微生物培养标本采集标准化电子教案.ppt
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1、1 12022/11/172022/11/17 黄文辉黄文辉 青海大学附属青海大学附属(fsh)(fsh)医医院检验科院检验科微生物培养微生物培养(piyng)(piyng)标本采集标准标本采集标准化培训化培训 第一页,共78页。2022/11/172022/11/172 2我们应该追求:我们应该追求:“准确的病原学诊断准确的病原学诊断”“针对性病原学治疗针对性病原学治疗”正确正确(zhngqu)(zhngqu)的微生物标本采的微生物标本采集和运送,是准确的病原学诊断的集和运送,是准确的病原学诊断的前提!前提!微生物让人类微生物让人类(rnli)(rnli)步步为营步步为营!第二页,共78页。
2、2022/11/172022/11/173 3 随着现代医学的进步和人类对疾病的不随着现代医学的进步和人类对疾病的不断认识,医学的学科分类越来越细,疾病的断认识,医学的学科分类越来越细,疾病的分类越来越完善,而与之相关的实验室检验分类越来越完善,而与之相关的实验室检验也日趋精密复杂。在多数情况下,实验室检也日趋精密复杂。在多数情况下,实验室检验比病人的主诉验比病人的主诉(zh s)(zh s)敏感、准确、客观,敏感、准确、客观,而现代医学对疾病的诊断和治疗越来越依赖而现代医学对疾病的诊断和治疗越来越依赖于实验室检验结果。于实验室检验结果。“君子慎始,差之毫厘,谬以千里君子慎始,差之毫厘,谬以千
3、里(mi y(mi y qin l)”qin l)”礼记礼记第三页,共78页。2022/11/172022/11/174 4良好的标本良好的标本(biobn)(biobn)是成功了一半!是成功了一半!为了取得准确的、可靠的检验结果,必须取得为了取得准确的、可靠的检验结果,必须取得为了取得准确的、可靠的检验结果,必须取得为了取得准确的、可靠的检验结果,必须取得高质量的标本高质量的标本高质量的标本高质量的标本(biobn)(biobn)(biobn)(biobn)。高质量的标本。高质量的标本。高质量的标本。高质量的标本(biobn)(biobn)(biobn)(biobn)是是是是高质量的检验的第
4、一步。没有高质量的标本高质量的检验的第一步。没有高质量的标本高质量的检验的第一步。没有高质量的标本高质量的检验的第一步。没有高质量的标本(biobn)(biobn)(biobn)(biobn),再先进、再精密的仪器也得不出准确的,再先进、再精密的仪器也得不出准确的,再先进、再精密的仪器也得不出准确的,再先进、再精密的仪器也得不出准确的结果,而很多采集标本结果,而很多采集标本结果,而很多采集标本结果,而很多采集标本(biobn)(biobn)(biobn)(biobn)的患者和医务人员的患者和医务人员的患者和医务人员的患者和医务人员都有忽视了标本都有忽视了标本都有忽视了标本都有忽视了标本(bio
5、bn)(biobn)(biobn)(biobn)的采集质量而引起结果很的采集质量而引起结果很的采集质量而引起结果很的采集质量而引起结果很大的偏差的经历。大的偏差的经历。大的偏差的经历。大的偏差的经历。第四页,共78页。2022/11/172022/11/175 5 标本采集和运送是细菌培养成功的最最重要标本采集和运送是细菌培养成功的最最重要的关键;的关键;但由于标本的采集和运送常有护士或医生或但由于标本的采集和运送常有护士或医生或病人自己完成病人自己完成(wn chng)(wn chng),所以也是最不容易,所以也是最不容易做好的事情,而且不知道问题所在之处,造成做好的事情,而且不知道问题所在
6、之处,造成的后果是?的后果是?临床医生最不能接受的问题临床医生最不能接受的问题:阳性率低、标本污染阳性率低、标本污染第五页,共78页。2022/11/172022/11/176 6棉花棉花棉花棉花(min hua)(min hua)纤维纤维纤维纤维 +竹竹竹竹/木条木条木条木条 抑抑抑抑 菌菌菌菌 区区区区 是是是是 因因因因 为为为为 :植植植植 物物物物 分分分分 泌泌泌泌 出出出出 来来来来 的的的的 :脂脂脂脂 肪肪肪肪 酸酸酸酸 ;树树树树 脂脂脂脂 ;福福福福 尔尔尔尔 马马马马 林;林;林;林;第六页,共78页。2022/11/172022/11/177 7 氯气氯气 ,重金属与
7、胶水重金属与胶水(jioshu)(jioshu)的影响的影响 第七页,共78页。推荐使用专业推荐使用专业(zhuny)(zhuny)运送培运送培养基养基 v多用途运送系统多用途运送系统 需氧需氧+厌氧厌氧v低低 氧氧 化化 的的 环环 境境 不会对标本不会对标本的微生物造成损害的微生物造成损害v 拭拭 子子 是是 深深 入入 培培 养养 基基 中中 来来 保保 护护 苛苛 养养 菌菌 与与 厌厌 氧菌氧菌 v 两面是以塑料密封两面是以塑料密封,不透水和漏气不透水和漏气 减少污染和维持减少污染和维持(wich)(wich)缺氧缺氧环境环境第八页,共78页。流感嗜血杆菌在三种流感嗜血杆菌在三种(s
8、n(sn zhn)zhn)不不同的运送基的存活率同的运送基的存活率第九页,共78页。2022/11/172022/11/171010基本基本(jbn)(jbn)原则原则1.1.及时采集微生物标本作病原学检查及时采集微生物标本作病原学检查2.2.在抗菌药物使用前采集标本在抗菌药物使用前采集标本3.3.采样时严格执行无菌操作采样时严格执行无菌操作4.4.采样后立即送检采样后立即送检5.5.棉拭子标本宜用运送培养基棉拭子标本宜用运送培养基6.6.混有正常菌群污染标本,不可置肉汤培养混有正常菌群污染标本,不可置肉汤培养7.7.标本容器须灭菌处理,但不得使用消毒剂标本容器须灭菌处理,但不得使用消毒剂8.
9、8.送检标本应注明来源和检验送检标本应注明来源和检验(jinyn)(jinyn)目的目的第十页,共78页。2022/11/172022/11/171111如何提高细菌如何提高细菌(xjn)(xjn)阳性检出率阳性检出率?vv标本标本标本标本(biobn)(biobn)(biobn)(biobn)采集时机采集时机采集时机采集时机vv标本标本标本标本(biobn)(biobn)(biobn)(biobn)采集方法采集方法采集方法采集方法vv标本标本标本标本(biobn)(biobn)(biobn)(biobn)的质与量的质与量的质与量的质与量vv标本标本标本标本(biobn)(biobn)(bio
10、bn)(biobn)的运送与保存的运送与保存的运送与保存的运送与保存vv镜检筛选合格标本镜检筛选合格标本镜检筛选合格标本镜检筛选合格标本(biobn)(biobn)(biobn)(biobn)vv高质量、多种分离培养基高质量、多种分离培养基高质量、多种分离培养基高质量、多种分离培养基vv培养环境培养环境培养环境培养环境第十一页,共78页。2022/11/172022/11/171212“正确的微生物学检验始自正确的微生物学检验始自正确的标本采取。临床医师、正确的标本采取。临床医师、护师及检验技师护师及检验技师(jsh)(jsh)都必都必须通晓其要领。须通晓其要领。”著名的临床微著名的临床微生物
11、检验专著生物检验专著Manual of Manual of Clinical Microbiology Clinical Microbiology 的的主编主编Patrick MurrayPatrick Murray第十二页,共78页。细菌学试验的各种标本细菌学试验的各种标本(biobn)(biobn)的运送及贮存的运送及贮存条件条件 第十三页,共78页。正常正常(zhngchng)菌群的分布菌群的分布位部位部位部位部 常见菌种常见菌种常见菌种常见菌种 皮肤皮肤皮肤皮肤 表皮葡萄球菌、类白喉杆菌、绿脓杆菌、耻垢杆菌等表皮葡萄球菌、类白喉杆菌、绿脓杆菌、耻垢杆菌等表皮葡萄球菌、类白喉杆菌、绿脓杆
12、菌、耻垢杆菌等表皮葡萄球菌、类白喉杆菌、绿脓杆菌、耻垢杆菌等 口腔口腔口腔口腔链球菌(甲型或乙型)、乳酸杆菌、螺旋体、梭形杆菌、白色念链球菌(甲型或乙型)、乳酸杆菌、螺旋体、梭形杆菌、白色念链球菌(甲型或乙型)、乳酸杆菌、螺旋体、梭形杆菌、白色念链球菌(甲型或乙型)、乳酸杆菌、螺旋体、梭形杆菌、白色念球菌、(真菌)表皮葡萄球菌、肺炎球菌、奈瑟氏球菌、类白喉球菌、(真菌)表皮葡萄球菌、肺炎球菌、奈瑟氏球菌、类白喉球菌、(真菌)表皮葡萄球菌、肺炎球菌、奈瑟氏球菌、类白喉球菌、(真菌)表皮葡萄球菌、肺炎球菌、奈瑟氏球菌、类白喉杆菌等杆菌等杆菌等杆菌等 鼻咽腔鼻咽腔鼻咽腔鼻咽腔甲甲甲甲型型型型链链链链
13、球球球球菌菌菌菌、卡卡卡卡他他他他球球球球菌菌菌菌、肺肺肺肺炎炎炎炎球球球球菌菌菌菌、流流流流感感感感杆杆杆杆菌菌菌菌、乙乙乙乙型型型型链链链链球球球球菌菌菌菌、葡葡葡葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、变形杆菌等萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、变形杆菌等萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、变形杆菌等萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、变形杆菌等 眼结膜眼结膜眼结膜眼结膜皮表葡萄球菌、结膜干燥杆菌、类白喉杆菌等皮表葡萄球菌、结膜干燥杆菌、类白喉杆菌等皮表葡萄球菌、结膜干燥杆菌、类白喉杆菌等皮表葡萄球菌、结膜干燥杆菌、类白喉杆菌等 胃胃胃胃正常一般无菌正常一般无菌正常一般无菌正常一般无菌 肠道肠道肠道肠道类类类类杆杆杆杆
14、菌菌菌菌、双双双双歧歧歧歧杆杆杆杆菌菌菌菌、大大大大肠肠肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌、厌厌厌厌氧氧氧氧性性性性链链链链球球球球菌菌菌菌、粪粪粪粪链链链链球球球球菌菌菌菌、葡葡葡葡萄萄萄萄球球球球菌菌菌菌、白白白白色色色色念念念念球球球球菌菌菌菌、乳乳乳乳酸酸酸酸杆杆杆杆菌菌菌菌、变变变变形形形形杆杆杆杆菌菌菌菌、破破破破伤伤伤伤风风风风杆杆杆杆菌菌菌菌、产产产产气气气气荚荚荚荚膜杆菌等膜杆菌等膜杆菌等膜杆菌等阴道阴道阴道阴道乳酸杆菌、白色念球菌、类白喉杆菌、大肠杆菌等乳酸杆菌、白色念球菌、类白喉杆菌、大肠杆菌等乳酸杆菌、白色念球菌、类白喉杆菌、大肠杆菌等乳酸杆菌、白色念球菌、类白喉杆菌、大肠杆菌等 尿
15、道尿道尿道尿道表皮葡萄球菌、类白喉杆菌、耻垢杆菌等表皮葡萄球菌、类白喉杆菌、耻垢杆菌等表皮葡萄球菌、类白喉杆菌、耻垢杆菌等表皮葡萄球菌、类白喉杆菌、耻垢杆菌等第十四页,共78页。15152022/11/172022/11/17血培养标本血培养标本(biobn)(biobn)采集、运送标采集、运送标准化操作准化操作第十五页,共78页。2022/11/172022/11/171616一、血培养指征 患者出现寒战、体温超过38或低体温,怀疑血流感染时,尤其存在以下情况时,应抽血做细菌和真菌培养:医院内肺炎;留置中心静脉导管超过72小时;感染性心内膜炎;骨髓炎;有严重基础疾病;免疫缺陷伴全身感染症状;
16、临床医生(yshng)怀疑有血液感染可能的其他情况。第十六页,共78页。2022/11/172022/11/171717二、采血时机 一旦怀疑有血流感染可能,应立即采血做血培养,最好在抗生素使用前或停用抗生素24小时后,以寒战(hnzhn)、发热时采集为宜。第十七页,共78页。2022/11/172022/11/171818第十八页,共78页。2022/11/172022/11/171919 三、采血流程消毒1、培养瓶消毒程序:用消毒液消毒培养瓶橡皮塞,待干燥后使用。2、皮肤消毒程序:用消毒液从穿刺点向外画圈消毒,至消毒区域直径达5cm以上,待消毒液挥发干燥后(常需30秒以上)穿刺采血。静脉穿
17、刺和培养瓶接种成人用注射器无菌穿刺取血后,排尽针头内空气,直接注入血培养瓶,勿换针头(如果行第二次穿刺或用头皮针取血时,应换针头),先注入厌氧培养瓶,避免注入空气,然后注入需氧培养瓶,轻轻混匀以防血液凝固。近年来,临床普遍采用负压血培养瓶,将血从患者静脉直接吸入血培养瓶,减少(jinsho)污染环节。第十九页,共78页。2022/11/172022/11/172020注意事项1、检验单需注明抗菌药物使用情况(qngkung)、血液采集时间和部位、临床诊断等患者信息。2、采血部位通常为肘静脉,疑为细菌性心内膜炎时以肘动脉或股动脉采血为宜,切忌在静滴抗生素的静脉处采血。除非怀疑有导管相关的血流感染
18、,否则不应从留置静脉或动脉导管取血,因为导管易被皮肤正常菌群污染。3、采血次数:对于成年患者,应该同时分别在两个部位采集血标本,在两个不同部位分离到同样菌种才能确定是病原菌。第二十页,共78页。第二十一页,共78页。2022/11/172022/11/1722224、细菌性心内膜炎:在24小时内取血3次,每次间隔不少于30分钟。必要时次日再做血培养(piyng)2次。5、采血量:以培养(piyng)基与血液之比10:1为宜,以稀释血液中的抗菌药物、抗体等杀菌物质。采血量少会明显降低阳性率。成人每次每培养(piyng)瓶采血810ml,婴幼儿每次培养(piyng)瓶采血2ml。第二十二页,共78
19、页。第二十三页,共78页。四、运送要求1、所有标本采集后都应立即送往实验室,最好在2小时内,如果不能及时送检,宜置于室温环境。血培养瓶送到检验科放入培养箱前,不应暂存于冰箱(bngxing)内。2、送检标本应正确粘贴条形码,注明采样时间和送检时间。3、安全防护:放标本的容器必须防漏,禁止将渗漏的标本送往实验室。第二十四页,共78页。第二十五页,共78页。第二十六页,共78页。第二十七页,共78页。第二十八页,共78页。第二十九页,共78页。2022/11/172022/11/173030尿液标本采集尿液标本采集(cij)(cij)和运送标和运送标准化操作准化操作第三十页,共78页。2022/1
20、1/172022/11/173131一、采集时机一、采集时机宜为抗菌药物使用前的清晨第一次尿液。宜为抗菌药物使用前的清晨第一次尿液。二、采集方法二、采集方法(fngf)(fngf)(一)、清洁中段尿(一)、清洁中段尿 1 1、女性:采集前用肥皂水或、女性:采集前用肥皂水或0.1%0.1%的高锰酸钾溶液等冲洗外阴,的高锰酸钾溶液等冲洗外阴,用手指分开阴唇,弃其前段尿,不终止排尿,留取中段尿用手指分开阴唇,弃其前段尿,不终止排尿,留取中段尿1020ml1020ml于无菌容器内。于无菌容器内。2 2、男性:采集前用肥皂水或、男性:采集前用肥皂水或0.05%0.1%0.05%0.1%的碘伏溶液清洗尿的
21、碘伏溶液清洗尿道口,擦干后上翻包皮,弃其前段尿,不终止排尿,留取中段道口,擦干后上翻包皮,弃其前段尿,不终止排尿,留取中段尿尿1020ml1020ml于无菌容器内。于无菌容器内。(二)、耻骨上膀胱穿刺(二)、耻骨上膀胱穿刺 主要用于厌氧菌培养或留取标本困难的婴儿,脊柱损伤患者主要用于厌氧菌培养或留取标本困难的婴儿,脊柱损伤患者的尿液采集。先用的尿液采集。先用0.25%0.25%的碘伏消毒穿刺部位皮肤,然后使用无的碘伏消毒穿刺部位皮肤,然后使用无菌注射器直接从耻骨联合与脐连线上高于耻骨联合菌注射器直接从耻骨联合与脐连线上高于耻骨联合2cm2cm处刺入膀处刺入膀胱吸取尿液胱吸取尿液1020ml10
22、20ml于无菌容器内。于无菌容器内。第三十一页,共78页。2022/11/172022/11/173232(三)、导尿管尿(三)、导尿管尿1 1、直接导尿法:使用、直接导尿法:使用0.05%0.1%0.05%0.1%的碘伏溶液消毒会阴局部,用导尿管的碘伏溶液消毒会阴局部,用导尿管直接经尿道插入膀胱,先弃其前段尿液约直接经尿道插入膀胱,先弃其前段尿液约15ml15ml,再留取中段尿,再留取中段尿1020ml1020ml于无菌容器内。于无菌容器内。2 2、留置、留置(li zh)(li zh)导尿管法:医院内尿路感染中,临床最常用方法。采导尿管法:医院内尿路感染中,临床最常用方法。采集前先夹住导尿
23、管,采集时则松管弃其前段尿液,使用集前先夹住导尿管,采集时则松管弃其前段尿液,使用0.25%0.5%0.25%0.5%的碘伏消毒导尿管的采样部位,使用无菌注射器斜刺入导尿管(从的碘伏消毒导尿管的采样部位,使用无菌注射器斜刺入导尿管(从采样口或靠近尿道的导尿管管壁)抽取采样口或靠近尿道的导尿管管壁)抽取1020ml1020ml尿液于无菌容器内。尿液于无菌容器内。3 3、回肠造口导尿管法:摘除导管,弃去里面的尿液,先用、回肠造口导尿管法:摘除导管,弃去里面的尿液,先用0.05%0.1%0.05%0.1%的碘伏消毒吻合口,再将导尿管插入到清洁的吻合口,直至筋膜的的碘伏消毒吻合口,再将导尿管插入到清洁
24、的吻合口,直至筋膜的深部采集深部采集1020ml1020ml尿液于无菌容器内。尿液于无菌容器内。第三十二页,共78页。2022/11/172022/11/173333(四)、小儿收集包(四)、小儿收集包 对于无自控能力的小儿可应用收集包采集尿液,这种装对于无自控能力的小儿可应用收集包采集尿液,这种装置由于很难避免会阴部菌群污染产生假阳性,所以只有在检置由于很难避免会阴部菌群污染产生假阳性,所以只有在检验结果为阴性时才有意义。如果检验结果为阳性,应结合临验结果为阴性时才有意义。如果检验结果为阳性,应结合临床进行分析,必要时可使用耻骨上膀胱穿刺或导尿法留取尿床进行分析,必要时可使用耻骨上膀胱穿刺或
25、导尿法留取尿液进行复检。液进行复检。三、标本运送三、标本运送 标本采集后应及时送检并接种,室温下保持时间不宜超标本采集后应及时送检并接种,室温下保持时间不宜超过过(chogu)2(chogu)2小时(夏季保存时间应适当缩短或冷藏保存)。小时(夏季保存时间应适当缩短或冷藏保存)。如果不能及时运送或接种,应如果不能及时运送或接种,应4 4冷藏。但保存时间也不应冷藏。但保存时间也不应超过超过(chogu)8(chogu)8小时。小时。第三十三页,共78页。2022/11/172022/11/173434四、注意事项 1.不应从集尿袋中采集尿液。2.尿液中不应加防腐剂或消毒剂 3.若尿液培养前患者曾使
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