铜绿假单胞菌讲稿.ppt

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1、关于铜绿假单胞菌第一页，讲稿共四十二页哦1.0.5-0.8*1.5-3.0微米的杆菌微米的杆菌2.细胞单个细胞单个3.成对或成短链。以极生的单鞭毛运动（有二成对或成短链。以极生的单鞭毛运动（有二个或二个以上的极生鞭毛的细胞，但不常见）个或二个以上的极生鞭毛的细胞，但不常见）4.在中性或碱性培养基种呈蓝色：在酸性培养基在中性或碱性培养基种呈蓝色：在酸性培养基种呈红色种呈红色5.专性好氧，在硝酸盐培养基中除外。专性好氧，在硝酸盐培养基中除外。6.最适温度约最适温度约37。41生长而生长而4不生长。不生长。7.能从土壤和水中分离到能从土壤和水中分离到8.侵袭性弱，一般认为属条件致病菌侵袭性弱，一般认

2、为属条件致病菌铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌第二页，讲稿共四十二页哦菌落特征第三页，讲稿共四十二页哦1.正常人皮肤，尤其潮湿部位如腋下、会阴部及耳道内，正常人皮肤，尤其潮湿部位如腋下、会阴部及耳道内，呼吸道和肠道均有该菌存在，但分离率较低。呼吸道和肠道均有该菌存在，但分离率较低。2.医源性感染医源性感染3.术后操作感染（气管切开、保留导尿管等）术后操作感染（气管切开、保留导尿管等）4.人、病人与病人的接触也为传播途径之一人、病人与病人的接触也为传播途径之一感染途径：感染途径：当机体免疫功能受损或缺损时，可引起严重的甚至致死性的感染。当机体免疫功能受损或缺损时，可引起严重的甚至致死性的感染。第四页，讲

3、稿共四十二页哦检查意义：人及动物的皮肤、肠道、上呼吸道等处都有该菌存在。绿脓杆菌抵抗力较强，湿热551小时才被杀死。对紫外线不敏感。对多种抗生素易产生耐药性。本菌仅于人体防御功能改变或直接进入机体（如通过泌尿道插管及静脉导管、呼吸道的通气设备和其他治疗检查方法）以及混合感染时才具有致病性。长期使用抗生素、肾上腺皮质激素、免疫抑制剂或大面积烧伤、肾功能不全、心脏病、慢性支气管肺疾患的患者易继发绿脓杆菌的感染。绿脓杆菌是医院内感染的重要病原菌之一。第五页，讲稿共四十二页哦胨 20.0g 磷酸二氢钾 1.3g乳糖 5.0g 牛胆盐 2.0g氯化钠 5.0g(或去氧胆酸钠）（0.5g)磷酸氢二钾 4.

4、0g 水 1000ml除乳糖、牛胆盐或去氧胆酸钠外，取上述成分，混合，微温溶解，调节P H值使灭菌后为7.4 0.2，煮沸，滤清，加入乳糖、牛胆盐或去氧胆酸钠，分装，灭菌。培养基成分：牛胆盐为抑菌剂，用于抑制一些杂菌的生长牛胆盐为抑菌剂，用于抑制一些杂菌的生长。出处：中国人民共和国药典2010版二部 附录 XI J 微生物限度检查法 P114胆盐乳糖培养基胆盐乳糖培养基（BL）第六页，讲稿共四十二页哦培养基成分：溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基胨 10g 溴化十六烷基三甲铵 0.3g牛肉浸出粉 3g 琼脂 1520g氯化钠 5g 水 1000ml除琼脂外，取上述成分，混

5、合，微温使溶解，调节pH值使灭菌后为7.50.1，加入琼脂，加热溶化后，分装，灭菌，冷至60，倾注平皿。溴化十六烷基三甲铵具有优良的渗透、柔化、乳化、抗静电、生物降解性及杀菌等性能。本产品化学稳定性好，耐热、耐光、耐压、耐强酸强碱。溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基是铜绿假单胞菌的选择性培养基，也是美国药典和中国药典等国推荐使用于食品、药品中铜绿假单胞菌检测的培养基。书本P161 5.14第七页，讲稿共四十二页哦培养基成分：营养琼脂培养基胨 10g 牛肉浸出粉 3g氯化钠 5g 琼脂1520g水 1000ml（以营养肉汤培养基的处方及制法）取上述成分，混合，煮沸溶解后，调节pH值使灭菌后为7.20.

6、2，分装，灭菌。书本P159 5.2第八页，讲稿共四十二页哦绿脓菌素培养基成分：PDP斜面，是否有色素，有，用氯仿3-5ml萃取，用无菌玻璃棒搅碎培养基、混匀，色素完全在氯仿层。吸管把氯仿层移到另一试管，加入盐酸1M1ml，静置后，盐酸出现粉红为阳性，无粉红为阴性，阴性斜面培养1-2天再重新做一遍。如果仍是阴性。做下一步试验。绿脓菌素从有机相转到酸性水相中会由蓝绿色变为粉红色。绿脓菌素(pyocyanin)测定用培养基(PDP琼脂)胨 20g 甘油 10ml氯化镁(无水)1.4g 琼脂 1820g硫酸钾 10g 水 1000ml取胨、氯化镁和硫酸钾加入水中，微温使溶解，调节pH值使灭菌后为7.

7、30.1，加入甘油及琼脂，加热溶化，混匀，分装于试管，灭菌，置成斜面。书本P163 5.26第九页，讲稿共四十二页哦样样品品10gBLBL供试液供试液缓冲液缓冲液100ml阴性阴性10ml10ml培养温度：培养温度：36培养时间：培养时间：1824h（必要时可延（必要时可延长至长至48h）增菌培养十六烷基三甲基溴化铵平板十六烷基三甲基溴化铵平板十六烷基三甲基溴化铵平板十六烷基三甲基溴化铵平板营养琼脂斜面营养琼脂斜面BL阳性阳性第十页，讲稿共四十二页哦供试品供试品供试液供试液胆盐乳糖增菌液胆盐乳糖增菌液十六烷基三甲基溴化铵平板十六烷基三甲基溴化铵平板3611824h营养琼脂斜面营养琼脂斜面361

8、24h氧化酶试验氧化酶试验革兰氏染色镜检革兰氏染色镜检阴性阴性报告报告36124h第十一页，讲稿共四十二页哦氧化酶试验氧化酶试验阴性阴性阳性阳性报告报告绿脓菌素试验绿脓菌素试验阳性阳性阴性阴性报告报告42生长试验生长试验硝酸盐还原试验硝酸盐还原试验明胶液化试验明胶液化试验报告报告第十二页，讲稿共四十二页哦生物学特性非发酵革兰氏阴性杆菌常见的条件致病菌菌体的一端有单鞭毛在暗视野显微镜或相差显微镜下观察可见细菌运动活泼。第十三页，讲稿共四十二页哦本菌为专性需氧菌，生长温度范围2542，最适生长温度为2530，特别是该菌在4不生长而在42可以生长的特点可用以鉴别。在普通培养基上可以生存并能产生水溶性

9、的色素，如绿脓素（pyocynin）与带荧光的水溶性荧光素（pyoverdin）等。在血平板上会有透明溶血环。该菌含有O抗原（菌体抗原）以及H抗原（鞭毛抗原）。O抗原包含两种成分：一种是其外膜蛋白，为保护性抗原；另一种是脂多糖，有特异性。O抗原可用以分型。第十四页，讲稿共四十二页哦铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌形态形态：G-b 菌体长短不一菌体长短不一 球杆状或长丝状球杆状或长丝状 单端单鞭毛单端单鞭毛 动力动力+无芽胞无芽胞特性特性：专性需氧：专性需氧 营养要求不高营养要求不高 35+4 42+可形成多种不同形态的菌落可形成多种不同形态的菌落 产多种色素产多种色素(主要为绿脓素、荧光素主要为绿脓素

10、、荧光素)第十五页，讲稿共四十二页哦实验室检查及其它检查标本采集采自不同感染部位的各种标本，包括血液、尿液、痰标本、脓汁、穿刺液等。还包括来自医院环境中的各种标本如水、空气、物体表面采样等。染色镜检为革兰阴性菌，菌体大小（1.55.0)um宽(0.51)um，细长且长短不一，有时呈球杆状或线状，成对或短链状排列。菌体的一端有单鞭毛，无芽胞。第十六页，讲稿共四十二页哦发酵型 氧化型 产碱型第十七页，讲稿共四十二页哦分离培养本菌生长对营养要求不高。对有正常菌群存在的临床标本或采自环境中的标本应接种选择性培养基如麦康凯琼脂培养基（MAC）；对无正常菌群存在的临床标本如血液、脑脊液、穿刺液等可接种普通

11、或血琼脂培养基。第十八页，讲稿共四十二页哦在普通琼脂培养基上生长1824h可以见到扁平、湿润的菌落，该菌所产生的带荧光的水溶性青脓素与绿脓素相结合将使得培养基呈亮绿色；在血琼脂平板上生长时可以见到在菌落的周围有溶血环，菌落呈金属光泽；如果是在液体培养基中则呈浑浊状生长，在液体表面形成菌落，而在培养基底部细菌的生长不良。第十九页，讲稿共四十二页哦假单胞菌属Pseudomonas种类：种类：铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)荧光假单胞菌荧光假单胞菌(P.fluorescence)恶臭假单胞菌恶臭假单胞菌(P.putica)斯氏假单胞菌斯氏假单胞菌(P.stutizeri)曼多辛假

12、单胞菌曼多辛假单胞菌(P.mendocina)产碱假单胞菌产碱假单胞菌(P.alcaligenes)假产碱假单胞菌假产碱假单胞菌(P.pseudoalcaligenes)第二十页，讲稿共四十二页哦非发酵菌分离率第二十一页，讲稿共四十二页哦假单胞菌属Pseudomonas共同特点：共同特点：G-b 菌体细长菌体细长 单端单端鞭毛鞭毛 无芽胞无芽胞 专性需专性需O2 营养要求不高营养要求不高 35生长，少数生长，少数4、42 生长生长 葡萄糖葡萄糖O/动力动力+氧化酶氧化酶+可产多种色素：绿脓素可产多种色素：绿脓素 荧光素荧光素 脓玉红素脓玉红素 第二十二页，讲稿共四十二页哦 各种菌产生的色素 菌

13、名菌名 色素色素 颜色颜色铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌 绿脓素、红脓素、青脓素、荧光素绿脓素、红脓素、青脓素、荧光素 蓝、红、黑、黄色蓝、红、黑、黄色荧光假单胞菌荧光假单胞菌 荧光素荧光素 黄绿色黄绿色恶臭假单胞菌恶臭假单胞菌 荧光素荧光素 黄绿色黄绿色斯氏假单胞菌斯氏假单胞菌 未定名黄色素未定名黄色素 黄色黄色洋葱伯克霍尔德菌洋葱伯克霍尔德菌 未定名黄色素、紫色素未定名黄色素、紫色素 黄色、紫色黄色、紫色腐败希瓦讷拉菌腐败希瓦讷拉菌 未定名色素未定名色素 淡红褐色淡红褐色 第二十三页，讲稿共四十二页哦 各种标本各种标本 血平板和血平板和Mac平板平板 可疑菌落可疑菌落涂片革兰染色涂片革兰染色革兰

14、阴性杆菌革兰阴性杆菌 氧化酶氧化酶(+)、OF：O 非发酵菌鉴定系统鉴定到种非发酵菌鉴定系统鉴定到种 微生物检验程序微生物检验程序第二十四页，讲稿共四十二页哦生化反应：生化反应：氧化酶氧化酶+OF：O 硝还硝还+N2+液化明胶液化明胶+枸橼酸盐枸橼酸盐+精双水解精双水解+乙酰胺酶乙酰胺酶+吲哚吲哚-第二十五页，讲稿共四十二页哦电镜图铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌第二十六页，讲稿共四十二页哦铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌抗原：抗原：O抗原抗原(外膜蛋白外膜蛋白-保护性抗原保护性抗原 脂多糖脂多糖-型特异性型特异性)H抗原抗原 血清学分型血清学分型 抵抗力：抵抗力：抵抗力强抵抗力强 耐干燥耐干燥 不耐热不耐热

15、 多重耐药多重耐药 在室温水中长期生存在室温水中长期生存 4不生长不生长 第二十七页，讲稿共四十二页哦致病性 广泛存在环境中的广泛存在环境中的条件致病菌，条件致病菌，是院内感染是院内感染 主要病原菌主要病原菌 可引起皮肤感染、呼吸道感染、泌尿道感染、可引起皮肤感染、呼吸道感染、泌尿道感染、烧伤感染、囊性纤维变性等烧伤感染、囊性纤维变性等 有多种毒力因子：包括菌毛、有多种毒力因子：包括菌毛、荚膜多糖、荚膜多糖、内内 毒素、外毒素、毒素、外毒素、绿脓菌素、绿脓菌素、蛋白酶、磷脂酶等蛋白酶、磷脂酶等铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌第二十八页，讲稿共四十二页哦粘附素：粘附素：菌毛的神经氨酸酶分解上皮细胞表面的

16、神经菌毛的神经氨酸酶分解上皮细胞表面的神经氨酸促进细菌侵入氨酸促进细菌侵入荚膜：荚膜：多糖类物质抗吞噬细胞的吞噬作用；使细菌锚泊在多糖类物质抗吞噬细胞的吞噬作用；使细菌锚泊在细胞表面，与呼吸道感染有关细胞表面，与呼吸道感染有关内毒素、外毒素内毒素、外毒素绿脓菌素：绿脓菌素：绿色色素，由铜绿假单胞菌的绿色色素，由铜绿假单胞菌的RpoS基因基因编码产生的代谢产物，具有氧化还原活性的化合物，编码产生的代谢产物，具有氧化还原活性的化合物，能催化超氧化物和过氧化氢产生有毒氧基团，引起能催化超氧化物和过氧化氢产生有毒氧基团，引起组织损伤。在致病中起重要作用组织损伤。在致病中起重要作用弹性蛋白酶：弹性蛋白酶

17、：降解弹性蛋白，引起肺实质损伤和出血；降解弹性蛋白，引起肺实质损伤和出血；降解补体和白细胞蛋白酶抑制物；可与相应抗体形成降解补体和白细胞蛋白酶抑制物；可与相应抗体形成复合物，沉积于感染组织中复合物，沉积于感染组织中磷脂酶磷脂酶C第二十九页，讲稿共四十二页哦微生物检验采集标本：各种临床标本采集标本：各种临床标本 医疗器械医疗器械 环境用品环境用品检验方法：直接镜检检验方法：直接镜检 分离培养分离培养(血平、血平、MAC平板平板)鉴定鉴定 分型：血清学分型、质粒指纹图谱分型、分型：血清学分型、质粒指纹图谱分型、脉冲场凝胶电泳分型等脉冲场凝胶电泳分型等第三十页，讲稿共四十二页哦分离培养普平：普平：1

18、8-24h圆形圆形 大小不一大小不一 边缘不整边缘不整 扁平扁平 湿润湿润 常呈融合态常呈融合态 琼脂被染成绿或黄琼脂被染成绿或黄绿绿 血平：血平：扁平扁平 湿润湿润 有有金属光泽金属光泽 琼脂被染成琼脂被染成蓝蓝 绿或灰绿绿或灰绿 有溶血环有溶血环 MACc平：微小无光泽平：微小无光泽半透明半透明 48h后菌落呈后菌落呈棕色棕色 第三十一页，讲稿共四十二页哦鉴定初步鉴定初步鉴定 菌体形态菌体形态 菌落特征菌落特征 产色素产色素 气味气味 氧氧化酶化酶最终鉴定最终鉴定 非发酵菌生化鉴定系统非发酵菌生化鉴定系统 API-NE试条试条 第三十二页，讲稿共四十二页哦细菌耐药机制细菌耐药机制外膜通透性

19、降低外膜通透性降低产生灭活酶或钝化酶产生灭活酶或钝化酶主动外排系统将抗生素泵出胞外主动外排系统将抗生素泵出胞外抗菌药物作用靶位改变抗菌药物作用靶位改变膜孔蛋白突变膜孔蛋白突变生物膜屏障作用生物膜屏障作用各种抗生素治疗铜绿假单胞菌所致感染过程中都可能各种抗生素治疗铜绿假单胞菌所致感染过程中都可能发生耐药。初代敏感菌株在治疗发生耐药。初代敏感菌株在治疗34天后可能发生耐天后可能发生耐药，有必要重复分离菌株药，有必要重复分离菌株本菌对多种抗生素天然耐药，常用三代头孢和氨基糖苷类联本菌对多种抗生素天然耐药，常用三代头孢和氨基糖苷类联合治疗合治疗第三十三页，讲稿共四十二页哦鉴定结果分析鉴定结果分析从临床

20、标本中分离出来的铜绿假单胞从临床标本中分离出来的铜绿假单胞菌，需要排除污染因素菌，需要排除污染因素铜绿假单胞菌下呼吸道感染需连续铜绿假单胞菌下呼吸道感染需连续三次痰培养阳性才能确立。三次痰培养阳性才能确立。第三十四页，讲稿共四十二页哦n典型型典型型n大肠菌样型大肠菌样型n粘液型粘液型n侏儒型侏儒型n粗糙型粗糙型铜绿的菌落分型第三十五页，讲稿共四十二页哦粘液型（麦康凯平板）粘液型（血平板）菌落光滑凸起成粘液状第三十六页，讲稿共四十二页哦侏儒型（麦康凯平板）细小，无光泽半透明菌落第三十七页，讲稿共四十二页哦典型型（麦康凯平板）菌落呈灰绿色 大小不一扁平湿润 边缘不规则呈伞状伸展 表面常可见金属光泽第三十八页，讲稿共四十二页哦典型型（普通平板上）产绿脓素琼脂染成黄绿色第三十九页，讲稿共四十二页哦粗糙型（麦康凯平板）菌落中央凸起边缘扁平表面粗糙第四十页，讲稿共四十二页哦大肠型（麦康凯平板）菌落圆形凸起似大肠埃希菌菌落第四十一页，讲稿共四十二页哦18.10.2022感谢大家观看第四十二页，讲稿共四十二页哦