《恩普生化检验基础》PPT课件.ppt
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1、临床生化检验基础产品经理刘海明目录生生生生 化化化化 检检检检 验验验验 的的的的 概概概概 述述述述生生生生 化化化化 检检检检 验验验验 的的的的 手手手手 段段段段生生生生 化化化化 检检检检 验验验验 的的的的 对对对对 象象象象生生生生 化化化化 检检检检 验验验验 的的的的 作作作作 用用用用概概 述述 临床生化检验:主要是运用物理学、化临床生化检验:主要是运用物理学、化学、生物物学等实验室技术和方法,通过学、生物物学等实验室技术和方法,通过感官、试剂反应、仪器分析和动物实验等感官、试剂反应、仪器分析和动物实验等手段,对病人的血液、体液、分泌液、排手段,对病人的血液、体液、分泌液、
2、排泄物等标本进行检验,以获得反映机体功泄物等标本进行检验,以获得反映机体功能状态、病理变化或病因等的客观资料。能状态、病理变化或病因等的客观资料。标本种类:标本种类:血液血液 尿液尿液 脑脊液脑脊液 胸腹水胸腹水 精液精液 对对 象象胃液胃液十二指肠液十二指肠液羊水羊水唾液唾液汗液汗液组织液组织液血血 液液 的的 组组 成成血血 液液标标 本本 的的 采采 集集标标 本本 的的 处处 理理标本的运输和保存标本的运输和保存血液的组成血液的组成血液由血细胞和血浆组成的红色粘稠混悬液。血液由血细胞和血浆组成的红色粘稠混悬液。血细胞:血细胞:4550血血 浆:浆:5055 水分:水分:9192 蛋白质
3、蛋白质 有机物有机物 无机盐无机盐 代谢产物代谢产物血液的组成血液的组成血液标本类型:血液标本类型:血液标本类型:血液标本类型:全血:离体血液立即与适量抗凝剂混合,全血:离体血液立即与适量抗凝剂混合,轻轻混匀,则可避免凝固,从而轻轻混匀,则可避免凝固,从而 得到抗凝全血。得到抗凝全血。血浆:将抗凝全血在一定条件下将其离血浆:将抗凝全血在一定条件下将其离 心沉淀后的上层浅黄色的液体。心沉淀后的上层浅黄色的液体。血清:离体血液自行凝固收缩析出淡黄血清:离体血液自行凝固收缩析出淡黄 色透明的液体。色透明的液体。血清和血浆的区别:血清和血浆的区别:血清和血浆的区别:血清和血浆的区别:血清中缺少了凝血系
4、统中的某些凝血因血清中缺少了凝血系统中的某些凝血因子(凝血过程中被消耗)如凝血因子子(凝血过程中被消耗)如凝血因子(纤(纤维蛋白原)、凝血因子维蛋白原)、凝血因子(凝血酶原)、凝(凝血酶原)、凝血因子血因子(易变因子)、凝血因子(易变因子)、凝血因子(抗血(抗血友病球蛋白友病球蛋白AHGAHG)等。)等。血液的组成血液的组成分析物分析物 与血浆均值比较的差异与血浆均值比较的差异血清与血浆差异的原因血清与血浆差异的原因 钾钾 +6.2+6.2细胞的溶解、特别是血小板细胞的溶解、特别是血小板 无机磷无机磷+10.7+10.7来自细胞的释放来自细胞的释放 总蛋白总蛋白-5.2-5.2纤维蛋白原的作用
5、纤维蛋白原的作用 氨氨+38+38血小板溶解、谷胺酰胺水解血小板溶解、谷胺酰胺水解 乳酸乳酸+22+22细胞释放细胞释放 除除了了血血小小板板溶溶解解外外,有有时时候候血血清清高高钾钾因因溶溶血血与与极极度度的的白白细细胞胞溶溶解解有有关关(白白细细胞胞计计数数50 50 G/LG/L)。考考虑虑到到血血小小板板对对全全血血的的影影响响,可可以以推推算算:血血小小板板计计数数达达100 100 G/LG/L,即即平均使血清与血浆的钾含量差平均使血清与血浆的钾含量差0.11 mmol/L0.11 mmol/L。血清与肝素血浆的差异(一)血清与肝素血浆的差异(一)总蛋白总蛋白白蛋白白蛋白TSHTS
6、H转铁蛋白转铁蛋白ASTAST肌酸激酶肌酸激酶总胆红素总胆红素钠钠铁铁胆碱酯酶胆碱酯酶碱性磷酸酶碱性磷酸酶直接胆红素直接胆红素甘油三酯甘油三酯LDHLDH无机磷无机磷钾钾GGTGGT三碘甲状腺素三碘甲状腺素乳酸乳酸血血清清与与肝肝素素血血浆浆的的差差异异(二二)标本的采集标本的采集采血方法:采血方法:采血方法:采血方法:毛细血管法:血球计数仪、微量分析等。毛细血管法:血球计数仪、微量分析等。静脉采血法:生化检验常用,真实反应。静脉采血法:生化检验常用,真实反应。动脉采血法:个别特殊检验,血气分析动脉采血法:个别特殊检验,血气分析 注意注意注意注意:生化分析仪测量生化分析仪测量生化分析仪测量生化
7、分析仪测量COCOCOCO2 2 2 2问题问题问题问题标本的采集标本的采集静脉采血法注意事项:静脉采血法注意事项:静脉采血法注意事项:静脉采血法注意事项:抽血姿势抽血姿势抽血时间抽血时间饮食饮食运动运动溶血溶血脂血脂血药物药物标本的采集标本的采集溶血:溶血:溶血:溶血:必须避免必须避免必须避免必须避免(1)注射器和容器不干燥、不清洁;)注射器和容器不干燥、不清洁;(2)压脉带捆扎时间太长,淤血过久;)压脉带捆扎时间太长,淤血过久;(3)穿刺不顺损伤组织过多;)穿刺不顺损伤组织过多;(4)抽血速度太快;)抽血速度太快;(5)血液注入容器时未取下针头或用力推)血液注入容器时未取下针头或用力推 出
8、产生大量气泡;出产生大量气泡;(6)抗凝血用力振荡;)抗凝血用力振荡;(7)全血放置时间过久;)全血放置时间过久;(8)离心机速度过快。)离心机速度过快。标本的处理标本的处理抗凝剂:抗凝剂:抗凝剂:抗凝剂:枸橼酸钠:出凝血疾病检验和枸橼酸钠:出凝血疾病检验和ESR;草酸钠:出凝血疾病检验;草酸钠:出凝血疾病检验;乙二酸四乙酸盐:乙二酸四乙酸盐:EDTA-K2/Na2,血,血RT;双草酸盐:草酸钾(钠)双草酸盐:草酸钾(钠)/草酸铵,草酸铵,Ht等;等;氟化钠:适于血糖,抑制糖酵解、血清酶;氟化钠:适于血糖,抑制糖酵解、血清酶;肝素:多种生化分析,临床常用抗血栓药肝素:多种生化分析,临床常用抗血
9、栓药 对部分生化项目有影响;对部分生化项目有影响;标本的处理标本的处理分离:分离:分离:分离:用离心机在符合要求的转速下离心用离心机在符合要求的转速下离心10min得到生化标本;得到生化标本;转速选择:转速选择:RCF1.118L(r/1000)2 RCF:相对离心力,在生化检验分析中的:相对离心力,在生化检验分析中的 标本相对离心力在标本相对离心力在1500150018001800;L:离心半径,以:离心半径,以mm计算,即离心管至旋计算,即离心管至旋 转轴中心距离;转轴中心距离;r:转子每分钟转速。:转子每分钟转速。分离注意事项:分离注意事项:分离注意事项:分离注意事项:转速不够,离心不彻
10、底,不能很好的将转速不够,离心不彻底,不能很好的将血清分离,在血清中容易夹杂纤维蛋白,在测血清分离,在血清中容易夹杂纤维蛋白,在测试过程中容易堵针,影响测试。试过程中容易堵针,影响测试。转速过高,容易造成溶血。转速过高,容易造成溶血。例:例:10cm离心半径的离心机,我们要得离心半径的离心机,我们要得到生化分析的合格标本,应选择到生化分析的合格标本,应选择3662366240124012之间转速,离心之间转速,离心10min即可。即可。标本的处理标本的处理标本的运输和保存标本的运输和保存运输:运输:运输:运输:分离出的血清或血浆,运送过程中注意分离出的血清或血浆,运送过程中注意容器的密闭性、注
11、意避光、避免剧烈震荡。容器的密闭性、注意避光、避免剧烈震荡。保存:保存:保存:保存:不能及时检测或需保留以备复查时,一不能及时检测或需保留以备复查时,一般密闭存放于般密闭存放于410冰箱中,以免水分蒸发冰箱中,以免水分蒸发造成标本浓缩或细胞内外交换影响结果。造成标本浓缩或细胞内外交换影响结果。手手 段段检检 测测 仪仪 器器检检 测测 试试 剂剂检检 测测 方方 法法 操操 作作 人人 员员校校 准准 品品检检 测测 仪仪 器器生化分析仪:生化分析仪:生化分析仪:生化分析仪:进行设置参数、试剂位置、定标测试、质进行设置参数、试剂位置、定标测试、质控测试后就可以上机测试标本。控测试后就可以上机测
12、试标本。保证生化结果准确性的因素除包括保证生化结果准确性的因素除包括样本样本样本样本质质量外还包括整个检测系统的工作状态,检测系量外还包括整个检测系统的工作状态,检测系统的工作状态保持最佳,除了保证仪器所在实统的工作状态保持最佳,除了保证仪器所在实验室的环境,验室的环境,仪器参数仪器参数仪器参数仪器参数的正确编制,的正确编制,配套校准配套校准配套校准配套校准品试剂的使用、定期校正、定期保养品试剂的使用、定期校正、定期保养品试剂的使用、定期校正、定期保养品试剂的使用、定期校正、定期保养等都是保等都是保证检测质量的重要方面。证检测质量的重要方面。检检 测测 试试 剂剂试剂的分类:试剂的分类:试剂的
13、分类:试剂的分类:干粉试剂:易保存、便宜,干粉试剂:易保存、便宜,复溶瓶间差大,效期短,浪费;复溶瓶间差大,效期短,浪费;液体试剂:稳定性好,效期长,浪费少;液体试剂:稳定性好,效期长,浪费少;双双 试试 剂:消除干扰物影响;剂:消除干扰物影响;试剂指示系统和化学原理试剂指示系统和化学原理NAD+NADH(NADP+NADPH)p-NP和和p-NAH2O2偶联偶联其它显色系统其它显色系统抗原抗体反应抗原抗体反应检检 测测 试试 剂剂NADNAD+NADH(NADPNADH(NADP+NADPH)NADPH)指示系统指示系统指示系统指示系统 :NADH和NADPH在340nm有最大吸收峰,而NA
14、D+和NADP+在340nm无吸收峰,利用其偶联的脱氢酶(工具酶)反应,根据340nm吸光度的变化,可以测定物质的浓度或活性。目前利用此指示系统进行测定的临床项目有:ALT、AST、CK、LDH、CK-MB、-HBDH、Glu(己糖激酶法)、UREA、NH4+、CO2等。NADNAD+NADH(NADPNADH(NADP+NADPH)NADPH)指示系统指示系统指示系统指示系统 :ALTALT为例为例为例为例:R1:NADH、乳酸脱氢酶(LDH)R2:L-丙氨酸、-酮戊二酸ALTL-丙氨酸+-酮戊二酸丙酮酸+L-谷氨酸 LDH丙酮酸+NADH+H+L-乳酸+NAD+H2O检检 测测 试试 剂剂
15、p-NPp-NP和和和和p-NAp-NA指示系统指示系统指示系统指示系统 :p-NP和p-NA在405nm有特征性吸收峰,根据405nm吸光度的变化,可以测定物质的浓度或活性。目前利用此指示系统进行测定的临床项目有ALP、r-GT、AMY等。检检 测测 试试 剂剂p-NPp-NP和和和和p-NAp-NA指示系统指示系统指示系统指示系统 :ALP为例:为例:R1:AMP缓冲液、MgCl2R2:对硝基苯磷酸盐ALP对硝基苯磷酸盐+H2O磷酸盐+对硝基苯酚检检 测测 试试 剂剂检检 测测 试试 剂剂H H2 2OO2 2偶联的指示系统偶联的指示系统偶联的指示系统偶联的指示系统 :H2O2在过氧化物酶
16、的作用下,可使单一个或成对的无色的色素原氧化成有色的色素,导致某一波长吸光度的增加,因此可用来测定物质的浓度或活性。目前利用此指示系统进行测定的临床项目有TC、TG、HDL-C、LDL-C、Glu(氧化酶法)、Cr、UA等。检检 测测 试试 剂剂H H2 2OO2 2偶联的指示系统偶联的指示系统偶联的指示系统偶联的指示系统 :GLU为例:为例:R1:4-氨基安替吡啉、抗坏血酸氧化酶R2:葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、酚。GOD葡萄糖+O2+H2O葡萄糖酸+H2O2POD2H2O2+4-氨基安替吡啉+酚醌亚胺+4H2O 检检 测测 试试 剂剂抗原抗体反应指示系统抗原抗体反应指示系统抗原抗体反应指示系
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