生物药物分析绪论.ppt

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1、 生物药物分析概述生物药物分析概述生命科学与工程学院生命科学与工程学院 魏屹魏屹1第一节第一节 生物药物概述生物药物概述一、生物药物及及分类一、生物药物及及分类二、生物药物的性质二、生物药物的性质三、生物药物的用途三、生物药物的用途学习目标学习目标2第二节第二节 生物药物的质量及其生物药物的质量及其控制控制一、生物药物质量的重要性与特殊一、生物药物质量的重要性与特殊性性二、药典与生物药物的质量标准二、药典与生物药物的质量标准三、生物药物的质量控制与管理三、生物药物的质量控制与管理第三节第三节 生物药物的分析检生物药物的分析检验验一、药物分析与生物药物分析一、药物分析与生物药物分析二、生物药物分

2、析与检验的特点二、生物药物分析与检验的特点三、生物药物分析的基本程序三、生物药物分析的基本程序学习目标学习目标3第四节第四节 生物药物常用的定量生物药物常用的定量分析方法分析方法一、生物药物常用的定量分析方法一、生物药物常用的定量分析方法二、二、UV、HPLC在生物药物分析在生物药物分析中的应用中的应用第一节第一节生物药物概述生物药物概述4用于用于药品药品预防预防治疗治疗诊断诊断调节调节一、生物药物及其分类一、生物药物及其分类5药品包括药品包括*中药材、中药饮片、中中药材、中药饮片、中成药成药*化学原料药及其制剂、抗生化学原料药及其制剂、抗生素、生化药品、放射性药品素、生化药品、放射性药品*血

3、清制品和诊断药品血清制品和诊断药品6人类用于预防、治疗和诊人类用于预防、治疗和诊断疾病的三大主要药物断疾病的三大主要药物化学药物化学药物生物药物生物药物中中 药药78（一）什么是生物药物？（一）什么是生物药物？u定义：生物药物（定义：生物药物（biopharmaceuticsbiopharmaceutics或或biopharmaceuticalsbiopharmaceuticals）是利用生物体、生物）是利用生物体、生物组织或组成生物体的各种成分，综合应用多组织或组成生物体的各种成分，综合应用多门学科的原理和方法，特别是采用现代生物门学科的原理和方法，特别是采用现代生物技术，进行加工、制造机而

4、形成的一大类用技术，进行加工、制造机而形成的一大类用于预防、治疗以及诊断疾病的药物。于预防、治疗以及诊断疾病的药物。分类：生物药物按其分类：生物药物按其来源来源和和生产方法生产方法分类，主要包括：分类，主要包括：*生化药物（生化药物（biochemical drugs）*生物合成药物（生物合成药物（biosyn-thetic drugs)*生物制品（生物制品（biological products)9（二）生物药物的分类（二）生物药物的分类生物药物按其生物药物按其化学本质化学本质和和化学特性化学特性分类，主要包括：分类，主要包括：10u氨基酸及其衍生物类氨基酸及其衍生物类u多肽类药物多肽类药物

5、u蛋白质类药物蛋白质类药物u酶类药物酶类药物u多糖类药物多糖类药物u脂质类药物脂质类药物u核酸类药物核酸类药物u基因工程类药物基因工程类药物（二）生物药物的分类（二）生物药物的分类生物药物按其生物药物按其用途用途分类，主要包括：分类，主要包括：11u治疗药物治疗药物u预防药物预防药物u诊断药物诊断药物u用作其他生物医药用品用作其他生物医药用品（二）生物药物的分类（二）生物药物的分类通常将三者结合进行通常将三者结合进行综合分类综合分类，生物药物分为以，生物药物分为以下几大类：下几大类：121、天然生化药物、天然生化药物天然生化药物是指从生物体（动物、植物及微生物）天然生化药物是指从生物体（动物、

6、植物及微生物）中获得的天然存在的生化活性物质。中获得的天然存在的生化活性物质。（1 1）氨基酸类药物（包括氨基酸及其衍生物）氨基酸类药物（包括氨基酸及其衍生物）单氨基酸单氨基酸：谷氨酸、胱氨酸、亮氨酸、半胱氨酸、丝氨：谷氨酸、胱氨酸、亮氨酸、半胱氨酸、丝氨酸、色氨酸、赖氨酸、甘氨酸等。酸、色氨酸、赖氨酸、甘氨酸等。氨基酸衍生物：氨基酸衍生物：谷胺酰胺、谷胺酰胺、N-N-乙酰乙酰-L-L-半胱氨酸、半胱氨酸、S-S-氨基氨基甲酰半胱氨酸、甲酰半胱氨酸、S-S-甲基半胱氨酸、甲基半胱氨酸、S-S-羟色氨酸。羟色氨酸。复合氨基酸注射液复合氨基酸注射液：3S3S、6S6S、9S9S、11S11S、13

7、S13S、14S14S、15S15S、17S17S、18S18S复合氨基酸注射液。（复合氨基酸注射液。（S S代表氨基酸的种类）代表氨基酸的种类）（2 2）多肽类与蛋白质类药物）多肽类与蛋白质类药物 多多肽肽类类药药物物主主要要有有多多肽肽激激素素和和多多肽肽细细胞胞生生长长调调节节因子，如催产素、促皮质素和表皮生长因子等。因子，如催产素、促皮质素和表皮生长因子等。13 蛋蛋白白质质类类药药物物包包括括单单纯纯蛋蛋白白质质（如如人人白白蛋蛋白白、丙丙种种球球蛋蛋白白、胰胰岛岛素素等等）和和结结合合蛋蛋白白类类（如如糖糖蛋蛋白白、脂蛋白、色蛋白等）。脂蛋白、色蛋白等）。（3 3）酶与辅酶类药物）

8、酶与辅酶类药物助消化酶类：助消化酶类：如胃蛋白酶、胰蛋白酶和麦芽淀粉酶等；如胃蛋白酶、胰蛋白酶和麦芽淀粉酶等；消炎酶类：消炎酶类：如溶菌酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等；如溶菌酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶等；心心脑脑血血管管疾疾病病治治疗疗酶酶：如如尿尿激激酶酶、弹弹性性蛋蛋白白酶酶、纤纤溶溶酶酶等；等；抗肿瘤酶类：抗肿瘤酶类：如天冬酰胺酶、谷氨酸胺酶、谷氨酸酶等；如天冬酰胺酶、谷氨酸胺酶、谷氨酸酶等；其它酶类：其它酶类：如超氧化物歧化酶（如超氧化物歧化酶（SODSOD）、青霉素酶等；）、青霉素酶等；辅辅酶酶类类：多多种种酶酶的的辅辅酶酶或或辅辅基基成成分分具具有有医医疗疗价价值值，如如辅辅酶酶、辅酶、

9、辅酶等广泛用于肺病和冠心病的治疗。等广泛用于肺病和冠心病的治疗。14（4 4）核酸类药物）核酸类药物 具具有有天天然然结结构构的的核核酸酸类类药药物物：包包括括RNARNA（核核糖糖核核酸酸）、DNADNA（脱脱氧氧核核糖糖核核酸酸）、核核苷苷、核核苷苷酸酸、多多聚核苷酸等。聚核苷酸等。核核酸酸结结构构改改造造药药物物：如如叠叠氮氮胸胸苷苷、阿阿糖糖腺腺苷苷、阿阿糖糖胞胞苷苷、聚聚肌肌胞胞等等。它它们们是是目目前前人人类类治治疗疗病病毒毒感感染染、肿瘤、艾滋病的重要药物。肿瘤、艾滋病的重要药物。15（5 5）多糖类药物）多糖类药物 肝素、硫酸软骨素肝素、硫酸软骨素A A和和C C、硫酸皮肤素（

10、硫、硫酸皮肤素（硫酸软骨素酸软骨素B B）、硫酸角质素、透明质酸等。）、硫酸角质素、透明质酸等。类肝素（酸性粘多糖）、鹿茸多糖、壳聚多类肝素（酸性粘多糖）、鹿茸多糖、壳聚多糖、右旋糖苷、灵芝多糖、猪苓多糖、人参糖、右旋糖苷、灵芝多糖、猪苓多糖、人参多糖、黄芪多糖等。多糖、黄芪多糖等。16（6 6）脂质类药物）脂质类药物磷脂类：磷脂类：卵磷脂、脑磷脂等；卵磷脂、脑磷脂等；不饱和脂肪酸类：不饱和脂肪酸类：亚油酸、亚麻酸等；亚油酸、亚麻酸等；胆酸类：胆酸类：如去氧胆酸、猪去氧胆酸等；如去氧胆酸、猪去氧胆酸等；固醇类：固醇类：胆固醇、麦角固醇、胆固醇、麦角固醇、-谷固醇等；谷固醇等；卟啉类：卟啉类：血

11、红素、胆红素、血卟琳等血红素、胆红素、血卟琳等前列腺素系列前列腺素系列（PGE1PGE1、PGE2PGE2、PGE2aPGE2a和和PG12PG12）。）。17182、微生物类药物、微生物类药物微生物类药物主要有抗生素类药物、酶微生物类药物主要有抗生素类药物、酶抑制剂和免疫调节剂。抑制剂和免疫调节剂。（1 1）抗生素类药物）抗生素类药物 抗生素抗生素是指是指“在低微浓度下即可对某些生物的生在低微浓度下即可对某些生物的生命活动有特异抑制作用的化学物质的总称命活动有特异抑制作用的化学物质的总称”。19（1 1）抗生素类药物）抗生素类药物 来源：来源：来源：来源：微生物合成（发酵）微生物合成（发酵）

12、微生物合成（发酵）微生物合成（发酵）微生物发酵微生物发酵微生物发酵微生物发酵天然抗生素，如青霉素是由青天然抗生素，如青霉素是由青天然抗生素，如青霉素是由青天然抗生素，如青霉素是由青霉菌的培养液中分离得到的。霉菌的培养液中分离得到的。霉菌的培养液中分离得到的。霉菌的培养液中分离得到的。化学半合成或全合成化学半合成或全合成化学半合成或全合成化学半合成或全合成 结构比较简单的抗生素（如氯霉素），可全合结构比较简单的抗生素（如氯霉素），可全合结构比较简单的抗生素（如氯霉素），可全合结构比较简单的抗生素（如氯霉素），可全合成；大多数抗生素是半合成的，半合成的抗生成；大多数抗生素是半合成的，半合成的抗生成

13、；大多数抗生素是半合成的，半合成的抗生成；大多数抗生素是半合成的，半合成的抗生素来自于天然药物或生物合成的抗生素，进行素来自于天然药物或生物合成的抗生素，进行素来自于天然药物或生物合成的抗生素，进行素来自于天然药物或生物合成的抗生素，进行结构修饰，得到活性更强，耐酸、碱或耐酶的结构修饰，得到活性更强，耐酸、碱或耐酶的结构修饰，得到活性更强，耐酸、碱或耐酶的结构修饰，得到活性更强，耐酸、碱或耐酶的新的抗生素。新的抗生素。新的抗生素。新的抗生素。20（2 2）酶抑制剂）酶抑制剂 由微生物来源的由微生物来源的由微生物来源的由微生物来源的酶抑制剂酶抑制剂酶抑制剂酶抑制剂主要有主要有主要有主要有-内酰胺

14、酶内酰胺酶内酰胺酶内酰胺酶抑制剂抑制剂抑制剂抑制剂，其代表是克拉维酸，它与青霉素类抗生，其代表是克拉维酸，它与青霉素类抗生，其代表是克拉维酸，它与青霉素类抗生，其代表是克拉维酸，它与青霉素类抗生素有很好的协同作用；素有很好的协同作用；素有很好的协同作用；素有很好的协同作用；还原酶抑制剂还原酶抑制剂还原酶抑制剂还原酶抑制剂，如洛伐他，如洛伐他，如洛伐他，如洛伐他丁、普伐他丁等，它们是重要的降血脂、降胆固丁、普伐他丁等，它们是重要的降血脂、降胆固丁、普伐他丁等，它们是重要的降血脂、降胆固丁、普伐他丁等，它们是重要的降血脂、降胆固醇、降血压药物；醇、降血压药物；醇、降血压药物；醇、降血压药物；亮氨酸

15、氨肽酶抑制剂亮氨酸氨肽酶抑制剂亮氨酸氨肽酶抑制剂亮氨酸氨肽酶抑制剂，如苯丁，如苯丁，如苯丁，如苯丁亮氨酸，可用于抗肿瘤。亮氨酸，可用于抗肿瘤。亮氨酸，可用于抗肿瘤。亮氨酸，可用于抗肿瘤。21（3 3）免疫调节剂）免疫调节剂 包括包括包括包括免疫增强剂免疫增强剂免疫增强剂免疫增强剂和和和和免疫抑制剂免疫抑制剂免疫抑制剂免疫抑制剂。如环孢菌素如环孢菌素如环孢菌素如环孢菌素AA属于免疫抑制剂，环孢菌素属于免疫抑制剂，环孢菌素属于免疫抑制剂，环孢菌素属于免疫抑制剂，环孢菌素AA的的的的发现大大增加器管移植的成功率。发现大大增加器管移植的成功率。发现大大增加器管移植的成功率。发现大大增加器管移植的成功率

16、。22重重组组多多肽肽与与蛋蛋白白质质类类激激素素：主主要要有有重重组组人人胰胰岛岛素素、重组人生长素、重组人白蛋白和重组人血红蛋白等；重组人生长素、重组人白蛋白和重组人血红蛋白等；重重组组溶溶栓栓类类药药物物：如如组组织织纤纤溶溶酶酶原原激激活活剂剂、重重组组水蛭素等；水蛭素等；细细胞胞因因子子类类药药物物：如如干干扰扰素素、白白介介素素、促促红红细细胞胞生生成素等；成素等；重重组组疫疫苗苗与与单单抗抗制制品品：主主要要有有乙乙肝肝表表面面抗抗原原疫疫苗苗、艾滋疫苗、流感疫苗等。艾滋疫苗、流感疫苗等。3、基因工程药物、基因工程药物234、基因药物、基因药物基因药物是以基因物质（基因药物是以基

17、因物质（DNA或或RNA及其衍生物）作为治疗的物质基础，包及其衍生物）作为治疗的物质基础，包括基因治疗用的重组目的括基因治疗用的重组目的DNA片段、重片段、重组疫苗、反义药物和核酶等。组疫苗、反义药物和核酶等。245、生物制品：、生物制品：生物制品是以微生物、细胞、动物或人源组织生物制品是以微生物、细胞、动物或人源组织和体液等为原料，应用传统的或现代的生物和体液等为原料，应用传统的或现代的生物技术（基因工程、细胞工程、蛋白质工程、技术（基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等）制成，用于人类疾病的预防、发酵工程等）制成，用于人类疾病的预防、治疗和诊断的药品。如疫苗、蛋白、生长因治疗和诊断的药

18、品。如疫苗、蛋白、生长因子、干扰素、毒素等等。子、干扰素、毒素等等。（1 1）在在化化学学结结构构上上，生生物物药药物物十十分分接接近近于于体体内内的的正正常常生生理理物物质质，进进入入体体内内后后也也更更易易为为机机体体所所吸吸收收和参与人体的正常代谢与调节。和参与人体的正常代谢与调节。二、生物药物的性质二、生物药物的性质25（2 2）在在药药理理学学上上，生生物物药药物物具具有有更更高高的的生生化化机机制制合理性合理性和和特异治疗有效性特异治疗有效性。（3 3）在在医医疗疗上上，生生物物药药物物具具有有药药理理活活性性高高、针针对对性性强强、毒毒性性低低、副副作作用用小小、疗疗效效可可靠靠

19、及及营营养养价价值值高等特点。高等特点。（4 4）生生物物药药物物的的有有效效成成分分在在生生物物材材料料中中浓浓度度都都很很低，低，杂质含量相对比较高杂质含量相对比较高。二、生物药物的性质二、生物药物的性质26（5 5）生生物物药药物物常常常常是是一一些些生生物物大大分分子子，它它们们不不仅仅分分子子量量大大，组组成成、结结构构复复杂杂，而而且且具具有有严严格格的的空空间构象间构象，以维持其特定的生理功能。，以维持其特定的生理功能。（6 6）生生物物药药物物对对热热、酸酸、碱碱、重重金金属属以以及及pHpH变变化化较较敏敏感感，各各种种生生理理因因素素的的变变化化易易对对生生物物活活性性产产

20、生影响。生影响。（1 1）作为治疗药物）作为治疗药物三、生物药物的用途三、生物药物的用途27（2 2）作为预防药物）作为预防药物（3 3）作为诊断药物）作为诊断药物（4 4）其他用途）其他用途第二节第二节生物药物的质量及控制生物药物的质量及控制2829u生物药物是生物药物是一类特殊药品一类特殊药品，它除用于临床，它除用于临床治疗和诊断以外，还用于健康人特别是儿童治疗和诊断以外，还用于健康人特别是儿童的预防接种，以增强机体对疾病的抵抗力。的预防接种，以增强机体对疾病的抵抗力。生物药物的质量与人们的生命攸关。如许多生物药物的质量与人们的生命攸关。如许多基因工程药物，特别是细胞因子药物都可参基因工程

21、药物，特别是细胞因子药物都可参与人体机能的精细调节，在极微量的情况下与人体机能的精细调节，在极微量的情况下就会产生显著的效应，任何性质或数量上的就会产生显著的效应，任何性质或数量上的偏差，都可能贻误病情甚至造成严重危害。偏差，都可能贻误病情甚至造成严重危害。因此，为了保证用药的因此，为了保证用药的安全安全、合理合理和和有效有效，在，在药品的研制、生产、供应以及临床使用过程中，对生物药药品的研制、生产、供应以及临床使用过程中，对生物药物及其产品进行严格的物及其产品进行严格的全面质量控制全面质量控制和科学管理。和科学管理。一、生物药物质量的重要性与特殊性一、生物药物质量的重要性与特殊性二、药典与生

22、物药物的质量标准二、药典与生物药物的质量标准 新修订新修订药品管理法药品管理法第第3232条规定：条规定：药品必须符合药品必须符合国家药品标准国家药品标准。30u保证用药保证用药安全安全、有效有效，在药品生产、储存、，在药品生产、储存、供应、使用及监督管理过程中应有一个供应、使用及监督管理过程中应有一个统一统一的质量标准的质量标准，以便定期进行严格的检查。，以便定期进行严格的检查。（一）国家药品质量标准（一）国家药品质量标准 国家药品质量标准国家药品质量标准，是国家对药品，是国家对药品质量、规格及检验方法所作的技术规定，质量、规格及检验方法所作的技术规定，是药品生产、供应、使用、检验和药品是药

23、品生产、供应、使用、检验和药品监督管理部门共同遵循的监督管理部门共同遵循的法定技术依据法定技术依据。31 国家药国家药品标准品标准中国中国药典药典局标准局标准部标准部标准国务院药品监督管理部门颁布国务院药品监督管理部门颁布32（二）药典（二）药典（1 1）药典定义）药典定义（2 2）中国药典中国药典历史沿革历史沿革（3 3）中国药典中国药典的主要内容的主要内容 33 “典典”者者，标标准准、法法规规。药药典典是是一一个个国国家家关关于于药药品品标标准准的的法法典典，是是国国家家管管理理药药品品质质量量的的法法定定技技术术标标准准。具具有有法法令令的的约约束束力力。它它代代表表了了一一个个国国家

24、家的的药药品品生生产产、科科技技研研究究和和药药品品管管理理的的水平，是国家标准的最高形式。水平，是国家标准的最高形式。（1 1）药典的定义）药典的定义34 唐唐本本草草亦亦称称唐唐新新修修本本草草，有有时时简简称称新新修修本本草草，是是唐唐高高宗宗显显庆庆四四年年（公公元元659659年年）编编修修成成功功的的，由由唐唐朝朝政政府府颁行颁行，这是国家颁定药典的创始。，这是国家颁定药典的创始。第一部药典：第一部药典：（2 2）中国药典的历史沿革）中国药典的历史沿革35 建国前，建国前，19311931年国民党时期，出版了年国民党时期，出版了中中华药典华药典。主要是模仿英、美国家药典的内容，以西

25、主要是模仿英、美国家药典的内容，以西药为主，收载的我国传统中药寥寥无几，仅药为主，收载的我国传统中药寥寥无几，仅收载了大黄、甘草、薄荷、龙胆等几味中药，收载了大黄、甘草、薄荷、龙胆等几味中药，而且都是为西药处方应用的制剂原料药。而且都是为西药处方应用的制剂原料药。中华人民共和国建国以来，分别出版了中华人民共和国建国以来，分别出版了九九版版中华人民共和国药典中华人民共和国药典，分别是：，分别是：36中国药典中国药典1953 年版年版 合订本合订本 共收载药品共收载药品531种，其中化学种，其中化学药药215种，植物药与油脂类种，植物药与油脂类65种，种，动物药动物药13种，抗生素种，抗生素2种，

26、生物制种，生物制品品25种，各类制剂种，各类制剂211种。种。1952年底执行年底执行37中国药典中国药典 1963年版年版 分为二部分为二部 共收载药品共收载药品1310种种一部一部收载中医常用的中药材收载中医常用的中药材446种和中药成方制剂种和中药成方制剂197种；种；二部二部收载化学药品、生物制品收载化学药品、生物制品667 种。种。1965年年1月月26日执行日执行38中国药典中国药典1977年版年版 分为二部分为二部 共收载药品共收载药品1925 种种一部一部收载中草药材（包括少数民族药收载中草药材（包括少数民族药材）、中草药提取物、植物油脂以及材）、中草药提取物、植物油脂以及一些

27、单味药材制剂等一些单味药材制剂等882 种，成方制种，成方制剂剂270 种，共种，共1152 种。种。二部二部收载化学药品、生物制品等收载化学药品、生物制品等773 种。种。1980年年1月月1日执行日执行39中国药典中国药典1985年版年版分为二部分为二部 共收载药品共收载药品1489 种种一部一部收载中药材、植物油脂及单收载中药材、植物油脂及单味制剂味制剂506 种，中药成方种，中药成方207 种，种，共共713 种。种。二部二部收载化学药品、生物制品等收载化学药品、生物制品等776 种种。1986年年4月月1日执行日执行40中国药典中国药典从从1985年版至年版至2010年版，均年版，均

28、为五年出版一版药典，其中：为五年出版一版药典，其中：中国药典中国药典1985年版，分为二部，年版，分为二部，1986年年4月月1日执行日执行中国药典中国药典1990年版，分为二部，年版，分为二部，1991年年7月月1日执行日执行中国药典中国药典1995年版，分为二部，年版，分为二部，1996年年4月月1日执行日执行中国药典中国药典2000年版，分为二部，年版，分为二部，2000年年7月月1日执行日执行41中国药典中国药典2005年版年版 共收载共收载3214 种种 Ch.PCh.P.（20052005）一部一部（中药）（中药）二部二部（化学药）（化学药）三部三部（生物制品）（生物制品）收载收载

29、1146 种种收载收载1967 种种收载收载101 种种42药药典典主主要要内内容容（1）凡例凡例 （3 3）各论）各论 （4 4）附录）附录 （5 5）索引）索引 （3）中国药典中国药典2010年版三部的内容年版三部的内容链接药典43（2 2）通则）通则 是为解释和使用是为解释和使用中国药典中国药典正确进行质量检定正确进行质量检定提供的提供的基本原则基本原则，并把与正文品种、附录及质量检，并把与正文品种、附录及质量检定有关的定有关的共性问题共性问题加以规定，避免在全书中重复说明。加以规定，避免在全书中重复说明。凡例中的有关规定具有凡例中的有关规定具有法定法定的约束力。的约束力。药典药典201

30、02010年版三部凡例总计七类，二十二条年版三部凡例总计七类，二十二条凡例凡例44 主要包括：主要包括：生物制品生产检定用菌毒种管理规程生物制品生产检定用菌毒种管理规程 生物制品国家标准物质制备和标定规程生物制品国家标准物质制备和标定规程 生物制品分批规程生物制品分批规程 生物制品分装和冻干规程生物制品分装和冻干规程 生物制品包装规程生物制品包装规程 生物制品贮藏和运输规程生物制品贮藏和运输规程 通则通则45 是药典的主要内容，为所收载药品及是药典的主要内容，为所收载药品及制剂的质量标准。制剂的质量标准。各论各论46 制剂通则制剂通则通用检测方法通用检测方法 指导原则指导原则附附录录的的组组成

31、成附录（附录（AppendixAppendix）47（三）生物制品的标准化（三）生物制品的标准化48生物制品生物制品检定检定规程规程 19521952年我国颁布了年我国颁布了生物制品及检定规程草生物制品及检定规程草案案初步形成我国统初步形成我国统的生产方式和质量标准，的生产方式和质量标准，19591959年出版了我国第一部年出版了我国第一部生物制品检定规程生物制品检定规程，其后于其后于19791979年、年、19901990年、年、19951995年出版了年出版了3 3版版中中国生物制品规程国生物制品规程，并自，并自19901990年起分为一、二部，年起分为一、二部，部收载预防、治疗和体内诊断

32、制品，二部收载部收载预防、治疗和体内诊断制品，二部收载体外诊断制品。体外诊断制品。（三）生物制品的标准化（三）生物制品的标准化49生物制品生物制品检定检定规程规程 中国生物制品规程中国生物制品规程20002000年版经第三届中年版经第三届中国生物制品标准化委员会审议通过，并经国家药国生物制品标准化委员会审议通过，并经国家药品监督管理局批准颁布。该版规程为原中国生品监督管理局批准颁布。该版规程为原中国生物制品规程一、二部的合订本，并经修订、删物制品规程一、二部的合订本，并经修订、删减、增补。规程分为正式规程和暂行规程两部分。减、增补。规程分为正式规程和暂行规程两部分。（三）生物制品的标准化（三）

33、生物制品的标准化50中国药典（三部）中国药典（三部）2005 2005年，将年，将中国生物制品规程中国生物制品规程及中国药及中国药典收载的生物制品合并，载入版典收载的生物制品合并，载入版中国中国药典药典20052005年版第三部。年版第三部。20102010年版进行了增修订。年版进行了增修订。第三节第三节生物药物的分析检验生物药物的分析检验51生物药物分析：生物药物分析：是一门研究和发展生是一门研究和发展生物药物全面质量控制的物药物全面质量控制的“方法学科方法学科”。它主要运用化学、物理化学或生物化它主要运用化学、物理化学或生物化学的方法和技术研究生物药物及其制学的方法和技术研究生物药物及其制

34、剂的质量控制方法的学科。剂的质量控制方法的学科。52一、药物分析与生物药物分析一、药物分析与生物药物分析53二、生物药物分析与检验的特点二、生物药物分析与检验的特点1 1、需进行相对分子质量的测定、需进行相对分子质量的测定 除除氨氨基基酸酸、核核苷苷酸酸、辅辅酶酶及及甾甾体体激激素素等等属属化化学学结结构构明明确确的的小小分分子子化化合合物物外外，大大部部分分为为大大分分子子物物质质，其其分分子子量量一一般般几几千千至至几几十十万万。对对大大分分子子的的药药物物而而言言，即即使使组组分分相相同同，往往往往由于分子量不同而产生不同的生理活性。由于分子量不同而产生不同的生理活性。54二、生物药物分

35、析与检验的特点二、生物药物分析与检验的特点2 2、需检查生物活性、需检查生物活性 在在制制备备多多肽肽或或蛋蛋白白质质类类药药物物时时，有有时时因因工工艺艺条条件件的的变变化化，导导致致活活性性多多肽肽或或蛋蛋白白质质失失活活。因因此此，对对这这类类生生物物药药物物，除除了了用用通通常常采采用用的的理理化化法法检检验验外外，尚尚需需用用生生物物检检定定法法进进行行检检定定，以证实其生物活性。以证实其生物活性。55二、生物药物分析与检验的特点二、生物药物分析与检验的特点3 3、需做安全性检查、需做安全性检查 由于生物药物的性质特殊，生产工艺复杂，由于生物药物的性质特殊，生产工艺复杂，易引入特殊杂

36、质和污染物，故常需做安全性易引入特殊杂质和污染物，故常需做安全性检查，如热原检查、过敏感试验、异常毒性检查，如热原检查、过敏感试验、异常毒性试验等。试验等。56二、生物药物分析与检验的特点二、生物药物分析与检验的特点4 4、需做效价测定、需做效价测定 生化药物多数可通过含量测定，以表生化药物多数可通过含量测定，以表明其主药的含量。但对某些药物（如酶明其主药的含量。但对某些药物（如酶类药物）需进行效价测定或酶活力测定，类药物）需进行效价测定或酶活力测定，以表明其有效成分含量的高低。以表明其有效成分含量的高低。57二、生物药物分析与检验的特点二、生物药物分析与检验的特点 5 5、要用生化法确证结构

37、、要用生化法确证结构 在大分子生物药物中，由于在大分子生物药物中，由于有效结构或分有效结构或分子量不确定子量不确定，其结构的确证很难沿用元素分，其结构的确证很难沿用元素分析、析、IRIR、UVUV、NMRNMR、MSMS等方法加以证实，等方法加以证实，往往还要用往往还要用生化法生化法如氨基酸序列分析等方法如氨基酸序列分析等方法加以证实。加以证实。基基 本本 程程 序序 取样取样 鉴别鉴别 检查检查 含量测定含量测定 检验报告书检验报告书 三三、生物药物分析的程序及内容生物药物分析的程序及内容：58（一）取样（一）取样 要考虑取样的科学性、真实性与代表性要考虑取样的科学性、真实性与代表性 根据药

38、物性质、不同剂型根据药物性质、不同剂型,采用不同的取样方法采用不同的取样方法抽取不同的样品量。抽取不同的样品量。均匀性均匀性合理性合理性取样原则取样原则取样程序取样程序SFDASFDA药品抽样指导原则药品抽样指导原则59 （二二）鉴别鉴别60鉴别就是依据生物药物的化学结构和理化性质，鉴别就是依据生物药物的化学结构和理化性质，采用化学法、物理法及生物学方法来确证生采用化学法、物理法及生物学方法来确证生物药物的物药物的真伪真伪。通常需用标准品或对照品在同一条件下进行对通常需用标准品或对照品在同一条件下进行对照试验。照试验。药物的鉴别不是由一项试验就能完成，而是采药物的鉴别不是由一项试验就能完成，而

39、是采用一组试验项目全面评价一种药物，力求使用一组试验项目全面评价一种药物，力求使结论正确无误。结论正确无误。常用的鉴别方法常用的鉴别方法61理化鉴别法理化鉴别法p化学反应法化学反应法p光谱法光谱法p色谱法色谱法生化鉴别法生化鉴别法p酶法酶法p电泳法电泳法 生物鉴别法生物鉴别法p血清学法血清学法p生物学法生物学法 （1 1）化学鉴别法）化学鉴别法62通常利用药物与某试剂在一定条件通常利用药物与某试剂在一定条件下反应，生成有颜色的产物或沉淀下反应，生成有颜色的产物或沉淀进行鉴别。进行鉴别。1 1、理化鉴别法、理化鉴别法举例举例63p胰蛋白酶的鉴别胰蛋白酶的鉴别：取本品约取本品约2mg，置白，置白色

40、点滴板上，加对甲苯磺酰色点滴板上，加对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯精氨酸甲酯盐酸盐试液盐酸盐试液0.2ml，摇匀，即显紫色。，摇匀，即显紫色。（呈（呈色法）色法）p胃蛋白酶的鉴别胃蛋白酶的鉴别：取本品的水溶液，加鞣取本品的水溶液，加鞣酸、没食子酸或多数重金属盐的溶液，即酸、没食子酸或多数重金属盐的溶液，即发生沉淀。发生沉淀。（沉淀法）（沉淀法）举例举例64p硫酸软骨素：硫酸软骨素：为大分子酸性黏多糖类药物，为大分子酸性黏多糖类药物，其分子中具有半缩醛基结构，有还原性，其分子中具有半缩醛基结构，有还原性，与碱性酒石酸铜试液反应，加热，即产生与碱性酒石酸铜试液反应，加热，即产生氧化亚铜的氧化亚铜的红色

41、沉淀红色沉淀。可用于硫酸软骨素。可用于硫酸软骨素的鉴别。的鉴别。（2 2）光谱法）光谱法紫外分光光度法紫外分光光度法65利用药物分子中含有共轭体系，能吸利用药物分子中含有共轭体系，能吸收紫外光的基团而显示特征吸收光谱，收紫外光的基团而显示特征吸收光谱，可作为生物药物鉴别的依据。可作为生物药物鉴别的依据。66三磷酸腺苷二钠的分子中具有共轭系统，能吸收紫外光。本品的0.01molL盐酸水溶液（20gml），在（2571）nm的波长处有最大吸收。A250nmA260nm的值应为0.170.27。举例：举例：（3 3）色谱法）色谱法纸色谱法纸色谱法67多糖中单糖的组成分析多糖中单糖的组成分析多糖在矿酸

42、存在下水解成单糖，单糖在浓酸中加热多糖在矿酸存在下水解成单糖，单糖在浓酸中加热脱水生成糖醛或其衍生物，它们在脱水生成糖醛或其衍生物，它们在-萘酚作用下生萘酚作用下生成有色物质，可用于糖类的一般鉴别。成有色物质，可用于糖类的一般鉴别。p样品的制备：样品的制备：取样品取样品20ml，加，加0.51molL硫酸硫酸溶液溶液2ml，充氮除氧封管，在，充氮除氧封管，在100水解水解11h，水解，水解液用碳酸钡中和，离心过滤，滤液进行以下分离鉴液用碳酸钡中和，离心过滤，滤液进行以下分离鉴定：定：68p纸色谱法：纸色谱法：取滤液取滤液（多糖水解液多糖水解液）点滴于滤纸上，同点滴于滤纸上，同时点滴时点滴D-葡

43、萄糖、葡萄糖、D-甘露糖、甘露糖、L-阿拉伯糖、阿拉伯糖、L-鼠李糖、鼠李糖、D-木糖、木糖、D-半乳糖等单糖对照品溶液，分别用：半乳糖等单糖对照品溶液，分别用：正丁正丁醇醇丙酮丙酮水水（4：5：1）；乙酸乙酯乙酸乙酯吡啶吡啶 水水（10：4：3）；正丁醇正丁醇冰醋酸冰醋酸水水（：1：1）；正丁醇正丁醇浓氨水浓氨水水（水（12：10：1）；乙酸乙酯乙酸乙酯吡啶吡啶乙酸乙酸水水（10：11：2：3）为展开剂为展开剂（也可用其他分也可用其他分离单糖的展开剂离单糖的展开剂）进行纸色谱分离。展开后以苯胺进行纸色谱分离。展开后以苯胺邻邻苯二甲酸的正丁醇饱和溶液喷雾显色。根据样品和对照苯二甲酸的正丁醇饱和

44、溶液喷雾显色。根据样品和对照品的品的Rf值及斑点颜色进行鉴定。值及斑点颜色进行鉴定。（3 3）色谱法）色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法69利用对照品溶液和供试品溶液色谱图的保留时间和肽图谱的一致性进行鉴别。HPLC为越来越多的国家药典采用来进行生物药物的分析，是生物药物最常用的一种分析方法。2 2、生化鉴别法生化鉴别法 （1 1）酶酶法法：尿尿激激酶酶是是专专属属性性较较强强的的蛋蛋白白水水解解酶酶，根根据据尿尿激激酶酶能能激激活活牛牛纤纤维维蛋蛋白白溶溶酶酶原原，而而具具有有相相同同作作用用的的链链激激酶酶不不能能激激活活牛牛纤纤维维蛋蛋白白溶溶酶酶原原而而加加以以区区别别，并并用用直直接

45、接观观察察溶溶解解纤纤维蛋白作用的气泡上升法作为判断指标。维蛋白作用的气泡上升法作为判断指标。70（2 2）电泳法）电泳法 肝素的鉴别采用肝素的鉴别采用糖凝胶电泳法糖凝胶电泳法：肝素是由：肝素是由D-D-硫酸氨基葡萄糖和葡萄糖醛酸分子组成的硫酸氨基葡萄糖和葡萄糖醛酸分子组成的酸性粘多糖，其水溶液带强负电荷，于琼脂酸性粘多糖，其水溶液带强负电荷，于琼脂凝胶板上，在电场作用下，向正极方向移动，凝胶板上，在电场作用下，向正极方向移动，与肝素国家标准品对照，其移动位置应相一与肝素国家标准品对照，其移动位置应相一致。致。713 3、生物鉴别法：生物鉴别法：利用生物体进行试验来鉴别药物。利用生物体进行试验

46、来鉴别药物。例如，胰岛素可用例如，胰岛素可用小鼠惊厥试验小鼠惊厥试验鉴别法：鉴别法：根据胰岛素的降血糖作用，给小鼠皮下注射根据胰岛素的降血糖作用，给小鼠皮下注射供试品液应使其发生惊厥来鉴别。供试品液应使其发生惊厥来鉴别。72 （三三）检查检查73u安全性检查安全性检查u有效性检查有效性检查u纯度检查纯度检查u均一性检查均一性检查u安全性检查安全性检查1 1、热原检查法热原检查法2 2、无菌检查法无菌检查法3 3、异常毒性试验异常毒性试验4 4、过敏试验过敏试验5 5、降压物质试验、降压物质试验6 6、基因工程药物中可能杂质与污染物检查、基因工程药物中可能杂质与污染物检查7 7、致突变试验、致突

47、变试验8 8、生殖毒性试验、生殖毒性试验 74u纯度检查纯度检查 杂质检查杂质检查75定义：定义：杂质是指药物中存在的杂质是指药物中存在的无治疗作用无治疗作用或或影影响药物的稳定性和疗效响药物的稳定性和疗效，甚至甚至对人体健康有对人体健康有害害的物质。的物质。在不影响药物疗效、不发生毒性和保证药物质在不影响药物疗效、不发生毒性和保证药物质量的原则下量的原则下，药品质量标准可以允许生产过药品质量标准可以允许生产过程和贮藏过程中引入的微量杂质的存在。程和贮藏过程中引入的微量杂质的存在。通常按照药品质量标准规定的项目进行通常按照药品质量标准规定的项目进行“限度限度检查检查”。杂质检查项目杂质检查项目

48、76生物药物杂质检查的生物药物杂质检查的项目项目通常包括：通常包括：p一般杂质检查一般杂质检查p特殊杂质检查特殊杂质检查一般杂质检查一般杂质检查一般杂质一般杂质指在自然界中分布广泛指在自然界中分布广泛,在多种在多种药物的生产或贮存过程中容易引入的杂质。药物的生产或贮存过程中容易引入的杂质。检查项目包括氯化物、硫酸盐、磷酸盐、检查项目包括氯化物、硫酸盐、磷酸盐、铵盐、铁盐、重金属、酸度、溶液的澄清铵盐、铁盐、重金属、酸度、溶液的澄清度或溶液的颜色、水分及干燥失重、炽灼度或溶液的颜色、水分及干燥失重、炽灼残渣等。残渣等。77特殊杂质检查特殊杂质检查 特殊杂质特殊杂质是指药品在生产和贮藏过程中可是指

49、药品在生产和贮藏过程中可能引入的特有杂质。能引入的特有杂质。许多药物是从生物组织中提取或用微生物许多药物是从生物组织中提取或用微生物发酵法制得，药物中易残存一些杂质或其他发酵法制得，药物中易残存一些杂质或其他成分。成分。78u均一性检查（制剂）均一性检查（制剂）79重量差异重量差异装量差异装量差异含量均匀度含量均匀度（四四）含量（效价）测定含量（效价）测定含量含量表示表示方法方法百分含量，适用于结构明确的小分子百分含量，适用于结构明确的小分子药物或经水解后变成小分子的药物。药物或经水解后变成小分子的药物。生物效价或酶活力，适用于酶类、蛋生物效价或酶活力，适用于酶类、蛋白质类等药物。白质类等药物

50、。80-准确测定有效成分的含量准确测定有效成分的含量 常用的含量测定方法常用的含量测定方法81理化法理化法p重量法重量法p滴定分析法滴定分析法p光谱分析法（光谱分析法（紫外紫外可见分光光可见分光光度法、荧光分光光度法）度法、荧光分光光度法）p色谱分析法（高效液相色谱法）色谱分析法（高效液相色谱法）常用的含量测定方法常用的含量测定方法82生化法生化法p酶法（包括：酶活力测定法、酶分析法酶法（包括：酶活力测定法、酶分析法）酶法测定生物药物是比较普遍一种分析方法，也酶法测定生物药物是比较普遍一种分析方法，也是药典收载的方法；是药典收载的方法；p电泳法（类型：纸电泳法、醋酸纤维素薄膜电泳电泳法（类型：