土壤中分解尿素的细菌的分离和计数..教学文案.ppt

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1、第一页，共29页。课题课题(kt)(kt)背景背景1 1、关于、关于(guny)(guny)尿素尿素 尿素是一种重要的农业氮肥。但是它不能直尿素是一种重要的农业氮肥。但是它不能直接被农作物吸收。只有接被农作物吸收。只有(zhyu)(zhyu)当土壤中的细菌当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。将尿素分解成氨之后才能被植物利用。2 2、细菌分解尿素的原因、细菌分解尿素的原因脲酶脲酶土壤中的细菌分解尿素是因为它们土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶能合成脲酶CO(NHCO(NH2 2)2 2脲酶脲酶+CO+CO2 2NHNH3 3+H2O第二页，共29页。课题课题(kt)(kt)目的

2、：目的：一、从土壤中分离出能够一、从土壤中分离出能够(nnggu)(nnggu)分解尿分解尿素的细菌素的细菌二、统计每克土壤样品中究竟二、统计每克土壤样品中究竟(jijng)(jijng)含有多少含有多少这样的细菌这样的细菌第三页，共29页。一、如何从土壤中分离出能够分解尿素一、如何从土壤中分离出能够分解尿素(nio(nio s)s)的细菌？的细菌？土壤有土壤有“微生物的天然培养基微生物的天然培养基”之称。同其之称。同其他他(qt)生物环境相比，土壤中的微生物，数量生物环境相比，土壤中的微生物，数量最大，种类最多。尤其是在富含有机质的土壤中，最大，种类最多。尤其是在富含有机质的土壤中，有更多的

3、微生物。而这些微生物中只有一小部分有更多的微生物。而这些微生物中只有一小部分能够分解尿素。那么如何能从众多的微生物中筛能够分解尿素。那么如何能从众多的微生物中筛选出能够分解尿素的细菌呢？选出能够分解尿素的细菌呢？第四页，共29页。资料资料(zlio)(zlio)一：一：思考：思考：思考：思考：1 1 1 1、科学家为什么能从热泉中筛选、科学家为什么能从热泉中筛选、科学家为什么能从热泉中筛选、科学家为什么能从热泉中筛选(shixun)(shixun)(shixun)(shixun)出耐高温的出耐高温的出耐高温的出耐高温的TaqTaqTaqTaq细菌？细菌？细菌？细菌？DNA DNA多聚酶链式反应

4、（多聚酶链式反应（PCRPCR）是一）是一种在体外将少量种在体外将少量DNADNA大量复制大量复制(fzh)(fzh)的技术，而此项技术的实施必须使用的技术，而此项技术的实施必须使用耐高温（耐高温（930C930C）的）的DNADNA聚合酶。聚合酶。美国微生物学家托马斯美国微生物学家托马斯布鲁克于布鲁克于19661966年在美国黄石国年在美国黄石国家公园的一个热泉中发现了水生耐热细菌家公园的一个热泉中发现了水生耐热细菌Taq，并从它，并从它体内分离出了耐高温的体内分离出了耐高温的TaqDNATaqDNA聚合酶。聚合酶。因为热泉温度为因为热泉温度为707080800 0C C C C，淘汰了绝大

5、多数微生物只有，淘汰了绝大多数微生物只有TaqTaq细菌被筛选出来。细菌被筛选出来。细菌被筛选出来。细菌被筛选出来。第五页，共29页。启示：寻找目的菌种时要根据启示：寻找目的菌种时要根据(gnj)(gnj)它对生存环它对生存环境的境的 要求，到相应的环境中去寻找。要求，到相应的环境中去寻找。2、从上述、从上述(shngsh)资料中你能得到什么启示？资料中你能得到什么启示？第六页，共29页。实验室中微生物的筛选，也是应用同样的原理：实验室中微生物的筛选，也是应用同样的原理：即人为提供有利于目的菌株生长即人为提供有利于目的菌株生长(shngzhng)(shngzhng)的条件的条件(包括营养、温度

6、、包括营养、温度、pHpH等等)，同时抑制或阻止其他微生，同时抑制或阻止其他微生物生长物生长(shngzhng)(shngzhng)。也就是利用选择培养基筛选出。也就是利用选择培养基筛选出你想要的目的菌株。你想要的目的菌株。比如：不加氮源的培养基比如：不加氮源的培养基固氮菌固氮菌 不加碳源的培养基不加碳源的培养基自养微生物自养微生物 加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基金黄色葡萄球金黄色葡萄球菌菌 允许特定种类的微生物生允许特定种类的微生物生 长，长，同时抑制或阻止其他同时抑制或阻止其他(qt)种种类微生物生长的培养基。类微生物生长的培养基。第七页，共29页。以尿素以尿素(nio s)

7、(nio s)为唯一氮源的培养基为唯一氮源的培养基能够分离尿能够分离尿素素(nio s)(nio s)的细菌的细菌 只有能分解尿素的细菌才能分解尿素，以尿素作为氮源。只有能分解尿素的细菌才能分解尿素，以尿素作为氮源。而不能分解尿素的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而而不能分解尿素的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而无法生长繁殖无法生长繁殖(fnzh)(fnzh)，所以用此培养基就能够选择出能，所以用此培养基就能够选择出能够分解尿素的细菌。够分解尿素的细菌。思考：什么样的培养基能选择思考：什么样的培养基能选择思考：什么样的培养基能选择思考：什么样的培养基能选择(xunz)(xunz)培养出能够分

8、离尿素的细培养出能够分离尿素的细培养出能够分离尿素的细培养出能够分离尿素的细菌呢？菌呢？菌呢？菌呢？第八页，共29页。思考：思考：1 1、该培养基中有哪些成分？它们分别为微生物生长提供、该培养基中有哪些成分？它们分别为微生物生长提供(tgng)(tgng)了什么营养？了什么营养？2 2、从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上看属于哪、从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上看属于哪类？类？第九页，共29页。1 1、显微镜直接计数法、显微镜直接计数法全部细菌数全部细菌数 利用利用(lyng)(lyng)血球计数板，在显微镜下计算一定血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。容积里样品

9、中微生物的数量。统计统计(tngj)菌落数目的方法：菌落数目的方法：二、如何统计每克土壤二、如何统计每克土壤(trng)(trng)样品中究竟含有样品中究竟含有多少这样的细菌？多少这样的细菌？2 2、稀释涂布平板法稀释涂布平板法活活菌数菌数（最常用）（最常用）3 3、滤膜法滤膜法第十页，共29页。计算方法：计算方法：每克样品中的菌落数每克样品中的菌落数(CV)M(CV)M 其中，其中，CC某一稀释某一稀释(xsh)(xsh)度下平板上生长的平度下平板上生长的平均菌落数，均菌落数，V V涂布平板时所用的稀释涂布平板时所用的稀释(xsh)(xsh)液的液的体积体积(ml)(ml)，M M稀释稀释(

10、xsh)(xsh)倍数。倍数。当样品的稀释当样品的稀释(xsh)度足够高时，培养基表面生度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释长的一个菌落，来源于样品稀释(xsh)液中的一液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。品中大约含有多少活菌。原理原理(yunl)：稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：第十一页，共29页。注意事项：注意事项：为了保证结果准确，一般选择菌落为了保证结果准确，一般选择菌落数在数在3030030300的平板进行计数。的平板进行计数。设置重复组：为使结果接近真实值设置重复组：为使结果接近真实值

11、可将同一稀释度加到三个或三个以上可将同一稀释度加到三个或三个以上的培养皿中，经涂布，培养计算出菌的培养皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。落平均数。设置对照组：将不加土样的培养基设置对照组：将不加土样的培养基置于相同置于相同(xin tn)(xin tn)条件下进行培条件下进行培养，作为空白对照。养，作为空白对照。统计的菌落往往比活菌的实际数目统计的菌落往往比活菌的实际数目低。低。因为当两个或多个细胞因为当两个或多个细胞(xbo)连在一起时，平板上观察到的只是一连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。个菌落。第十二页，共29页。讨论题讨论题1 1：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤两位同学用

12、稀释涂布平板法测定同一土壤(trng)(trng)样品中的细菌数。在对应稀释倍数为样品中的细菌数。在对应稀释倍数为106106的的培养基中，得到以下两种统计结果。培养基中，得到以下两种统计结果。1 1、第一位同学在该浓度下涂布了一个平板，统、第一位同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为计的菌落数为230230。2 2、第二位同学在该浓度下涂布了三个平板，统、第二位同学在该浓度下涂布了三个平板，统计的菌落数分别为计的菌落数分别为2121、212212、256256，该同学以这三个，该同学以这三个平板上菌落数的平均值平板上菌落数的平均值163163作为统计结果。作为统计结果。分析：你认为哪位

13、同学的结果更接近真实值？分析：你认为哪位同学的结果更接近真实值？你认为这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，你认为这两位同学的实验需要改进吗？如果需要，如何改进？如何改进？甲只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。甲只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。乙有一个平板与另外两个乙有一个平板与另外两个(lin)平板相差很大，说明操作过平板相差很大，说明操作过程可能有误，必须重做实验。程可能有误，必须重做实验。1、实验时必须设置、实验时必须设置(shzh)重重复组，至少要涂布复组，至少要涂布3个平板。个平板。2、分析结果时，一定要考虑、分析结果时，一定要考虑所设置所

14、设置(shzh)的重复组结果的重复组结果是否一致，结果不一致，意味是否一致，结果不一致，意味着操作有误，需要重做实验。着操作有误，需要重做实验。第十三页，共29页。讨论题讨论题2 2：在做本课题的实验时，在做本课题的实验时，A A 同学从对应同学从对应106106倍稀倍稀释的培养基中筛选出大约释的培养基中筛选出大约150150个菌落。但是，其他个菌落。但是，其他同学在同样的稀释度下只选择出大约同学在同样的稀释度下只选择出大约5050个菌落。个菌落。其他同学认为其他同学认为A A同学的结果有问题。他们分析同学的结果有问题。他们分析可能是可能是A A同学的培养基被杂菌污染了，或者培养基同学的培养基

15、被杂菌污染了，或者培养基中混入了其他含氮物质，因而导致不能分解尿素的中混入了其他含氮物质，因而导致不能分解尿素的细菌也能在该培养基上生长。细菌也能在该培养基上生长。但是，但是，A A同学确信自己的实验操作同学确信自己的实验操作(cozu)(cozu)准准确无误，与其他同学的结果之所以不相同，是因为确无误，与其他同学的结果之所以不相同，是因为自己所选用的土壤样品不同。但是，自己所选用的土壤样品不同。但是，A A同学在设计同学在设计实验的时候并没有设置对照，因而此时也拿了不出实验的时候并没有设置对照，因而此时也拿了不出令人信服的证据。令人信服的证据。分析：你能通过设置对照，帮助分析：你能通过设置对

16、照，帮助A A同学学排除同学学排除上述两个可能影响实验结果的因素吗？上述两个可能影响实验结果的因素吗？第十四页，共29页。通过这个事例可以看出通过这个事例可以看出(kn ch)，实验，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。方案方案(fng n)(fng n)一：由其他同学用与一：由其他同学用与A A同学相同土样同学相同土样进行实验进行实验 方案二：将方案二：将A A同学配制的培养基在不加同学配制的培养基在不加(b ji)(b ji)土土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。养基是否受到

17、污染。如果结果与如果结果与A A同学一致，则证明同学一致，则证明A A无误；如果结果无误；如果结果不同，则证明不同，则证明A A同学存在操作失误或培养基的配制有同学存在操作失误或培养基的配制有问题。问题。对照实验是指除了被测试的对照实验是指除了被测试的条件以外，其他条件都相同条件以外，其他条件都相同的实验，其作用是比照实验的实验，其作用是比照实验组，排除任何其他可能原因组，排除任何其他可能原因的干扰的干扰第十五页，共29页。三三.实验的具体操作实验的具体操作 （一）（一）.土壤取样土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土表层土3cm3cm左右，再取样，将

18、样品装入事先左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。准备好的信封中。取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。使用前都要灭菌。（二）（二）.制备培养基制备培养基 制备以尿素为唯一氮源的选择培养基制备以尿素为唯一氮源的选择培养基和牛肉膏蛋白和牛肉膏蛋白(dnbi)(dnbi)胨固体培养基。胨固体培养基。筛选出能够筛选出能够(nnggu)分解分解尿素的细菌尿素的细菌与选择培养基作对照，与选择培养基作对照，检测选择培养基是否检测选择培养基是否(sh fu)具有选择作具有选择作用用第十六页，共29页。应在火焰旁称取土壤应在火焰旁称取土壤10g10g。在稀释

19、土壤溶液的过程在稀释土壤溶液的过程(guchng)(guchng)中，每一步都要在火焰中，每一步都要在火焰旁进行旁进行 分离不同的微生物采用不同的稀释度分离不同的微生物采用不同的稀释度 一般分离土壤中细菌，选用一般分离土壤中细菌，选用(xunyng)104(xunyng)104、105105、106106倍倍的稀释度的稀释度 分离土壤中放线菌，选用分离土壤中放线菌，选用(xunyng)103(xunyng)103、104104、105105倍倍的稀释度的稀释度 分离土壤中真菌，选用分离土壤中真菌，选用(xunyng)102(xunyng)102、103103、104104倍的倍的稀释度稀释度

20、第一次实验可将稀释度放宽一点，选择第一次实验可将稀释度放宽一点，选择103107103107（三三）样样品品(yngp(yngpn)n)的的稀释稀释第十七页，共29页。思考：思考：为为什什么么分分离离不不同同的的微微生生物物要要采采用用(ciyng)(ciyng)不不同同的的稀稀释释度度？测测定定土土壤壤中中细细菌菌的的总总量量和和测测定定土土壤壤中中能能分分解解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？原因：不同微生物在土壤中的含量不同。原因：不同微生物在土壤中的含量不同。目的：保证目的：保证(bozhng)能从中选择出菌落数在能从中选择出菌落数在303

21、00间的平板进行计数。间的平板进行计数。第十八页，共29页。（四）（四）.取样取样(qyng)(qyng)涂布涂布实验时要对培实验时要对培养皿作好标记养皿作好标记(bioj)(bioj)。注明。注明培养基类型、培培养基类型、培养时间、稀释度、养时间、稀释度、培养物等。培养物等。如果如果(rgu)得到了得到了2个或个或2个以上菌落数目在个以上菌落数目在30300的的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果如果(rgu)同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验操作有误，需要重新实验。

22、表明试验操作有误，需要重新实验。第十九页，共29页。（五）（五）.微生物的培养微生物的培养(piy(piyng)ng)与观察与观察在菌落计数时，每隔在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。不足而导致遗漏菌落的数目。不同的微生物会表现出不同的菌落特征，包括菌落的形状、不同的微生物会表现出不同的菌落特征，包括菌落的形状、大小、颜色和隆起程度等等大小、颜色和隆起程度等等(dn dn)。这也是区别不同微。这也是区别不同微生物的关键。生物的关键。培养培养(pi

23、yng)不同微生物往往需要不同培养不同微生物往往需要不同培养(piyng)温温度和时间。度和时间。细菌：细菌：3037培养培养(piyng)12d 放线菌：放线菌：2528培养培养(piyng)57d 霉菌：霉菌：2528培养培养(piyng)34d。第二十页，共29页。第二十一页，共29页。四、结果分析与评价四、结果分析与评价1.1.培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落：选出菌落：对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，说对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏蛋白胨培养基的明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏蛋白

24、胨培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目，说明选择培菌落数目明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。养基已筛选出一些菌落。2.2.样品的稀释操作是否成功：样品的稀释操作是否成功：如果得到了如果得到了2 2个或个或2 2个以上菌落数目在个以上菌落数目在3030300300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。落的计数。3.3.重复组的结果是否一致：重复组的结果是否一致：如果学生如果学生(xu sheng)(xu sheng)选取的是同一种土样，选取的是同一种土样，统计的结果应该接近。如果结果相差太远，则可能统计的结果

25、应该接近。如果结果相差太远，则可能操作有误，需要重做试验。操作有误，需要重做试验。第二十二页，共29页。五、操作五、操作(cozu)提示提示 无菌操作无菌操作(cozu)做好标记做好标记(bioj)规划时间规划时间 第二十三页，共29页。六六.课外延伸课外延伸菌种的进一步鉴定：菌种的进一步鉴定：细菌合成的脲酶将尿素细菌合成的脲酶将尿素(nio s)(nio s)分解成了氨，氨会使分解成了氨，氨会使培养基的碱性增强，培养基的碱性增强，pHpH升高。升高。那么我们就可以在以尿素那么我们就可以在以尿素(nio(nio s)s)为唯一氮源的培养基中加入为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后

26、，酚红指示剂。培养某种细菌后，如果如果PHPH升高，指示剂变红，说升高，指示剂变红，说明该细菌能够分解尿素明该细菌能够分解尿素(nio(nio s)s)。加入加入(jir)酚红指示酚红指示剂的培养基从功能上划剂的培养基从功能上划分属于什么培养基？分属于什么培养基？第二十四页，共29页。滤膜法：滤膜法：测定饮水测定饮水(ynshu)(ynshu)中大肠杆菌数量的方法是将中大肠杆菌数量的方法是将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到伊红一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到伊红美蓝培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记美蓝培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，通过记数得出水样中大肠杆菌的

27、数量。数得出水样中大肠杆菌的数量。大肠杆菌大肠杆菌(d chn n(d chn n jn)jn)呈呈 黑色中心黑色中心,有或有或无金属光泽无金属光泽伊红美蓝培养基伊红美蓝培养基从功能上划分从功能上划分(hu fn)属于什属于什么培养基？么培养基？第二十五页，共29页。练习练习1 1、需要在火焰旁操作的有（、需要在火焰旁操作的有（）土壤取样土壤取样称取土壤称取土壤稀释土壤溶液稀释土壤溶液涂布平板涂布平板 微生物的培养微生物的培养 A A B B C C D D2 2、在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂、在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂的目的是（的目的是（）A.A.筛选出能分解尿

28、素的细菌筛选出能分解尿素的细菌 B B培养基中缺乏酚红指示剂作细菌的营养培养基中缺乏酚红指示剂作细菌的营养 C C对分离对分离(fnl)(fnl)的菌种作进一步的鉴定的菌种作进一步的鉴定 D D如指示剂变蓝就能准确认定该菌能分解尿素如指示剂变蓝就能准确认定该菌能分解尿素3 3、测定土壤中细菌数量一般选用、测定土壤中细菌数量一般选用104104、105105和和106106倍的倍的稀释液进行平板培养，而测定真菌的数量一般选用稀释液进行平板培养，而测定真菌的数量一般选用102102、103103和和104104倍稀释，其原因是倍稀释，其原因是()A A细菌个体小，真菌个体大细菌个体小，真菌个体大

29、B B细菌易稀释，真细菌易稀释，真菌不易稀释菌不易稀释C C细菌在土壤中数量比真菌多细菌在土壤中数量比真菌多 D D随机的，没有原随机的，没有原因因4 4、分离、分离(fnl)(fnl)土壤中分解尿素的细菌，对培养基的土壤中分解尿素的细菌，对培养基的要求是要求是()加尿素加尿素不加尿素不加尿素加琼脂加琼脂不加琼脂不加琼脂加葡萄糖加葡萄糖不加葡萄糖不加葡萄糖加硝酸盐加硝酸盐不加硝不加硝酸盐酸盐A A B B C C D D第二十六页，共29页。5.5.下列说法不正确的是（下列说法不正确的是（）A.A.科学家从科学家从70708080度热泉中分离到耐高温的度热泉中分离到耐高温的TaqDNATaqD

30、NA聚合酶聚合酶 B.B.统计某一稀释度的统计某一稀释度的5 5个平板的菌落数依次为个平板的菌落数依次为M1M1、M2M2、M3M3、M4M4、M5M5，以，以M3M3作作为该样品菌落数的估计值为该样品菌落数的估计值 C.C.设置对照实验的主要设置对照实验的主要(zhyo)(zhyo)目的是排除实验组中非测试因素对实验结果目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度的影响，提高实验结果的可信度 D.D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。6 6、实验测定链霉素对、实验测定链霉素对3 3种细菌的抗生素效

31、应，用种细菌的抗生素效应，用3 3种细菌在事先准备好的琼脂种细菌在事先准备好的琼脂平板上画平板上画3 3条等长的平行线条等长的平行线(3(3条线均与图中的链霉素带接触条线均与图中的链霉素带接触)，将平板置于，将平板置于37 37 条件下恒温培养条件下恒温培养3 3天，结果如图所示。从实验结果分析，以下叙述不正确的天，结果如图所示。从实验结果分析，以下叙述不正确的是是()A A链霉素能阻止结核菌的生长链霉素能阻止结核菌的生长 B B链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效C C链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效 D D链霉素可以用于治疗伤寒病人链霉素

32、可以用于治疗伤寒病人第二十七页，共29页。7 7、用来判断选择培养基是否起到了选择作用，需要设置的对照是、用来判断选择培养基是否起到了选择作用，需要设置的对照是()A A未接种的选择培养基未接种的选择培养基B B未接种的牛肉膏蛋白胨培养基未接种的牛肉膏蛋白胨培养基C C接种了的牛肉膏蛋白胨培养基接种了的牛肉膏蛋白胨培养基D D接种了的选择培养基接种了的选择培养基8 8、下列是关于、下列是关于“检测土壤中细菌总数检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述中，错误的是实验操作的叙述中，错误的是()A A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌

33、后倒平板B B取取104104、105105、106106倍的土壤稀释液和无菌水各倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL0.1 mL，分别涂布于各组平板，分别涂布于各组平板上上C C将实验组和对照组平板倒置，将实验组和对照组平板倒置，37 37 恒温培养恒温培养242448h48hD D确定确定(qudng)(qudng)对照组无菌后，选择菌落数在对照组无菌后，选择菌落数在300300以上的实验组平板进行计数以上的实验组平板进行计数9 9、某同学从稀释度为、某同学从稀释度为103103倍的稀释液中各取了倍的稀释液中各取了0.1mL0.1mL土壤菌液涂布到三个平板上土壤菌液涂布到三个平板上得到菌落

34、数分别为得到菌落数分别为200200、215215、210210。求每克土壤样品中的菌落数为。求每克土壤样品中的菌落数为_。第二十八页，共29页。1010、人和哺乳动物的尿中含有尿素、人和哺乳动物的尿中含有尿素(nio s)(nio s)，大量尿素，大量尿素(nio s)(nio s)的存在会的存在会对环境造成污染土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素对环境造成污染土壤中有些细菌含有脲酶，可通过降解尿素(nio s)(nio s)作为作为其生长的氮源现对土壤中的这类细菌进行分离实验，请回答下列问题：其生长的氮源现对土壤中的这类细菌进行分离实验，请回答下列问题：（1 1）分离培养细菌时必须进行无

35、菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无）分离培养细菌时必须进行无菌操作，包括培养基和各种器皿都必须是无菌的，常用的灭菌方法有菌的，常用的灭菌方法有、和和（2 2）将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养在稀释土壤溶液的过程）将样液进行一系列的梯度稀释，然后接种培养在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在中每一步都要在旁进行操作接种后的培养皿旁进行操作接种后的培养皿_于于3737的的中培养中培养（3 3）用含有酚红指示剂的培养基筛选能分泌脲酶的细菌，从功能上划分该培）用含有酚红指示剂的培养基筛选能分泌脲酶的细菌，从功能上划分该培养基属于养基属于培养基若培养基中存在有分解尿素培养基若培养基中存在有分解尿

36、素(nio s)(nio s)的细菌，其的细菌，其菌落周围会出现红色环带，这是由于尿素菌落周围会出现红色环带，这是由于尿素(nio s)(nio s)被分解产生的被分解产生的使使pHpH升高，酚红指示剂产生的颜色变化，从而证明这一菌株可以以尿素升高，酚红指示剂产生的颜色变化，从而证明这一菌株可以以尿素(nio(nio s)s)为氮源变色区域越大，表明该菌株利用尿素为氮源变色区域越大，表明该菌株利用尿素(nio s)(nio s)的能力的能力（4 4）与全营养培养基中的菌落相比，以尿素）与全营养培养基中的菌落相比，以尿素(nio s)(nio s)为氮源的培养基中菌为氮源的培养基中菌落数落数A A多多 B B少少 C C相等相等 D D几乎为零几乎为零第二十九页，共29页。