纤维素酶在葛根有效成分提取中的应用.ppt

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1、纤维素酶在葛根有效成分提取中的应用 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望一、总设计思路一、总设计思路一、总设计思路一、总设计思路发现问题，结合已有成果，总结经验发现问题，结合已有成果，总结经验发现问题，结合已有成果，总结经验发现问题，结合已有成果，总结经验分析总结分析总结查阅相关查阅相关文献文献资料资料含量检测、含量检测、成分分析成分分析设计工艺设计工艺流程流程确定研究确定研究对象对象二、选二、选二、选二、选题基础题基础题基础题基础有效成分有效成分植物药

2、材的有效成分被包裹在细胞壁中植物药材的有效成分被包裹在细胞壁中细胞壁主要成分是纤维素，细胞壁主要成分是纤维素，大量的纤维大量的纤维素阻碍了有效成分的溶出。素阻碍了有效成分的溶出。细胞壁细胞壁ll纤维素酶解提取过程纤维素酶解提取过程纤维素酶解提取过程纤维素酶解提取过程 酶解破壁酶解破壁 有效成分的提取有效成分的提取 纤维素酶纤维素酶解提取解提取 提高提取率提高提取率加速有效成分释放加速有效成分释放将植物组织将植物组织温和温和分解分解选用纤维素酶选用纤维素酶4.3.2.1.ll酶解优酶解优酶解优酶解优点点ll两种提取方法的比较两种提取方法的比较两种提取方法的比较两种提取方法的比较l萃取时间长l需要

3、使用大量溶剂l受植物细胞壁纤维组织的 屏障作用l提取率较低（尤其是以富含纤维素的根、茎、皮类药材为原料提取时,纤维素的屏障作用更为突出）酶处理法酶处理法l可使细胞壁发生不同程度的改变,如软化、膨 胀和崩溃等l可改变细胞壁的通透性l有利于壁内的药效成分溶出,从而提高药效成分的提取率。.传统的水、酸、碱、传统的水、酸、碱、有机溶剂提取方法有机溶剂提取方法 三、确定实验对象三、确定实验对象三、确定实验对象三、确定实验对象n葛根是一味常葛根是一味常用的药材，为用的药材，为豆科植物野葛豆科植物野葛或甘葛藤干燥或甘葛藤干燥根。根。葛根多为根部用药，常为斜切或纵切的块片，其切葛根多为根部用药，常为斜切或纵切

4、的块片，其切面粗糟，纤维性强，对根部入药药材酶解法提取的面粗糟，纤维性强，对根部入药药材酶解法提取的研究有较好的代表性，因此本次实验选取野葛根药研究有较好的代表性，因此本次实验选取野葛根药材最为研究对象进行实验设计。材最为研究对象进行实验设计。葛根素（葛根黄素）葛根素（葛根黄素）1.大豆黄酮（大豆苷元）大豆黄酮（大豆苷元）2.大豆黄酮苷（大豆苷）大豆黄酮苷（大豆苷）3.非黄酮类成分如尿囊素等非黄酮类成分如尿囊素等4.ll葛根主要含黄酮类化合物，含量达葛根主要含黄酮类化合物，含量达葛根主要含黄酮类化合物，含量达葛根主要含黄酮类化合物，含量达葛根主要含黄酮类化合物，含量达葛根主要含黄酮类化合物，含

5、量达12%12%12%四、实验设计四、实验设计四、实验设计四、实验设计1.制备供试液制备供试液 20g葛根粗粉葛根粗粉 加入加入100mL乙醇回流提取乙醇回流提取1.5h，抽滤（再重复两次）抽滤（再重复两次）药药 渣渣 60%乙醇回流提取乙醇回流提取4次次 合并乙醇溶液合并乙醇溶液，减压浓缩减压浓缩浸浸 膏膏 用少量甲醇溶解，用少量甲醇溶解，除去不溶物除去不溶物定容于定容于100mL量瓶中量瓶中（一）测定纤维素酶对葛根总黄酮的影响（一）测定纤维素酶对葛根总黄酮的影响 分别取分别取5mL5mL甲醇溶液两份（甲醇溶液两份（A,BA,B）A A：用甲（乙）醇定容至：用甲（乙）醇定容至25ml25ml

6、作为对照组；作为对照组；B B：将甲醇蒸干：将甲醇蒸干15mLpH4.815mLpH4.8的磷酸盐缓冲液超的磷酸盐缓冲液超声溶解于声溶解于25mL25mL三角瓶中三角瓶中加入加入75mg75mg纤维素酶纤维素酶 5050水浴水浴2.5h2.5h，水浴蒸干，水浴蒸干用甲醇超声溶解，用甲醇超声溶解，定容于定容于25mL25mL量瓶中。量瓶中。.处理处理1.1.1.1.薄层色谱薄层色谱薄层色谱薄层色谱分析分析分析分析.液相或液相或液相或液相或液质联用液质联用液质联用液质联用3.3.3.3.检测检测检测检测 按照按照2005年中华人民共和国药典一部葛根项下年中华人民共和国药典一部葛根项下方法进行薄层色

7、谱检查和方法进行薄层色谱检查和HPLC法进行比较。法进行比较。提取物未经任何处理提取物未经任何处理提取物加酶处理提取物加酶处理3小时小时ll测定结果测定结果测定结果测定结果n通过薄层比较未发现两实验组的斑点有明显变通过薄层比较未发现两实验组的斑点有明显变化化 ；n通过高效液相测定，对照组与实验组的谱图上通过高效液相测定，对照组与实验组的谱图上显示峰数目、保留时间等参数均有很大变化显示峰数目、保留时间等参数均有很大变化（二）测定纤维素酶对葛根的作用（二）测定纤维素酶对葛根的作用2g2g葛根粗粉葛根粗粉 25mL水 30mL甲醇超声25min,过滤 药渣药渣 加入30mL甲醇超声25min 合并甲

8、醇溶液合并甲醇溶液 蒸干 用甲醇溶解定容于定容于25mL25mL量瓶中量瓶中 2g2g葛根粗粉葛根粗粉 缓冲液25mL100mg纤维素酶 50水浴5h 同法处理同法处理定容于定容于25mL25mL量瓶中量瓶中 1.1.1.1.薄层色谱薄层色谱薄层色谱薄层色谱分析分析分析分析2.2.2.2.总黄酮含总黄酮含总黄酮含总黄酮含量测定量测定量测定量测定3.3.3.3.液相或液相或液相或液相或液质联用液质联用液质联用液质联用检测检测检测检测 原药材未经酶解原药材未经酶解原药材经酶解后原药材经酶解后ll测定结果测定结果测定结果测定结果n通过薄层比较未发现两实验组的斑点有明显变通过薄层比较未发现两实验组的斑

9、点有明显变化化 ；n通过高效液相测定，通过高效液相测定，对照组与实验组的谱图上对照组与实验组的谱图上显示峰数目、保留时间等参数均有很大变化显示峰数目、保留时间等参数均有很大变化 n由于缺少对照品，总黄酮含量并未测定，因此由于缺少对照品，总黄酮含量并未测定，因此无法确定提取率是否增加无法确定提取率是否增加ll实验特色实验特色实验特色实验特色实验设置了两个对照组进行比较分析，实验设置了两个对照组进行比较分析，较全面较全面的考虑了可能的影响因素的考虑了可能的影响因素：这是本实验研究的独特性这是本实验研究的独特性此外，实验中应用三种检测方法分别进行对照此外，实验中应用三种检测方法分别进行对照分析，这与

10、已经发表的研究文献相比也具有良分析，这与已经发表的研究文献相比也具有良好的准确性好的准确性 酶解对于药材有效成分破坏的影响酶解对于药材有效成分破坏的影响1.酶解对药材有效成分提取率的影响酶解对药材有效成分提取率的影响2.五、前期工作小结五、前期工作小结五、前期工作小结五、前期工作小结n在前期实验中，应用在前期实验中，应用薄层层析法薄层层析法对各供试品对各供试品 进行检测分析，进行检测分析，显示结果与对照组相比较斑显示结果与对照组相比较斑 点无明显变化点无明显变化。这与相应文献记载相符合。这与相应文献记载相符合。n但是样品用但是样品用高效液相高效液相测定之后发现异常现象，测定之后发现异常现象，对

11、照组与实验组的谱图上显示峰数目、保留时对照组与实验组的谱图上显示峰数目、保留时间等参数均有很大变化间等参数均有很大变化。因此我对文献中纤维。因此我对文献中纤维素酶解没有破坏葛根的有效成分这一说法存在素酶解没有破坏葛根的有效成分这一说法存在质疑。质疑。六、后续实验设计六、后续实验设计六、后续实验设计六、后续实验设计 1.1.用分光光度法对提取物进行含量测定，以确用分光光度法对提取物进行含量测定，以确 定酶解是否提高了药材有效成分提取率；定酶解是否提高了药材有效成分提取率；2.2.进行药效学实验研究，首先确定一个药理指进行药效学实验研究，首先确定一个药理指标，根据该指标判断酶解对药材的某一药效的标，根据该指标判断酶解对药材的某一药效的作用或毒副作用。作用或毒副作用。谢谢谢谢大大家家！祝您有个愉快的夜晚祝您有个愉快的夜晚