DNA的粗提取与鉴定(优秀课件)ppt.ppt
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1、为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益DNADNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定 为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益 DNA DNA的提取和鉴定的提取和鉴定DNADNA从哪从哪 儿提取?儿提取?怎样将怎样将DNADNA与与细胞中的其他细胞中的其他物质分离?物质分离?怎样鉴定怎样鉴定我们提取我们提取的的DNADNA?为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益内容解析基
2、础知识基础知识DNA的物理化学性质为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益 如何利用如何利用DNA的物理化学性的物理化学性质提取和鉴定质提取和鉴定DNA?思考:1.洗涤剂能溶解细胞膜,但不会破坏洗涤剂能溶解细胞膜,但不会破坏DNA 将将DNADNA从细胞中提取出来从细胞中提取出来2 2、当氯化钠的物质的量浓度为当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol 2 molL L时,时,DNADNA的溶解度最大,浓度为的
3、溶解度最大,浓度为 0 014 mol14 molL L时,时,DNADNA的溶解度最低。的溶解度最低。可以使可以使DNADNA在盐溶液中溶解或析出在盐溶液中溶解或析出为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益3 3、DNADNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的某不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精。些物质则可以溶于酒精。可以将可以将DNADNA与蛋白质进一步分离与蛋白质进一步分离4 4、DNADNA与二苯胺在沸水浴条件下呈蓝与二苯胺在沸水浴条件下呈蓝色色鉴定鉴定DNADNA为了规范事业单位聘用关系,建立和完善
4、适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益提取DNA的实验步骤破碎细胞,获取含DNA的滤液选取实验材料去除滤液中的杂质析出DNA鉴定DNA为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益二、二、DNADNA的粗提取与鉴定的实验设计的粗提取与鉴定的实验设计(一)实验材料的选取(一)实验材料的选取 材料:鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳材料:鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。(从中
5、选取液体培养基中培养的大肠杆菌。(从中选取2 23 3种实验材料)种实验材料)原则:凡是含有原则:凡是含有DNADNA的生物材料都可以考虑,的生物材料都可以考虑,但选用但选用DNADNA含量相对较高的生物组织,成功的可含量相对较高的生物组织,成功的可能性更大能性更大为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益 无细胞壁,将其加入无细胞壁,将其加入无细胞壁,将其加入无细胞壁,将其加入蒸馏水中蒸馏水中蒸馏水中蒸馏水中 ,使其破裂释放使其破裂释放使其破裂释放使其破裂释放DNADNADNADNA 有细胞壁,有细胞壁,有细胞壁,有细
6、胞壁,需要先用一定的洗涤剂需要先用一定的洗涤剂需要先用一定的洗涤剂需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜,进行充分的搅拌和食盐溶解细胞膜,进行充分的搅拌和食盐溶解细胞膜,进行充分的搅拌和食盐溶解细胞膜,进行充分的搅拌和研磨,和研磨,和研磨,和研磨,才能使其破裂释放才能使其破裂释放才能使其破裂释放才能使其破裂释放DNADNADNADNA(二)破碎细胞,获取含(二)破碎细胞,获取含DNADNA的滤液的滤液动物细胞:动物细胞:植物细胞:植物细胞:为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益讨论:加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么?讨
7、论:加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么?答:洗涤剂是一些离子去污剂,能溶解细胞膜,答:洗涤剂是一些离子去污剂,能溶解细胞膜,有利于有利于DNADNA的释放;食盐的主要成分是的释放;食盐的主要成分是NaClNaCl,有利于有利于DNADNA的溶解的溶解实例:提取洋葱实例:提取洋葱DNADNA时,在切碎的洋葱中加时,在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐,进行充分的搅拌和研入一定的洗涤剂和食盐,进行充分的搅拌和研磨,过滤后收集研磨液磨,过滤后收集研磨液为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益答:研磨不充分会使细胞核内的答:研磨
8、不充分会使细胞核内的DNADNA释放不完全,释放不完全,提取的提取的DNADNA量变少,影响实验结果,导致看不到量变少,影响实验结果,导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等讨论:如果研磨不充分,会对实验结果产生怎样讨论:如果研磨不充分,会对实验结果产生怎样的影响?的影响?(三)去除滤液中的杂质(三)去除滤液中的杂质为了纯化提取的为了纯化提取的DNADNA需要将滤液作进一步处理需要将滤液作进一步处理讨论:此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞讨论:此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分?成分?答:可能含有核蛋白、多糖和答:可能含有核蛋白、多糖和RNARNA
9、等杂质等杂质为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益讨论:为什么反复地溶解与析出讨论:为什么反复地溶解与析出DNADNA,能够去,能够去除杂质除杂质答:用高盐浓度的溶液溶解答:用高盐浓度的溶液溶解DNADNA,能除去在高,能除去在高盐中不能溶解的杂质;用低盐浓度使盐中不能溶解的杂质;用低盐浓度使DNADNA析出,析出,能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此,通过反能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此,通过反复溶解与析出复溶解与析出DNADNA,就能够除去与,就能够除去与DNADNA溶解度溶解度不同的多种杂质不同的多种杂质为了
10、规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益讨论:方案二与方案三的原理有什么不同?讨论:方案二与方案三的原理有什么不同?答:方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白,从而答:方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白,从而使提取的使提取的DNADNA与蛋白质分开;方案三利用的是与蛋白质分开;方案三利用的是DNADNA和蛋白质对高温耐受性的不同,从而使蛋和蛋白质对高温耐受性的不同,从而使蛋白质变性,与白质变性,与DNADNA分离。分离。为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益
11、为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益(四)(四)DNADNA的析出与鉴定的析出与鉴定DNADNA的析出用的是与滤液体积相等的的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒冷却的酒精溶液(体积分数为精溶液(体积分数为95 95),静置,静置2 23min3min,溶液中会出现,溶液中会出现白色丝状物,白色丝状物,这就是粗提取这就是粗提取DNADNA。用玻璃棒沿。用玻璃棒沿一个方向一个方向搅拌,卷起丝状物,搅拌,卷起丝状物,并用滤纸吸取上面的水并用滤纸吸取上面的水1 1、DNADNA的析出的析出为了规范事业单位聘用关系,建立和完
12、善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益2 2、DNA DNA的鉴定的鉴定鉴定鉴定DNADNA时在试管中先加入物质的量的浓度为时在试管中先加入物质的量的浓度为2mol/L 2mol/L 的的NaClNaCl溶液溶液5ml5ml于两只试管中,其中一于两只试管中,其中一只加入只加入DNADNA丝状物,各加入丝状物,各加入二苯胺二苯胺4ml 4ml 试剂。试剂。混合均匀后,将试管置于沸水中加热混合均匀后,将试管置于沸水中加热5min,5min,
13、待试待试管冷却后,比较两只试管中溶液颜色的变化,看管冷却后,比较两只试管中溶液颜色的变化,看看溶解有看溶解有DNADNA的溶液是否有的溶液是否有蓝色蓝色为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益(一)案例一:以鸡血为实验材料进行(一)案例一:以鸡血为实验材料进行DNADNA的的粗提取粗提取三、实验案例三、实验案例鸡血细胞极易吸水胀破,而用动物肝脏细胞鸡血细胞极易吸水胀破,而用动物肝脏细胞作实验材料常常需要匀浆和离心,对设备要求作实验材料常常需要匀浆和离心,对设备要求较高,操作繁琐,历时较长较高,操作繁琐,历时较长1 1、
14、鸡血细胞做实验材料的原因、鸡血细胞做实验材料的原因鸡血细胞核的鸡血细胞核的DNADNA含量丰富,材料易得含量丰富,材料易得为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益2 2、实验原理、实验原理 DNA DNA在在NaClNaCl溶液中的溶解度,是随着溶液中的溶解度,是随着NaClNaCl的的浓度的变化而改变的。当浓度的变化而改变的。当NaClNaCl的物质的量浓度为的物质的量浓度为0.14 mol0.14 molL L时时,DNA,DNA的溶解度最低。利用这一原的溶解度最低。利用这一原理,可以使溶解在理,可以使溶解在NaC
15、lNaCl溶液中的溶液中的DNADNA析出。析出。DNA DNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些蛋不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些蛋白质可以溶于酒精溶液。利用这一原理,可以进白质可以溶于酒精溶液。利用这一原理,可以进一步提取出含杂质较少的一步提取出含杂质较少的DNADNA。DNA DNA遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色,因此,遇二苯胺(沸水浴)会染成蓝色,因此,二苯胺可以作为鉴定二苯胺可以作为鉴定DNADNA的试剂。的试剂。为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益3 3、实验材料和用具:、实验材料和用具:鸡血细胞液(鸡血细
16、胞液(510ml510ml);体积分数为);体积分数为95%95%的冷的冷酒精溶液(实验前置于冰箱内冷却酒精溶液(实验前置于冰箱内冷却24h24h);蒸馏);蒸馏水;质量浓度为水;质量浓度为0 0g/mlg/ml的柠檬酸纳溶液;务的柠檬酸纳溶液;务质量的浓度分别为质量的浓度分别为2mol/L2mol/L和和0 0015mol/L015mol/L的氯的氯化纳溶液;二苯胺试剂。铁架台;铁环;镊子;化纳溶液;二苯胺试剂。铁架台;铁环;镊子;三角架;酒精灯;石棉网;载玻片;玻璃棒;滤三角架;酒精灯;石棉网;载玻片;玻璃棒;滤纸;滴管;量筒(纸;滴管;量筒(100ml100ml,一个);烧杯;,一个);
17、烧杯;(100ml100ml,一个,一个,50ml50ml、500ml500ml各二个);试各二个);试管(管(20ml20ml,二个);漏斗;试管夹;纱布。,二个);漏斗;试管夹;纱布。为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益4 4、课前准备鸡血细胞液、课前准备鸡血细胞液取质量浓度为取质量浓度为0 01g/ml1g/ml的的柠檬酸纳溶液(抗凝柠檬酸纳溶液(抗凝剂)剂)100ml100ml,置于,置于500ml500ml烧杯中。注入新鲜的烧杯中。注入新鲜的鸡血(约鸡血(约180ml180ml),同时用玻璃棒搅拌,使血)
18、,同时用玻璃棒搅拌,使血液与柠檬酸纳溶液充分混合,以免凝血。将烧液与柠檬酸纳溶液充分混合,以免凝血。将烧杯中的血液置于冰箱内,静置一天,使血细胞杯中的血液置于冰箱内,静置一天,使血细胞自行沉淀。(也可以将血液倒入离心管内,用自行沉淀。(也可以将血液倒入离心管内,用1000r/min1000r/min(转每分)的离心机离心(转每分)的离心机离心2min2min,血细胞沉淀于离心管底部。实验时。血细胞沉淀于离心管底部。实验时。用吸管除用吸管除去离心管上部的澄清液,就可以得到鸡血细胞去离心管上部的澄清液,就可以得到鸡血细胞液。)液。)过程过程为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体
19、制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益为了规范事业单位聘用关系,建立和完善适应社会主义市场经济体制的事业单位工作人员聘用制度,保障用人单位和职工的合法权益柠檬酸钠作用柠檬酸钠作用防止血液凝固防止血液凝固作用机理作用机理柠檬酸钠能与血浆中的柠檬酸钠能与血浆中的CaCa2+2+发生反应,生成柠发生反应,生成柠檬酸钙络合物,血浆中游离的檬酸钙络合物,血浆中游离的CaCa2+2+大大减少,大大减少,血液就不会凝固血液就不会凝固讨论:提取鸡血中的讨论:提取鸡血中的DNADNA时,为什么除去血液时,为什么除去血液中的上清液?中的上清液?答:血液分为两部分,一部分是血浆,一部分答:血液分
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