高效液相色谱分析.ppt

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1、第十章第十章 高效液相色谱分析高效液相色谱分析(high perfomance lquid chromatography)n第一节第一节 概述概述n第二节第二节 基本原理基本原理n第三节第三节 固定相与流动相固定相与流动相n第四节第四节 高效液相色谱仪高效液相色谱仪n第五节第五节 定性、定量分析定性、定量分析第一节第一节 高效液相色谱法概述高效液相色谱法概述n与经典液相色谱法比较与经典液相色谱法比较n与气相色谱法比较与气相色谱法比较n高效液相色谱的特点高效液相色谱的特点第一节第一节 高效液相色谱法概述高效液相色谱法概述 高高效效液液相相色色谱谱(HPLC)是是以以溶溶剂剂液液体体为为流流动动相

2、相的的色色谱谱方方法法。按按照照固固定定相相不不同同可可分分为为：液液液液分分配配色色谱谱；吸吸附附色色谱谱(液液固固色色谱谱)；离离子子交交换换色色谱谱；尺尺寸寸排排阻阻色色谱谱(凝凝胶胶渗渗透透色谱色谱)。早早期期液液相相色色谱谱，包包括括Tswett的的工工作作，都都是是在在直直径径15cm,长长50500cm的的玻玻璃璃柱柱中中进进行行的的。为为保保证证有有一一定定的的柱柱流流速速，填填充充的的固固定定相相颗颗粒粒直直径径多多在在150200 m范范围围内内。即即使使这这样样，流流速速仍仍然然很很低低(7时，该检测器不够灵敏。时，该检测器不够灵敏。第五节第五节 应用与示例应用与示例 一

3、、分离分析方法的选择一、分离分析方法的选择 应用高效液相色谱法对试样进行分离、分析应用高效液相色谱法对试样进行分离、分析的第一步，是根据试样的特性来选择一种最合适的第一步，是根据试样的特性来选择一种最合适的分离类型。色谱分离类型主要是根据试样分子的分离类型。色谱分离类型主要是根据试样分子量大小、溶解度参数和分子结构等化学性质和物量大小、溶解度参数和分子结构等化学性质和物理性质来选定。理性质来选定。试样试样相对分子质相对分子质量量2000溶于水溶于水不溶于水不溶于水凝胶色谱，水为流动相凝胶色谱，水为流动相凝胶色谱，非水为流动相凝胶色谱，非水为流动相溶于非水溶剂溶于非水溶剂溶于水不离解溶于水不离解

4、反相液液色谱反相液液色谱凝胶色谱凝胶色谱(小孔径小孔径)，水为流动相，水为流动相溶于水离解溶于水离解碱碱酸酸阳离子交换色谱阳离子交换色谱阴离子交换色谱阴离子交换色谱溶于烃类溶于烃类(异辛烷等异辛烷等)溶于芳烃溶于芳烃(苯等苯等)溶于二氯甲烷溶于二氯甲烷、氯仿、氯仿溶于甲醇、乙醇溶于甲醇、乙醇等等分子大小差别大分子大小差别大凝胶色谱凝胶色谱(小孔径小孔径)，水为流动相水为流动相反相液液色谱反相液液色谱液固色谱，正相液液色谱液固色谱，正相液液色谱液固色谱液固色谱液固色谱液固色谱极性增加极性增加不溶于水不溶于水溶于水溶于水非极性非极性离子离子非离子极性非离子极性吸附吸附反向分配反向分配分配分配正向分

5、配正向分配离子交换离子交换尺寸排阻尺寸排阻凝胶渗透凝胶渗透凝胶过滤凝胶过滤分分子子量量应用应用 由于由于HPLC分离分析的高灵分离分析的高灵敏度、定量的准确性、适于非敏度、定量的准确性、适于非挥发性和热不稳定组分的分析，挥发性和热不稳定组分的分析，因此，在工业、科学研究，尤因此，在工业、科学研究，尤其是在生物学和医学等方面应其是在生物学和医学等方面应用极为广泛。如氨基酸、蛋白用极为广泛。如氨基酸、蛋白质、核酸、烃、碳水化合物、质、核酸、烃、碳水化合物、药品、多糖、高聚物、农药、药品、多糖、高聚物、农药、抗生素、胆固醇、金属有机物抗生素、胆固醇、金属有机物等分析，大多是通过等分析，大多是通过HP

6、LC来来完成的。完成的。右图是各种右图是各种HPLC方法的应方法的应用范围及对象用范围及对象在生物化学和生物工程中的应用在生物化学和生物工程中的应用n氨基酸氨基酸、多肽多肽和和蛋白质蛋白质的分析的分析n核碱和核苷、核苷酸、核酸的分析核碱和核苷、核苷酸、核酸的分析n紫外检测器紫外检测器n生物胺的分析：研究生物胺及代谢产物与人体生物胺的分析：研究生物胺及代谢产物与人体健康和疾病研究有重要意义健康和疾病研究有重要意义n柱前或柱后荧光衍生化法柱前或柱后荧光衍生化法在医药研究中的应用在医药研究中的应用n合成药物的纯化及成分的定性、定量分析，合成药物的纯化及成分的定性、定量分析，n中草药有效成分的分离、制

7、备及纯度鉴定，中草药有效成分的分离、制备及纯度鉴定，n人体血液及体液中药物浓度、药物代谢物的测定，人体血液及体液中药物浓度、药物代谢物的测定，n手性药物中对映体含量测定及拆分等。手性药物中对映体含量测定及拆分等。在食品分析中的应用在食品分析中的应用n糖类的分离分析糖类的分离分析n有机酸及酸味剂的分离分析有机酸及酸味剂的分离分析n维生素的分离分析维生素的分离分析n食品添加剂的分离分析：防腐剂，抗氧化剂，甜食品添加剂的分离分析：防腐剂，抗氧化剂，甜味剂和香料，人工合成色素，食品污染物分析。味剂和香料，人工合成色素，食品污染物分析。在环境污染分析中的应用在环境污染分析中的应用n农药残留的检测农药残留

8、的检测n酚类和胺类的检测酚类和胺类的检测n多环芳烃多环芳烃的检测的检测n多氯联苯的检测多氯联苯的检测习题习题 9.用长用长15cm 的的ODS 柱分离二个组分，已知柱分离二个组分，已知在实验条件下柱效在实验条件下柱效n=2.84 104m-1。用苯磺酸钠。用苯磺酸钠溶液测得死时间溶液测得死时间tM，二个组分的保留时间分别为，二个组分的保留时间分别为tR1 及及 tR2。（。（1）求）求k1，k2，R。（。（2）若增加）若增加柱长至柱长至30cm，分离度可否达到？，分离度可否达到？习题习题解：解：习题习题(2)已知已知习题习题 10.在某一柱上分离一样品，得以下数据。在某一柱上分离一样品，得以下数据。组分组分A、B 及非滞留组分及非滞留组分 C 的保留时间分别为的保留时间分别为2min、5min 和和1min。求。求 （1）B 组分停留在固定相中的时间是组分停留在固定相中的时间是A组分组分的几倍？的几倍？（2）B组分的分配系数是组分的分配系数是A 组分的几倍？组分的几倍？（3）当柱长增加一倍时，峰宽增加多少倍？）当柱长增加一倍时，峰宽增加多少倍？习题习题解：解：习题习题