.4.1 柱层析法柱层析法9.4.2 平面层析法平面层析法 第四节第四节层析分离法层析分离法2022/10/292022/10/29 柱层析法柱层析法1.1.吸附柱层析法吸附柱层析法吸附柱层析法吸附柱层析法 以吸附剂为固定相以吸附剂为固定相以吸附剂为固定相以吸附剂为固定相(硅胶、氧化铝和活性炭等硅胶、氧化铝和活性炭等硅胶、氧化铝和活性炭等硅胶、氧化铝和活性炭等)。根据试样的性质、吸附剂的活性和流动相的极性这根据试样的性质、吸附剂的活性和流动相的极性这根据试样的性质、吸附剂的活性和流动相的极性这根据试样的性质、吸附剂的活性和流动相的极性这三

2、种因素来选择适宜的条件。三种因素来选择适宜的条件。三种因素来选择适宜的条件。三种因素来选择适宜的条件。被分离的组分极性较强，应选择吸附性能较弱的吸被分离的组分极性较强，应选择吸附性能较弱的吸被分离的组分极性较强，应选择吸附性能较弱的吸被分离的组分极性较强，应选择吸附性能较弱的吸附剂，同时选择极性较强的洗脱剂；或反之。附剂，同时选择极性较强的洗脱剂；或反之。附剂，同时选择极性较强的洗脱剂；或反之。附剂，同时选择极性较强的洗脱剂；或反之。吸附柱层析法可用于芳香族化合物的分离、倍半萜吸附柱层析法可用于芳香族化合物的分离、倍半萜吸附柱层析法可用于芳香族化合物的分离、倍半萜吸附柱层析法可用于芳香族化合物

3、的分离、倍半萜类烯物的分离等。类烯物的分离等。类烯物的分离等。类烯物的分离等。2022/10/292022/10/292.凝胶柱层析法凝胶柱层析法 利用凝胶或其他具有分子筛性质的多孔性物质做固定利用凝胶或其他具有分子筛性质的多孔性物质做固定利用凝胶或其他具有分子筛性质的多孔性物质做固定利用凝胶或其他具有分子筛性质的多孔性物质做固定相。相。相。相。对具有不同相对分子质量的溶质或不同大小的分子进对具有不同相对分子质量的溶质或不同大小的分子进对具有不同相对分子质量的溶质或不同大小的分子进对具有不同相对分子质量的溶质或不同大小的分子进行分离纯化的一种方法。行分离纯化的一种方法。行分离纯化的一种方法。行

4、分离纯化的一种方法。凝胶：葡萄糖凝胶、聚丙烯酰凝胶、琼脂糖凝胶、聚苯凝胶：葡萄糖凝胶、聚丙烯酰凝胶、琼脂糖凝胶、聚苯凝胶：葡萄糖凝胶、聚丙烯酰凝胶、琼脂糖凝胶、聚苯凝胶：葡萄糖凝胶、聚丙烯酰凝胶、琼脂糖凝胶、聚苯乙烯凝胶和多孔硅胶等。乙烯凝胶和多孔硅胶等。乙烯凝胶和多孔硅胶等。乙烯凝胶和多孔硅胶等。分离原理：当被分离的物质通过柱子时分离原理：当被分离的物质通过柱子时分离原理：当被分离的物质通过柱子时分离原理：当被分离的物质通过柱子时,小分子可以自小分子可以自小分子可以自小分子可以自由进入凝胶孔道由进入凝胶孔道由进入凝胶孔道由进入凝胶孔道(k kd d 1),1),在柱内停留时间最长；大分子因不

5、在柱内停留时间最长；大分子因不在柱内停留时间最长；大分子因不在柱内停留时间最长；大分子因不能进入孔道能进入孔道能进入孔道能进入孔道(k kd d 0),0),在柱内停留时间最短；居中分子在柱内停留时间最短；居中分子在柱内停留时间最短；居中分子在柱内停留时间最短；居中分子(k kd d 0 01)1)，它们将按照顺序被洗脱。，它们将按照顺序被洗脱。，它们将按照顺序被洗脱。，它们将按照顺序被洗脱。2022/10/292022/10/29凝胶柱层析法凝胶柱层析法 应用应用应用应用 生化领域，如蛋白质、氨基酸、核酸、肽类等生物物生化领域，如蛋白质、氨基酸、核酸、肽类等生物物生化领域，如蛋白质、氨基酸、

6、核酸、肽类等生物物生化领域，如蛋白质、氨基酸、核酸、肽类等生物物质的分离和制备；质的分离和制备；质的分离和制备；质的分离和制备；抗菌素的分离、纯化，肝炎病毒的分离等；抗菌素的分离、纯化，肝炎病毒的分离等；抗菌素的分离、纯化，肝炎病毒的分离等；抗菌素的分离、纯化，肝炎病毒的分离等；高聚物的高聚物的高聚物的高聚物的相对分子质量相对分子质量相对分子质量相对分子质量和和和和分子质量分子质量分子质量分子质量分布测定。分布测定。分布测定。分布测定。2022/10/292022/10/29 平面层析法平面层析法 平面层析法平面层析法平面层析法平面层析法(planar chromatography)(plan

7、ar chromatography)主要包括薄层层主要包括薄层层主要包括薄层层主要包括薄层层析法和纸层析法两大类。析法和纸层析法两大类。析法和纸层析法两大类。析法和纸层析法两大类。薄层层析：将固定相涂布于平面载板上。薄层层析：将固定相涂布于平面载板上。薄层层析：将固定相涂布于平面载板上。薄层层析：将固定相涂布于平面载板上。纸层析：直接以滤纸作为固定相。纸层析：直接以滤纸作为固定相。纸层析：直接以滤纸作为固定相。纸层析：直接以滤纸作为固定相。装置简单、操作简便。装置简单、操作简便。装置简单、操作简便。装置简单、操作简便。常作为一种不挥发高沸点有机物、生物大分子混合物常作为一种不挥发高沸点有机物、

8、生物大分子混合物常作为一种不挥发高沸点有机物、生物大分子混合物常作为一种不挥发高沸点有机物、生物大分子混合物的有效、快速、简便的分离分析手段而被应用。的有效、快速、简便的分离分析手段而被应用。的有效、快速、简便的分离分析手段而被应用。的有效、快速、简便的分离分析手段而被应用。平面层析法与其他色谱分离有着相同或相似的分离机平面层析法与其他色谱分离有着相同或相似的分离机平面层析法与其他色谱分离有着相同或相似的分离机平面层析法与其他色谱分离有着相同或相似的分离机理。理。理。理。2022/10/292022/10/29平面层析法平面层析法 纸纸层层析析和和薄薄层层层层析析流流动动相相的的移移动动是是依

9、依靠靠毛毛细细作作用。用。将将试试样样点点在在色色谱谱滤滤纸纸或或层层析析板板的的一一端端，并并将将该该端端浸浸在在作作为为流流动动相相的的溶溶剂剂（常常称称之之为为展展开开剂剂）中中，随随着着溶溶剂剂向向上上的的移移动动，经经过过试试样样点点时时，带带动动试试样样向向上运动。上运动。2022/10/292022/10/29操作技术操作技术mmmm）。）。干燥后即可使用。干燥后即可使用。2022/10/292022/10/29 由由一一种种或或多多种种溶溶剂剂按按一一定定比比例例组组成成。如如用用纸纸层层析析分分离离氨基酸时，常用的展开剂组成和配比为氨基酸时，常用的展开剂组成和配比为 正丁醇正

10、丁醇乙酸乙酸 水水=4=4 1 11 1 。2022/10/292022/10/293.点样点样 用用微微量量注注射射器器或或玻玻璃璃毛毛细细管管吸吸取取一一定定量量试试样样点点在在原原点点上上。试试样样点点的的直直径径一一般般应应小小于于5 5mmmm。可可并并排排点点多多个个试试样同时展开。样同时展开。2022/10/292022/10/294.显色、检测显色、检测 有有些些组组分分在在紫紫外外光光照照射射下下产产生生荧荧光光，可可在在紫紫外外灯灯下下用用铅铅笔笔将将组组分分斑斑点点描描绘绘出出来来。常常用用的的显显色色方方法法有有喷洒显色剂、碘蒸气熏或氨水熏等。喷洒显色剂、碘蒸气熏或氨水

11、熏等。2022/10/292022/10/29特点及应用特点及应用 平板色谱简单、方便、操作费用低；平板色谱简单、方便、操作费用低；可可以以在在一一块块层层析析板板上上同同时时展展开开多多个个试试样样及及将多条滤纸同时展开；将多条滤纸同时展开；采采用用方方形形薄薄层层板板还还可可以以方方便便地地进进行行二二维维展展开开，即即按按一一般般方方法法展展开开后后，改改变变方方向向和和展展开剂再次展开，进一步改善分离效果；开剂再次展开，进一步改善分离效果；试样一般不需要经过预处理即可分离。试样一般不需要经过预处理即可分离。2022/10/292022/10/29缺点缺点:缺缺缺缺点点点点：分分离离效效

12、率率较较低低，不不适适用用于于挥挥发发性性试试样分离。定性定量不便。样分离。定性定量不便。应应应应用用用用：平平板板色色谱谱法法在在染染料料、农农药药、医医药药、有有机机酸酸碱碱类类化化合合物物、糖糖类类化化合合物物、氨氨基基酸酸、蛋蛋白白质质及及中中草草药药中中有有效效成成分分的的分分离离分分析析中中经经常常被被使使用用。也也可可以以用用于于无无机机离离子子的的分分离离。还还经常作为高效液相色谱的一种预试方法。经常作为高效液相色谱的一种预试方法。2022/10/292022/10/299.1 9.1 沉淀分离法沉淀分离法沉淀分离法沉淀分离法 9.2 9.2 溶剂萃取分离法溶剂萃取分离法溶剂萃取分离法溶剂萃取分离法 9.3 9.3 离子交换分离法离子交换分离法离子交换分离法离子交换分离法 9.4 9.4 层析分离法层析分离法层析分离法层析分离法 9.5 9.5 膜分离法膜分离法膜分离法膜分离法 9.6 9.6 激光分离法激光分离法激光分离法激光分离法内容选择：内容选择：结束结束结束结束2022/10/292022/10/29