体液免疫球蛋白测定备课讲稿.ppt

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1、第十六章第十六章 体液体液(ty)(ty)免疫球免疫球蛋白测定蛋白测定P188P188 湖南省中医药大学微生物免疫湖南省中医药大学微生物免疫(miny(miny)教研室教研室 李志芳李志芳第一页，共32页。u抗体（抗体（antibody,Ab)antibody,Ab)：是：是B B细胞识别抗原后增细胞识别抗原后增殖分化为浆细胞所产生的能与相应抗原特异殖分化为浆细胞所产生的能与相应抗原特异性地结合性地结合(jih)(jih)球蛋白。球蛋白。(生物学功能上的生物学功能上的概念概念)u抗体主要存在于血清等体液中，故将抗体介抗体主要存在于血清等体液中，故将抗体介导的免疫称为体液免疫。导的免疫称为体液免

2、疫。几个几个(j)概念概念第二页，共32页。免疫球蛋白（免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）：具有）：具有(jyu)抗体活性或化学结构与抗体相似抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白。（化学结构上的概念）的球蛋白。（化学结构上的概念）Ab与Ig的联系(linx)1.所有的Ab都是Ig 2.Ig并非都是Abu分泌型（分泌型（secreted Ig，sIg）：存在于血清）：存在于血清(xuqng)等体液中，如等体液中，如Abu膜型（膜型（membrane Ig，mIg）是）是B细胞上的抗细胞上的抗原受体。原受体。第三页，共32页。IgIg的基本结构：的基本结构：四肽链结构四肽链结构,所有

3、所有IgIg的基本单位都是四条肽链的对的基本单位都是四条肽链的对称结构。两条重链（称结构。两条重链（H H）和两条轻链（）和两条轻链（L L）。每条）。每条重链和轻链分为重链和轻链分为(fn wi)(fn wi)氨基端和羧基端。氨基端和羧基端。第四页，共32页。免疫球蛋白分类免疫球蛋白分类(fn li)及及特性特性v重链性质，重链性质，IgIg分分5 5类：类：IgG()IgG()、IgA()IgA()、IgM()IgM()、v IgD()IgD()、IgE()IgE()v轻链性质，轻链性质，IgIg分分2 2型：型：、vIgIg占血浆蛋白总量：占血浆蛋白总量：20%20%vIgIg含量含量(

4、hnling)(hnling)：血清：血清 IgG IgG、IgAIgA、IgMIgM：g/Lg/L、IgD IgD、IgEIgE：mg/L mg/L v 体液体液 IgG IgG、IgAIgA、IgMIgM：mg/L mg/L v检测意义：反应机体的免疫功能、诊断疾病检测意义：反应机体的免疫功能、诊断疾病第五页，共32页。五类免疫五类免疫(miny)球蛋白的特点和球蛋白的特点和功能功能第六页，共32页。第一节第一节 体液体液(ty(ty)中中IgGIgG、IgAIgA、IgM IgM 测定的临床应用测定的临床应用体液免疫球蛋白测定主要指对人体的血液、尿液、体液免疫球蛋白测定主要指对人体的血液

5、、尿液、脑脊液等样本中的脑脊液等样本中的IgGIgG、IgAIgA、IgM IgM 定量检测，由定量检测，由于免疫球蛋白于免疫球蛋白IgGIgG、IgAIgA、IgM IgM 在人体体液中含量在人体体液中含量(hnling)(hnling)相对较高，测定快速，临床意义明确，相对较高，测定快速，临床意义明确，临床应用较广泛临床应用较广泛第七页，共32页。u IgG是血清中含量最高(占80%)的免疫球蛋白，是血液(xuy)和细胞外液中的主要抗体，也是机体再次免疫的主要抗体。u IgA分为血清型A1和分泌型A2，是参与黏膜局部免疫的主要抗体，主要存在于胃肠道和支气管分泌液、初乳、唾液和泪液中。u I

6、gM是分子量最大的免疫球蛋白，是个体发育过程中最早合成和分泌的抗体，也是抗原刺激诱导的体液免疫应答中最早出现的抗体。测定方法测定方法 单向环状免疫单向环状免疫(miny)(miny)扩散法扩散法(耗时、重复性差耗时、重复性差)免疫免疫(miny)(miny)浊度法（速率散浊度法（速率散射比浊）常用射比浊）常用第八页，共32页。年龄：血液年龄：血液Ig随年龄、性别、血型、种族及测定方随年龄、性别、血型、种族及测定方法不同有所差别，各实验室要建立自己法不同有所差别，各实验室要建立自己(zj)的的参考范围参考范围一、血液免疫一、血液免疫(miny)(miny)球蛋白测定的临球蛋白测定的临床意义床意义

7、高高IgIg血症血症 多克隆多克隆IgIg增高（感染）增高（感染）单克隆单克隆IgIg增高（免疫增殖病）增高（免疫增殖病）低低IgIg血症血症:先天性低先天性低IgIg血症（免疫缺陷病）血症（免疫缺陷病）获得性低获得性低IgIg血症血症(蛋白蛋白(dnbi)(dnbi)丢失、淋巴系丢失、淋巴系统肿瘤、使用免疫抑制剂统肿瘤、使用免疫抑制剂)第九页，共32页。正常人尿液中的正常人尿液中的IgIg含量甚微，当机体的免疫功能含量甚微，当机体的免疫功能(gngnng)(gngnng)异常或炎症反应引起肾脏疾病时，可导异常或炎症反应引起肾脏疾病时，可导致肾小球滤过膜分子屏障破坏或电荷屏障受损，从致肾小球滤

8、过膜分子屏障破坏或电荷屏障受损，从而引起球蛋白及其他大分子蛋白质漏出增多。而引起球蛋白及其他大分子蛋白质漏出增多。二、尿液免疫二、尿液免疫(miny)球蛋白测定的临床意义球蛋白测定的临床意义u判断肾小球滤膜受损程度：选择性蛋白尿指数判断肾小球滤膜受损程度：选择性蛋白尿指数SPISPIu可根据尿内可根据尿内IgIg增高的类型帮助鉴别诊断肾小球疾病的增高的类型帮助鉴别诊断肾小球疾病的种类种类(zhngli)(zhngli)u尿中游离轻链的检测对诊断轻链病和尿中游离轻链的检测对诊断轻链病和MMMM有重要意义有重要意义第十页，共32页。三、脑脊液免疫三、脑脊液免疫(miny)球蛋白测定的临床球蛋白测定

9、的临床意义意义 生理情况下，生理情况下，IgIg根据其分子量大小，通过根据其分子量大小，通过血脑屏障的难易度不同，血脑屏障的难易度不同，IgGIgG、IgAIgA、IgMIgM在在脑脊液中的浓度递减。病理脑脊液中的浓度递减。病理(bngl)(bngl)状态时，状态时，血脑屏障通透性增加，脑脊液组分发生改变。血脑屏障通透性增加，脑脊液组分发生改变。血脑屏障受损程度：白蛋白商值、血脑屏障受损程度：白蛋白商值、CSF-IgGCSF-IgG指数指数增高有临床意义：多发性硬化症、中枢神经系统增高有临床意义：多发性硬化症、中枢神经系统(xtng)(xtng)感染感染第十一页，共32页。第二节血液第二节血液

10、IgDIgD和和IgEIgE的测定及临床的测定及临床(ln(ln chun)chun)应用应用u正常人血液中正常人血液中IgDIgD含量很低（含量很低（0.2%0.2%），目），目前生物学功能尚不清楚前生物学功能尚不清楚uIgEIgE是正常人血清中含量最少的免疫球蛋是正常人血清中含量最少的免疫球蛋白，主要由黏膜下淋巴组织中的浆细胞白，主要由黏膜下淋巴组织中的浆细胞分泌，为亲细胞抗体，引起分泌，为亲细胞抗体，引起(ynq)I(ynq)I型型超敏反应；与机体抗寄生虫免疫也可能超敏反应；与机体抗寄生虫免疫也可能有关。有关。第十二页，共32页。一、IgD的测定(cdng)及临床意义u测定方法：放免、免

11、疫比浊、测定方法：放免、免疫比浊、ELISA(ELISA(常用常用)u临床意义：血液中含量波动范围大，各实临床意义：血液中含量波动范围大，各实验室最好验室最好(zu ho)(zu ho)使用固定的试剂盒，建使用固定的试剂盒，建立自己的参考范围立自己的参考范围第十三页，共32页。二、IgE的测定(cdng)及临床意义u测定测定(cdng)(cdng)方法：方法：u 总总IgEIgE测定测定(cdng)(cdng)：放射免疫分析法：放射免疫分析法u 化学发光免疫分析法化学发光免疫分析法(常用常用)u 免疫比浊法免疫比浊法u 酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法(常用常用)u 特异性特异性IgEIgE测定测

12、定(cdng)(cdng)：免疫斑点法：免疫斑点法u 酶联免疫吸附法酶联免疫吸附法u临床意义：临床意义：u 增高：变态反应性疾病、寄生虫感染、病毒感染、增高：变态反应性疾病、寄生虫感染、病毒感染、自身免疫性疾病。自身免疫性疾病。u 降低：意义不大降低：意义不大第十四页，共32页。第三节第三节 血清血清(xu(xu qng)IgGqng)IgG亚类测定及亚类测定及临床意义临床意义IgIg亚类：亚类：IgG1IgG1、IgG2IgG2、IgG3IgG3、IgG4IgG4，其含量依次下降，其含量依次下降测定方法：测定方法：单向单向(dn xin)(dn xin)免疫扩散法免疫扩散法 免疫比浊法免疫比

13、浊法（常用）（常用）放射免疫分析法放射免疫分析法 酶联免疫吸附法（常用）酶联免疫吸附法（常用）临床意义：临床意义：IgGIgG亚类可能和感染复发、免疫缺陷和自身免疫性疾病有亚类可能和感染复发、免疫缺陷和自身免疫性疾病有关，因而测定关，因而测定IgGIgG亚类对上述疾病有重要意义。即使当总亚类对上述疾病有重要意义。即使当总IgGIgG水平在正常范围内，水平在正常范围内，IgGIgG的亚类分配也可能发生紊乱的亚类分配也可能发生紊乱 第十五页，共32页。第四节第四节 M M蛋白蛋白(d(d nbnb i)i)测定及临测定及临床意义床意义 M M蛋白：蛋白：B B淋巴细胞或浆细胞单克隆异淋巴细胞或浆细

14、胞单克隆异常常(ychng)(ychng)增殖产生的一种在增殖产生的一种在氨基酸组成及顺序上十分均一氨基酸组成及顺序上十分均一的异常的异常(ychng)(ychng)单克隆免疫球单克隆免疫球蛋白蛋白 临床上多见于多发性骨髓瘤、临床上多见于多发性骨髓瘤、高丙种球蛋白血症、恶性淋巴高丙种球蛋白血症、恶性淋巴瘤、重链病、轻链病等瘤、重链病、轻链病等 第十六页，共32页。M M蛋白蛋白(d(d nbnb i)i)测定测定蛋白区带电泳：经典蛋白区带电泳：经典(jngdin)(jngdin)方法方法 计算蛋白含量和百分比计算蛋白含量和百分比免疫比浊法：免疫比浊法：免疫球蛋白定量免疫球蛋白定量 准确性高、快

15、速准确性高、快速免疫电泳：免疫电泳：M M蛋白分型蛋白分型免疫固定电泳：免疫固定电泳：M M蛋白分型及鉴定，分辨蛋白分型及鉴定，分辨 率高率高(最常用最常用)各方法各方法(fngf)(fngf)视具体情况合理选用视具体情况合理选用第十七页，共32页。u蛋白质区带电泳是血清蛋白的经典分析方法，血清蛋白质区带电泳是血清蛋白的经典分析方法，血清（或尿液）标本中不同性质的蛋白质由于其等电点，（或尿液）标本中不同性质的蛋白质由于其等电点，分子量和分子形状各不相同，其电泳速度就不同，分子量和分子形状各不相同，其电泳速度就不同，可明显分开形成可明显分开形成(xngchng)(xngchng)不同的区带，与正

16、常不同的区带，与正常的电泳图谱进行比较，很容易发现患者电泳图谱中的电泳图谱进行比较，很容易发现患者电泳图谱中不一样的狭窄而浓缩的集中带，即不一样的狭窄而浓缩的集中带，即M M区带。区带。u这是由于这是由于M M蛋白的化学结构高度均一，因而其电泳蛋白的化学结构高度均一，因而其电泳迁移率十分一致。如果将这些区带电泳图谱扫描，迁移率十分一致。如果将这些区带电泳图谱扫描，还可计算出异常蛋白的含量和百分比。这种还可计算出异常蛋白的含量和百分比。这种M M区带区带较多见于较多见于或或区，偶亦可见于区，偶亦可见于区。区。u该法方便，是筛选该法方便，是筛选M M蛋白的最基本方法。但是区带蛋白的最基本方法。但是

17、区带电泳不能判定免疫球蛋白的类型，最终还需用特异电泳不能判定免疫球蛋白的类型，最终还需用特异性抗体进行鉴定。性抗体进行鉴定。一、血清蛋白区带电泳(din yn)第十八页，共32页。gba2白蛋白a1:a1酸性糖蛋白,a1抗胰蛋白酶:结合珠蛋白,a2 巨球蛋白,a脂蛋白,铜蓝蛋白:转铁蛋白,血液结合素,C3补体,b脂蛋白:免疫球蛋白血清蛋白电泳血清蛋白电泳(din yn)第十九页，共32页。正常正常(zhngchng)的电泳图的电泳图谱谱第二十页，共32页。出现出现(chxin)(chxin)在在区域的单克隆免疫区域的单克隆免疫球蛋白球蛋白第二十一页，共32页。二、血清免疫二、血清免疫(miny

18、)球蛋白定量测定球蛋白定量测定u血清免疫球蛋白定量测定也可作为检测血清免疫球蛋白定量测定也可作为检测M蛋蛋白的初筛试验。免疫球蛋白定量测定较常用白的初筛试验。免疫球蛋白定量测定较常用的方法有单向扩散法与免疫浊度法，前者较的方法有单向扩散法与免疫浊度法，前者较为简便，后者更为准确迅速为简便，后者更为准确迅速 u免疫球蛋白定量检测，有助于丙种球蛋白病免疫球蛋白定量检测，有助于丙种球蛋白病的诊断，并对丙种球蛋白病的良、恶性鉴别的诊断，并对丙种球蛋白病的良、恶性鉴别有帮助。恶性单克隆丙种球蛋白病常呈现某有帮助。恶性单克隆丙种球蛋白病常呈现某一类丙种球蛋白的显著一类丙种球蛋白的显著(xinzh)增高，大

19、多增高，大多在在30g/l以上；在良性丙种球蛋白病的血清以上；在良性丙种球蛋白病的血清标本中，标本中，M蛋白多在蛋白多在20g/l以下以下 第二十三页，共32页。三、免疫电泳（常规三、免疫电泳（常规(chnggu)方法）方法）u疑为丙种球蛋白疑为丙种球蛋白(dnbi)(dnbi)病的患者，经血清蛋白病的患者，经血清蛋白(dnbi)(dnbi)区带电区带电泳和免疫球蛋白泳和免疫球蛋白(dnbi)(dnbi)测定，已基本证实是否有免疫球蛋白测定，已基本证实是否有免疫球蛋白(dnbi)(dnbi)的异常增高和其含量的多少，但是增高的的异常增高和其含量的多少，但是增高的M M蛋白蛋白(dnbi)(dn

20、bi)究竟是哪一类免疫球蛋白究竟是哪一类免疫球蛋白(dnbi)(dnbi)，仍需进一步分类鉴，仍需进一步分类鉴定，常应用各种类型的特异性抗血清，做不同形式的电泳或免疫定，常应用各种类型的特异性抗血清，做不同形式的电泳或免疫扩散。扩散。u免疫电泳是将区带电泳和免疫扩散结合起来的一种免疫学分析法。免疫电泳是将区带电泳和免疫扩散结合起来的一种免疫学分析法。u一般多用抗一般多用抗IgGIgG、IgMIgM、IgAIgA、和和轻链等轻链等5 5种抗血清进行实验，种抗血清进行实验，用抗正常人血清作为对照。用抗正常人血清作为对照。M M蛋白蛋白(dnbi)(dnbi)与相应抗体发生反应与相应抗体发生反应所出

21、现的沉淀弧较为特殊，较普通沉淀弧宽，凸出呈弓形，不难所出现的沉淀弧较为特殊，较普通沉淀弧宽，凸出呈弓形，不难辨认辨认 第二十四页，共32页。+-免疫电泳示意图免疫电泳示意图第二十五页，共32页。四、免疫固定电泳四、免疫固定电泳(din yn)（最常（最常用）用）u区带电泳区带电泳+沉淀反应：将待测血清或其他标本在琼脂平板沉淀反应：将待测血清或其他标本在琼脂平板上作区带电泳，分离后于其上覆盖含抗上作区带电泳，分离后于其上覆盖含抗或或轻链或各类轻链或各类重链的抗血清滤纸，当抗体重链的抗血清滤纸，当抗体(kngt)(kngt)与某区带中的单克隆与某区带中的单克隆免疫球蛋白结合后，便形成复合物而沉淀下

22、来，再通过漂免疫球蛋白结合后，便形成复合物而沉淀下来，再通过漂洗与染色，呈现浓而狭窄的着色区带，即可判断单克隆丙洗与染色，呈现浓而狭窄的着色区带，即可判断单克隆丙种球蛋白的轻链和重链型别种球蛋白的轻链和重链型别u结合蛋白质电泳的高分辨率和抗原抗体结合蛋白质电泳的高分辨率和抗原抗体(kngt)(kngt)反应的特反应的特异性异性u测定时间短测定时间短(1.5-2h)(1.5-2h)、敏感性高（、敏感性高（0.5-1.5g/l0.5-1.5g/l）、结果直）、结果直观易于分析判断观易于分析判断 第二十六页，共32页。左图为左图为IgG IgG 型型,中图为中图为IgG IgG 型，右为正常型，右为

23、正常(zhngchng)(zhngchng)SP G AM SP G AM SPG AM 免疫固定电泳免疫固定电泳(din(din yn)yn)示意图示意图第二十七页，共32页。五、本五、本-周蛋白周蛋白(dnbi)(dnbi)的检测的检测u本周蛋白即尿中游离的免疫球蛋白轻链，其检测对轻链病的诊断本周蛋白即尿中游离的免疫球蛋白轻链，其检测对轻链病的诊断是必不可少的项目，并对多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白病、重是必不可少的项目，并对多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白病、重链病等疾病的诊断、鉴别和预后判断均有一定帮助链病等疾病的诊断、鉴别和预后判断均有一定帮助 u加热沉淀法加热沉淀法:本周蛋白在本周蛋白在

24、pH5.0的条件下，加热至的条件下，加热至5060时时出现沉淀，继续加热至出现沉淀，继续加热至90后又重新溶解。根据这种理化性质，后又重新溶解。根据这种理化性质，又将其称为凝溶蛋白，故可根据这一特点，用化学方法进行检测。又将其称为凝溶蛋白，故可根据这一特点，用化学方法进行检测。这种方法简便易行，但敏感度较低，也不能确定轻链的型别这种方法简便易行，但敏感度较低，也不能确定轻链的型别 u免疫电泳分析法：尿标本用抗免疫电泳分析法：尿标本用抗和和型轻链抗血清进行免疫电泳分型轻链抗血清进行免疫电泳分析，游离轻链往往与其中析，游离轻链往往与其中(qzhng)一型的抗血清起反应，在一型的抗血清起反应，在-区

25、附近形成一条致密的弓形沉淀弧。区附近形成一条致密的弓形沉淀弧。第二十八页，共32页。六、六、-Ig-Ig和和-Ig-Ig定量定量(dngling)(dngling)测测定定u样本：尿液、血液样本：尿液、血液u 方法：单向免疫扩散法、免疫比浊法（常用，准确、方法：单向免疫扩散法、免疫比浊法（常用，准确、快速）快速）u应用应用(yngyng)(yngyng)：M M蛋白血症的分型及鉴定蛋白血症的分型及鉴定u多数实验室确立的多数实验室确立的/比率正常范围在比率正常范围在1.2-2.41.2-2.4，通过，通过/比率测定有助于判断疾病类型和监测治疗效果比率测定有助于判断疾病类型和监测治疗效果第二十九页

26、，共32页。u冷球蛋白是血清中的一种特殊蛋白质，在冷球蛋白是血清中的一种特殊蛋白质，在44时自时自发沉淀，在发沉淀，在3737时又可溶解时又可溶解 ，常利用这种可逆性，常利用这种可逆性冷沉淀的特性对其进行测定。冷沉淀的特性对其进行测定。u取患者外周血，分离出血清置取患者外周血，分离出血清置44冰箱中，一般在冰箱中，一般在242472h72h出现沉淀，若出现沉淀，若1 1周仍不出现沉淀者方可判周仍不出现沉淀者方可判断为阴性断为阴性(ynxng)(ynxng)。如形成沉淀，再置。如形成沉淀，再置3737温育温育使其复溶，也可将冷沉淀物离心洗涤后做定性与使其复溶，也可将冷沉淀物离心洗涤后做定性与定量

27、分析。定量分析。七、七、冷球蛋白的检测冷球蛋白的检测(jin c)(jin c)第三十页，共32页。冷球蛋白的类型及临床意义冷球蛋白的类型及临床意义 I I型：为单克隆冷球蛋白型，占型：为单克隆冷球蛋白型，占25%25%40%;40%;多见于免疫增生性疾病多见于免疫增生性疾病如如MMMM 型：单克隆和多克隆混合型冷型：单克隆和多克隆混合型冷球蛋白，占球蛋白，占15%15%25%;25%;多见于自身多见于自身(zshn)(zshn)免疫性疾病（免疫性疾病（SLESLE、类风、类风湿、湿、SSSS）型：多克隆混合型冷球蛋白，型：多克隆混合型冷球蛋白，约占约占50%;50%;多见于传单以及感染性多见于传单以及感染性疾病疾病 第三十一页，共32页。谢谢 谢！谢！第三十二页，共32页。