脂肪肝的实验研究教学提纲.ppt

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1、脂肪肝的实验研究概 述2 脂肪肝是仅次于病毒性肝炎的第二位脂肪肝是仅次于病毒性肝炎的第二位常见肝病，是二十一世纪肝病领域面临的常见肝病，是二十一世纪肝病领域面临的新挑战。对于脂肪肝的防治不仅是一个医新挑战。对于脂肪肝的防治不仅是一个医学问题，更是一个社会问题。脂肪肝已成学问题，更是一个社会问题。脂肪肝已成为消化、内分泌、营养、心血管等多学科为消化、内分泌、营养、心血管等多学科共同关注的问题。共同关注的问题。320112011年年7 7月月 重庆重庆 第四届全国脂肪性肝病学术会议第四届全国脂肪性肝病学术会议 解放军解放军302302医院病理诊断与研究中心主医院病理诊断与研究中心主任、军事医学科学

2、院博士生导师任、军事医学科学院博士生导师赵景民教赵景民教授授指出，未来十年，我国将由指出，未来十年，我国将由“病毒性肝病毒性肝炎大国炎大国”转为转为“脂肪性肝病大国脂肪性肝病大国”，应高，应高度重视脂肪性肝病的防治度重视脂肪性肝病的防治 。4正常肝脏正常肝脏脂肪肝脂肪肝5脂肪肝大体标本切面6大泡、小泡性肝大泡、小泡性肝脂肪变混杂脂肪变混杂小泡性肝脂肪变小泡性肝脂肪变7重度肝脂肪变，脂变肝细胞达重度肝脂肪变，脂变肝细胞达90%8脂肪肝基本概念n狭义的定义狭义的定义 肝细胞内的脂肪含量（主要是肝细胞内的脂肪含量（主要是甘油三酯甘油三酯TGTG）肝脏湿重的）肝脏湿重的5%5%，或肝组织学上每单，或肝

3、组织学上每单位面积位面积30%30%的肝实质细胞出现脂肪变性时，的肝实质细胞出现脂肪变性时，称为称为脂肪性肝病脂肪性肝病(fatty liver disease(fatty liver disease ，FLD)FLD)，简称，简称脂肪肝。脂肪肝。9脂肪肝基本概念n广义的定义广义的定义 脂肪肝是遗传环境代谢应激相关因脂肪肝是遗传环境代谢应激相关因素所致的，病变主体在肝小叶，以肝细胞素所致的，病变主体在肝小叶，以肝细胞脂肪变性为主的的临床病理综合征脂肪变性为主的的临床病理综合征10脂肪肝的分类n根据起病方式及病程分类根据起病方式及病程分类 急性脂肪肝：小泡性急性脂肪肝：小泡性 慢性脂肪肝：大泡性

4、或混合性慢性脂肪肝：大泡性或混合性11脂肪肝的分类n根据病因分类根据病因分类 酒精性脂肪性肝病酒精性脂肪性肝病（alcoholic fatty liver alcoholic fatty liver disease,disease,AFLDAFLD)非酒精性脂肪性肝病非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver non-alcoholic fatty liver disease,disease,NAFLDNAFLD)酒精性脂肪肝（酒精性脂肪肝（AFL）酒精性肝炎酒精性肝炎酒精性肝纤维化酒精性肝纤维化酒精性肝硬化酒精性肝硬化单纯性脂肪肝（单纯性脂肪肝（NAFLNAFL）

5、脂肪性肝炎（脂肪性肝炎（NASHNASH）脂肪性肝纤维化和肝硬化脂肪性肝纤维化和肝硬化12NASHNASH，脂变，脂变50%50%，汇管区，汇管区中度炎症细胞浸润（中度炎症细胞浸润（HE50)HE50)13脂肪肝的流行病学调查 及预后n非酒精性脂肪性肝病（非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）：）：80%n酒精性脂肪性肝病（酒精性脂肪性肝病（AFLD）：）：5%n其余的是药物性、中毒性、遗传性、自身其余的是药物性、中毒性、遗传性、自身免疫性等脂肪肝免疫性等脂肪肝14NAFLDNAFLD的流行病学及预后的流行病学及预后n欧美、日本成人欧美、日本成人NAFLDNAFLD检出率检出率20203333，其中

6、至少其中至少1015%1015%为为NASHNASHnNAFLDNAFLD已成为西欧、美国、澳大利亚、日已成为西欧、美国、澳大利亚、日本第一大慢性肝病及肝酶异常的首要病因本第一大慢性肝病及肝酶异常的首要病因n亚太地区亚太地区NAFLDNAFLD检出率检出率1212242415NAFLDNAFLD的流行病学及预后的流行病学及预后n代谢综合征（代谢综合征（MSMS）可使）可使NAFLDNAFLD患病风险增患病风险增加加411411倍倍nNAFLDNAFLD可使糖尿病发生风险增加可使糖尿病发生风险增加3.8113.811倍倍n肥胖者：肥胖者：NAFL NAFL发生率发生率6090%6090%，NAS

7、HNASH为为2025%2025%，肝硬化，肝硬化28%28%n糖尿病和高脂血症患者糖尿病和高脂血症患者NAFLDNAFLD检出率分别检出率分别为为2178%2178%、2792%,2792%,肥胖肥胖2 2型糖尿病患者型糖尿病患者可达可达50%70%50%70%，且多为中度以上，且多为中度以上16流行病学n研究显示：研究显示：2型糖尿病患者是脂肪肝的高发人群型糖尿病患者是脂肪肝的高发人群2型糖尿病患者患型糖尿病患者患NASH危险性比一般人高危险性比一般人高2.6倍倍17中国脂肪肝的流行病学调查中国脂肪肝的流行病学调查 范建高，世界华人消化杂志，01年第1期；中华消化杂志，02年第2期n818

8、818名北京市干部：名北京市干部：18.3%18.3%n40094009名上海市职员：名上海市职员：12.8%12.8%n10501050名北京市职工：名北京市职工：11.011.0n11191119名南京市干部：名南京市干部：10.2%10.2%n1137211372名绍兴市职工：名绍兴市职工：9.58%9.58%n30153015名杭州市工人：名杭州市工人：5.2%5.2%n41004100名大庆油田工人：名大庆油田工人：5.15%5.15%n四川四川1010个寺庙和尚：个寺庙和尚：0.27%0.27%n来自广州的一项长达来自广州的一项长达3年的队列研究显示，年的队列研究显示，2003年年

9、NAFLD患病率为患病率为16.3%，而，而2008年则高达年则高达20.5%18n20112011年，北京地坛医院副院长、军事医学科年，北京地坛医院副院长、军事医学科学院博导学院博导成军教授成军教授对对北京市居民（北京市居民（37623762名）名）FLDFLD患病率患病率及其危险因素流行病学调查结果及其危险因素流行病学调查结果显示：显示：北京市常住居民北京市常住居民 FLD35.1%FLD35.1%NAFLD31.0%NAFLD31.0%AFLD4.1%AFLD4.1%在过去的在过去的710710年，中国发达地区成人年，中国发达地区成人脂肪肝患病率增加了一倍脂肪肝患病率增加了一倍19NAF

10、LDNAFLD的预后的预后nNAFLNAFL近期预后良好近期预后良好nNAFLNAFL有有1240%1240%患者患者813813年进展为年进展为NASHNASHnNASHNASH约有约有25%25%患者在患者在813813年发展为脂肪年发展为脂肪性肝硬化性肝硬化n脂肪性肝硬化患者发生原发性肝细胞癌、脂肪性肝硬化患者发生原发性肝细胞癌、肝功能衰竭的概率高达肝功能衰竭的概率高达3040%3040%20NAFLDNAFLD相关肿瘤相关肿瘤n20142014年上海国际消化系统疾病会议：年上海国际消化系统疾病会议：福建漳州报道福建漳州报道1 1例手术证实例手术证实NAFLDNAFLD相关肝癌，癌相关肝

11、癌，癌旁组织并无肝硬化。旁组织并无肝硬化。美国国立卫生研究院的美国国立卫生研究院的Bin GaoBin Gao教授也有类似的教授也有类似的报道报道 提示提示：NAFLDNAFLD可以不经过肝纤维化、肝硬化就发生可以不经过肝纤维化、肝硬化就发生肝癌肝癌 有研究表明，有研究表明，NAFLD NAFLD与多种肿瘤的发生相关，与多种肿瘤的发生相关，包括直肠癌、乳腺癌等，也是目前研究的一项热点包括直肠癌、乳腺癌等，也是目前研究的一项热点21非酒精性脂肪肝的病情演变非酒精性脂肪肝的病情演变脂肪肝脂肪肝纤维化纤维化肝硬化肝硬化脂肪堆积致肝脂肪堆积致肝肿大肿大可逆转可逆转纤维组织形成纤维组织形成纤维组织无法纤

12、维组织无法逆转逆转结缔组织生成破坏结缔组织生成破坏肝细胞肝细胞病变不可逆转病变不可逆转22酒精性肝病酒精性肝病ALDALD的流行病学及预后的流行病学及预后n欧美国家嗜酒人群中欧美国家嗜酒人群中ALDALD患病率高达患病率高达84%84%，其中其中2030%2030%发展为肝硬化发展为肝硬化n在美国，在美国，ALDALD为慢性肝病最常见病因，每年为慢性肝病最常见病因，每年 1.52 1.52万人死于万人死于ALDALDn我国居民我国居民ALDALD发病率为发病率为45%45%，北方南方，北方南方n女性对酒精敏感性高，但由于男性嗜酒者多女性对酒精敏感性高，但由于男性嗜酒者多见，见，ALDALD男女

13、比例约男女比例约2:12:123酒精性肝病ALD的诊断标准第一条：n有长期饮酒史，一般超过有长期饮酒史，一般超过5 5年，年，折合乙醇量折合乙醇量40g/d40g/d，女性，女性20g/d20g/d；或或2 2周内有大量饮酒史（周内有大量饮酒史（80g/d80g/d）24 酒精量：饮酒量饮酒量酒精度（酒精度（%）0.8n以56度二锅头为例 饮用180ml就超过80g 饮用700ml就超过300g*喜力啤酒1000ml40g25ALDALD的流行病学及预后的流行病学及预后n酒精量酒精量80160g/d80160g/d，其发生率增长，其发生率增长525525倍倍 酒精量酒精量300g/d300g/

14、d，8 8天后就出现酒精性脂肪肝天后就出现酒精性脂肪肝nAFLDAFLD比比NAFLD NAFLD 患者患者1010年内肝硬化发生率显年内肝硬化发生率显著增高（著增高（20%20%对对1%1%）*美国胃肠病学会统计，男性平均每天饮用美国胃肠病学会统计，男性平均每天饮用80g80g酒精，可能在酒精，可能在1010年内发生肝硬化，而女年内发生肝硬化，而女性消耗同等量酒精，性消耗同等量酒精，5 5年内就发生肝硬化年内就发生肝硬化26脂肪肝的病因27一、营养性因素一、营养性因素1 1、肥胖病、肥胖病 NAFLDNAFLD最常见和最肯定的病因最常见和最肯定的病因 肥胖伴酗酒者脂肪肝发生率达肥胖伴酗酒者脂

15、肪肝发生率达90%90%以上以上2 2、胃肠外营养、胃肠外营养 全胃肠外营养持续时间过长可导致肝细胞脂肪变全胃肠外营养持续时间过长可导致肝细胞脂肪变和和NASHNASH3 3、营养不良、营养不良 蛋白质摄入不足或吸收不良，或胆碱、卵磷脂等蛋白质摄入不足或吸收不良，或胆碱、卵磷脂等缺乏缺乏28二、化学性致病因素二、化学性致病因素1 1、工业毒物、工业毒物 苯、二氯甲烷、二氯乙烯、钡盐等苯、二氯甲烷、二氯乙烯、钡盐等 NAFL NAFL CClCCl4 4、砷化物、三氯甲烷、磷等、砷化物、三氯甲烷、磷等 肝细胞坏死合并脂肪变肝细胞坏死合并脂肪变2 2、药物、药物 长期使用糖皮质激素、大量四环素、雌

16、激素制剂、长期使用糖皮质激素、大量四环素、雌激素制剂、氨甲喋呤、胺碘酮等氨甲喋呤、胺碘酮等3 3、酒精中毒：、酒精中毒：90%90%酒精在肝脏转化为乙醛酒精在肝脏转化为乙醛29三、内分泌代谢因素三、内分泌代谢因素1 1、糖尿病、糖尿病 2 2型糖尿病型糖尿病5070%5070%合并脂肪肝，且大多为中度合并脂肪肝，且大多为中度或中度以上的脂肪肝或中度以上的脂肪肝 NAFLD NAFLD与胰岛素抵抗（与胰岛素抵抗（IRIR）、高胰岛素血症有）、高胰岛素血症有较强的关联较强的关联2 2、高脂血症、高脂血症 关系最密切的是高甘油三酯血症，脂肪肝发病率关系最密切的是高甘油三酯血症，脂肪肝发病率为为608

17、0%6080%，常伴有肥胖和糖尿病，常伴有肥胖和糖尿病3 3、皮质醇增多症、妊娠等亦可导致脂肪肝、皮质醇增多症、妊娠等亦可导致脂肪肝30四、生物性致病因素四、生物性致病因素 肝炎病毒肝炎病毒HBVHBV和和HCVHCV感染可引起脂肪肝感染可引起脂肪肝 特别是特别是HCVHCV感染患者中感染患者中80%80%伴脂肪肝伴脂肪肝五、遗传因素五、遗传因素 先天性代谢性肝病：肝豆状核变性、半乳糖血症、先天性代谢性肝病：肝豆状核变性、半乳糖血症、肝糖原贮积病等肝糖原贮积病等 遗传易感性：肥胖、糖尿病、原发性高脂血症遗传易感性：肥胖、糖尿病、原发性高脂血症六、其他六、其他 免疫性疾病如免疫性疾病如SLESL

18、E、自身免疫性肝炎等、自身免疫性肝炎等 部分病因不明脂肪肝部分病因不明脂肪肝隐源性脂肪肝隐源性脂肪肝31酒精中毒、肥胖、糖尿病酒精中毒、肥胖、糖尿病 脂肪肝的三大病因脂肪肝的三大病因32脂肪肝的发病机制3319981998年年DayDay提出的提出的“二次打击二次打击”学说学说n第一次打击第一次打击 各种病因作用各种病因作用 肝细胞脂肪代谢异常，肝内脂肪沉积肝细胞脂肪代谢异常，肝内脂肪沉积n第二次打击第二次打击 肝细胞脂肪变性肝细胞脂肪变性 脂肪性肝炎、肝纤维化脂肪性肝炎、肝纤维化氧化应激和脂质过氧化、氧化应激和脂质过氧化、细胞因子等作用下细胞因子等作用下34NAFLDNAFLD的发病机制的发

19、病机制n脂质代谢障碍脂质代谢障碍n激素的作用：激素的作用：胰岛素抵抗（胰岛素抵抗（IRIR）瘦素抵抗瘦素抵抗n氧化应激及脂质过氧化损伤氧化应激及脂质过氧化损伤n细胞因子的作用细胞因子的作用第一次打击第一次打击第二次打击第二次打击35肝脏在脂肪代谢中占据中心地位肝脏在脂肪代谢中占据中心地位饥饿饥饿脂库脂肪动员脂库脂肪动员脂肪酸脂肪酸肝脏肝脏-氧化氧化酮体酮体肝外组织肝外组织（脑、肌肉）利用（脑、肌肉）利用输出输出饱食饱食葡萄糖代谢葡萄糖代谢乙酰乙酰CoA合成合成脂肪酸、胆固醇脂肪酸、胆固醇VLDL（TG+胆固醇胆固醇+磷脂磷脂+载脂蛋白）载脂蛋白）脂肪组织贮存脂肪组织贮存输出输出36-氧化氧化脂

20、肪酸脂酰辅酶A线粒体线粒体-氧化氧化乙酰辅酶乙酰辅酶A三羧酸循环三羧酸循环酮体酮体肝外组织肝外组织氧化供能氧化供能左旋肉碱左旋肉碱37脂质代谢障碍脂质代谢障碍1 1、血中游离脂肪酸（、血中游离脂肪酸（FFAFFA）增加）增加2 2、碳水化合物摄取过多、碳水化合物摄取过多3 3、肝细胞线粒体、肝细胞线粒体-氧化障碍氧化障碍4 4、VLDLVLDL合成障碍合成障碍38胰岛素抵抗（胰岛素抵抗（IRIR）NAFLDNAFLD的发病机制的发病机制n定义：指胰岛素作用的靶组织或靶器官（主要指胰岛素作用的靶组织或靶器官（主要是肝脏、肌肉和脂肪组织）对胰岛素生物作用的是肝脏、肌肉和脂肪组织）对胰岛素生物作用的

21、敏感性下降，即正常剂量的胰岛素产生低于正常敏感性下降，即正常剂量的胰岛素产生低于正常生物学效应的一种状态生物学效应的一种状态n原因：胰岛素生物活性下降胰岛素生物活性下降，或靶器官、靶组或靶器官、靶组织上的受体障碍及受体下调，或受体后缺陷，对织上的受体障碍及受体下调，或受体后缺陷，对胰岛素表现为一定的抵抗性，敏感性下降胰岛素表现为一定的抵抗性，敏感性下降*IRIR是代谢综合征的是代谢综合征的“共同土壤共同土壤”39n胰岛素是调节脂肪合成的主要激素胰岛素是调节脂肪合成的主要激素胰岛素胰岛素胰岛素抵抗（胰岛素抵抗（IRIR）NAFLDNAFLD的发病机制的发病机制脂肪组织内的脂肪组织内的激素敏感性脂

22、肪酶激素敏感性脂肪酶脂肪动员脂肪动员（-）（-）脂肪组织内的脂肪组织内的脂蛋白脂酶脂蛋白脂酶脂肪酸进入脂肪脂肪酸进入脂肪组织合成与贮存组织合成与贮存（+）（+）血中游离血中游离脂肪酸脂肪酸40IRIR胰岛素抵抗（胰岛素抵抗（IRIR）NAFLDNAFLD的发病机制的发病机制激素敏感性脂肪酶激素敏感性脂肪酶（TG脂酶）活性增强脂酶）活性增强脂肪动员脂肪动员脂蛋白脂酶脂蛋白脂酶活性降低活性降低脂肪组织合成脂肪组织合成与贮存与贮存血中游离血中游离脂肪酸脂肪酸肝内肝内TG合成合成入肝入肝脂肪肝脂肪肝41n瘦素是肥胖基因（瘦素是肥胖基因（obob基因）表达的蛋白质类激素，基因）表达的蛋白质类激素，主要由

23、白色脂肪组织分泌合成主要由白色脂肪组织分泌合成n作用：抑制食欲、减少能量摄入、抑制脂肪合成、作用：抑制食欲、减少能量摄入、抑制脂肪合成、增加能量消耗增加能量消耗 *瘦素抵抗患者瘦素抵抗患者 （1 1）食欲增强，脂肪合成增多，肥胖）食欲增强，脂肪合成增多，肥胖 （2 2）高瘦素血症，干扰胰岛素的生理功能，诱）高瘦素血症，干扰胰岛素的生理功能，诱 导导IR IR，促进肝内脂肪贮积，促进肝内脂肪贮积瘦素抵抗瘦素抵抗 NAFLDNAFLD的发病机制的发病机制42氧化应激及脂质过氧化损伤氧化应激及脂质过氧化损伤 NAFLDNAFLD的发病机制的发病机制n肝组织内脂肪酸和肝组织内脂肪酸和TGTG增多增多

24、线粒体线粒体-氧氧化速度代偿性化速度代偿性 活性氧（活性氧（ROSROS）ROS 激活磷脂酶激活磷脂酶A A2 2 膜磷脂膜磷脂 花生四烯酸花生四烯酸 PG PG、LTLT等等 激活激活NF-NF-BB：细胞因子表达增强细胞因子表达增强 TNF TNF、IL-8IL-8等等 OO2 2 OH OH 1 1O O2 2 H H2 2O O2 2脂质过氧化反应脂质过氧化反应生物膜结构功能破坏生物膜结构功能破坏抑制膜蛋白功能抑制膜蛋白功能线粒体损伤线粒体损伤炎炎症症反反应应+不饱和脂肪酸不饱和脂肪酸43细胞因子的作用细胞因子的作用 NAFLDNAFLD的发病机制的发病机制肝组织脂肪酸、肝组织脂肪酸、

25、ROSROS增多增多激活激活KupfferKupffer细胞细胞释放大量细胞因子如释放大量细胞因子如TNFTNF、TGF-1TGF-1、PDGFPDGF等等肝细胞炎症、坏死、肝细胞炎症、坏死、肝纤维化肝纤维化44细胞因子的作用细胞因子的作用 NAFLDNAFLD的发病机制的发病机制n转化生长因子（转化生长因子（TGF-1TGF-1）肝纤维化主要始动因子之一肝纤维化主要始动因子之一 TGF-1 TGF-1 肝星状细胞（肝星状细胞（HSCHSC）活化增殖）活化增殖 肌成纤维细胞并分泌胶原纤维肌成纤维细胞并分泌胶原纤维n血小板衍生生长因子血小板衍生生长因子（PDGFPDGF）目前已知的目前已知的HS

26、CHSC最强的丝裂原，能刺激最强的丝裂原，能刺激HSCHSC活化增活化增殖转化为肌成纤维细胞，促进肝纤维化的发生殖转化为肌成纤维细胞，促进肝纤维化的发生45酒精性脂肪肝的发病机制n长期大量摄入酒精是导致长期大量摄入酒精是导致ALDALD的主要原因的主要原因n酒精对肝脏直接毒性作用酒精对肝脏直接毒性作用n氧化应激和脂质过氧化的作用氧化应激和脂质过氧化的作用n细胞因子的作用细胞因子的作用第一次打击第一次打击第二次打击第二次打击46酒精对肝脏直接毒性作用酒精对肝脏直接毒性作用 AFLDAFLD发病机制发病机制乙醇乙醇乙醛乙醛乙酸乙酸乙醇脱氢酶乙醇脱氢酶ADH微粒体乙醇氧化酶系微粒体乙醇氧化酶系MEO

27、SNAD+NADH乙醛脱氢酶乙醛脱氢酶NAD+NADH促进自由基产生，促进膜的脂质过氧化促进自由基产生，促进膜的脂质过氧化与丙二醛（与丙二醛（MDAMDA）等形成加合物）等形成加合物 损伤肝脏损伤肝脏抑制抑制VLDLVLDL合成合成 肝内肝内TGTG转运障碍，肝转运障碍，肝TGTG堆积堆积乙醛乙醛NADH/NADNADH/NAD+抑制线粒体三羧酸循环抑制线粒体三羧酸循环 -氧化氧化 肝内肝内TGTG堆积堆积47氧化应激和脂质过氧化损伤氧化应激和脂质过氧化损伤 AFLDAFLD发病机制发病机制n酒精含量高时，其代谢主要由微粒体乙醇酒精含量高时，其代谢主要由微粒体乙醇氧化酶系（氧化酶系（MEOSM

28、EOS）起作用）起作用nMEOSMEOS主要成分为细胞色素主要成分为细胞色素P450 P450 2E12E1（CYP2E1CYP2E1），在酒精诱导下活化，产生），在酒精诱导下活化，产生大量大量ROSROS，引发，引发氧化应激和脂质过氧化氧化应激和脂质过氧化，造，造成肝组织炎症、细胞损伤成肝组织炎症、细胞损伤48细胞因子的作用细胞因子的作用 AFLDAFLD发病机制发病机制nROSROS等激活等激活KupfferKupffer细胞释放大量细胞因子细胞释放大量细胞因子如如TGF-1TGF-1、PDGFPDGF等等 促进肝纤维化促进肝纤维化*TNF*TNF在在ALDALD中占重要地位中占重要地位

29、长期大量饮酒长期大量饮酒 肠道菌群过度生长，肠粘膜屏障肠道菌群过度生长，肠粘膜屏障通透性通透性 肠细菌移位肠细菌移位 肠源性内毒素血症肠源性内毒素血症 激活激活KupfferKupffer细胞释放大量细胞释放大量TNFTNF 组织炎症反应、肝细胞凋亡、坏死组织炎症反应、肝细胞凋亡、坏死 激活中性粒细胞，增加激活中性粒细胞，增加ROSROS的生成的生成49脂肪肝实验模型的脂肪肝实验模型的建立方法建立方法50理想的实验模型理想的实验模型n与人类疾病特征相似与人类疾病特征相似n病变有一定发展过程，与人类发病过程相似病变有一定发展过程，与人类发病过程相似n形成率高，动物死亡率低，重复性好形成率高，动物

30、死亡率低，重复性好n造模方法简单易行，对实验人员无伤害造模方法简单易行，对实验人员无伤害n造模停止后组织学病变逆转缓慢，便于药物造模停止后组织学病变逆转缓慢，便于药物干预研究干预研究51脂肪肝实验模型脂肪肝实验模型nNAFLDnAFLD特殊品系脂肪肝动物模型特殊品系脂肪肝动物模型营养失调性脂肪肝动物模型营养失调性脂肪肝动物模型毒物或药物性脂肪肝动物模型毒物或药物性脂肪肝动物模型体外诱导模型体外诱导模型复合模型复合模型急性酒精性肝病动物模型急性酒精性肝病动物模型慢性酒精性肝病动物模型慢性酒精性肝病动物模型体外诱导模型体外诱导模型52特殊品系脂肪肝动物模型特殊品系脂肪肝动物模型 NAFLD模型模型

31、（基因突变或基因敲除）（基因突变或基因敲除）1、ob/ob小鼠、小鼠、db/db小鼠（或小鼠（或fa/fa大鼠）大鼠）ob/obob/ob小鼠小鼠obob基因自发突变基因自发突变db/dbdb/db小鼠小鼠dbdb基因自发突变基因自发突变fa/fafa/fa大鼠大鼠fafa基因自发突变基因自发突变瘦素受体缺乏瘦素受体缺乏瘦素抵抗瘦素抵抗瘦素缺乏瘦素缺乏*可出现与人类可出现与人类NAFLDNAFLD相似的特征：相似的特征：过度摄食、肥胖、高脂血症、高胰岛素血症等过度摄食、肥胖、高脂血症、高胰岛素血症等53n特点特点：该模型虽有明显的该模型虽有明显的IRIR，但不能自发地由单，但不能自发地由单 纯

32、性脂肪肝发展为纯性脂肪肝发展为NASHNASH、肝纤维化、肝纤维化n解决方案解决方案：+蛋氨酸蛋氨酸-胆碱缺乏（胆碱缺乏（MCDMCD）饮食、）饮食、或内毒素、或酒精、或高脂饮食、或再灌或内毒素、或酒精、或高脂饮食、或再灌 注损伤方可演变为注损伤方可演变为NASHNASH、肝纤维化、肝纤维化n意义意义：研究由肝脂肪变向研究由肝脂肪变向NASHNASH进展、进展、NASH NASH向向 纤维化进展的良好模型纤维化进展的良好模型54特殊品系脂肪肝动物模型特殊品系脂肪肝动物模型 NAFLD模型模型2 2、幼龄内脏脂肪变小鼠（、幼龄内脏脂肪变小鼠（JVSJVS）模型）模型 系统性肉毒碱缺乏模型系统性肉

33、毒碱缺乏模型表现表现：出生出生328328天，小鼠生长缓慢，肝肿大，肝天，小鼠生长缓慢，肝肿大，肝 细胞脂肪变性细胞脂肪变性机理机理：肉毒碱是转运脂肪酸进入线粒体进行肉毒碱是转运脂肪酸进入线粒体进行氧化氧化 所必须的物质。所必须的物质。55特殊品系脂肪肝动物模型特殊品系脂肪肝动物模型 NAFLD模型模型3 3、FLSFLS小鼠模型小鼠模型 19991999年年SogaSoga等用同系交配法建立了一种等用同系交配法建立了一种无过度摄无过度摄食、不出现肥胖和糖尿病食、不出现肥胖和糖尿病而伴有脂肪肝的新品种。而伴有脂肪肝的新品种。表现表现：新生的：新生的FLSFLS小鼠的肝细胞内即有细小的脂肪颗小鼠

34、的肝细胞内即有细小的脂肪颗粒聚集，随年龄增长进行性加重，肝脏粒聚集，随年龄增长进行性加重，肝脏 TG TG含量较同含量较同龄小鼠升高龄小鼠升高5 5倍，伴倍，伴ALTALT和和ASTAST增高、炎症反应，而增高、炎症反应，而血脂无异常血脂无异常。12 12个月多自发形成肝细胞癌（个月多自发形成肝细胞癌（HCCHCC），但），但未见未见肝硬化肝硬化意义意义：可作为人类非肥胖、糖尿病而伴有脂肪肝和人：可作为人类非肥胖、糖尿病而伴有脂肪肝和人类类NASHNASH相关相关HCCHCC机制研究的模型机制研究的模型56特殊品系脂肪肝动物模型特殊品系脂肪肝动物模型 NAFLD模型模型n特殊品系动物模型因基因

35、突变或缺失，引特殊品系动物模型因基因突变或缺失，引起脂肪代谢障碍，能自发形成脂肪肝起脂肪代谢障碍，能自发形成脂肪肝n缺点缺点：1 1、可建立先天性和幼年型脂肪肝模型，但不适、可建立先天性和幼年型脂肪肝模型，但不适于后天营养障碍所致的脂肪肝的研究于后天营养障碍所致的脂肪肝的研究 2 2、多缺乏、多缺乏NASHNASH和肝纤维化的自然演变过程，仅和肝纤维化的自然演变过程，仅适合适合NAFLDNAFLD特定发病机制的研究特定发病机制的研究3 3、实验动物成本高，来源较困难，死亡率高，缺、实验动物成本高，来源较困难，死亡率高，缺乏广泛应用的可行性乏广泛应用的可行性57营养失调性脂肪肝动物模型营养失调性

36、脂肪肝动物模型 NAFLD模型模型1 1、蛋氨酸、蛋氨酸-胆碱缺乏（胆碱缺乏（MCDMCD）饮食模型）饮食模型 国际上经典的国际上经典的NASHNASH动物模型动物模型机理机理：蛋氨酸、胆碱缺乏导致线粒体蛋氨酸、胆碱缺乏导致线粒体-氧化障碍、氧化障碍、VLDL VLDL合成减少合成减少表现表现：MCDMCD饮食小鼠，饮食小鼠，2 2周后形成周后形成NASHNASH，肝内可见肝内可见活化的巨噬细胞浸润，伴活化的巨噬细胞浸润，伴NF-NF-BB激活、炎性细胞因激活、炎性细胞因子、粘附分子等表达增加，子、粘附分子等表达增加，12W12W出现肝纤维化出现肝纤维化特点特点：MCDMCD饮食模型有明显的氧

37、化应激、线粒体损饮食模型有明显的氧化应激、线粒体损伤及细胞凋亡；与人类伤及细胞凋亡；与人类NASHNASH相比，动物多出现相比，动物多出现ALTALT过高、过高、TGTG过低、不引起过低、不引起IRIR等表现等表现58意义意义：用于用于NSAHNSAH及肝纤维化的机制及药物筛选、药及肝纤维化的机制及药物筛选、药物干预研究，并为非肥胖而伴物干预研究，并为非肥胖而伴NASHNASH等特殊脂肪营等特殊脂肪营养障碍疾病提供研究思路养障碍疾病提供研究思路缺点缺点：MCDMCD饮食价格昂贵，且不符合人类膳食结构饮食价格昂贵，且不符合人类膳食结构59营养失调性脂肪肝动物模型营养失调性脂肪肝动物模型 NAFL

38、D模型模型2 2、高脂饮食（、高脂饮食（HFDHFD）模型）模型 国内最常用的模型国内最常用的模型配方配方：多种，构造原理基本一致，主要差别在于饮多种，构造原理基本一致，主要差别在于饮食中脂肪占供能物质的比例不等（食中脂肪占供能物质的比例不等（10%71%10%71%），），含或不含高碳水化合物含或不含高碳水化合物特点特点：A A、造模周期长，约、造模周期长，约412W412W，甚至半年，成功率高，甚至半年，成功率高 B B、病变有一定的发展过程，在发病机制、临床表、病变有一定的发展过程，在发病机制、临床表现上与人类现上与人类NAFLD NAFLD 最相似，且多合并肥胖、最相似，且多合并肥胖、

39、IRIR等等60高脂饮食常用配方高脂饮食常用配方A、华天懿等：高脂饲料喂养大鼠华天懿等：高脂饲料喂养大鼠12W12W 基础饲料基础饲料50%+50%+猪油猪油10%+10%+奶粉奶粉10%+10%+鸡蛋鸡蛋30%30%表现表现：大鼠第：大鼠第2W 2W 开始体重增长加速，至第开始体重增长加速，至第4W 4W 体体重已明显高于对照组，肝重已明显高于对照组，肝TGTG、胆固醇明显增加，、胆固醇明显增加，肝细胞脂肪变肝细胞脂肪变。意义意义：与儿童单纯性肥胖症的自然发病过程相似，与儿童单纯性肥胖症的自然发病过程相似，对该病及并发的脂肪肝的防治研究有一定的意义对该病及并发的脂肪肝的防治研究有一定的意义6

40、1高脂饮食常用配方高脂饮食常用配方B B、祁培宏等：普通饲料喂养大鼠、祁培宏等：普通饲料喂养大鼠1W1W，再用脂肪乳，再用脂肪乳剂灌胃剂灌胃4W4W 乳清酸乳清酸5%+5%+胆固醇胆固醇10%+10%+猪油猪油20%+20%+蛋黄粉蛋黄粉1%1%表现表现：肝脏体积变大，湿重增加，色黄，切面油腻；：肝脏体积变大，湿重增加，色黄，切面油腻；HEHE染色肝细胞呈大泡性脂肪变，血清、肝脏染色肝细胞呈大泡性脂肪变，血清、肝脏TGTG、胆固醇显著升高胆固醇显著升高62高脂饮食常用配方高脂饮食常用配方C、徐正婕、钟岚、范建高等：徐正婕、钟岚、范建高等：HFDHFD饲养雄性饲养雄性SDSD大鼠大鼠 标准饲料标

41、准饲料88%+88%+猪油猪油10%+10%+胆固醇胆固醇2%2%表现表现：4 w4 w出现肝脂肪变；出现肝脂肪变；8 w8 w呈现单纯性脂肪肝；呈现单纯性脂肪肝；12 w12 w形成形成NASHNASH，伴，伴ALTALT水平升高；水平升高；24 w24 w出现明显出现明显窦周纤维化；窦周纤维化；3648 w3648 w纤维化加剧纤维化加剧意义意义：本模型与人类肥胖症合并高脂血症及脂肪肝本模型与人类肥胖症合并高脂血症及脂肪肝的病例极为相似，可用于血脂调整药物防治动脉粥的病例极为相似，可用于血脂调整药物防治动脉粥样硬化和脂肪肝的药理研究样硬化和脂肪肝的药理研究63高脂饮食常用配方高脂饮食常用配

42、方D、美国美国CharlesCharles等：高脂液体饲料喂养等：高脂液体饲料喂养SDSD大鼠大鼠 脂肪脂肪71%+71%+碳水化合物碳水化合物11%+11%+蛋白蛋白18%18%表现：表现：3 3周可形成全小叶肝细胞脂肪变，伴有周可形成全小叶肝细胞脂肪变，伴有TNFaTNFa和和I I型胶原型胶原mRNA mRNA 的表达增强，可诱发线粒体损伤的表达增强，可诱发线粒体损伤和氧化应激和氧化应激意义：意义：造模方法简单，所需时间较短，与人体高脂造模方法简单，所需时间较短，与人体高脂血症性脂肪肝机制相似，是一种用于该病研究的血症性脂肪肝机制相似，是一种用于该病研究的经典模型经典模型缺点：缺点：每天

43、灌胃较为繁琐，操作不当可引起动物窒每天灌胃较为繁琐，操作不当可引起动物窒息死亡息死亡64营养失调性脂肪肝动物模型营养失调性脂肪肝动物模型 NAFLD模型模型3 3、高糖饮食大鼠模型、高糖饮食大鼠模型 高蔗糖高蔗糖/果糖饮食果糖饮食 *在在WistarWistar大鼠的饮用水中加入大鼠的饮用水中加入10%10%蔗糖，蔗糖，4848小时小时内即能在其体内观察到脂肪酸合成增加内即能在其体内观察到脂肪酸合成增加 *SD *SD大鼠在含蔗糖大鼠在含蔗糖70%70%的饮食喂养后出现肥胖，的饮食喂养后出现肥胖，2323周可形成脂肪肝，并伴有参与脂肪合成的酶周可形成脂肪肝，并伴有参与脂肪合成的酶类增加，雄性鼠

44、肝损伤更为严重类增加，雄性鼠肝损伤更为严重意义：意义：形成机制与部分人群，尤其是女性不良饮食形成机制与部分人群，尤其是女性不良饮食习惯导致的脂肪肝相似。但是雄性鼠比雌性鼠对习惯导致的脂肪肝相似。但是雄性鼠比雌性鼠对高糖诱导的肝损伤具有更高的易感性高糖诱导的肝损伤具有更高的易感性65营养失调性脂肪肝动物模型营养失调性脂肪肝动物模型 NAFLD模型模型4 4、禁食、禁食后高糖饲料诱发后高糖饲料诱发大鼠脂肪肝模型大鼠脂肪肝模型*Leclercq*Leclercq等将雄性等将雄性WisterWister大鼠禁食大鼠禁食48h48h后给予高糖饲后给予高糖饲料，料，2d2d后大鼠肝内脂肪含量较正常增加后大

45、鼠肝内脂肪含量较正常增加235%235%，呈，呈现肝细胞单纯性脂肪变性现肝细胞单纯性脂肪变性意义：意义：禁食后再进食导致脂肪肝的可能机制为肝脏禁食后再进食导致脂肪肝的可能机制为肝脏合成脂肪酸和脂肪酸的循环失衡，合成脂肪酸和脂肪酸的循环失衡，TGTG的合成和分的合成和分泌失衡泌失衡66营养失调性脂肪肝动物模型营养失调性脂肪肝动物模型 NAFLD模型模型5 5、玉米油注射大鼠脂肪肝模型、玉米油注射大鼠脂肪肝模型 墨西哥墨西哥TerrazosLuchTerrazosLuch等采用皮下注射玉米油的等采用皮下注射玉米油的方法建立大鼠脂肪肝模型方法建立大鼠脂肪肝模型6 6、全胃肠外营养（、全胃肠外营养（T

46、PNTPN）脂肪肝模型）脂肪肝模型 予成年大鼠深静脉插管，导管接电脑输液泵，予成年大鼠深静脉插管，导管接电脑输液泵，将营养液以将营养液以3ml/h3ml/h的滴速持续滴注。静脉营养液中的滴速持续滴注。静脉营养液中非蛋白能量占非蛋白能量占33%33%以上，以上，1W1W后大鼠肝脏即出现明后大鼠肝脏即出现明显的脂肪变性。显的脂肪变性。此造模方法时间短、成功率高，但操作复杂，此造模方法时间短、成功率高，但操作复杂，限制了实验的广泛应用限制了实验的广泛应用67毒物或药物性脂肪肝动物模型毒物或药物性脂肪肝动物模型 NAFLD模型模型1 1、四氯化碳（、四氯化碳（CClCCl4 4）诱发模型）诱发模型 C

47、ClCCl4 4 0.5ml/kg 0.5ml/kg，每周，每周3 3次，大鼠皮下注射次，大鼠皮下注射 表现：表现：短时间内即可观察到中央静脉周围中重度大短时间内即可观察到中央静脉周围中重度大泡性肝细胞脂肪变，伴炎症及坏死；泡性肝细胞脂肪变，伴炎症及坏死；6W6W可出现肝纤可出现肝纤维化；维化；12W12W可见肝硬化。可见肝硬化。机理：机理：CClCCl4 4诱导诱导CYP2E1CYP2E1激活及严重脂质过氧化反应激活及严重脂质过氧化反应造成肝细胞结构和功能破坏造成肝细胞结构和功能破坏优缺点：优缺点：模型复制率模型复制率100%100%，但死亡率高达，但死亡率高达2040%2040%68毒物或

48、药物性脂肪肝动物模型毒物或药物性脂肪肝动物模型 NAFLD模型模型2 2、四环素诱发模型、四环素诱发模型 *雄性大鼠一次性口服四环素雄性大鼠一次性口服四环素1 g/kg1 g/kg，在，在24h24h即可即可见肝细胞小泡性脂肪变，并伴胆固醇、见肝细胞小泡性脂肪变，并伴胆固醇、TGTG合成增合成增加及脂肪酸加及脂肪酸-氧化受抑制。氧化受抑制。*另有报道，经四环素单次诱导即可使肝脏另有报道，经四环素单次诱导即可使肝脏TGTG水水平增加平增加270%270%，并出现小泡性脂变。，并出现小泡性脂变。机理：机理：四环素沉积于肝细胞线粒体，抑制线粒体四环素沉积于肝细胞线粒体，抑制线粒体DNADNA复制，干

49、扰复制，干扰mRNAmRNA翻译成载脂蛋白，继而影响翻译成载脂蛋白，继而影响肝内肝内TGTG的转运及线粒体脂肪酸的的转运及线粒体脂肪酸的-氧化氧化69毒物或药物性脂肪肝动物模型毒物或药物性脂肪肝动物模型 NAFLD模型模型n 药物或毒物诱导模型具有成型时间短、方法简药物或毒物诱导模型具有成型时间短、方法简便、病变明显等特点便、病变明显等特点n 但其发病机制、病理、病理生理改变与人类常见但其发病机制、病理、病理生理改变与人类常见脂肪肝类型差异较大，未出现肥胖和脂肪肝类型差异较大，未出现肥胖和IRIR，且动物肝，且动物肝损伤严重，死亡率高损伤严重，死亡率高70体外诱导模型体外诱导模型 NAFLD模

50、型模型 肝细胞株脂肪变性模型肝细胞株脂肪变性模型*20022002年日本年日本OkamotoOkamoto等，用含有等，用含有1 mmol1 mmolL L油酸油酸的细胞培养液培养人的细胞培养液培养人HepG2HepG2细胞细胞24h24h，成功地建立，成功地建立了一个体外的脂肪肝模型，细胞内了一个体外的脂肪肝模型，细胞内TGTG增加增加*以正常成人肝细胞株（以正常成人肝细胞株（L-02L-02）等为材料，在培养）等为材料，在培养液中加入不同浓度的液中加入不同浓度的TGTG、油酸、亚油酸、花生四、油酸、亚油酸、花生四烯酸等脂质建立体外脂肪肝模型烯酸等脂质建立体外脂肪肝模型意义：意义：应用此模型