多聚酶链式反应扩增DNA片段 讲课稿.ppt

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1、多聚酶链式反应扩增DNA片段ppt实验目的l通过本实验学习PCR反应的基本原理与实验技术。温度温度温度温度（）时间时间时间时间（minmin）9494727260609494变性变性变性变性（1min1min）60 60 退火退火退火退火（1min1min）72 72 延伸延伸延伸延伸（1.5min1.5min）循环循环循环循环1 1 循环循环循环循环2 2 循环循环循环循环3 3PCRPCRPCRPCR反应的温度循环周期反应的温度循环周期反应的温度循环周期反应的温度循环周期PCR PCR PCR PCR 反应的每一个温度循环周期都是由反应的每一个温度循环周期都是由反应的每一个温度循环周期都是

2、由反应的每一个温度循环周期都是由DNADNADNADNA变性、引变性、引变性、引变性、引物退火和反应延伸三个步骤完成的。图中设定的反物退火和反应延伸三个步骤完成的。图中设定的反物退火和反应延伸三个步骤完成的。图中设定的反物退火和反应延伸三个步骤完成的。图中设定的反应参数是应参数是应参数是应参数是94949494变性变性变性变性1min1min1min1min，60 60 60 60 退火退火退火退火1min1min1min1min，72 72 72 72 延伸延伸延伸延伸1.5min1.5min1.5min1.5min。如此周而复始，重复进行，直至扩增。如此周而复始，重复进行，直至扩增。如此周

3、而复始，重复进行，直至扩增。如此周而复始，重复进行，直至扩增产物的数量满足实验需求为止。产物的数量满足实验需求为止。产物的数量满足实验需求为止。产物的数量满足实验需求为止。一般一般PCR反应条件反应条件实验仪器电泳仪电泳仪琼脂糖凝胶电泳槽琼脂糖凝胶电泳槽琼脂糖凝胶电泳槽琼脂糖凝胶电泳槽PCR仪仪凝胶成像系统凝胶成像系统凝胶成像系统凝胶成像系统移液器移液器实验材料l1、DNA模板l2、4种dNTPl3、引物1、引物2l4、Taq酶l5、琼脂糖l6、DNA相对分子质量标准物l7、吸头、50ulPCR管试剂l10PCR缓冲液(含Mg2)l4dNTP(每种1mmol)lTag酶1U/ullDNA模板l

4、引物1:5-GGGGAATTCATGGTGAGCAAGGGC-3l引物2:5-GACCTGCAGGCATGCAAGCTTGGC-3 l引物溶液浓度10pmol/ul实验步骤l1在0.5mlRCR管内配置20ul反应体系：CK(ul)1#(ul)模板01引物10.40.4引物20.40.410 PCR Buffer22Taq酶0.50.5dNTPs0.40.4ddH2O14.315.3Total2020PCRPCR反应程序反应程序(1)94(1)94(1)94(1)94变性变性变性变性5min5min5min5min，(2)94(2)94(2)94(2)94变性变性变性变性1min1min1min1min，(3)52 (3)52 (3)52 (3)52 退火退火退火退火1min1min1min1min，(4)72 (4)72 (4)72 (4)72 延伸延伸延伸延伸1min1min1min1min。(5)(5)(5)(5)重复重复重复重复(2)-(4)30(2)-(4)30(2)-(4)30(2)-(4)30次次次次（6 6 6 6）72 72 72 72 延伸延伸延伸延伸1min1min1min1min。实验报告l要求：l1、写出本实验目的、原理；l2、实验器材及实验步骤；l3、列出实验结果示意图并分析原因。实验结果PCR结果。1、对照(无模板)；26、PCR产物（5ul样品）