微生物实验（课堂ppt）课件.ppt

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1、经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用实验一实验一 玻璃仪器的清洗与包扎、干热灭菌玻璃仪器的清洗与包扎、干热灭菌一、玻璃器皿的清洗和灭菌一、玻璃器皿的清洗和灭菌(一一)、新购的玻璃器皿、新购的玻璃器皿1 1、先用热肥皂水刷洗，流水冲净。、先用热肥皂水刷洗，流水冲净。2 2、再浸泡于的盐酸中数小时，最后用流水、再浸泡于的盐酸中数小时，最后用流水冲净。冲净。1经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用二、玻璃仪器的干热灭

2、菌二、玻璃仪器的干热灭菌(1)(1)将培养皿、吸管等玻璃器皿洗净干燥后，用报纸将培养皿、吸管等玻璃器皿洗净干燥后，用报纸 包好，或装入特制的铁筒中。包好，或装入特制的铁筒中。(2)(2)将包装好的玻璃仪器摆入电热烘箱中，彼此间留将包装好的玻璃仪器摆入电热烘箱中，彼此间留 有一定的空隙以便流通空气。有一定的空隙以便流通空气。(3)(3)关紧箱门，打开排气孔接上电源。关紧箱门，打开排气孔接上电源。(4)(4)待箱内空气排出到一定程度时，关闭上排气孔，待箱内空气排出到一定程度时，关闭上排气孔，继续加热至一定温度后，调节温度控制旋钮固定继续加热至一定温度后，调节温度控制旋钮固定 温度，在温度，在161

3、600165165保持保持2 2小时即可。小时即可。(5)(5)待自然降温冷却后待自然降温冷却后(60(60以下以下)才能开门取出玻璃才能开门取出玻璃 器皿。器皿。2经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用三、注意事项三、注意事项 干热灭菌时电烘箱中物品不要摆得太拥干热灭菌时电烘箱中物品不要摆得太拥挤，以免阻碍空气流通而影响灭菌效果；灭挤，以免阻碍空气流通而影响灭菌效果；灭菌物品不要与电烘箱内壁的铁板接触。以免菌物品不要与电烘箱内壁的铁板接触。以免包装纸烤焦起火。包装纸烤焦起火。3经营者提供商品或者服务有

4、欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用实验二实验二 培养基的配制、分装和灭菌培养基的配制、分装和灭菌一一.实验目的实验目的 明确培养基的配制原则；明确培养基的配制原则；掌握配制培养基的一般方法和步骤；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围；了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围；掌握高压蒸汽灭菌技术，了解几种常用灭菌方法。掌握高压蒸汽灭菌技术，了解几种常用灭菌方法。熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。4经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当

5、按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用二二.实验材料实验材料l其它：天平、牛角匙、电炉、其它：天平、牛角匙、电炉、1N 1N NaOHNaOH、pHpH试纸、试纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、带玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养皿、吸管、无棉塞的空试管、培养皿、吸管、各种包装纸、防水纸、绳索、棉花、标签等各种包装纸、防水纸、绳索、棉花、标签等5经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费

6、者购买商品的价款或接受服务的费用（一）培养基的制备（一）培养基的制备（1 1）培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合）培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合 成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材 料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微 生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和 配制方法。配制方法。（2 2）制备流程：）制备流程：称量称量溶解溶解蒸煮蒸煮调调pHpH分装分装包扎包扎灭菌灭菌三三.实验原理实

7、验原理6经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用(3)(3)操作步骤：操作步骤：1 1）称药品）称药品 按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后杯中。牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，随后放人热水中，牛倒入大烧杯；也可放在称量纸上称量，随后放人热水中，牛肉膏便与称量纸分离，立即取出纸片。蛋白胨极易吸潮，故肉膏便与称量纸分离，立即取出纸片。蛋白胨极易吸潮，故称量时

8、要迅速。称量时要迅速。2 2）加热溶解）加热溶解 在烧杯中加入少于所需要的水量，小火加热，并在烧杯中加入少于所需要的水量，小火加热，并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若配用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入已溶解的药品中，再加制固体培养基，则将称好的琼脂放入已溶解的药品中，再加热融化，此过程中需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后热融化，此过程中需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补足所失的水分。补足所失的水分。7经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受

9、服务的费用3 3）调调pH pH 检检测测培培养养基基的的pHpH，若若pHpH偏偏酸酸，可可滴滴加加1 1滴滴1molL1molL-1 1NaOHNaOH，边边加加边边搅搅拌拌，并并随随时时用用pHpH试试纸纸检检测测，直直至至达达到到所所需需pHpH范范围围。若若偏偏碱碱，则则用用1molL1molL-1-1HClHCl进进行行调调节节。pHpH的的调调节节通通常常放放在在加加琼琼脂脂之之前前。应应注注意意pHpH值值不不要要调调过过头头，以以免免回回调调而而影影响响培培养基内各离子的浓度。养基内各离子的浓度。4 4）过过滤滤 液液体体培培养养基基可可用用滤滤纸纸过过滤滤，固固体体培培养养

10、基基可可用用4 4层层纱纱布布趁趁热热过过滤滤，以以利利结结果果的的观观察察。但但是是供供一一般般使使用用的的培培养养基基，该该步步可省略。可省略。8经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用固体分装固体分装5 5）分分装装 披披实实验验要要求求，可可将将配配制制的的培培养养基基分分装装入入试试管管或或三三角角瓶瓶内内。分分装装时时可可用用漏漏斗斗以以免免使使培培养养基基沾沾在在管管口口或或瓶瓶口口上上面面造造成成污染。污染。分装量：固体培养基约为试管高度的分装量：固体培养基约为试管高度的1 15 5，灭菌

11、后制成斜，灭菌后制成斜面。分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜。半固体培面。分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜。半固体培养基以试管高度的养基以试管高度的1/31/3为宜。灭菌后垂直待凝。为宜。灭菌后垂直待凝。半固体半固体 液体分装液体分装试管试管 三角烧瓶三角烧瓶试管试管 三角烧瓶三角烧瓶 1/3 1/31/41/4 1/21/21/51/51/21/29经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用6 6）加加棉棉塞塞 试试管管口口和和三三角角瓶瓶口口塞塞上上用用普普通通棉棉花花(非非脱脱脂脂棉棉)制制

12、作作的的棉棉塞塞。棉棉塞塞的的形形状状、大大小小和和松松紧紧度度要要合合适适，四四周周紧紧贴贴管管壁壁，不不留留缝缝隙隙，才才能能起起到到防防止止杂杂菌菌侵侵入入和和有有利利通通气气的的作作用用。要要使使棉棉塞塞总总长长约约3 35 5塞塞入入试试管管口口或或瓶瓶口口内内，以以防防棉棉塞塞脱脱落落。有有些些微微生生物物需需要要更更好好的的通通气气，则则可可用用8 8层层纱纱布布制制成成通气塞。有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞。通气塞。有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞。7 7）包包扎扎 加加塞塞后后，将将三三角角瓶瓶的的棉棉塞塞外外包包一一层层牛牛皮皮纸纸，以以防防灭灭菌时冷凝水沾湿棉塞。菌时冷

13、凝水沾湿棉塞。8 8）培养基的灭菌时间和温度，需按照各种培养基的规定进）培养基的灭菌时间和温度，需按照各种培养基的规定进行，以保证灭菌效果和不损培养基的必要成份。培养基经行，以保证灭菌效果和不损培养基的必要成份。培养基经灭菌后，必须放灭菌后，必须放3737温室培养温室培养24h24h，无菌生长者方可使用。，无菌生长者方可使用。10经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用 培养基分装培养基分装斜面制作斜面制作包包扎扎成成捆捆挂挂标标签签11经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受

14、到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用（4 4）关键步骤及注意事项）关键步骤及注意事项要严格按配方配制。要严格按配方配制。调调pHpH不要过头。不要过头。干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70C70C以下放物、取物。以下放物、取物。高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零取物。降压回零取物。12经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用（二）灭菌（

15、二）灭菌灭菌：用物理或化学的方法杀灭物体上一切微生物。灭菌：用物理或化学的方法杀灭物体上一切微生物。（1 1）干热灭菌法：把待灭菌的物品均匀地放入烘箱中，升温）干热灭菌法：把待灭菌的物品均匀地放入烘箱中，升温 至至160C160C，恒温，恒温1 1小时即可。此法适用于玻璃皿、金属用小时即可。此法适用于玻璃皿、金属用 具等的灭菌。具等的灭菌。（2 2）高压蒸汽灭菌法（一般）高压蒸汽灭菌法（一般121C121C，30min30min，适用培养基）：，适用培养基）：把待灭菌的物品放在一个可密闭的加压蒸汽灭菌锅中进把待灭菌的物品放在一个可密闭的加压蒸汽灭菌锅中进 行的，以大量蒸汽使其中压力升高。由于蒸

16、汽压的上行的，以大量蒸汽使其中压力升高。由于蒸汽压的上 升，水的沸点也随之提高。在蒸汽压达到升，水的沸点也随之提高。在蒸汽压达到1.055 1.055 公斤公斤/厘厘 米米2 2时，加压蒸汽灭菌锅内的温度可达到时，加压蒸汽灭菌锅内的温度可达到121C121C。在这种。在这种 情况下，微生物（包括芽孢）在情况下，微生物（包括芽孢）在151520 20 分钟便会被杀分钟便会被杀 死，而达到灭菌目的。如灭菌的对象是砂土、石蜡油等死，而达到灭菌目的。如灭菌的对象是砂土、石蜡油等 面积大、含菌多、传热差的物品，则应适当延长灭菌时面积大、含菌多、传热差的物品，则应适当延长灭菌时 间。间。13经营者提供商品

17、或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法1 1加水加水 将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的 水，以水面与三角架相平为至。水，以水面与三角架相平为至。2 2装料装料 将装料桶放回锅内，装入待灭菌的物品。装有培将装料桶放回锅内，装入待灭菌的物品。装有培 养基的容器放置时要防止液体溢出，瓶塞不要紧贴桶养基的容器放置时要防止液体溢出，瓶塞不要紧贴桶 壁，以防冷凝水沾湿棉塞。壁，以防冷凝水沾湿棉塞。3 3加盖加盖 将盖上与排气孔相连接的排气软管插人内层灭菌

18、将盖上与排气孔相连接的排气软管插人内层灭菌 桶的排气槽内，摆正锅盖，对齐螺口，然后以同时旋紧桶的排气槽内，摆正锅盖，对齐螺口，然后以同时旋紧 相对的两个螺栓的方式拧紧所有螺栓，并打开排气阀；相对的两个螺栓的方式拧紧所有螺栓，并打开排气阀；4 4排气排气 加热。待水煮沸后，水蒸汽和空气一起从排气孔加热。待水煮沸后，水蒸汽和空气一起从排气孔 排出。一般认为，当水沸后约排出。一般认为，当水沸后约5min5min，表明锅内空气已排，表明锅内空气已排 净。净。5 5升压升压 当锅内空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始当锅内空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始 上升。上升。14经营者提供商品或者服务有欺诈

19、行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用6 6保压保压 当压力表指针达到所需压力刻度时，控制热源。当压力表指针达到所需压力刻度时，控制热源。开始计时并维持压力至所需时间。本实验用开始计时并维持压力至所需时间。本实验用121121，20min 20min灭菌。灭菌。7 7降压降压 达到所需灭菌时间后，关闭热源，让压力自然下达到所需灭菌时间后，关闭热源，让压力自然下 降到零后，打开排气阀。放净余下的蒸汽后，再打开锅降到零后，打开排气阀。放净余下的蒸汽后，再打开锅 盖，取出灭菌物品，倒掉锅内剩水。盖，取出灭菌物品，倒掉锅内剩水。8 8无菌

20、检查无菌检查 将已灭菌培养基于将已灭菌培养基于3737培养培养24h24h，无杂菌生，无杂菌生 长，即可待用。长，即可待用。注意事项：注意事项：使用灭菌锅应严格按照操作程序进行，避免发使用灭菌锅应严格按照操作程序进行，避免发生事故；灭菌时，操作者切勿擅自离开，务必待压力下降生事故；灭菌时，操作者切勿擅自离开，务必待压力下降到零后，才可打开锅盖。到零后，才可打开锅盖。15经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用（3 3）间歇灭菌法：待灭菌的物品放在灭菌器或蒸笼里，每天）间歇灭菌法：待灭菌的物品放在灭菌器或蒸

21、笼里，每天 蒸煮蒸煮1 1次，每次煮沸次，每次煮沸1h1h，连续，连续3d 3d 重复进行。在每两次蒸重复进行。在每两次蒸 煮之间，将物品（指培养基）放在煮之间，将物品（指培养基）放在37C37C恒温条件下培养恒温条件下培养 过夜，这样可以使每次蒸煮后未杀死残留的芽孢萌发成过夜，这样可以使每次蒸煮后未杀死残留的芽孢萌发成 营养体，以便下次蒸煮时杀灭。营养体，以便下次蒸煮时杀灭。（4 4）巴氏灭菌法：有些食物会因高温破坏营养成分或影响质）巴氏灭菌法：有些食物会因高温破坏营养成分或影响质 量，如牛奶、酱油、啤酒等，所以只能用较低的温度来量，如牛奶、酱油、啤酒等，所以只能用较低的温度来 杀死其中的病

22、原微生物，这样既保持食物的营养和风杀死其中的病原微生物，这样既保持食物的营养和风 味，又进行了消毒，保证了食品卫生。该法一般在味，又进行了消毒，保证了食品卫生。该法一般在 62 62，3030分钟既可达到消毒目的。此法为法国微生物学分钟既可达到消毒目的。此法为法国微生物学 家巴斯德首创，故名为巴氏消毒法。家巴斯德首创，故名为巴氏消毒法。16经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用（三）棉塞的制作（三）棉塞的制作17经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额

23、为消费者购买商品的价款或接受服务的费用18经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用 微生物接种技术是进行微生物实验和相关研究微生物接种技术是进行微生物实验和相关研究的基本操作技能。的基本操作技能。无菌操作是微生物接种技术的关键。斜面接种无菌操作是微生物接种技术的关键。斜面接种、液体接种、固体接种和穿刺接种操作均以获得生、液体接种、固体接种和穿刺接种操作均以获得生长良好的纯种微生物为目的。长良好的纯种微生物为目的。由于接种方法不同，采用的接种工具也有区由于接种方法不同，采用的接种工具也有区别，如固体斜面培养

24、体转接时用接种环；穿刺接种别，如固体斜面培养体转接时用接种环；穿刺接种时用接种针，液体转接用移液管等。时用接种针，液体转接用移液管等。实验三实验三 微生物的接种技术微生物的接种技术 19经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用一、实验目的：一、实验目的：了解各种微生物接种方法。了解各种微生物接种方法。二、实验材料和用具：二、实验材料和用具：已灭菌培养基、接种环、接种针、酒精灯、已灭菌培养基、接种环、接种针、酒精灯、移液管、记号笔移液管、记号笔 20经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增

25、加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用三、实验步骤：三、实验步骤：1 1、斜面接种技术、斜面接种技术 斜面接种是从已生长好的菌种斜面上挑取少量斜面接种是从已生长好的菌种斜面上挑取少量菌种移植至另一新鲜斜面培养基上的一种接种方法菌种移植至另一新鲜斜面培养基上的一种接种方法。具体操作如下：。具体操作如下：(1)(1)贴标签贴标签 接种前在试管上贴上标签，注明菌名、接种前在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人姓名等。贴在距试管口约接种日期、接种人姓名等。贴在距试管口约2 23cm3cm的位置。的位置。(若用记号笔标记则不需标签若用记号笔标记则不需标签)。(2)

26、(2)点燃酒精灯。点燃酒精灯。21经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用(3)(3)接接种种 用用接接种种环环将将少少许许菌菌种种移移接接到到贴贴好好标标签签的的试试管斜面上。操作必须按无菌操作法进行。管斜面上。操作必须按无菌操作法进行。1)1)手手持持试试管管 将将菌菌种种和和待待接接斜斜面面的的两两支支试试管管用用大大姆姆指指和和其其他他四四指指握握在在左左手手中中。使使中中指指位位于于两两试试管管之之间间部位。斜面面向操作者，并使它们位于水平位置。部位。斜面面向操作者，并使它们位于水平位置。2)2

27、)旋旋松松管管塞塞 先先用用有有于于松松动动棉棉塞塞或或塑塑料料管管盖盖，以以便便接接种时拔出。种时拔出。3)3)取取接接种种环环 右右手手拿拿接接种种环环，在在火火焰焰上上将将环环端端灼灼烧烧灭灭菌菌然然后后将将有有可可能能伸伸入入试试管管中中的的其其余余部部分分均均灼灼烧烧灭菌，重复此操作，再灼烧一次。灭菌，重复此操作，再灼烧一次。22经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用4)4)拔拔管管塞塞 用用右右手手的的无无名名指指、小小指指和和手手掌掌边边先先后后取取下下菌菌种种管管和和待待接接试试管管的的

28、管管塞塞，然然后后让让试试管管口口缓缓缓缓过过火灭菌火灭菌(切勿烧得过烫切勿烧得过烫)。试试管管拔拔塞塞后后过过火火灭灭菌菌和和取取菌菌 23经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用5)5)塞塞管管塞塞 取取出出接接种种环环，灼灼烧烧试试管管口口，并并在在火火焰焰旁旁将将管管塞塞旋旋上上。不不要要用用试试管管去去迎迎棉棉塞塞，以以免免试试管管在在移移动时纳入不洁空气。动时纳入不洁空气。6)6)将接种环灼烧灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋将接种环灼烧灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋紧。紧。24经营者提供商品或者

29、服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用2 2、液体接种技术、液体接种技术(1)(1)用用斜斜面面菌菌种种接接种种液液体体培培养养基基时时，有有下下面面两两种种情情况况：如如接接种种量量小小，可可用用接接种种环环取取少少量量菌菌体体移移入入培培养养基基容容器器(试试管管或或三三角角瓶瓶等等)中中，将将接接种种环环在在液液体体表表面面振振荡荡或或在在器器壁壁上上轻轻轻轻摩摩擦擦把把菌菌苔苔散散开开，抽抽出出接接种种环环，塞塞好好棉棉塞塞，再再将将液液体体摇摇动动，菌菌体体即即均均匀匀分分布布在在液液体体中中。如如接接种种量量

30、大大，可可先先在在斜斜面面菌菌种种管管中中注注入入定定量量无无菌菌水水接接种种环环把把菌菌苔苔刮刮下下研研开开，再再把把菌菌悬悬液液倒倒入入液液体体培培养基中，倒前需将试管口在火焰上灭菌。养基中，倒前需将试管口在火焰上灭菌。(2)(2)用液体培养物接种液体培养基时，可用无菌的吸管用液体培养物接种液体培养基时，可用无菌的吸管或移液管吸取菌液接种。或移液管吸取菌液接种。25经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用3 3、固体接种技术、固体接种技术 固体接种最普遍的形式是接种固体菌制剂。因所用固体接种最普遍的形

31、式是接种固体菌制剂。因所用菌种或种子菌来源不同分为：菌种或种子菌来源不同分为：1)1)用用菌菌液液接接种种固固体体料料 可可用用菌菌苔苔刮刮洗洗制制成成的的悬悬液液。接接种种时时可可按按无无菌菌操操作作法法将将菌菌液液直直接接例例入入固固体体培培养养基基中中，搅搅拌拌均均匀匀。注注意意接接种种所所用用菌菌液液量量要要计计算算在在固固体体料料总总加加水水量量之之内内，否否则则往往往往在在用用液液体体种种子子菌菌接接种种后后含含水水量量加加大大，影响培养效果。影响培养效果。2)2)用用固固体体种种子子接接种种固固体体料料 包包括括用用孢孢子子粉粉、菌菌丝丝孢孢子子混混合合种种子子菌菌或或其其他他固

32、固体体培培养养的的种种子子菌菌，直直接接把把接接种种材材料料混混入入灭灭菌菌的的固固体体料料。接接种种后后必必须须充充分分搅搅拌拌使使之之混混合合均匀。均匀。26经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用4 4、穿刺接种技术、穿刺接种技术 穿刺接种技术是一种用接种针从菌种斜面上挑穿刺接种技术是一种用接种针从菌种斜面上挑取少量菌体并把它穿刺到固体或半固体的深层培养取少量菌体并把它穿刺到固体或半固体的深层培养基中的接种方法。经穿刺接种后的菌种常作为保藏基中的接种方法。经穿刺接种后的菌种常作为保藏菌种的一种形式，

33、同时也是检查细菌运动能力的一菌种的一种形式，同时也是检查细菌运动能力的一种方法，它只适宜于细菌和酵母的接种培养。种方法，它只适宜于细菌和酵母的接种培养。27经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用具体操作如下。具体操作如下。(1)(1)贴标签。贴标签。(2)(2)点燃酒精灯。点燃酒精灯。(3)(3)穿刺接种。穿刺接种。(4)(4)将接种过的试管直立于试管架上，放在将接种过的试管直立于试管架上，放在3737或或2828恒温箱中培养。恒温箱中培养。24h24h后观察结果后观察结果(注意：若具注意：若具有运动能

34、力的细菌，它能沿着接种线向外运动而有运动能力的细菌，它能沿着接种线向外运动而弥散，故形成的穿刺线较粗而散、反之则细而密弥散，故形成的穿刺线较粗而散、反之则细而密)。28经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用(3)(3)穿刺接种方法如下：穿刺接种方法如下：1)1)手持试管。手持试管。2)2)旋松棉塞。旋松棉塞。3)3)右右手手拿拿接接种种针针在在火火焰焰上上将将针针端端灼灼烧烧灭灭菌菌，接接着着把把在在穿刺中可能伸入试管的其他部位也灼烧灭菌。穿刺中可能伸入试管的其他部位也灼烧灭菌。4)4)用右手的小指和手

35、掌边拔出棉塞。接种针先在培养用右手的小指和手掌边拔出棉塞。接种针先在培养基部分冷却。再用接种针的针尖沾取少量菌种。基部分冷却。再用接种针的针尖沾取少量菌种。5)5)接接种种有有两两种种手手持持操操作作法法。一一种种是是水水平平法法，它它类类似似于于斜斜面面接接种种法法。一一种种则则称称垂垂直直法法。尽尽管管穿穿刺刺时时手手持持方方法法不不同同，但但穿穿刺刺时时所所用用接接种种针针都都必必须须挺挺直直，将将接接种种针针自自培培养养基基中中心心垂垂直直地地刺刺入入培培养养基基中中。穿穿刺刺时时要要做做到到手手稳稳、动动作作轻轻巧巧快快速速，并并且且要要将将接接种种针针穿穿刺刺到到接接近近试试管管的

36、的底底部部，然然后后沿沿着着接接种种线线将将针针拔拔出出。最最后后，塞上棉塞，再将接种针上残留的菌在火焰上烧掉。塞上棉塞，再将接种针上残留的菌在火焰上烧掉。29经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用斜面划线法（斜面划线法（a a）不同细菌直线接种长出的菌苔形态（不同细菌直线接种长出的菌苔形态（b b）30经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用 穿刺接种穿刺接种（a a）水平穿刺接种；（）水平穿刺接种；（b b）垂

37、直穿刺接种）垂直穿刺接种 31经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用四、实验报告四、实验报告列表比较各种接种方法及注意事项。列表比较各种接种方法及注意事项。五、问题和讨论五、问题和讨论1 1、斜斜面面接接种种取取菌菌前前为为什什么么要要将将灼灼烧烧过过的的接接种种针针在在无菌培养基上沾一下？无菌培养基上沾一下？2 2、穿刺接种时能否将接种针直接穿透培养基？、穿刺接种时能否将接种针直接穿透培养基？32经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商

38、品的价款或接受服务的费用实验四实验四 显微镜的使用和维护显微镜的使用和维护（1 1）学习掌握显微镜的结构、功能和使用方法。）学习掌握显微镜的结构、功能和使用方法。（2 2）学习并掌握显微镜的维护的基本知识。）学习并掌握显微镜的维护的基本知识。一一.实验目的实验目的33经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用二、显微镜的构造二、显微镜的构造1.1.光学部分光学部分:接目镜、接物镜、照明装置接目镜、接物镜、照明装置(聚光镜、虹彩光圈、反聚光镜、虹彩光圈、反光镜等光镜等)。它使检视物放大。它使检视物放大,造成物

39、象。造成物象。2.2.机械部分机械部分:镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件。它起着支持转移器、粗调节器、细调节器等部件。它起着支持调节固定等作用。调节固定等作用。34经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用油镜使用的原理油镜使用的原理油镜使用的原理油镜使用的原理35经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用镜头的识别镜头的识别 低倍、

40、高倍和油镜接物镜的识别方法，可直接低倍、高倍和油镜接物镜的识别方法，可直接读它上面刻的倍数，简便方法是低倍镜较短，高倍读它上面刻的倍数，简便方法是低倍镜较短，高倍镜较长，油镜更长且上面刻有黑圈。使用时一定要镜较长，油镜更长且上面刻有黑圈。使用时一定要识别清楚，不可认错，否则在转换物镜时会碰压镜识别清楚，不可认错，否则在转换物镜时会碰压镜头，损坏物镜的危险。放大倍数越高的接物镜它的头，损坏物镜的危险。放大倍数越高的接物镜它的焦距越小，工作距离也越小，因此油镜观察时镜头焦距越小，工作距离也越小，因此油镜观察时镜头和玻片极为接近，使用时应该注意。和玻片极为接近，使用时应该注意。36经营者提供商品或者

41、服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用37经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用显微镜的使用显微镜的使用1.1.用前检查：用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁。零件是否齐全，镜头是否清洁。2.2.调节光亮度调节光亮度 3.3.低倍镜观察：低倍镜观察：粗调、细调。粗调、细调。4.4.依次再进行中倍、高倍观察依次再进行中倍、高倍观察 5.5.油镜观察：油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光镜，在标高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚

42、光镜，在标 本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油 中，细调至看清物象为止。中，细调至看清物象为止。6.6.换片：换片：另换新片，必须从第三条开始操作。另换新片，必须从第三条开始操作。7.7.用后复原：用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的 油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的 油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体 全部复原全部复原。38经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其

43、受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用1.1.用低倍镜观察酵母菌用低倍镜观察酵母菌 (1)(1)调节光源调节光源:将低倍物镜转到工作位置。上升聚光器，可变光阑完全将低倍物镜转到工作位置。上升聚光器，可变光阑完全打开，然后转动反光镜采集光源，一般以采集北窗射入的自打开，然后转动反光镜采集光源，一般以采集北窗射入的自然光为宜，不宜采用直射日光。如遇阴天或晚上可用普通日然光为宜，不宜采用直射日光。如遇阴天或晚上可用普通日光台灯照明。光台灯照明。当用显微镜灯当用显微镜灯(钨丝灯泡钨丝灯泡)照明时，因其亮度较强，而且照明时，因其亮度较强，而且发射光谱中有较多刺激眼睛的红光，故应

44、根据标本染色情况发射光谱中有较多刺激眼睛的红光，故应根据标本染色情况选用绿色、黄绿或蓝绿色滤光器或一面磨砂的有色滤光片，选用绿色、黄绿或蓝绿色滤光器或一面磨砂的有色滤光片，以减弱光的强度，同时又可吸收掉红光，使视野光线柔和，以减弱光的强度，同时又可吸收掉红光，使视野光线柔和，并可护眼睛。并可护眼睛。旋转反光镜，使光线投射到反光镜中央，并调节聚光器旋转反光镜，使光线投射到反光镜中央，并调节聚光器或调节光圈大小，使视野得到均匀的照明。或调节光圈大小，使视野得到均匀的照明。三三.实验步骤实验步骤39经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购

45、买商品的价款或接受服务的费用（2)2)调节聚光镜和物镜数值孔径相一致，取下目镜直接向调节聚光镜和物镜数值孔径相一致，取下目镜直接向镜筒内观察，先将可交光阑缩到最小，再轻轻地打开，便镜筒内观察，先将可交光阑缩到最小，再轻轻地打开，便聚光器的孔径与视野的直径一样大，然后再放回目镜。这聚光器的孔径与视野的直径一样大，然后再放回目镜。这一操作的目的是使入射光所展开的角度与镜口角的角度相一操作的目的是使入射光所展开的角度与镜口角的角度相符合，否则因光圈开得太大而超过物镜的数值孔径时，会符合，否则因光圈开得太大而超过物镜的数值孔径时，会产生光斑，如光圈收得太小则降低分辨力，从面影响了物产生光斑，如光圈收得

46、太小则降低分辨力，从面影响了物像的清晰度。因为各物镜的数值孔径不同，所以每转换一像的清晰度。因为各物镜的数值孔径不同，所以每转换一次物镜都要进行调节。次物镜都要进行调节。在实际操作中观察者住往只根据视野的亮度和标本明在实际操作中观察者住往只根据视野的亮度和标本明暗对比度来侧节光圈大小，而不考虑聚光器与物镜数值孔暗对比度来侧节光圈大小，而不考虑聚光器与物镜数值孔径的配合。只要能达到较好的效果，这种调节法也是可取径的配合。只要能达到较好的效果，这种调节法也是可取的。但是，对于使用显微镜的工作者来讲，必须了解这一的。但是，对于使用显微镜的工作者来讲，必须了解这一操作的目的和原理，这样在操作时就能运用

47、自如。操作的目的和原理，这样在操作时就能运用自如。40经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用(3)(3)放置标本放置标本 上升镜筒，将酵母水封片放在镜台上，用玻上升镜筒，将酵母水封片放在镜台上，用玻片夹夹住，然后降下低倍物镜，使其下端接近于玻片。片夹夹住，然后降下低倍物镜，使其下端接近于玻片。(4)(4)调焦调焦 转动粗螺旋，使镜筒逐渐上升到看见模糊物像时，转动粗螺旋，使镜筒逐渐上升到看见模糊物像时，再转动细螺旋，调节到物像清晰时为止。再转动细螺旋，调节到物像清晰时为止。(5)(5)观察观察 观察并绘制

48、酵母菌形态。如要精细观察可转换高倍观察并绘制酵母菌形态。如要精细观察可转换高倍镜。镜。41经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用2.2.高倍镜观察高倍镜观察（1 1）将在低倍镜下找到的合适部位移至视好当中。）将在低倍镜下找到的合适部位移至视好当中。（2 2）转换高倍镜）转换高倍镜 用手按住转换器慢慢地旋转，当听用手按住转换器慢慢地旋转，当听“咔嗦咔嗦”一声即表物镜已转到正确的工作位置上。一声即表物镜已转到正确的工作位置上。（3 3）调焦）调焦 使用齐焦物镜时，只要从低倍镜转到高倍镜再稍使用齐焦物镜时，只

49、要从低倍镜转到高倍镜再稍 调一下细螺旋即可看清物像。如用不齐焦的物镜时，每转换调一下细螺旋即可看清物像。如用不齐焦的物镜时，每转换 一次物镜都要进行调焦，即先使物镜降至非常靠近玻片的位一次物镜都要进行调焦，即先使物镜降至非常靠近玻片的位 置然后再慢慢上升镜筒，并细心调节粗、细螺旋，直至物象置然后再慢慢上升镜筒，并细心调节粗、细螺旋，直至物象 清晰为止。清晰为止。（4 4）观察）观察:仔细地观察酵母菌的结构。仔细地观察酵母菌的结构。42经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求增加赔偿其受到的损失，增加赔偿的金额为消费者购买商品的价款或接受服务的费用3.3.用油镜观察细菌用油镜观察

50、细菌 (1)(1)放置标本放置标本 将染色的细菌涂片置于镜台上。将染色的细菌涂片置于镜台上。(2)(2)找合适的视野找合适的视野 先用低倍镜寻找合适的视野，并将欲观先用低倍镜寻找合适的视野，并将欲观察的部位移到视野中央。察的部位移到视野中央。(3)(3)转换油镜，将油镜转到工作位置。转换油镜，将油镜转到工作位置。(4)(4)调节聚光器与油镜数值孔径相一致调节聚光器与油镜数值孔径相一致:只要将聚光器上升只要将聚光器上升到最高位置，可变光阑开到最大，此时两者的数值孔径即达到到最高位置，可变光阑开到最大，此时两者的数值孔径即达到一致。一致。43经营者提供商品或者服务有欺诈行为的，应当按照消费者的要求