《平面色谱技术》PPT课件.ppt

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1、5.平板色谱一般分离过程 将将试试样样点点在在色色谱谱滤滤纸纸或或层层析析板板的的一一端端，并并将将该该端端浸浸在在作作为为流流动动相相的的溶溶剂剂（常常称称之之为为展展开开剂剂）中中，随随着着溶溶剂剂向向上上的的移移动动，经经过过试试样样点点时时，带动试样向上运动。带动试样向上运动。纸纸层层析析和和薄薄层层层层析析流流动动相的移动是依靠毛细作用。相的移动是依靠毛细作用。比移值比移值比移值比移值（R R R R )：溶质移动距离与流动相移动距离之比：溶质移动距离与流动相移动距离之比：溶质移动距离与流动相移动距离之比：溶质移动距离与流动相移动距离之比1 1）纸色谱）纸色谱载体：滤纸（纤维素），可

2、吸附载体：滤纸（纤维素），可吸附22%水，其中水，其中 6%与纤维素上的羟基结合（通过氢键和分子与纤维素上的羟基结合（通过氢键和分子 之间的偶极作用）形成固定相之间的偶极作用）形成固定相纸纸纸纸22%H22%H2 2OO6%H2O 固定相固定相流动相流动相S S S SS S S SS S S SS S S SS S S SS S S SS S S S纸色谱属于分配色谱纸色谱属于分配色谱纸色谱属于分配色谱纸色谱属于分配色谱 -正相和反相分配纸色谱正相和反相分配纸色谱正相和反相分配纸色谱正相和反相分配纸色谱2)2)薄层色谱薄层色谱 薄层薄层薄层薄层 分离机制分离机制分离机制分离机制 主要应用范围

3、主要应用范围主要应用范围主要应用范围氧化铝板氧化铝板氧化铝板氧化铝板 吸附吸附吸附吸附 脂肪和芳香化合物、生物脂肪和芳香化合物、生物脂肪和芳香化合物、生物脂肪和芳香化合物、生物 硅胶板硅胶板硅胶板硅胶板 吸附吸附吸附吸附 碱、甾类、萜类碱、甾类、萜类碱、甾类、萜类碱、甾类、萜类改性硅胶改性硅胶改性硅胶改性硅胶 C C2 2,C,C8 8,C,C1818RP RP 正相、反相正相、反相正相、反相正相、反相 非极性物质、极性物质非极性物质、极性物质非极性物质、极性物质非极性物质、极性物质CNCN板板板板 正相、反相正相、反相正相、反相正相、反相 农药、酚类、甾类农药、酚类、甾类农药、酚类、甾类农药

4、、酚类、甾类NHNH2 2板板板板 正相、反相、正相、反相、正相、反相、正相、反相、核苷酸、农药、酚类、甾类、核苷酸、农药、酚类、甾类、核苷酸、农药、酚类、甾类、核苷酸、农药、酚类、甾类、阴离子交换阴离子交换阴离子交换阴离子交换 维生素类、嘌呤衍生物维生素类、嘌呤衍生物维生素类、嘌呤衍生物维生素类、嘌呤衍生物纤维素纤维素纤维素纤维素 分配分配分配分配 氨基酸、梭酸氨基酸、梭酸氨基酸、梭酸氨基酸、梭酸乙酰纤维素乙酰纤维素乙酰纤维素乙酰纤维素 正相、反相正相、反相正相、反相正相、反相 蒽醌类、抗氧化剂蒽醌类、抗氧化剂蒽醌类、抗氧化剂蒽醌类、抗氧化剂离子交换剂离子交换剂离子交换剂离子交换剂 阴、阳离

5、子交换阴、阳离子交换阴、阳离子交换阴、阳离子交换 氨基酸、梭酸、氨基糖、肽氨基酸、梭酸、氨基糖、肽氨基酸、梭酸、氨基糖、肽氨基酸、梭酸、氨基糖、肽聚酰胺聚酰胺聚酰胺聚酰胺 分配分配分配分配 黄酮类、酚类黄酮类、酚类黄酮类、酚类黄酮类、酚类葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶葡聚糖凝胶 凝胶过滤凝胶过滤凝胶过滤凝胶过滤 蛋白质、核苷酸蛋白质、核苷酸蛋白质、核苷酸蛋白质、核苷酸2.薄层色谱操作技术1)薄层板(1)(1)(1)(1)载体：载体：载体：载体：硅胶：表面带有硅醇基，经硅胶：表面带有硅醇基，经硅胶：表面带有硅醇基，经硅胶：表面带有硅醇基，经150150活化脱水活化脱水活化脱水活化脱水 后，后，后

6、，后，4646个硅醇基个硅醇基个硅醇基个硅醇基/nm/nm2 2(2)(2)(2)(2)薄层参数：薄层参数：薄层参数：薄层参数：厚度：厚度：厚度：厚度：普通薄层普通薄层普通薄层普通薄层 高效薄层高效薄层高效薄层高效薄层 制备薄层制备薄层制备薄层制备薄层 0.25mm 0.2mm 0.52mm 0.25mm 0.2mm 0.52mm 活度：吸附剂的吸附能力可用活度表示活度：吸附剂的吸附能力可用活度表示活度：吸附剂的吸附能力可用活度表示活度：吸附剂的吸附能力可用活度表示,它随含水量的增它随含水量的增它随含水量的增它随含水量的增加而减弱加而减弱加而减弱加而减弱活度级别活度级别活度级别活度级别含水量含

7、水量含水量含水量吸附力吸附力吸附力吸附力硅胶硅胶硅胶硅胶氧化铝氧化铝氧化铝氧化铝增增增增强强强强硅胶、氧化铝活度、含水量与吸附力的关系硅胶、氧化铝活度、含水量与吸附力的关系硅胶、氧化铝活度、含水量与吸附力的关系硅胶、氧化铝活度、含水量与吸附力的关系不同温度下硅胶表面硅醇基吸附水分子层的损失情况不同温度下硅胶表面硅醇基吸附水分子层的损失情况不同温度下硅胶表面硅醇基吸附水分子层的损失情况不同温度下硅胶表面硅醇基吸附水分子层的损失情况(3)(3)粘合剂与添加剂粘合剂与添加剂 粘合剂粘合剂a.a.煅石膏煅石膏（CaSOCaSO4 42H2H2 2O)O)：120140120140烘烤烘烤24h,24h

8、,过过200200目筛，密闭备用。目筛，密闭备用。b.b.羧甲基纤维素钠（羧甲基纤维素钠（-a)a)：0.21.0%0.21.0%添加剂添加剂a.a.荧光指示剂荧光指示剂 ZnSOZnSO4 4:Mn 254nm:Mn 254nm ZnSZnSCdS:Ag 366nmCdS:Ag 366nmb.b.酸、碱或缓冲液酸、碱或缓冲液c.c.硝酸银溶液硝酸银溶液：饱合化合物：饱合化合物 炔烃炔烃 反式烯烃反式烯烃 顺式烯烃顺式烯烃(4)(4)薄层的制备方法薄层的制备方法薄层的制备方法薄层的制备方法 手工制板手工制板手工制板手工制板 a.a.软板软板软板软板 b.b.硬板硬板硬板硬板(含粘合剂含粘合剂含

9、粘合剂含粘合剂)匀浆匀浆匀浆匀浆涂布涂布涂布涂布凉干凉干凉干凉干活化活化活化活化预制板：玻璃板、塑料板、铝箔板预制板：玻璃板、塑料板、铝箔板预制板：玻璃板、塑料板、铝箔板预制板：玻璃板、塑料板、铝箔板 a.a.a.a.普通薄层普通薄层普通薄层普通薄层预制板预制板预制板预制板-硅胶、氧化铝、纤维素、硅硅胶、氧化铝、纤维素、硅硅胶、氧化铝、纤维素、硅硅胶、氧化铝、纤维素、硅藻土、聚酰胺、离子交换纤维素、烷基键合硅胶反相藻土、聚酰胺、离子交换纤维素、烷基键合硅胶反相藻土、聚酰胺、离子交换纤维素、烷基键合硅胶反相藻土、聚酰胺、离子交换纤维素、烷基键合硅胶反相板板板板 b.b.b.b.高效高效高效高效薄

10、层预制板薄层预制板薄层预制板薄层预制板-氨基、氰基键合硅胶板、手氨基、氰基键合硅胶板、手氨基、氰基键合硅胶板、手氨基、氰基键合硅胶板、手性预制板、聚酰胺、混合预制板（如：氧化铝性预制板、聚酰胺、混合预制板（如：氧化铝性预制板、聚酰胺、混合预制板（如：氧化铝性预制板、聚酰胺、混合预制板（如：氧化铝-纤维纤维纤维纤维素、纤维素素、纤维素素、纤维素素、纤维素-硅胶、硅藻土硅胶、硅藻土硅胶、硅藻土硅胶、硅藻土-硅胶等）硅胶等）硅胶等）硅胶等）(5)(5)(5)(5)薄层板的活化薄层板的活化薄层板的活化薄层板的活化 吸附剂的表面及其孔隙的表面存在许多活性点，活性吸附剂的表面及其孔隙的表面存在许多活性点，

11、活性吸附剂的表面及其孔隙的表面存在许多活性点，活性吸附剂的表面及其孔隙的表面存在许多活性点，活性点的强度和数目较大时，吸附剂的活度就高，吸附剂的点的强度和数目较大时，吸附剂的活度就高，吸附剂的点的强度和数目较大时，吸附剂的活度就高，吸附剂的点的强度和数目较大时，吸附剂的活度就高，吸附剂的保留能力也较高，被保留物质保留能力也较高，被保留物质保留能力也较高，被保留物质保留能力也较高，被保留物质R R 值就小。值就小。值就小。值就小。活化：活化：活化：活化：105120105120105120105120干燥干燥干燥干燥 0.51h 0.51h 0.51h 0.51h 级级级级 活度的标定：活度的标

12、定：活度的标定：活度的标定：a.a.a.a.氧化铝薄层活度的标定氧化铝薄层活度的标定氧化铝薄层活度的标定氧化铝薄层活度的标定 染料溶液的配制：称取染料溶液的配制：称取染料溶液的配制：称取染料溶液的配制：称取偶氮苯偶氮苯偶氮苯偶氮苯30mg30mg30mg30mg和和和和对对对对-甲氧基偶甲氧基偶甲氧基偶甲氧基偶氮苯、苏丹黄、苏丹红、对氮苯、苏丹黄、苏丹红、对氮苯、苏丹黄、苏丹红、对氮苯、苏丹黄、苏丹红、对-氨基偶氮苯各氨基偶氮苯各氨基偶氮苯各氨基偶氮苯各20mg20mg20mg20mg溶于四溶于四溶于四溶于四氯化碳氯化碳氯化碳氯化碳50ml50ml50ml50ml中，摇匀备用。中，摇匀备用。中

13、，摇匀备用。中，摇匀备用。标定方法：取上述溶液标定方法：取上述溶液标定方法：取上述溶液标定方法：取上述溶液20l20l20l20l点于待测板上，用四点于待测板上，用四点于待测板上，用四点于待测板上，用四氯化碳展开，测量五种染料的氯化碳展开，测量五种染料的氯化碳展开，测量五种染料的氯化碳展开，测量五种染料的R R ，由下表中确定薄板，由下表中确定薄板，由下表中确定薄板，由下表中确定薄板的花度级别。的花度级别。的花度级别。的花度级别。染料染料染料染料活度级别（活度级别（活度级别（活度级别（R R 值）值）值）值）偶氮苯偶氮苯偶氮苯偶氮苯0.590.590.740.740.850.850.950.9

14、5对对对对-甲氧基偶氮苯甲氧基偶氮苯甲氧基偶氮苯甲氧基偶氮苯0.160.160.490.490.690.690.890.89苏丹黄苏丹黄苏丹黄苏丹黄0.010.010.250.250.570.570.780.78苏丹红苏丹红苏丹红苏丹红0.000.000.100.100.330.330.560.56对对对对-氨基偶氮苯氨基偶氮苯氨基偶氮苯氨基偶氮苯0.000.000.030.030.080.080.190.19氧化铝薄层的活度级别氧化铝薄层的活度级别氧化铝薄层的活度级别氧化铝薄层的活度级别b.b.薄层活度的标定薄层活度的标定薄层活度的标定薄层活度的标定 染料溶液的配制：称取对染料溶液的配制：称

15、取对染料溶液的配制：称取对染料溶液的配制：称取对-二甲氨基偶氮苯、靛酚蓝、二甲氨基偶氮苯、靛酚蓝、二甲氨基偶氮苯、靛酚蓝、二甲氨基偶氮苯、靛酚蓝、苏丹红（苏丹苏丹红（苏丹苏丹红（苏丹苏丹红（苏丹）各）各）各）各20mg20mg溶于溶于溶于溶于1ml1ml氯仿中，摇匀备用。氯仿中，摇匀备用。氯仿中，摇匀备用。氯仿中，摇匀备用。标定方法：取上述溶液点于待测板上，用正己烷标定方法：取上述溶液点于待测板上，用正己烷标定方法：取上述溶液点于待测板上，用正己烷标定方法：取上述溶液点于待测板上，用正己烷-乙乙乙乙酸乙酯（酸乙酯（酸乙酯（酸乙酯（9 9：1 1）展开，三种染料能分开，对）展开，三种染料能分开，

16、对）展开，三种染料能分开，对）展开，三种染料能分开，对-二甲氨基二甲氨基二甲氨基二甲氨基偶氮苯在前缘，靛酚蓝在其次、苏丹红走在最后，这偶氮苯在前缘，靛酚蓝在其次、苏丹红走在最后，这偶氮苯在前缘，靛酚蓝在其次、苏丹红走在最后，这偶氮苯在前缘，靛酚蓝在其次、苏丹红走在最后，这样的硅胶活度与前述样的硅胶活度与前述样的硅胶活度与前述样的硅胶活度与前述级氧化铝的活度相当。级氧化铝的活度相当。级氧化铝的活度相当。级氧化铝的活度相当。（6 6 6 6）薄层板的预处理）薄层板的预处理）薄层板的预处理）薄层板的预处理 常用方法：常用方法：常用方法：常用方法：用氯仿用氯仿用氯仿用氯仿-甲醇甲醇甲醇甲醇(1:1)(

17、1:1)(1:1)(1:1)或所用展开剂先展或所用展开剂先展或所用展开剂先展或所用展开剂先展开一次空白薄层板（展距要大一些），在开一次空白薄层板（展距要大一些），在开一次空白薄层板（展距要大一些），在开一次空白薄层板（展距要大一些），在110110110110干燥干燥干燥干燥0.510.51h h h h，干燥器中保存备用。，干燥器中保存备用。，干燥器中保存备用。，干燥器中保存备用。除有特殊规定外，预制板在使用时不需任何预处除有特殊规定外，预制板在使用时不需任何预处除有特殊规定外，预制板在使用时不需任何预处除有特殊规定外，预制板在使用时不需任何预处理。理。理。理。（7 7 7 7）烧结）烧结）

18、烧结）烧结薄层板和棒状薄层薄层板和棒状薄层薄层板和棒状薄层薄层板和棒状薄层 机械强度高、热稳定性好、耐酸并可反复使用机械强度高、热稳定性好、耐酸并可反复使用机械强度高、热稳定性好、耐酸并可反复使用机械强度高、热稳定性好、耐酸并可反复使用2 2）点样：点样：（1 1 1 1）样品溶液的制备样品溶液的制备样品溶液的制备样品溶液的制备 纯品的溶解纯品的溶解纯品的溶解纯品的溶解 样品的提取与净化样品的提取与净化样品的提取与净化样品的提取与净化 a.a.a.a.溶剂提取法溶剂提取法溶剂提取法溶剂提取法 b.b.b.b.液液萃取法液液萃取法液液萃取法液液萃取法 c.c.c.c.液固萃取法液固萃取法液固萃取

19、法液固萃取法-亲脂型和亲水型固体萃取剂亲脂型和亲水型固体萃取剂亲脂型和亲水型固体萃取剂亲脂型和亲水型固体萃取剂溶剂的选择溶剂的选择溶剂的选择溶剂的选择 a.a.a.a.溶剂溶剂溶剂溶剂对溶质的溶解度相对较小，否则会出现点对溶质的溶解度相对较小，否则会出现点对溶质的溶解度相对较小，否则会出现点对溶质的溶解度相对较小，否则会出现点样环形色谱效应；样环形色谱效应；样环形色谱效应；样环形色谱效应；b.b.b.b.溶剂的溶剂的溶剂的溶剂的粘度不宜太高，以便于点样；粘度不宜太高，以便于点样；粘度不宜太高，以便于点样；粘度不宜太高，以便于点样；c.c.c.c.溶剂的沸点要适中。溶剂的沸点要适中。溶剂的沸点要

20、适中。溶剂的沸点要适中。(2)(2)(2)(2)点样点样点样点样 样品浓度样品浓度样品浓度样品浓度 0.011.00%0.011.00%点样体积点样体积点样体积点样体积 经典薄层经典薄层经典薄层经典薄层 15 15 l l 高效薄层高效薄层高效薄层高效薄层 0.10.5 0.10.5 l l 点样过多会造成原点点样过多会造成原点点样过多会造成原点点样过多会造成原点“超载超载超载超载”，展开剂产生，展开剂产生，展开剂产生，展开剂产生“绕行绕行绕行绕行”现象使斑点拖尾或重叠，严重影响分离。现象使斑点拖尾或重叠，严重影响分离。现象使斑点拖尾或重叠，严重影响分离。现象使斑点拖尾或重叠，严重影响分离。点

21、样直径点样直径点样直径点样直径 经典薄层经典薄层经典薄层经典薄层 5mm(5mm(一般一般一般一般3mm)3mm)高效薄层高效薄层高效薄层高效薄层 12mm12mm 点样间距点样间距点样间距点样间距 经典薄层经典薄层经典薄层经典薄层 1 1 1 12cm 2cm 高效薄层高效薄层高效薄层高效薄层 点样方法点样方法点样方法点样方法 a.a.a.a.点状点样点状点样点状点样点状点样 b.b.b.b.带状点样带状点样带状点样带状点样 c.c.c.c.自动点样自动点样自动点样自动点样 d.d.d.d.接触点样接触点样接触点样接触点样接触点样示意图接触点样示意图接触点样示意图接触点样示意图3 3）展开：

22、展开：（1 1）展开方式展开方式 线性展开线性展开线性展开线性展开 a.a.a.a.上行展开上行展开上行展开上行展开 b.b.b.b.下行展开下行展开下行展开下行展开 c.c.c.c.双向展开双向展开双向展开双向展开 d.d.d.d.近水平展开近水平展开近水平展开近水平展开 环型展开环型展开环型展开环型展开 展距短、展速快、节约展开剂、分离效率高，适展距短、展速快、节约展开剂、分离效率高，适展距短、展速快、节约展开剂、分离效率高，适展距短、展速快、节约展开剂、分离效率高，适用于用于用于用于R R 较小的组分的分离。较小的组分的分离。较小的组分的分离。较小的组分的分离。(R R R R c c

23、c c)2 2 2 2=R R R R 反圆心式展开反圆心式展开反圆心式展开反圆心式展开 展速快、可提高展速快、可提高展速快、可提高展速快、可提高R R 值较大组分的检测灵敏度和定值较大组分的检测灵敏度和定值较大组分的检测灵敏度和定值较大组分的检测灵敏度和定量准确性。量准确性。量准确性。量准确性。多次展开多次展开多次展开多次展开 a.a.单向多次展开单向多次展开单向多次展开单向多次展开 n nR R =1-(1-=1-(1-R R )n n 一般二次展开即可一般二次展开即可一般二次展开即可一般二次展开即可,能得到最佳的分离能得到最佳的分离能得到最佳的分离能得到最佳的分离,但还不能但还不能但还不

24、能但还不能使斑点十分浓集。使斑点十分浓集。使斑点十分浓集。使斑点十分浓集。b.b.增量多次展开增量多次展开增量多次展开增量多次展开 增量多次展开能提供比一般薄层色谱好得多的分增量多次展开能提供比一般薄层色谱好得多的分增量多次展开能提供比一般薄层色谱好得多的分增量多次展开能提供比一般薄层色谱好得多的分离度，在短时间内得到较多次展开，有利于斑点的浓离度，在短时间内得到较多次展开，有利于斑点的浓离度，在短时间内得到较多次展开，有利于斑点的浓离度，在短时间内得到较多次展开，有利于斑点的浓集及集及集及集及R R 值较小的组分的分离。值较小的组分的分离。值较小的组分的分离。值较小的组分的分离。c.c.c.

25、c.阶式展开（分级展开）阶式展开（分级展开）阶式展开（分级展开）阶式展开（分级展开）使用两种或两种以上极性不同的展开剂分别展开使用两种或两种以上极性不同的展开剂分别展开使用两种或两种以上极性不同的展开剂分别展开使用两种或两种以上极性不同的展开剂分别展开几次，可以将极性相差很大的组分在一块薄层板上分几次，可以将极性相差很大的组分在一块薄层板上分几次，可以将极性相差很大的组分在一块薄层板上分几次，可以将极性相差很大的组分在一块薄层板上分离。离。离。离。用乙醚用乙醚用乙醚用乙醚-环己烷环己烷环己烷环己烷-甲醇甲醇甲醇甲醇（5 5：3 3：）、乙醚乙醚乙醚乙醚-环己烷环己烷环己烷环己烷-甲醇甲醇甲醇甲

26、醇（5 5：3 3：）、甲苯甲苯甲苯甲苯-氯仿氯仿氯仿氯仿-甲醇甲醇甲醇甲醇-二乙胺二乙胺二乙胺二乙胺（7 7：2 2：1 1：）展开三次，在一块薄层板上实现了展开三次，在一块薄层板上实现了展开三次，在一块薄层板上实现了展开三次，在一块薄层板上实现了1111种种种种异喹啉生异喹啉生异喹啉生异喹啉生物碱的分离。物碱的分离。物碱的分离。物碱的分离。在常规色谱中，仅在展开时出现一次斑点浓集。如在常规色谱中，仅在展开时出现一次斑点浓集。如在常规色谱中，仅在展开时出现一次斑点浓集。如在常规色谱中，仅在展开时出现一次斑点浓集。如重复展开重复展开重复展开重复展开n n n n次，则最后斑点宽度降低到次，则最

27、后斑点宽度降低到次，则最后斑点宽度降低到次，则最后斑点宽度降低到:(1-:(1-R R )n n 起始宽起始宽起始宽起始宽度，但实际上没有度，但实际上没有度，但实际上没有度，但实际上没有(1-(1-R R )n n 那么明显，主要是展开时又那么明显，主要是展开时又那么明显，主要是展开时又那么明显，主要是展开时又扩散增宽，所以扩散增宽，所以扩散增宽，所以扩散增宽，所以多次展开的优点不是在斑点的宽度上，多次展开的优点不是在斑点的宽度上，多次展开的优点不是在斑点的宽度上，多次展开的优点不是在斑点的宽度上，而是增加相邻斑点的距离，并经过一个最大值后再随着而是增加相邻斑点的距离，并经过一个最大值后再随着

28、而是增加相邻斑点的距离，并经过一个最大值后再随着而是增加相邻斑点的距离，并经过一个最大值后再随着继续展开而降低。继续展开而降低。继续展开而降低。继续展开而降低。对对对对R R 值低的斑点这值低的斑点这值低的斑点这值低的斑点这种浓集更有效，这意种浓集更有效，这意种浓集更有效，这意种浓集更有效，这意味着对极性较大组分味着对极性较大组分味着对极性较大组分味着对极性较大组分的分离效率及灵敏度的分离效率及灵敏度的分离效率及灵敏度的分离效率及灵敏度的提高。的提高。的提高。的提高。连续展开连续展开连续展开连续展开 不增加薄层板长度不增加薄层板长度不增加薄层板长度不增加薄层板长度而使展距加长，使而使展距加长，

29、使而使展距加长，使而使展距加长，使R R 值值值值较小的组分移动较大的较小的组分移动较大的较小的组分移动较大的较小的组分移动较大的距离从而得到较好的分距离从而得到较好的分距离从而得到较好的分距离从而得到较好的分离。离。离。离。短床展开室短床展开室短床展开室短床展开室 连续展开示意图连续展开示意图连续展开示意图连续展开示意图b.b.蒸发展开蒸发展开蒸发展开蒸发展开 当展开剂前沿推进到某当展开剂前沿推进到某当展开剂前沿推进到某当展开剂前沿推进到某一位置时，流入薄层的展开一位置时，流入薄层的展开一位置时，流入薄层的展开一位置时，流入薄层的展开剂量恰好全部蒸发掉，此时剂量恰好全部蒸发掉，此时剂量恰好全

30、部蒸发掉，此时剂量恰好全部蒸发掉，此时处于稳定态，溶剂必然成负处于稳定态，溶剂必然成负处于稳定态，溶剂必然成负处于稳定态，溶剂必然成负速度梯度，因此蒸发展开的速度梯度，因此蒸发展开的速度梯度，因此蒸发展开的速度梯度，因此蒸发展开的分离效果比普通展开方式为分离效果比普通展开方式为分离效果比普通展开方式为分离效果比普通展开方式为高，有利于高，有利于高，有利于高，有利于R R 值小于的组分值小于的组分值小于的组分值小于的组分的分离。的分离。的分离。的分离。蒸发展开示意图蒸发展开示意图蒸发展开示意图蒸发展开示意图(2)(2)影响薄层影响薄层展开的因素展开的因素 相对湿度相对湿度相对湿度相对湿度 a.a

31、.a.a.预活化的薄层板可迅速吸附空气中的水蒸气，数分预活化的薄层板可迅速吸附空气中的水蒸气，数分预活化的薄层板可迅速吸附空气中的水蒸气，数分预活化的薄层板可迅速吸附空气中的水蒸气，数分钟内可达平衡；钟内可达平衡；钟内可达平衡；钟内可达平衡；b.b.b.b.溶质和溶剂极性的增加，展开时最佳相对湿度的范溶质和溶剂极性的增加，展开时最佳相对湿度的范溶质和溶剂极性的增加，展开时最佳相对湿度的范溶质和溶剂极性的增加，展开时最佳相对湿度的范围也相应增大。围也相应增大。围也相应增大。围也相应增大。c.c.c.c.控制相对湿度的方法控制相对湿度的方法控制相对湿度的方法控制相对湿度的方法:硫酸溶液法、无机盐溶

32、液法硫酸溶液法、无机盐溶液法硫酸溶液法、无机盐溶液法硫酸溶液法、无机盐溶液法 溶剂蒸气的影响溶剂蒸气的影响溶剂蒸气的影响溶剂蒸气的影响 a.a.a.a.展开室饱和展开室饱和展开室饱和展开室饱和 b.b.b.b.预吸附预吸附预吸附预吸附 c.c.c.c.吸附饱和吸附饱和吸附饱和吸附饱和 d.d.d.d.毛细管饱毛细管饱毛细管饱毛细管饱和和和和温度的影响温度的影响温度的影响温度的影响 温度对分配色谱影响较大，对吸附色谱影温度对分配色谱影响较大，对吸附色谱影温度对分配色谱影响较大，对吸附色谱影温度对分配色谱影响较大，对吸附色谱影响较小。响较小。响较小。响较小。展距的影响展距的影响展距的影响展距的影响

33、 展距增加一倍，分离度为原来的展距增加一倍，分离度为原来的展距增加一倍，分离度为原来的展距增加一倍，分离度为原来的2 2 2 21/21/21/21/2倍。倍。倍。倍。（3）展开剂的选择）展开剂的选择分子间的作用分子间的作用分子间的作用分子间的作用 a.a.a.a.色散力色散力色散力色散力 b.b.b.b.偶极作用偶极作用偶极作用偶极作用 c.c.c.c.氢键作用氢键作用氢键作用氢键作用 d.d.d.d.介电作用介电作用介电作用介电作用色散力很弱色散力很弱色散力很弱色散力很弱,无选择性无选择性无选择性无选择性,对层析无关重要对层析无关重要对层析无关重要对层析无关重要对非电解质溶剂主要研究它们的

34、偶极作用和对非电解质溶剂主要研究它们的偶极作用和对非电解质溶剂主要研究它们的偶极作用和对非电解质溶剂主要研究它们的偶极作用和氢键作用氢键作用氢键作用氢键作用介电作用只对溶解离子化合物的样品溶剂有介电作用只对溶解离子化合物的样品溶剂有介电作用只对溶解离子化合物的样品溶剂有介电作用只对溶解离子化合物的样品溶剂有重要意义重要意义重要意义重要意义展开剂的极性和强度展开剂的极性和强度展开剂的极性和强度展开剂的极性和强度 a.a.a.a.极性参数极性参数极性参数极性参数PP 混合溶剂的混合溶剂的混合溶剂的混合溶剂的PP值值值值 P=P=A AP PA A+B BP PB B P PA A、P PB B分别

35、代表溶剂分别代表溶剂分别代表溶剂分别代表溶剂A A A A和和和和B B B B的极性参数，的极性参数，的极性参数，的极性参数，A A和和和和B B分别代表它们在混合溶剂中的体积分数。分别代表它们在混合溶剂中的体积分数。分别代表它们在混合溶剂中的体积分数。分别代表它们在混合溶剂中的体积分数。A/BA/B两种溶剂组成的展开剂，当用溶剂两种溶剂组成的展开剂，当用溶剂两种溶剂组成的展开剂，当用溶剂两种溶剂组成的展开剂，当用溶剂C C去替换溶去替换溶去替换溶去替换溶剂剂剂剂B B并保持展开剂极性不变，则并保持展开剂极性不变，则并保持展开剂极性不变，则并保持展开剂极性不变，则C C可按下式计算：可按下式

36、计算：可按下式计算：可按下式计算：C C=B B（P PB B/P/PA A）展开剂强度越强展开剂强度越强展开剂强度越强展开剂强度越强,样品组分样品组分样品组分样品组分k k k k值越小，值越小，值越小，值越小，R R R R 值越大值越大值越大值越大;反反反反之亦然。之亦然。之亦然。之亦然。b.b.强度参数强度参数强度参数强度参数（：吸附层析，：吸附层析，：吸附层析，：吸附层析，S S：反：反：反：反相层析）相层析）相层析）相层析）溶剂在单位表面积的溶剂在单位表面积的溶剂在单位表面积的溶剂在单位表面积的标定活度的吸附剂上的吸标定活度的吸附剂上的吸标定活度的吸附剂上的吸标定活度的吸附剂上的吸

37、附能。附能。附能。附能。它是通过实验测定它是通过实验测定它是通过实验测定它是通过实验测定 的，以丙烷的的，以丙烷的的，以丙烷的的，以丙烷的为零，其为零，其为零，其为零，其它溶剂的它溶剂的它溶剂的它溶剂的与丙烷比较而与丙烷比较而与丙烷比较而与丙烷比较而求得的相对值。求得的相对值。求得的相对值。求得的相对值。在硅胶上在硅胶上在硅胶上在硅胶上与与与与PP的关系曲线的关系曲线的关系曲线的关系曲线选择性分组选择性分组选择性分组选择性分组溶剂溶剂溶剂溶剂脂肪醚脂肪醚脂肪醚脂肪醚,四甲基胍四甲基胍四甲基胍四甲基胍脂肪醇脂肪醇脂肪醇脂肪醇四氢呋喃四氢呋喃四氢呋喃四氢呋喃,酰胺酰胺酰胺酰胺(甲酰胺除外甲酰胺除外

38、甲酰胺除外甲酰胺除外),),乙二醇醚乙二醇醚乙二醇醚乙二醇醚,亚砜亚砜亚砜亚砜乙二醇乙二醇乙二醇乙二醇,苯甲醇苯甲醇苯甲醇苯甲醇,醋酸醋酸醋酸醋酸,甲酰胺甲酰胺甲酰胺甲酰胺二氯甲烷二氯甲烷二氯甲烷二氯甲烷,二氯乙烷二氯乙烷二氯乙烷二氯乙烷脂肪酮脂肪酮脂肪酮脂肪酮,酯酯酯酯,聚醚聚醚聚醚聚醚,二氧六环二氧六环二氧六环二氧六环,砜砜砜砜,腈腈腈腈芳香烃芳香烃芳香烃芳香烃,卤代芳香烃卤代芳香烃卤代芳香烃卤代芳香烃,芳香醚芳香醚芳香醚芳香醚,硝剂化合物硝剂化合物硝剂化合物硝剂化合物氟代脂肪醇氟代脂肪醇氟代脂肪醇氟代脂肪醇,间甲酚间甲酚间甲酚间甲酚,水水水水(氯仿氯仿氯仿氯仿)SynderSynder溶

39、剂选择性分组溶剂选择性分组溶剂选择性分组溶剂选择性分组溶剂分类溶剂分类溶剂分类溶剂分类溶剂选择性三角形溶剂选择性三角形溶剂选择性三角形溶剂选择性三角形展开剂的选择展开剂的选择展开剂的选择展开剂的选择 原则：原则：原则：原则：先找出一种极性或强度能使组分的先找出一种极性或强度能使组分的先找出一种极性或强度能使组分的先找出一种极性或强度能使组分的k k 值在值在值在值在110110（最（最（最（最好在好在好在好在0.55,0.55,或或或或R R 值在值在值在值在0.650.17)0.650.17)之间，保持这个强度不之间，保持这个强度不之间，保持这个强度不之间，保持这个强度不变，改变展开剂的选择

40、性直到使组分有合适的分离度。变，改变展开剂的选择性直到使组分有合适的分离度。变，改变展开剂的选择性直到使组分有合适的分离度。变，改变展开剂的选择性直到使组分有合适的分离度。a.a.选择展开剂的方法选择展开剂的方法选择展开剂的方法选择展开剂的方法 a)a)三角形法三角形法三角形法三角形法 b)b)点滴试验法点滴试验法点滴试验法点滴试验法b.b.二元展开剂的极性和强度的选择二元展开剂的极性和强度的选择二元展开剂的极性和强度的选择二元展开剂的极性和强度的选择 二元展开剂由一种强度较大的溶剂（极性调节剂）二元展开剂由一种强度较大的溶剂（极性调节剂）二元展开剂由一种强度较大的溶剂（极性调节剂）二元展开剂

41、由一种强度较大的溶剂（极性调节剂）和一种强度近于零的溶剂（底剂）按一定比例混合和一种强度近于零的溶剂（底剂）按一定比例混合和一种强度近于零的溶剂（底剂）按一定比例混合和一种强度近于零的溶剂（底剂）按一定比例混合而成。而成。而成。而成。乙醚乙醚乙醚乙醚-正己烷（正己烷（正己烷（正己烷（5050：5050）P=P=乙醚乙醚乙醚乙醚P P乙醚乙醚乙醚乙醚 +正己烷正己烷正己烷正己烷P P正己烷正己烷正己烷正己烷 =0.52.8+0.50=0.52.8+0.50 在乙醚在乙醚在乙醚在乙醚-正己烷（正己烷（正己烷（正己烷（5050：5050）中，分别用氯仿、二氯）中，分别用氯仿、二氯）中，分别用氯仿、二

42、氯）中，分别用氯仿、二氯甲烷替代乙醚，其体积比为：甲烷替代乙醚，其体积比为：甲烷替代乙醚，其体积比为：甲烷替代乙醚，其体积比为：氯仿氯仿氯仿氯仿 二氯甲烷二氯甲烷二氯甲烷二氯甲烷 氯仿：正己烷（氯仿：正己烷（氯仿：正己烷（氯仿：正己烷（3434：6666）二氯甲烷：正己烷（二氯甲烷：正己烷（二氯甲烷：正己烷（二氯甲烷：正己烷（4545：5555）为了使选择性的差别达到最大，应该从靠近三角为了使选择性的差别达到最大，应该从靠近三角为了使选择性的差别达到最大，应该从靠近三角为了使选择性的差别达到最大，应该从靠近三角形顶部的组中选择强度较强的溶剂。形顶部的组中选择强度较强的溶剂。形顶部的组中选择强度

43、较强的溶剂。形顶部的组中选择强度较强的溶剂。c.c.二元展开剂的选择性二元展开剂的选择性二元展开剂的选择性二元展开剂的选择性 二元展开剂选择性的改变，主要是通过其中强度二元展开剂选择性的改变，主要是通过其中强度二元展开剂选择性的改变，主要是通过其中强度二元展开剂选择性的改变，主要是通过其中强度较强溶剂的组别的替换来实现的。较强溶剂的组别的替换来实现的。较强溶剂的组别的替换来实现的。较强溶剂的组别的替换来实现的。d.d.其它因素其它因素其它因素其它因素 a)a)拖尾抑制剂拖尾抑制剂拖尾抑制剂拖尾抑制剂 b)b)降低粘度和促溶作用降低粘度和促溶作用降低粘度和促溶作用降低粘度和促溶作用 氯仿氯仿氯仿

44、氯仿-甲醇甲醇甲醇甲醇-水、正丁醇水、正丁醇水、正丁醇水、正丁醇-冰醋酸冰醋酸冰醋酸冰醋酸-水水水水吸附层析法中的几条规则：吸附层析法中的几条规则：增大则增大则增大则增大则R R 值增大，但选择性变小；值增大，但选择性变小；值增大，但选择性变小；值增大，但选择性变小；减小则减小则减小则减小则R R 值减值减值减值减小，但选择性增大。小，但选择性增大。小，但选择性增大。小，但选择性增大。二元展开剂中，当强度较强的溶剂所占体积最大或最二元展开剂中，当强度较强的溶剂所占体积最大或最二元展开剂中，当强度较强的溶剂所占体积最大或最二元展开剂中，当强度较强的溶剂所占体积最大或最小时选择性最大。小时选择性最

45、大。小时选择性最大。小时选择性最大。当展开剂的组成改变时，如果能引起溶剂分子和溶质当展开剂的组成改变时，如果能引起溶剂分子和溶质当展开剂的组成改变时，如果能引起溶剂分子和溶质当展开剂的组成改变时，如果能引起溶剂分子和溶质分子间的氢键作用的改变，则会产生最大的选择性。分子间的氢键作用的改变，则会产生最大的选择性。分子间的氢键作用的改变，则会产生最大的选择性。分子间的氢键作用的改变，则会产生最大的选择性。如果用无水展开剂时组分斑点拖尾，则可选用去活性如果用无水展开剂时组分斑点拖尾，则可选用去活性如果用无水展开剂时组分斑点拖尾，则可选用去活性如果用无水展开剂时组分斑点拖尾，则可选用去活性的吸附剂。的

46、吸附剂。的吸附剂。的吸附剂。4）定位和定性（1 1）光谱检出法）光谱检出法）光谱检出法）光谱检出法 紫外紫外紫外紫外 g g 荧光荧光荧光荧光 （2 2）蒸气检出法）蒸气检出法）蒸气检出法）蒸气检出法（3 3）试剂显色法）试剂显色法）试剂显色法）试剂显色法 显色方法显色方法显色方法显色方法 a.a.a.a.喷雾显色喷雾显色喷雾显色喷雾显色b.b.b.b.浸渍显色浸渍显色浸渍显色浸渍显色c.c.c.c.超压衍生化超压衍生化超压衍生化超压衍生化d.d.d.d.展层展层展层展层-显色法显色法显色法显色法 显色试剂显色试剂显色试剂显色试剂a.a.通用显色剂通用显色剂通用显色剂通用显色剂 a)a)a)a

47、)硫酸硫酸硫酸硫酸 组成：硫酸组成：硫酸组成：硫酸组成：硫酸-水（水（水（水（1:11:11:11:1），硫酸），硫酸），硫酸），硫酸-甲醇或乙醇（甲醇或乙醇（甲醇或乙醇（甲醇或乙醇（1:11:11:11:1），），），），硫酸与硫酸与硫酸与硫酸与 硫酸铵。硫酸铵。硫酸铵。硫酸铵。方法：喷后方法：喷后方法：喷后方法：喷后110110110110烤烤烤烤15min,15min,15min,15min,不同有机物显不同颜不同有机物显不同颜不同有机物显不同颜不同有机物显不同颜 色。色。色。色。b)0.5%b)0.5%b)0.5%b)0.5%碘的氯仿溶液碘的氯仿溶液碘的氯仿溶液碘的氯仿溶液 c)c)c

48、)c)中性中性中性中性0.05%0.05%0.05%0.05%高锰酸钾溶液高锰酸钾溶液高锰酸钾溶液高锰酸钾溶液 易还原化合物在淡红背景下显黄斑。易还原化合物在淡红背景下显黄斑。易还原化合物在淡红背景下显黄斑。易还原化合物在淡红背景下显黄斑。d)5%d)5%d)5%d)5%磷钼酸乙醇溶液磷钼酸乙醇溶液磷钼酸乙醇溶液磷钼酸乙醇溶液方法：喷后方法：喷后方法：喷后方法：喷后120120120120烘烤，还原化合物显蓝斑，再用氨气烘烤，还原化合物显蓝斑，再用氨气烘烤，还原化合物显蓝斑，再用氨气烘烤，还原化合物显蓝斑，再用氨气熏，则背景变无色。熏，则背景变无色。熏，则背景变无色。熏，则背景变无色。b.b.

49、b.b.专属显色剂专属显色剂专属显色剂专属显色剂（4 4）定性）定性）定性）定性 斑点的斑点的斑点的斑点的R R 值值值值斑点的显色特性斑点的显色特性斑点的显色特性斑点的显色特性 斑点的原位光谱扫描斑点的原位光谱扫描斑点的原位光谱扫描斑点的原位光谱扫描a.a.a.a.薄层色谱薄层色谱薄层色谱薄层色谱-紫外可见光谱扫描紫外可见光谱扫描紫外可见光谱扫描紫外可见光谱扫描b.b.b.b.薄曾色谱薄曾色谱薄曾色谱薄曾色谱-三维光谱扫描三维光谱扫描三维光谱扫描三维光谱扫描与其它分析技术的联用与其它分析技术的联用与其它分析技术的联用与其它分析技术的联用 a.a.a.a.与其它色谱法：与其它色谱法：与其它色谱

50、法：与其它色谱法：GCGCGCGC、HPLCHPLCHPLCHPLCb.b.b.b.与电化学法联用：与电化学法联用：与电化学法联用：与电化学法联用：阳极伏安法、脉冲极谱法、库仑滴阳极伏安法、脉冲极谱法、库仑滴阳极伏安法、脉冲极谱法、库仑滴阳极伏安法、脉冲极谱法、库仑滴定法定法定法定法c.c.c.c.与光谱法联用：与光谱法联用：与光谱法联用：与光谱法联用：原子吸收、拉曼光谱、原子吸收、拉曼光谱、原子吸收、拉曼光谱、原子吸收、拉曼光谱、IRIRIRIR、MS MS MS MS、NMR NMR NMR NMR（）定量）定量）定量）定量平板色谱简单、方便、及操作费用低，平板色谱简单、方便、及操作费用低