微生物培养TY.ppt

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1、专题专题2:2:微生物的培养与应用微生物的培养与应用（2）按培养基的）按培养基的物理形态分：物理形态分：n液体培养基液体培养基n半固体培养基半固体培养基n固体培养基固体培养基一一 基础知识基础知识:（3）按培养基的）按培养基的功能分：功能分：基础培养基基础培养基选择培养基选择培养基鉴别培养基鉴别培养基（1）按培养基的）按培养基的化学成分分：化学成分分：天然培养基天然培养基合成培养基合成培养基液体培养基：液体培养基：表面生长表面生长表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长沉淀生长沉淀生长半固体培养基：半固体培养基：(是否运动是否运动)无动力无动力无动力无动

2、力有动力有动力有动力有动力(弥散弥散弥散弥散)固体培养基：菌落固体培养基：菌落选择培养基选择培养基在培养基中加入（缺少）某种化学物质在培养基中加入（缺少）某种化学物质,以以抑抑制制不需要的微生物的生长不需要的微生物的生长,促进促进所需要的微生物的生长。所需要的微生物的生长。用以用以菌种的分离菌种的分离加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物分

3、离自养型微生物鉴别培养基鉴别培养基在培养基中加入某种在培养基中加入某种指示剂或化学指示剂或化学药品药品。用以菌种的鉴别。用以菌种的鉴别。2.培养基的成分培养基的成分 不管哪种培养基，一般都含有不管哪种培养基，一般都含有水水、无机盐无机盐、碳源碳源和和氮源氮源等营养物质。等营养物质。另外还需要满足微生物生长对另外还需要满足微生物生长对pHpH、特殊营特殊营养物质养物质,生长因子生长因子(如维生素、某些氨基酸、如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶嘌呤、嘧啶)以及以及氧气氧气、二氧化碳二氧化碳、渗透压渗透压等等的要求。的要求。练习练习1.不能作为异养微生物碳源的是（不能作为异养微生物碳源的是（）A牛肉膏

4、牛肉膏B含碳有机物含碳有机物C石油石油D含碳无机物含碳无机物2.自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别是（差别是（）A碳源碳源B氮源氮源C无机盐无机盐D生长因子生长因子【典例解析典例解析】例例:关于微生物营养物质的叙述中，正确的关于微生物营养物质的叙述中，正确的是是()()A.A.是碳源的物质不可能同时是氮源是碳源的物质不可能同时是氮源 B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量 C.C.除水以外的无机物只提供无机盐除水以外的无机物只提供无机盐 D.D.无机氮源也能提供能量无机氮源也能提供能量编号编号成分成分含量含量粉状硫粉状硫10g10g（NHNH

5、4 4）2 2SOSO4 40.4g0.4gK K2 2HPOHPO4 44.0g4.0gMgSOMgSO4 49.25g9.25gFeSOFeSO4 40.5g0.5gCaClCaCl2 20.5g0.5gHH2 2OO100ml100ml例右表是某微生物培养基例右表是某微生物培养基成分，请据此回答：成分，请据此回答：（1 1）右表培养基可培养的）右表培养基可培养的微生物类型是微生物类型是 。（2 2）若不慎将过量）若不慎将过量NaClNaCl加加入培养基中。如不想浪费此培入培养基中。如不想浪费此培养基，可再加入养基，可再加入 ，用于培养，用于培养 （4 4）表中营养成分共有）表中营养成分共

6、有 类。类。（5 5）不论何种培养基，在）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要各种成分都溶化后分装前，要进行的是进行的是 。自养型微生物自养型微生物 含碳有机物含碳有机物 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠休眠体体，叫做，叫做芽孢芽孢。特点：特点：1 1、对恶劣的环境，如干旱、高温等，有很强的抵抗力对恶劣的环境，如干旱、高温等，有很强的抵抗力 2 2、小而轻，可随风飘散小而轻，可随风飘散 3 3、当环境适宜（如温度、水分适宜）的条件下，芽孢又可以当环境适宜（如温度、水分适宜）的条件下，芽孢又

7、可以萌发，形成一个细菌萌发，形成一个细菌.在生物体的一定部位产生一种特殊的在生物体的一定部位产生一种特殊的生生殖细胞殖细胞叫孢子。孢子的叫孢子。孢子的特点特点是能是能直接直接长成新长成新个体个体 孢子孢子思考：思考：1.获得纯净培养物的关键获得纯净培养物的关键？2.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？（外来微生物污染外，还有什么目的？（P15旁栏思考）旁栏思考）3.消毒和灭菌有何不同？消毒和灭菌有何不同？4.常用的消毒和灭菌方法有哪些？常用的消毒和灭菌方法有哪些？无菌技术还能有效避免操作者自身被无菌技术还能有效避免操作

8、者自身被微生物感染。微生物感染。.无菌技术无菌技术防止外来杂菌的入侵防止外来杂菌的入侵 （1 1）消毒：）消毒：用温和的化学或物理方法，杀死用温和的化学或物理方法，杀死物体表面或内部的物体表面或内部的部份微生物部份微生物的过程。的过程。2.2.消毒与灭菌的概念及两者的区别消毒与灭菌的概念及两者的区别（2 2）灭菌：）灭菌：以强烈的理化因素杀死物体内外以强烈的理化因素杀死物体内外所有微生物所有微生物，达到，达到完全无菌完全无菌的过程。的过程。灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。普通也是最重要的技术。1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮

9、沸煮沸5-6min5-6min2、巴氏消毒法：、巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min3、化学药剂消毒法、化学药剂消毒法:用用75%75%酒精、新洁酒精、新洁 尔灭等进行皮肤消毒尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源氯气消毒水源4、紫外线消毒：、紫外线消毒：对实验室空气消毒对实验室空气消毒(1)消毒的方法：消毒的方法：3.3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法灼灼烧灭菌菌干干热灭菌：菌：160-170 160-170 下加下加热1-2h1-2h。高高压蒸气蒸气灭菌：菌：100kPa100kPa、121 121 下下维持

10、持15-30min.15-30min.灭菌的方法：菌的方法：比较比较项目项目理化因素理化因素作用强度作用强度消灭微生物消灭微生物的数量的数量芽孢和孢子能否芽孢和孢子能否被消灭被消灭消毒消毒灭菌灭菌列表比较消毒与灭菌列表比较消毒与灭菌较为温和较为温和强强 烈烈能能不能不能部分生活状部分生活状态的微生物态的微生物全部微生物全部微生物1.1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。菌

11、。如果需要，请选择合适的方法。（1 1）培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿（2 2）玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管（3 3）实验操作者的双手实验操作者的双手 答：无菌技术还能有效避免操作者自答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。身被微生物感染。答：（答：（1）、（）、（2）需要灭菌；（）需要灭菌；（3）需要消毒）需要消毒。常常识识n1 无菌技无菌技术包括：包括：n（1）对实验操作操作空空间、操作者的、操作者的衣着和手衣着和手进行行 清清洁和消毒和消毒；n（2）将）将培养器皿、接种用具和培养基等培养器皿、接种用具和培养基等器具器具进行行 灭菌菌；n（3）

12、为避免避免周周围微生物微生物污染，染，实验操作操作应在在 酒精灯火焰附近酒精灯火焰附近 旁旁进行；行；n（4）避免已）避免已灭菌菌处理的材料用具与理的材料用具与 周周围物品物品 相接触。相接触。n2 消毒方法：消毒方法：n（1）日常生活）日常生活经常用到的是常用到的是 煮沸煮沸 消毒法；消毒法；n（2）对一些一些不耐高温不耐高温的液体，的液体，则使用使用 巴氏巴氏 消毒法（作消毒法（作简要介要介绍）；）；n（3）对接种室、接种箱或超接种室、接种箱或超净工作台工作台首先首先喷洒洒 石炭酸或煤酚皂石炭酸或煤酚皂 等溶等溶液以增液以增强消毒效果，然后使用消毒效果，然后使用 紫外紫外线 进行物理消毒。

13、行物理消毒。n（4）实验操作者的操作者的双手双手使用使用 酒精酒精 进行消毒；行消毒；n（5）饮水水源水水源用用 氯气气 进行消毒。行消毒。n3灭菌方法菌方法：n（1）接种）接种环、接种、接种针、试管口等使用管口等使用 灼灼烧 灭菌法；菌法；n（2）玻璃器皿、金属用具等使用）玻璃器皿、金属用具等使用 干干热 灭菌法，所用器械是菌法，所用器械是 干干热灭菌箱菌箱；n（3）培养基、无菌水等使用）培养基、无菌水等使用 高高压蒸汽蒸汽 灭菌法菌法，所用器械是，所用器械是 高高压蒸蒸汽汽灭菌菌锅。n（4）表面）表面灭菌和空气菌和空气灭菌等使用菌等使用 紫外紫外线 灭菌法，所用器械是菌法，所用器械是 紫外

14、紫外灯灯。二二.实验操作实验操作(以培养大肠杆菌为例以培养大肠杆菌为例).制备牛肉膏蛋白胨培养基制备牛肉膏蛋白胨培养基1.1.计算计算2.2.称量称量3.3.溶化溶化4.4.灭菌灭菌:将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅，在压力为将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa100kPa、温度为、温度为121121，灭菌，灭菌151530min30min。5 5.倒平板倒平板:待培养基冷却到待培养基冷却到50 50 左右时，在酒精灯左右时，在酒精灯附近倒平板。附近倒平板。2d2d后观察平板，无杂菌污染才可后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。用来接种。倒倒平平板板操操作作答：可以用手触摸盛有培养基的锥形

15、瓶，感觉答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。养基。问题讨论问题讨论1.1.培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到50 50 左右时，左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？的温度？3.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.4.在倒

16、平板的过程中，如果不小心将培养基溅在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？培养微生物吗？为什么？答：答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以以防止皿盖上的水珠落入培养基防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。，造成污染。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养

17、基上滋生，因此最好不要用这个平板培养培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。微生物。关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述中，错误的是（）关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述中，错误的是（）A.A.操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B.B.牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸C.C.待培养基冷却至待培养基冷却至5050左右时，进行倒平板左右时，进行倒平板D.D.待平板冷却凝固约待平板冷却凝固约5min5min10min10min后，将平板倒过来放置后，将平板倒过来放置.纯化大肠杆菌纯化大肠杆

18、菌平板划线法平板划线法和和稀释涂布平板法稀释涂布平板法。微生物的接种的微生物的接种的常用接种方法有常用接种方法有：1.1.平板划线的操作方法平板划线的操作方法答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目过

19、划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。细菌污染环境和感染操作者。问题讨论问题讨论1.1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？灼烧接种环吗？为什么？2.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？进行划线？答：以免接种环温度太高

20、，杀死菌种。答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？总是从上一次划线的末端开始划线？答：答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。答：答：应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要

21、合适、吸例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。精灯火焰周围等等。问题讨论问题讨论涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第想一想，第2 2步应如何进行无菌操作？步应如何进行无菌操作？2.2.稀释涂布平板的操作方法稀释涂布平板的操作方法三三.结果分析与果分析与评价价 .培养基的制作是否合格培养基的制作是否合格培养基的制作是否合格培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的

22、培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温1 1 1 12d2d2d2d后无菌落生后无菌落生后无菌落生后无菌落生长长，说说明培养基的制明培养基的制明培养基的制明培养基的制备备是成功的，否是成功的，否是成功的，否是成功的，否则则需要重新制需要重新制需要重新制需要重新制备备。.接种操作是否符合无菌要求接种操作是否符合无菌要求接种操作是否符合无菌要求接种操作是否符合无菌要求如果培养基上生如果培养基上生如果培养基上生如果培养基上生长长的菌落的的菌落的的菌落的的菌落的颜颜色、形状、大小基本一致，色、形状、大小基本一致，色、形状、大小基本一致，色、形状、大小基本一

23、致，并符合大并符合大并符合大并符合大肠肠杆菌菌落的特点，杆菌菌落的特点，杆菌菌落的特点，杆菌菌落的特点，则说则说明接种操作是符合要明接种操作是符合要明接种操作是符合要明接种操作是符合要求的；如果培养基上出求的；如果培养基上出求的；如果培养基上出求的；如果培养基上出现现了其他菌落，了其他菌落，了其他菌落，了其他菌落，则说则说明接种明接种明接种明接种过过程程程程中，无菌操作中，无菌操作中，无菌操作中，无菌操作还还未达到要求，需要分析原因，再次未达到要求，需要分析原因，再次未达到要求，需要分析原因，再次未达到要求，需要分析原因，再次练习练习。.是否是否是否是否进进行了及行了及行了及行了及时细时细致的

24、致的致的致的观观察与察与察与察与记录记录培养培养培养培养12h12h12h12h与与与与24h24h24h24h后的大后的大后的大后的大肠肠杆菌菌落的大小会有明杆菌菌落的大小会有明杆菌菌落的大小会有明杆菌菌落的大小会有明显显不同，不同，不同，不同，及及及及时观时观察察察察记录记录的同学会的同学会的同学会的同学会发现这发现这一点，并能一点，并能一点，并能一点，并能观观察到其他一察到其他一察到其他一察到其他一些些些些细细微的微的微的微的变变化。化。化。化。4.4.菌种的保存菌种的保存固体斜面培养基上固体斜面培养基上44保存，菌种易被保存，菌种易被污染或产生变异污染或产生变异3.3.微生物的恒温培养

25、微生物的恒温培养.长期保存：长期保存：2020甘油管在甘油管在冷冻箱中保藏冷冻箱中保藏.临时保藏：临时保藏：例例1 1某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题。请回答与此实验相关的问题。（1 1）培养基中含有蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了）培养基中含有蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了 和和 。除此之外，培养基还必。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是须含有的基本成分是 和和 。（2 2）对培养基进行灭

26、菌，应该采用的方法是）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是 。（3 3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于水样品的平板置于 中培养，培养的温度设定中培养，培养的温度设定氮源氮源氮源氮源碳源碳源碳源碳源无机盐无机盐无机盐无机盐水水水水高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌恒温箱恒温箱恒温箱恒温箱在在3737。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种种 作为对照进行实验。作为对照进行实验。（4 4）培养）培养2020小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌

27、小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有落，这说明湖水样品中有 种细菌。一般说来，种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越 。（5 5）如果提高培养基中）如果提高培养基中NaClNaCl的浓度，可以用于筛选耐的浓度，可以用于筛选耐 细菌，这种培养基被称为细菌，这种培养基被称为 。无菌水无菌水无菌水无菌水多多多多高高高高选择培养基选择培养基选择培养基选择培养基盐盐盐盐练习对买回来的菌进行扩大培养,首先制备试管培养基,写出制备固体牛肉膏蛋白胨培养基所需的原料：_其中提供氮源的主要是_；提供能源的主要物质是_；琼脂的作用是_

28、，它不提供营养。牛肉膏、蛋白胨、水、无机盐、琼脂蛋白胨牛肉膏凝固剂练习微生物在生长过程中对各种成分所需量不同,故制备培养基时各成分要有合适的_,在烧杯加入琼脂后要不停地_,防止_.练习微生物在生长过程中对各种成分所需量不同,故制备培养基时各成分要有合适的_,在烧杯加入琼脂后要不停地_,防止_.比例练习微生物在生长过程中对各种成分所需量不同,故制备培养基时各成分要有合适的_,在烧杯加入琼脂后要不停地_,防止_.比例搅拌练习微生物在生长过程中对各种成分所需量不同,故制备培养基时各成分要有合适的_,在烧杯加入琼脂后要不停地_,防止_.比例搅拌琼脂糊底引起烧杯破裂练习将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加

29、棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入_中灭菌，压力为_，温度为_，时间_，灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力_，将试管取出。练习将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入_中灭菌，压力为_，温度为_，时间_，灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力_，将试管取出。高压灭菌锅练习将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入_中灭菌，压力为_，温度为_，时间_，灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力_，将试管取出。高压灭菌锅100KPa练习将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入_中灭菌，压力为_，温度为_，时间_，灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力_，将试管取出

30、。高压灭菌锅100KPa121 练习将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入_中灭菌，压力为_，温度为_，时间_，灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力_，将试管取出。高压灭菌锅100KPa121 15 30min练习将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入_中灭菌，压力为_，温度为_，时间_，灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力_，将试管取出。高压灭菌锅100KPa121 15 30min自然降至零后 练习使用高压蒸汽灭菌锅时注意,先向锅内倒入 _，把锅内水加热煮沸并将基中原有冷空气彻底排除后将锅密闭.练习使用高压蒸汽灭菌锅时注意,先向锅内倒入 _，把锅内水

31、加热煮沸并将基中原有冷空气彻底排除后将锅密闭.适量水练习从一支试管向另一支试管接种时注意，接种环要在酒精灯_焰灭菌.并且待接种环_后沾取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近,将接种的试管放入_冰箱中保藏.练习从一支试管向另一支试管接种时注意，接种环要在酒精灯_焰灭菌.并且待接种环_后沾取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近,将接种的试管放入_冰箱中保藏.外练习从一支试管向另一支试管接种时注意，接种环要在酒精灯_焰灭菌.并且待接种环_后沾取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近,将接种的试管放入_冰箱中保藏.外冷却练习从一支试管向另一支试管接种时注意，接种环要在酒精灯_焰灭菌.并且待接种环_后沾取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近,将接种的试管放入_冰箱中保藏.外冷却4