超敏反应性疾病的免疫学检验讲课讲稿.ppt
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1、人民卫生出版社人民卫生出版社第十四章第十四章 超敏反应性疾病的免疫学检验超敏反应性疾病的免疫学检验 超敏反应性疾病的免疫学检验l 超敏反应(超敏反应(hypersensitivityhypersensitivity)又称变态反应,是又称变态反应,是指机体再次接受相同抗原刺激后,发生的以组织细胞指机体再次接受相同抗原刺激后,发生的以组织细胞损伤或生理功能紊乱为主的特异性免疫应答。损伤或生理功能紊乱为主的特异性免疫应答。l 变应原(变应原(allergenallergen):):引起超敏反应的抗原称引起超敏反应的抗原称之为变应原。之为变应原。超敏反应超敏反应 第一节第一节 激发试验激发试验激发试验
2、(激发试验(provocation testprovocation test)是模拟自然发病是模拟自然发病条件,用少量超敏原引起一次较轻的超敏反应发条件,用少量超敏原引起一次较轻的超敏反应发作,达到确定超敏原的一种体内试验。作,达到确定超敏原的一种体内试验。l 非特异性激发:非特异性激发:是用组胺等刺激物做雾化吸入,是用组胺等刺激物做雾化吸入,以观察患者对以观察患者对型超敏反应的敏感性,进而分型超敏反应的敏感性,进而分 析病因或判定疗效。析病因或判定疗效。l 特异性激发:特异性激发:是用抗原如尘螨等做试验,对明确是用抗原如尘螨等做试验,对明确 超敏原有一定价值。超敏原有一定价值。用于用于型和型
3、和型超敏反应性疾病的检查。型超敏反应性疾病的检查。一、皮肤试验一、皮肤试验是在皮肤进行的体内免疫学试验,简称皮试。是在皮肤进行的体内免疫学试验,简称皮试。机制:机制:型超敏反应型超敏反应型超敏反应型超敏反应l皮内试验皮内试验l点刺试验(挑刺或刺痕试验)点刺试验(挑刺或刺痕试验)l斑贴试验斑贴试验(一)试验类型及方法(一)试验类型及方法(二)结果判定及分级标准(二)结果判定及分级标准l速发型皮肤试验结果判定速发型皮肤试验结果判定 阳性反应以风团为主;阳性反应以风团为主;点刺试验的阳性反应以红晕为主。点刺试验的阳性反应以红晕为主。l迟发型皮肤试验结果判定迟发型皮肤试验结果判定 阳性结果以红肿和硬结
4、为主。阳性结果以红肿和硬结为主。相同超敏原不同稀释度相同超敏原不同稀释度 速发型速发型151530min30min内观察内观察 迟发型迟发型484872h72h内观察内观察0.010.03ml/针4mm/针针方法方法结果结果皮内试验皮内试验l 比皮内试验敏感性稍低,但假阳性较少;比皮内试验敏感性稍低,但假阳性较少;l 皮试液浓度要比皮内试验高皮试液浓度要比皮内试验高1010100100倍。倍。将试验抗原与对照液分别将试验抗原与对照液分别滴于试验部位的皮肤上滴于试验部位的皮肤上用针尖透过液滴轻挑一下用针尖透过液滴轻挑一下以刺破皮肤而不出血为度以刺破皮肤而不出血为度1min后拭(吸)去试验抗原液后
5、拭(吸)去试验抗原液点刺试验点刺试验速发型皮肤试验的结果判定标准速发型皮肤试验的结果判定标准分级 皮 内 试 验 点 刺 试 验-无风团或小于阴性对照无风团或小于阴性对照无风团反应或小于阴性对照无风团反应或小于阴性对照+风团风团3 35mm5mm、红晕、红晕20mm20mm无风团无风团,阴性对照红晕阴性对照红晕20mm20mm+风团风团6 69mm9mm伴红晕伴红晕无风团,红晕无风团,红晕20mm20mm+风团风团101015mm15mm伴红晕伴红晕风团伴红晕风团伴红晕+风团风团15mm15mm伴红晕和伪足伴红晕和伪足风团伴红晕和伪足风团伴红晕和伪足迟发型皮试结果判定标准迟发型皮试结果判定标准
6、反应程度 结果判定 -无反应或小于阴性对照无反应或小于阴性对照 +仅有红肿仅有红肿 +红肿伴硬结红肿伴硬结 +红肿、硬结、小疱红肿、硬结、小疱 +大疱或大疱或/和溃疡和溃疡l第一次读:第一次读:4848小时打开斑试器小时打开斑试器,间隔间隔3030min待斑试器待斑试器 压痕消失后判定结果。压痕消失后判定结果。l第二次读:第第二次读:第3 3天或第天或第4 4天。天。l如怀疑光过敏,在斑贴试验的基础上给予紫外线照如怀疑光过敏,在斑贴试验的基础上给予紫外线照 射,操作过程相似。射,操作过程相似。斑贴试验斑贴试验斑贴试验结果判定标准斑贴试验结果判定标准反应程度反应程度结果判定结果判定 无反应或小于
7、阴性对无反应或小于阴性对照照 +轻度红肿、搔痒轻度红肿、搔痒 +明显红肿、时有红斑明显红肿、时有红斑 +红肿伴皮疹、水疱红肿伴皮疹、水疱 +红肿、水疱伴溃疡红肿、水疱伴溃疡(三)结果分析及注意事项(三)结果分析及注意事项 l假阴性出现的常见原因:假阴性出现的常见原因:皮试液的浓度过低或失效;皮试液的浓度过低或失效;老年患者或过敏性休克或哮喘大发作之后;老年患者或过敏性休克或哮喘大发作之后;皮试前用过抗组胺药或免疫抑制剂;皮试前用过抗组胺药或免疫抑制剂;操作不当将皮试液注入皮下或注入量过少等。操作不当将皮试液注入皮下或注入量过少等。(三)结果分析及注意事项(三)结果分析及注意事项 l假阳性出现的
8、常见原因:假阳性出现的常见原因:皮试液含有非特异性刺激物;皮试液含有非特异性刺激物;患者患有皮肤划痕征;患者患有皮肤划痕征;操作手法较重;操作手法较重;注入量较大或浓度过高;注入量较大或浓度过高;注入少量空气等。注入少量空气等。l询问病史询问病史阳性对照阳性对照l必备抢救药品和设施必备抢救药品和设施如何避免假性结果的出现:如何避免假性结果的出现:适应证适应证阴性对照阴性对照皮试液浓度皮试液浓度(四)应用与评价(四)应用与评价 l预防药物或疫苗等过敏预防药物或疫苗等过敏 l防治防治型超敏反应性疾病型超敏反应性疾病 l结核菌素试验结核菌素试验l评估机体细胞免疫功能评估机体细胞免疫功能 l预防皮肤接
9、触过敏预防皮肤接触过敏 结核菌素试验结核菌素试验 l是用结核菌素进行皮肤试验,通过观察局部是否出是用结核菌素进行皮肤试验,通过观察局部是否出现迟发型超敏反应,判断机体有无结核分枝杆菌感现迟发型超敏反应,判断机体有无结核分枝杆菌感染和对该菌的免疫力。染和对该菌的免疫力。l阳性:阳性:机体已感染过结核杆菌或机体已感染过结核杆菌或BCG接种成功;接种成功;l强阳性:强阳性:可能有活动性结核病;可能有活动性结核病;l阴性:阴性:机体未感染过结核分枝杆菌,机体未感染过结核分枝杆菌,但应考虑:但应考虑:感染初期;感染初期;老年人;老年人;重度结核病患者,机体处于免疫反应低下状态;重度结核病患者,机体处于免
10、疫反应低下状态;患有其他疾病。患有其他疾病。二、支气管激发试验二、支气管激发试验手捏式雾化器手捏式雾化器 bronchial provocative test,BPTl 测定支气管吸入某种刺激性物质后产生收缩反应程测定支气管吸入某种刺激性物质后产生收缩反应程 度的方法,亦称气道反应性测定;度的方法,亦称气道反应性测定;l 吸入一定量的激发物;吸入一定量的激发物;l 比较吸入前后肺通气功能指标;比较吸入前后肺通气功能指标;l 判断气道高反应性程度。判断气道高反应性程度。雾化抗原颗粒雾化抗原颗粒5 5微米微米测定肺功能指标:测定肺功能指标:用力肺活量用力肺活量(FVC)1 1秒用力呼气容积秒用力呼
11、气容积(FEV1)最大呼气流速最大呼气流速(PEF)比气道传导率比气道传导率(sGaw)射流雾化器射流雾化器l 特异性特异性BPTBPT 将一定浓度的抗原刺激物装入雾化器中将一定浓度的抗原刺激物装入雾化器中 使受试者经口或鼻吸入雾化颗粒,其携带激发物在使受试者经口或鼻吸入雾化颗粒,其携带激发物在 支气管树及肺泡沉积而起作用。支气管树及肺泡沉积而起作用。l 非特异性非特异性BPTBPT 将一定浓度的激发物装入雾化器中,将一定浓度的激发物装入雾化器中,进行同特异性进行同特异性BPTBPT的操作。的操作。l 吸气流速、雾化颗粒直径的大小以及气道通畅与否吸气流速、雾化颗粒直径的大小以及气道通畅与否 均
12、可影响雾化颗粒在气道的沉积,从而影响气道的均可影响雾化颗粒在气道的沉积,从而影响气道的 反应性。反应性。(一)试验类型及方法(一)试验类型及方法测基础肺功能测基础肺功能 激发物稀释液:激发物稀释液:低浓度低浓度/小剂量小剂量双倍浓度双倍浓度/剂量递增剂量递增阳性伴明显气促、喘息阳性伴明显气促、喘息口吸入口吸入1 11 1分半钟分半钟测定肺功能测定肺功能阳性标准阳性标准/明显不适明显不适/临床症状临床症状直至直至激发物达到最高浓度激发物达到最高浓度阴性反应阴性反应支气管支气管舒张剂舒张剂吸入吸入技术要点技术要点(二)测定指标及结果判断(二)测定指标及结果判断支气管反应有三种类型:速发、迟发和双重
13、反应。支气管反应有三种类型:速发、迟发和双重反应。每次观察不能小于每次观察不能小于2424小时。小时。lFEV1:重复性好,结果稳定;重复性好,结果稳定;lPEF:峰流速仪价格低廉、方便、不受场地限制,峰流速仪价格低廉、方便、不受场地限制,与与FEV1FEV1有较好的相关性,适合流行病学调查;有较好的相关性,适合流行病学调查;lsGaw:敏感性好,但重复性稍差。敏感性好,但重复性稍差。测定指标测定指标1 变应原的确定常以定性试验判断结果。变应原的确定常以定性试验判断结果。阳性:阳性:气道反应性增高气道反应性增高 FEV1、PEF较基础下降较基础下降2020或或sGaw下降下降35%35%,有时
14、伴有明显自觉症状或肺部闻及哮鸣音。有时伴有明显自觉症状或肺部闻及哮鸣音。定性判断定性判断2(二)测定指标及结果判断(二)测定指标及结果判断 阴性:阴性:气道反应性正常气道反应性正常 FEV1、PEF或或sGaw上述标准,正常值为阴性。上述标准,正常值为阴性。无论激发试验阳性或阴性,均应排除气道反应性的影无论激发试验阳性或阴性,均应排除气道反应性的影响因素。可疑者,间隔响因素。可疑者,间隔2 23 3周后复检或周后复检或2 2个月后再测。个月后再测。定性判断定性判断2(二)测定指标及结果判断(二)测定指标及结果判断(三)注意事项及禁忌证(三)注意事项及禁忌证 l受试者在心肺功能不全、高血压、甲亢
15、、妊娠、严受试者在心肺功能不全、高血压、甲亢、妊娠、严重咽喉炎、呼吸道感染或肺炎等情况下一般不适宜重咽喉炎、呼吸道感染或肺炎等情况下一般不适宜作激发试验;作激发试验;l有过敏性休克,严重的血管性水肿及严重的喉头水有过敏性休克,严重的血管性水肿及严重的喉头水肿病史者;肿病史者;l一周之内预防接种、职业性过敏因素的接触等。一周之内预防接种、职业性过敏因素的接触等。禁忌证禁忌证1l受试者在检查前:受试者在检查前:4848小时:停小时:停!抗组胺药、色甘酸钠及皮质激素类药抗组胺药、色甘酸钠及皮质激素类药;1212小时:停小时:停!支气管扩张剂支气管扩张剂;1515分钟:实验室休息分钟:实验室休息,病史
16、、体检排除病史、体检排除BPTBPT的禁忌证。的禁忌证。注意事项注意事项2(三)注意事项及禁忌证(三)注意事项及禁忌证l基础基础FEV1占预计值占预计值70%70%以上才能进行试验。以上才能进行试验。l受试者应为哮喘患者病情稳定时或缓解期。受试者应为哮喘患者病情稳定时或缓解期。l吸入激发物的浓度应从小到大,逐渐递增。吸入激发物的浓度应从小到大,逐渐递增。l应备有急救器械、药品和有经验的临床医生在场。应备有急救器械、药品和有经验的临床医生在场。注意事项注意事项2(三)注意事项及禁忌证(三)注意事项及禁忌证(四)应用与评价(四)应用与评价有一定的危险性,但较皮肤试验的特异性高有一定的危险性,但较皮
17、肤试验的特异性高与受试者的病史、症状和体征相关性较强与受试者的病史、症状和体征相关性较强确定支气管哮喘的过敏原,尤其皮试结果不肯定时确定支气管哮喘的过敏原,尤其皮试结果不肯定时排除皮试时的假阳性反应和假阴性反应排除皮试时的假阳性反应和假阴性反应检测新制剂的抗原性、平喘药疗效及观察脱敏效果检测新制剂的抗原性、平喘药疗效及观察脱敏效果缺点是每次仅能用一种抗原,要专门设备和技术,缺点是每次仅能用一种抗原,要专门设备和技术,并需对病人进行训练并与之配合并需对病人进行训练并与之配合观察症状观察症状症状好转症状好转或减轻或减轻导致导致三、食物激发试验三、食物激发试验基础基础饮食饮食吃可疑的吃可疑的过敏食物
18、过敏食物症状症状加重加重1 1周后周后疑似疑似过敏原,重复过敏原,重复3 3次次确定确定某食物为过敏原某食物为过敏原症状未减轻症状未减轻1 1周后周后排除排除 食物所致过敏食物所致过敏四、其他方法四、其他方法口腔激发试验口腔激发试验将超敏原直接与口腔黏膜接触,当口腔将超敏原直接与口腔黏膜接触,当口腔黏膜出现肿胀和充血时,可判断为阳性黏膜出现肿胀和充血时,可判断为阳性反应。反应。结膜激发试验结膜激发试验将超敏原滴于一眼,阳性反应为结膜充将超敏原滴于一眼,阳性反应为结膜充血、水肿、分泌增加、搔痒,甚至眼睑血、水肿、分泌增加、搔痒,甚至眼睑红肿。注意假阳性对结果的干扰。红肿。注意假阳性对结果的干扰。
19、鼻黏膜激发试验鼻黏膜激发试验将抗原吸入将抗原吸入/滴入受试者鼻腔,出现鼻滴入受试者鼻腔,出现鼻黏膜水肿、苍白、鼻痒、流涕、喷嚏为黏膜水肿、苍白、鼻痒、流涕、喷嚏为阳性。阳性。返回章目录返回章目录第二节第二节 IgE的检测的检测 一、一、IgE的测定的测定 CLIA敏感度更高,特异性高,定量敏感度更高,特异性高,定量 测定方法测定方法测定方法测定方法测定方法测定方法固相固相RIA是较传统的是较传统的IgE检测方法检测方法ELISA 双抗体夹心法,操作简便,敏感性很双抗体夹心法,操作简便,敏感性很高,是测定血清高,是测定血清IgE最常用的方法最常用的方法 临床意义临床意义 正常人群血清正常人群血清
20、IgE水平受地域环境、种水平受地域环境、种 族、遗传、年龄、性别、寄生虫感染、测定法及取族、遗传、年龄、性别、寄生虫感染、测定法及取 样等影响,结果有一定差异。样等影响,结果有一定差异。参考值参考值0.10.10.9mg/L0.9mg/L某些过敏体质者高于正常某些过敏体质者高于正常100010001000010000倍倍 血清血清IgE高高特应症、支气管肺曲菌病、特应症、支气管肺曲菌病、药物性间质性肺炎、麻风、药物性间质性肺炎、麻风、寄生虫病及寄生虫病及IgE型骨髓瘤等型骨髓瘤等二、特异性二、特异性IgE的测定的测定l 用纯化的过敏原去检测相应的用纯化的过敏原去检测相应的IgE抗体的一类试验。
21、抗体的一类试验。酶联免疫吸附试验:酶联免疫吸附试验:常用间接法测特异性常用间接法测特异性IgE。免疫印迹技术:免疫印迹技术:操作简单,能一次性测定多种变。操作简单,能一次性测定多种变。应原的特异性应原的特异性IgE,故临床已普遍采用,故临床已普遍采用IBT法。法。(+)E EE EE EE EE EE E洗涤洗涤洗涤洗涤洗涤洗涤结果结果ELISA间接法检测特异性间接法检测特异性IgE特异性变应原加入待检血清特异性变应原加入待检血清转印至转印至NC膜膜NC膜膜待检血清待检血清特异性特异性IgE抗抗-IgEHRP底物底物特异性抗原特异性抗原条带显色条带显色NC膜膜变应原变应原特异性特异性IgE抗抗
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