自身抗体检测及应用-华西医院电子教案.ppt
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1、自身抗体检测及应用-华西医院自身免疫性疾病自身免疫性疾病(autoimmunedisease,AID)因自身免疫反应导致组织器官损伤因自身免疫反应导致组织器官损伤或功能障碍所致疾病。或功能障碍所致疾病。自身抗体的特性自身抗体的特性自身免疫性疾病的重要标志自身免疫性疾病的重要标志高滴度存在于自身免疫性疾病患者高滴度存在于自身免疫性疾病患者与疾病的活动性相关与疾病的活动性相关参与免疫病理性损伤参与免疫病理性损伤检测自身抗体常用的方法检测自身抗体常用的方法间接免疫荧光法(间接免疫荧光法(IIFIIF)ELISAELISA免疫印迹法免疫印迹法(Western-blotWestern-blot)酶免疫斑
2、点法酶免疫斑点法 常检测的自身抗体常检测的自身抗体类风湿因子(类风湿因子(RFRF)抗核抗体(抗核抗体(ANAANA)抗可提取性核抗原抗体(抗可提取性核抗原抗体(ENAENA)抗中性粒细胞胞浆抗体(抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCAANCA)抗角蛋白抗体(抗角蛋白抗体(AKAAKA)抗心磷脂抗体(抗心磷脂抗体(ACAACA)类风湿因子类风湿因子(rheumatoidfactor,RF)抗变性抗变性IgGFc的自身抗体,主要类型是的自身抗体,主要类型是IgM型型致病机理:致病机理:RF与体内变性与体内变性IgG结合形成免疫复合物,激结合形成免疫复合物,激活补体或被吞噬细胞吞噬,产生炎性介质导致组活补
3、体或被吞噬细胞吞噬,产生炎性介质导致组织炎性损伤,使患者发生骨关节炎及血管炎。织炎性损伤,使患者发生骨关节炎及血管炎。检测方法:检测方法:1.胶乳颗粒凝集实验胶乳颗粒凝集实验定性、半定量,敏感性和特异性不高,测定定性、半定量,敏感性和特异性不高,测定IgM-RF2.速率散射比浊法(速率散射比浊法(ARRAY、IMAGE)定量、准确、快速,测定定量、准确、快速,测定IgM-RF3.ELISA定量、准确,可测定不同类型的定量、准确,可测定不同类型的RF临床应用:临床应用:(1)RF在在RA、SLE、PSS等多种自身免疫性等多种自身免疫性疾病患者中均可被检出。疾病患者中均可被检出。疾病疾病阳性率阳性
4、率%RA79SLE30SS95Sclerosis80PM80MCTD25(2)RF滴度与滴度与RA患者临床表现呈正相关,患者临床表现呈正相关,IgM-RF效价效价80IU/ml并伴有严重关节功能障碍并伴有严重关节功能障碍时通常提示患者预后不良。时通常提示患者预后不良。(3)IgG-RF与与RA患者的滑膜炎、血管炎和关节患者的滑膜炎、血管炎和关节症状密切相关,常伴随症状密切相关,常伴随IgM-RF同时出现,同时出现,在正常人及非在正常人及非RA患者中很难检出。患者中很难检出。(4)IgA-RF与与RA患者关节症状的严重程度及骨患者关节症状的严重程度及骨质破坏有显著相关性。质破坏有显著相关性。临床
5、应用:临床应用:抗核抗体抗核抗体(antinuclearantibody,ANA)以真核细胞(如以真核细胞(如HEp-2细胞、肝细胞)细胞、肝细胞)的各种细胞核成分为靶抗原所检测的自身的各种细胞核成分为靶抗原所检测的自身抗体的总称。抗体的总称。分类和命名分类和命名1.以首先检出该抗体的患者名字命名,如抗以首先检出该抗体的患者名字命名,如抗Sm、抗抗Sa抗体等;抗体等;2.以以相相关关疾疾病病命命名名,如如抗抗Scl-70、抗抗SS-A、抗抗SS-B抗体等;抗体等;3.以以抗抗原原的的部部位位命命名名,如如抗抗核核仁仁抗抗体体、抗抗线线粒粒体抗体、抗核膜抗体、抗细胞浆抗体等;体抗体、抗核膜抗体、
6、抗细胞浆抗体等;4.以以抗抗原原的的化化学学性性质质进进行行分分类类命命名名,如如抗抗DNA、抗抗RNP、抗组蛋白抗体等。抗组蛋白抗体等。抗核抗体检测方法抗核抗体检测方法间接免疫荧光法间接免疫荧光法(indirectimmunofluorescence,IIF)酶免疫斑点法酶免疫斑点法ELISA免疫印迹法免疫印迹法(Western-blot)间接免疫荧光法间接免疫荧光法HEp-2细胞细胞肝组织切片肝组织切片荧光标记抗体荧光标记抗体病人血清(待检抗体)病人血清(待检抗体)细胞核细胞核细胞浆细胞浆细胞骨架细胞骨架细胞周期细胞周期均质型均质型核糖体型核糖体型肌蛋白型肌蛋白型中心体型中心体型斑点型斑点
7、型线粒体型线粒体型波形纤维蛋白型波形纤维蛋白型纺缍体型纺缍体型核仁型核仁型高尔基体型高尔基体型细胞角蛋白型细胞角蛋白型纺缍丝型纺缍丝型着丝点型着丝点型溶酶体型溶酶体型原肌球蛋白型原肌球蛋白型中间体型中间体型周边型周边型颗粒型颗粒型纽带蛋白型纽带蛋白型PCNA型型核点型核点型(dots)结蛋白结蛋白(桥粒桥粒)型型IIFIIF检测检测ANAANA荧光染色模型荧光染色模型斑点型(斑点型(nRNP/SmnRNP/Sm)高滴度的抗高滴度的抗U1-nRNP为为MCTD的特征。的特征。抗抗SmSm抗体对抗体对SLESLE具有高度特具有高度特异性。异性。斑点型(斑点型(SSA/SSBSSA/SSB)抗抗SS
8、A最常出现于最常出现于SS及新生儿红及新生儿红斑狼疮斑狼疮(100%)。)。抗抗SSB抗体几乎仅抗体几乎仅见于女性,可出现于见于女性,可出现于SS和和SLE。均质型均质型抗抗dsDNA抗体抗体抗组蛋白抗体抗组蛋白抗体(histone)抗抗ssDNA抗体抗体抗核小体抗体抗核小体抗体(nucleosome)抗抗dsDNA抗体抗体SLE特异性抗体,与病情活动度相关。特异性抗体,与病情活动度相关。周边型周边型可见于可见于胶原病、胶原病、PBC、CAH等患者等患者核点型(核点型(DOTSDOTS)见于见于SLE、SS、PBC、风湿病。风湿病。抗着丝点型抗着丝点型 PSS局限型标志抗体。局限型标志抗体。抗
9、原纤维蛋白型抗原纤维蛋白型 仅见于仅见于5%-10%的的PSS,男性高于女性。,男性高于女性。抗抗RNARNA多聚酶多聚酶型抗体型抗体仅见于硬皮病患者,阳性率为仅见于硬皮病患者,阳性率为4%。抗抗PM-SclPM-Scl(PM-1PM-1)抗体抗体见于重叠综合征(多发性肌炎见于重叠综合征(多发性肌炎PM/皮肌炎皮肌炎DM/弥漫性弥漫性PSS)抗抗Scl-70Scl-70型型 PSS弥漫型的标志抗体。弥漫型的标志抗体。增殖细胞核抗原增殖细胞核抗原型型(PCNAPCNA)SLE特异性抗体,与发生弥漫性增殖性肾小球肾炎相关。特异性抗体,与发生弥漫性增殖性肾小球肾炎相关。抗核糖体抗核糖体P P蛋白蛋白
10、(rib-Prib-P)抗体抗体抗线粒体抗体抗线粒体抗体(AMAAMA)SLE标志抗体标志抗体原发性胆汁性肝硬化标志抗体原发性胆汁性肝硬化标志抗体抗抗Jo-1Jo-1抗体抗体抗高尔基体抗体抗高尔基体抗体多发性肌炎(多发性肌炎(PM)标志抗体标志抗体偶见于偶见于SLE和和SS抗肌动蛋白抗体抗肌动蛋白抗体见于自身免疫性慢性活动型肝炎见于自身免疫性慢性活动型肝炎 抗抗ENAENA抗体谱抗体谱ENA(extractablenuclearantigen):可提取核抗原的总称可提取核抗原的总称临床常检测的抗临床常检测的抗ENA抗体谱主要包括:抗体谱主要包括:抗抗Sm抗抗U1-RNP抗抗SSA抗抗SSB抗抗
11、Jo-1抗抗Scl-70抗抗rib-P蛋白蛋白检测方法检测方法双向免疫扩散(双向免疫扩散(ID)对流免疫电泳(对流免疫电泳(CIE)免疫印迹法(免疫印迹法(Western-blot)ELISA酶免疫斑点法酶免疫斑点法免疫印迹法免疫印迹法SDS-PAGE电泳电泳转移电泳转移电泳酶免疫检测酶免疫检测是一组以人中性粒细胞胞浆成分为靶抗是一组以人中性粒细胞胞浆成分为靶抗原,与临床多种小血管炎性疾病密切相关的原,与临床多种小血管炎性疾病密切相关的自身抗体,对系统性血管炎、炎症性肠病等自身抗体,对系统性血管炎、炎症性肠病等疾病的诊断与鉴别诊断具有重要意义。疾病的诊断与鉴别诊断具有重要意义。抗中性粒细胞胞浆
12、抗体抗中性粒细胞胞浆抗体(anti-neutrophilcytoplasmicautoantibodies,ANCA)荧光染色型荧光染色型靶抗原靶抗原胞浆型胞浆型(cANCA)蛋白酶蛋白酶3(PR3)杀菌杀菌/通透性增高蛋白(通透性增高蛋白(BPI)核周型核周型(pANCA)髓过氧化物酶(髓过氧化物酶(MPO)组织蛋白酶组织蛋白酶G(Cath-G)乳铁蛋白(乳铁蛋白(LF)白细胞弹性蛋白酶(白细胞弹性蛋白酶(HLE)非典型型非典型型(aANCA)兼有两种特性兼有两种特性 ANCAANCA荧光染色型与靶抗原荧光染色型与靶抗原周边型抗中性粒细胞胞浆抗体周边型抗中性粒细胞胞浆抗体(pANCApANC
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